氨基酸分离鉴定中显色剂为什么不能用茚三酮水溶液

氨基酸分离鉴定中显色剂为什么不能用茚三酮水溶液

茚三酮根很多种氨基酸都显示紫色

没办法分离鉴定呀

茚三酮使氨基酸显色原理

α氨基酸与茚三酮在弱酸性溶液中共热，反应后经失水脱羧生成氨基茚三酮，再与水合茚三酮反应生成紫红色，最终为蓝色物质。脯氨酸等仲胺氨基酸与茚三酮反应生成黄色物质。该反应可广泛用于各种氨基酸的定性或定量测定。

阿尔法氨基酸与水合茚三酮一起加热，经氧化脱氨变成相应的阿尔法酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮被还原成还原成还原型茚三酮。在弱酸性溶液中，氨、还原型茚三酮，和另一分子水合茚三酮反应，缩合成蓝紫色物质。

注意事项

（1）被分离物质在该溶剂系统中Rf在0.05～0.8之间，各组分之Rf值相差最好能大于0.05，以免斑点重叠。

（2）溶剂系统中任一组分与被分离物之间不能起化学反应。

（3）被分离物质在溶剂系统中的分配较恒定，不随温度而变化，且易迅速达到平衡，这样所得斑点较圆整。

本实验采用八种混合氨基酸为样品，用酸性和碱性两种溶剂进行双向层析，以茚三酮为显色剂，可获得分离清晰的层析图谱，如图3.2所示。

注意事项

（1）烘箱加热温度不可过高，且不可有氨的干扰，否则图谱背景会泛红。

（2）第一相溶剂最好在使用前再按比例混合，否则会引起酯化，影响层析效果。

（3）整个实验操作应戴手套进行。

思考题

1．酸性与碱性溶剂系统对氨基酸极性基团的解离各有何影响？

2．为什么展层时要用两种溶剂系统？

性质：又称比移值。是色谱法中表示组分移动位置的一种方法的参数。定义为溶质迁移距离与流动相迁移距离之比。在一定的色谱条件下，特定化合物的R f值是一个常数，因此有可能根据化合物的R f值鉴定化合物

请问薄层层析时，Rf值在什么范围时，分离效果比较准

我帮你查了相关书籍结合我的实验经验，薄层层析采用硅胶G-CMC板，通用展开系统：无水乙醇-苯（1：4）；苯-氯仿（1：3）；丙酮-甲醇（1：1）。先用无水乙醇-苯（1：4）展开，Rf值如果>0.8，改用苯-氯仿（1：3），若Rf值如

薄层层析时为甚麼Rf值要在0.2~0.8之间

Rf值的大小与样品的结构、性质、溶剂系统等有关

薄层层析时Rf值要在0.2~0.8之间主演是考虑的经济性，在效果比较好的情况下保持展开剂的用量少

蛋白质的性质实验

From： Update：2006-12-01

【目的和要求】

1. 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法及其原理。

2. 了解蛋白质的两性解离性质。初步学会测定蛋白质等电点的方法。

3. 加深对蛋白质胶体分子稳定因素的认识，了解蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及其相互关系。

【实验原理】

（一）蛋白质及氨基酸的呈色反应

蛋白质所含有的某些氨基酸具有特殊结构，可以与某些试剂反应，生成有色物质。

1. 双缩脲反应

尿素被加热至180℃左右时，两分子尿素缩合放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性条件下可与Cu2+结合生成复杂的紫红色化合物。此反应称为双缩脲反应。

所有含有两个或两个以上肽键的化合物均有此反应。

蛋白质或二肽以上的多肽分子中，含有多个与双缩脲结构相似的肽键，因此也有双缩脲反应，可用此法鉴定蛋

白质的存在或测定其含量。

2. 茚三酮反应

蛋白质、多肽和各种氨基酸具有茚三酮反应。除无α-氨基的脯氨酸和羟脯氨酸呈黄色外，其他氨基酸生成紫红色，最终为蓝色化合物。

除蛋白质、多肽和各种氨基酸能进行茚三酮反应外，氨、β-丙氨酸和许多一级胺化合物都有此反应。该反应灵敏度达1：1500 000（pH5-7）。现已广泛地用于氨基酸定量测定。

3. 黄色反应

凡是含有苯基的化合物都可与浓硝酸反应产生黄色化合物。芳香族氨基酸及含有酪氨酸和色氨酸的蛋白质分子具有此反应。苯丙氨酸很难反应，需加少量浓硫酸才有黄色反应。

(二) 蛋白质的两性反应及等电点的测定

蛋白质和氨基酸一样是两性电解质。调节溶液的酸碱度达到一定的离子浓度时，蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等，以兼性离子状态存在，在电场内该蛋白质分子既不向阴极移动，也不向阳极移动，这时溶液的pH 值称为该蛋白质的等电点(pI)。当溶液的pH值低于蛋白质等电点时，即在H+ 较多的条件下，蛋白质分子带正

电荷成为阳离子，当溶液的pH值大于等电点时，即在O H—较多的条件下，蛋白质分子带负电荷成为阴离子。

本实验采用蛋白质在不同pH 溶液中形成的混浊度来确定其等电点，在等电点时蛋白质溶解度最小，最容易沉淀析出。

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