试验-脑脊液检验-PPT课件

血液分析仪也可进行脑脊液细胞计数和 白细胞分类，此法简单，快速，但标本 尤其是病理性，陈旧性标本中的组织， 细胞的碎片以及细胞变形等都可以影响 细胞分类和计数，故结果重复性，可靠 性有待进一步探讨。另外，蛋白质含量 高，尤其有凝块的脑脊液标本容易使仪 器堵孔，故不推荐使用
标本采集后应在1h内进行细胞计数，若 放置太久，细胞可能凝集成团或破坏， 影响计数结果。标本必须混匀方可充池， 否则影响计数结果 因穿刺损伤血管，引起血性脑脊液，白 细胞计数结果必须校正，以剔除因出血 而带来的白细胞。 细胞计数时应注意新型隐球菌与白细胞， 红细胞区别
（操作）
细胞总数计数 直接计数法（适用于清晰透明或微浑脑 脊液） 充池：微量吸管吸取混匀的脑脊液，充 入血细胞计数板的上下2个计数池。 计数：静置2~3min，低倍镜下计数2个 计数池内四角和中央大方格共10个大方 格内的细胞数。 计算：10个大方格内的细胞总数即为每 微升脑脊液细胞总数，再换算
细胞涂片时，为了使细胞容易粘在玻片 上，可取沉淀的细胞悬液2滴，加血清1 滴，混匀后涂片。 涂片染色分类时，如见内皮细胞或异常 细胞，则另行描述报告，必要时用巴氏 或HE染色查找肿瘤细胞。 实验结束后，血细胞计数板用0.75％ （V/V）乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸 泡，以免损坏计数板。
脑脊液检验
实验一
脑脊液理学检查
（目的） 掌握脑脊液理学检查的内容， 方法。 （标本） 新鲜脑脊液。 （操作） 1．观察颜色 肉眼观察脑脊液颜色变化， 分别以无色，乳白色，红色，棕色，或 黑色，绿色等文字如实描述报告。
2．观察透明度 肉眼观察脑脊液透明度 变化。正常脑脊液清晰透明，病理情况 下可出现不同程度浑浊，可分别以“清 晰透明”。“微浑”，“浑浊”等如实 报告。3．观察凝块或薄膜 轻轻倾斜试 管，肉眼仔细观察有无凝块或薄膜。正 常脑脊液无凝块或薄膜，脑膜炎时可形 成凝块或薄膜，分别以“无凝块”， “有凝块”，“有薄膜”等如实报告。
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当标本颜色或透明度改变不明显时， 应在灯光下以白色或黑色为背景仔细观 察，同时观察有无凝块。 怀疑为结核性脑膜炎时，标本应在 2~4℃环境中静置12~24h再观察脑脊液 表面有无薄膜形成。 参考值 ：无色，清晰透明，放置后无凝 块或薄膜形成。
实验二 脑脊液显微镜检查
（目的）掌握脑脊液显微镜检查的内容， 方法。 （器材） 显微镜，改良牛鲍计数板， 微量吸管。刻度吸管，小试管。 （试剂） 生理盐水或红细胞稀释液，冰 乙酸，白细胞稀释液，瑞氏染液或瑞— 吉染液。 （标本）新鲜脑脊液。
质量控制
白细胞计数直接法的试管或吸管中的冰 乙酸要尽量去尽，否则结果偏低。 若标本陈旧，细胞变形时，白细胞直接 分类法误差大，推荐用涂片染色分类法 分类计数。 涂片染色分类计数时，离心速度不能太 快，否则细胞形态受影响，有条件的单 位可用玻片离心沉淀法，细胞室沉淀法 等收集细胞。 涂片固定时间不能太长，更不能高温固 定，以免细胞皱缩。
涂片染色分类法
若直接分类不易区别 细胞时，可将脑脊液以1000r/min离心5min， 取沉淀物，制成均匀薄片，置于室温或37℃ 恒温箱内尽快干燥，瑞氏或瑞—吉染色后， 油镜下进行分类计数，结果报告与血液白细 胞分类计数报告方式相同。若见激活型单核 细胞（比普通单核细胞大，胞质边缘趁、呈 花边状，胞质内有空泡），转化型淋巴细胞 （形态似异型淋巴细胞）及室管膜细胞（形 态似大淋巴细胞）应计入分类的百分比中
（注意事项）
直接白细胞计数时，也可用微量吸管吸取冰 乙酸后尽可能全部吹出，仅使吸管内壁粘附 少许冰乙酸，再吸取少量混匀的脑脊液于吸 管中，数分钟后吸管内红细胞溶解，然后再 充池计数。 细胞计数时，如发现较多红细胞有皱缩或肿 胀等异常现象，应如实报告，以协助临床医 生鉴别是陈旧性出血或新鲜出血。 血性脑脊液中的白细胞必须校正后才有价值 白细胞校正数=脑脊液白细胞未校正数—脑脊 液红细胞数×血液白细胞数/血液内红细胞数
白细胞分类计数
直接分类法 白细胞计数后，转换高倍镜，
根据细胞的形态和细胞核形态进行直接分类， 共计数100个白细胞（包括内皮细胞），分别 计数单（个）核细胞（包括淋巴细胞，单核 细胞，内皮细胞）和多（个）核细胞（粒细 胞系）的数量，结果以单核细胞百分比和多 核细胞百分比报告。如白细胞不足100个，可 直接写出单核细胞和多核细胞具体数，若白 细胞数不足30个，可不做直接计数而改用涂 片染色分类计数
稀释计数法（适用于浑浊的脑脊液）
稀释：如标本细胞过多，可根据标本内细胞 多少，用生理盐水或红细胞稀释液对标本进 行一定倍数稀释。 充池：用微量吸管吸取混匀后的稀释脑脊液 充入1个计数池。 计数：静置2~3后，低倍镜计数1个计数池内 四角和中央大方格共5个大方格内的细胞数。 计算：根据5个大方格内细胞总数及稀释倍数， 计算每升脑脊液的细胞总数。
方法学评价
脑脊液细胞计数和分类目前一般任用手 工显微镜法。白细胞直接分类法简单， 快速，但属粗略分类，其准确性差，且 细胞较小，初学者难把握，尤其是陈旧 性标本的细胞变形，分类更困难，误差 较大。涂片染色分类法分类详细，结果 准确可靠，尤其是可以发现异常细胞如 肿瘤细胞。该法被推荐使用，但其操作 较复杂，费时。
白细胞计数
直接计数法（非血性清晰透明或微浑脑 脊液） 除去红细胞：在小试管内加入冰乙酸 1~2滴，转动试管，使内壁粘附少许冰 乙酸后倾去，滴加混匀的脑脊液3~4滴， 混匀，放置数分钟，使红细胞破坏。 充池： 计数： 计算：
稀释计数法（浑浊脑脊液）
稀释破坏红细胞：根据标本内白细胞多少情 况，用白细胞稀释液对标本进行一定倍数的 稀释，混匀，放置数分钟，破坏红细胞。 充池：用微量吸管吸取混匀稀释后的脑脊液 充入1个计数池。 计数：静置2~3min后，低倍镜计数1个计数池 内的四角和中央大方格内的白细胞数。 计算：根据5个大方格内的白细胞总数和稀释 倍数，计算每升脑脊液的白细胞总数