微生物检验第二十三章 立克次体及检验讲义

第二十三章立克次体及检验

本章内容

概述——共同特征

分类

生物学特性

致病性

微生物检验

斑疹伤寒立克次体

恙虫病立克次体

贝纳柯克斯体

埃立克体

汉赛巴通体

概述

·一类微小的原核细胞型微生物，有DNA和RNA。

·大多是人畜共患病原体，引起人类发热和出血性疾病。

·以节肢动物为传播媒介或储存宿主。

·大小介于一般细菌与病毒之间。

·G-，呈多形性，主要为球杆状。

·除极少数外均专性活细胞内寄生。

·对多种抗生素敏感。

分类

对人类致病的立克次体有五个属：

立克次体属：分2个生物型，斑疹伤寒群、斑点热群。

柯克斯体属

东方体属（恙虫病群）

埃立克体属

巴通体属

生物学特性

·形态与结构：形似小杆菌，具有多形性。无鞭毛或荚膜。一般不易着色。

·立克次体的结构与G-菌非常相似，但脂类含量比细菌多，细胞壁弹性较大。

·形态与结构：革兰染色阴性，但一般不易着色，常用Giemsa、Macchiavello和Giménez法染色。

·各种立克次体在细胞内存在部位有所不同。

普氏立克次体分散于胞质中

恙虫病立克次体多在胞质近核处堆积

Q热立克次体则在胞质的空泡中定位

斑点热立克次体除位于胞质外，也可在核内发现。

埃立克体单个或包涵体形式存于宿主细胞膜包被的空泡内。

·抗原：群特异性和种特异性。群特异性抗原是立克次体悬液经乙醚处理后获得的可溶性抗原，种特异性抗原，为颗粒性抗原。

外斐反应：斑疹伤寒等立克次体与变形杆菌某些菌体抗原（OX19、OX2、OX K抗原）具有共同的耐热性多糖类属抗原，因而临床上常用后者代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，作为人类或动物血清中有关抗体的检查。用于立克次体病的辅助诊断。

·培养特性：除巴通体外，其他立克次体只能在活的真核细胞内生长。立克次体的分离繁殖常用方法

有鸡胚卵黄囊培养、细胞培养。接种豚鼠等动物可用于立克次体的初代分离。

汉赛巴通体接种新鲜巧克力平板，在35℃、5%CO2环境中培养2周左右才出菌落。

致病性

·立克次体病

·普氏立克次体→流行性斑疹伤寒（又称虱传斑疹伤寒）

莫氏立克次体→地方性斑疹伤寒（又称鼠型斑疹伤寒）

·恙虫病立克次体→恙虫病

·贝纳柯克斯体（又称Q热立克次体）→Q热

微生物检验

·标本的采集和处理

在病程第1周内并在使用广谱抗生素前采集患者血液5～10ml，立即在患者床边接种于动物。血清学检查标本一般采集3份血液标本，分别取自病程早期、病后10～14d及病后21～28d。

·标本直接检查

1.立克次体的染色法：多用于脏器标本的检查。标本印片、固定后用荧光抗体染色或常规染色镜检。必要时作切片检查。

2.核酸检测：采用PCR技术和核酸探针检测。

·立克次体培养法

1.立克次体分离：斑疹伤寒、斑点热、恙虫病和Q热病原体分离多用动物接种。常用动物有豚鼠、金黄地鼠、小白鼠、大白鼠及家兔等。汉赛巴通体用人工培养基，埃立克体用细胞培养。

2.分离株的大量繁殖及保存用鸡胚卵黄囊培养或细胞培养。

·血清学试验：立克次体病实验诊断和鉴定病原体的重要手段。患者双份血清的试验结果，有利于立克次体病现症诊断。

1.间接免疫荧光（IFA）试验、ELISA间接法是目前检测标本中特异性抗体的常用方法。单份血清滴度≥1:128者有现症诊断意义，一般滴度在1:16或以上即为阳性，4倍增长可作为立克次体病的现症诊断。

2.凝集试验

分为特异性凝集和非特异性凝集试验两种。

（1）特异性凝集试验：微量血凝试验达1:8以上者为阳性。间接凝集试验滴度在1:50以上有诊断价值。

（2）非特异性凝集试验：外斐试验常用于立克次体属的三个生物型的诊断。一般血清滴度达1:160即为阳性，病程中双份或多份血清试验，至少效价有4倍增长才有诊断意义。

斑疹伤寒立克次体——生物学特性

·形态与结构

形态：多形性。

有球形、球杆状、长杆状或长丝状。

大小：比细菌小。

排列：在感染细胞内大多聚集成团分布在胞浆内。

染色：G-不易着色。吉姆萨染色紫红色；Macchiavello染色红色；Giménez染色红色，背景为绿色。

特殊结构：最外表含有黏液层和微荚膜结构。

·培养特性

专性细胞内寄生。

鸡胚成纤维细胞、L929细胞和Vero细胞：繁殖一代需要6～8小时，培养时需要CO2。

动物接种：常用豚鼠，每日观察动物1～2次，注意观察其活动及饮食等有无异常情况。

·抗原

有两类特异性抗原：群特异性抗原，与黏液层的脂多糖有关；种特异性抗原，与细胞壁外膜的表面蛋白成分有关。

·抵抗力

对热敏感，耐低温和干燥。对四环素和氯霉素类抗菌药物敏感。磺胺可刺激其增殖。

斑疹伤寒立克次体——微生物检验

·标本采集：

病程第一周内并在使用广谱抗生素前采集患者血液5～10ml，立即床边接种于动物。血清学检查标本一般采集3份血液标本，分别取自病程早期、病后10～14d及病后21～28d。

活检或尸检组织标本研磨制成10%～20%悬液，低速离心取上清接种，若标本有细菌污染，可加青霉素（100～1000IU/ml）置室温作用30min后接种动物。

·形态学检查：染色及免疫荧光检测。

多用于脏器标本的检査。荧光显微镜下可见脾、肺及心瓣膜赘生物中有立克次体，也可在肝、肾及皮疹活检组织中检出。

·核酸检测：PCR、核酸探针等。

MadridE株染色体环状DNA，G+C含量为29.1mol%；Wilmington株单链环状DNA，G+C含量为28.9mol%。

·分离培养

·血清学试验

抗原检测：用免疫荧光法鉴定感染动物脏器、鸡胚卵黄囊、细胞培养物中的特异性抗原；并用已知抗原测定动物恢复期血清中的相应抗体。

抗体检测：主要采用外斐反应、间接免疫荧光试验、ELISA、补体结合试验等进行抗体检测。

斑疹伤寒立克次体——致病性及临床意义

·致病物质：脂多糖、脂酶A及微荚膜样黏液层。

·所致疾病：地方性斑疹伤寒。

啮齿类动物是主要储存宿主，主要传播媒介是鼠蚤或鼠虱。