微生物检验第二十三章 立克次体及检验讲义

第二十三章立克次体及检验本章内容概述——共同特征分类生物学特性致病性微生物检验斑疹伤寒立克次体恙虫病立克次体贝纳柯克斯体埃立克体汉赛巴通体概述·一类微小的原核细胞型微生物，有DNA和RNA。

·大多是人畜共患病原体，引起人类发热和出血性疾病。

·以节肢动物为传播媒介或储存宿主。

·大小介于一般细菌与病毒之间。

·G-，呈多形性，主要为球杆状。

·除极少数外均专性活细胞内寄生。

·对多种抗生素敏感。

分类对人类致病的立克次体有五个属：立克次体属：分2个生物型，斑疹伤寒群、斑点热群。

柯克斯体属东方体属（恙虫病群）埃立克体属巴通体属生物学特性·形态与结构：形似小杆菌，具有多形性。

无鞭毛或荚膜。

一般不易着色。

·立克次体的结构与G-菌非常相似，但脂类含量比细菌多，细胞壁弹性较大。

·形态与结构：革兰染色阴性，但一般不易着色，常用Giemsa、Macchiavello和Giménez法染色。

·各种立克次体在细胞内存在部位有所不同。

普氏立克次体分散于胞质中恙虫病立克次体多在胞质近核处堆积Q热立克次体则在胞质的空泡中定位斑点热立克次体除位于胞质外，也可在核内发现。

埃立克体单个或包涵体形式存于宿主细胞膜包被的空泡内。

·抗原：群特异性和种特异性。

群特异性抗原是立克次体悬液经乙醚处理后获得的可溶性抗原，种特异性抗原，为颗粒性抗原。

外斐反应：斑疹伤寒等立克次体与变形杆菌某些菌体抗原（OX19、OX2、OX K抗原）具有共同的耐热性多糖类属抗原，因而临床上常用后者代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，作为人类或动物血清中有关抗体的检查。

用于立克次体病的辅助诊断。

·培养特性：除巴通体外，其他立克次体只能在活的真核细胞内生长。

立克次体的分离繁殖常用方法有鸡胚卵黄囊培养、细胞培养。

接种豚鼠等动物可用于立克次体的初代分离。

汉赛巴通体接种新鲜巧克力平板，在35℃、5%CO2环境中培养2周左右才出菌落。

致病性·立克次体病·普氏立克次体→流行性斑疹伤寒（又称虱传斑疹伤寒）莫氏立克次体→地方性斑疹伤寒（又称鼠型斑疹伤寒）·恙虫病立克次体→恙虫病·贝纳柯克斯体（又称Q热立克次体）→Q热微生物检验·标本的采集和处理在病程第1周内并在使用广谱抗生素前采集患者血液5～10ml，立即在患者床边接种于动物。

血清学检查标本一般采集3份血液标本，分别取自病程早期、病后10～14d及病后21～28d。

·标本直接检查1.立克次体的染色法：多用于脏器标本的检查。

标本印片、固定后用荧光抗体染色或常规染色镜检。

必要时作切片检查。

2.核酸检测：采用PCR技术和核酸探针检测。

·立克次体培养法1.立克次体分离：斑疹伤寒、斑点热、恙虫病和Q热病原体分离多用动物接种。

常用动物有豚鼠、金黄地鼠、小白鼠、大白鼠及家兔等。

汉赛巴通体用人工培养基，埃立克体用细胞培养。

2.分离株的大量繁殖及保存用鸡胚卵黄囊培养或细胞培养。

·血清学试验：立克次体病实验诊断和鉴定病原体的重要手段。

患者双份血清的试验结果，有利于立克次体病现症诊断。

1.间接免疫荧光（IFA）试验、ELISA间接法是目前检测标本中特异性抗体的常用方法。

单份血清滴度≥1:128者有现症诊断意义，一般滴度在1:16或以上即为阳性，4倍增长可作为立克次体病的现症诊断。

2.凝集试验分为特异性凝集和非特异性凝集试验两种。

（1）特异性凝集试验：微量血凝试验达1:8以上者为阳性。

间接凝集试验滴度在1:50以上有诊断价值。

（2）非特异性凝集试验：外斐试验常用于立克次体属的三个生物型的诊断。

一般血清滴度达1:160即为阳性，病程中双份或多份血清试验，至少效价有4倍增长才有诊断意义。

斑疹伤寒立克次体——生物学特性·形态与结构形态：多形性。

有球形、球杆状、长杆状或长丝状。

大小：比细菌小。

排列：在感染细胞内大多聚集成团分布在胞浆内。

染色：G-不易着色。

吉姆萨染色紫红色；Macchiavello染色红色；Giménez染色红色，背景为绿色。

特殊结构：最外表含有黏液层和微荚膜结构。

·培养特性专性细胞内寄生。

鸡胚成纤维细胞、L929细胞和Vero细胞：繁殖一代需要6～8小时，培养时需要CO2。

动物接种：常用豚鼠，每日观察动物1～2次，注意观察其活动及饮食等有无异常情况。

·抗原有两类特异性抗原：群特异性抗原，与黏液层的脂多糖有关；种特异性抗原，与细胞壁外膜的表面蛋白成分有关。

·抵抗力对热敏感，耐低温和干燥。

对四环素和氯霉素类抗菌药物敏感。

磺胺可刺激其增殖。

斑疹伤寒立克次体——微生物检验·标本采集：病程第一周内并在使用广谱抗生素前采集患者血液5～10ml，立即床边接种于动物。

血清学检查标本一般采集3份血液标本，分别取自病程早期、病后10～14d及病后21～28d。

活检或尸检组织标本研磨制成10%～20%悬液，低速离心取上清接种，若标本有细菌污染，可加青霉素（100～1000IU/ml）置室温作用30min后接种动物。

·形态学检查：染色及免疫荧光检测。

多用于脏器标本的检査。

荧光显微镜下可见脾、肺及心瓣膜赘生物中有立克次体，也可在肝、肾及皮疹活检组织中检出。

·核酸检测：PCR、核酸探针等。

MadridE株染色体环状DNA，G+C含量为29.1mol%；Wilmington株单链环状DNA，G+C含量为28.9mol%。

·分离培养·血清学试验抗原检测：用免疫荧光法鉴定感染动物脏器、鸡胚卵黄囊、细胞培养物中的特异性抗原；并用已知抗原测定动物恢复期血清中的相应抗体。

抗体检测：主要采用外斐反应、间接免疫荧光试验、ELISA、补体结合试验等进行抗体检测。

斑疹伤寒立克次体——致病性及临床意义·致病物质：脂多糖、脂酶A及微荚膜样黏液层。

·所致疾病：地方性斑疹伤寒。

啮齿类动物是主要储存宿主，主要传播媒介是鼠蚤或鼠虱。

以高热、头痛、全身皮疹为主要特征。

有的伴有神经系统、心血管系统等症状和实质性器官损伤。

恙虫病立克次体——生物学特性·形态与结构形态：多形性。

以球杆状或短杆状为常见。

大小：比细菌小。

排列：分布在细胞质内，密集于细胞核旁。

染色：G-，吉姆萨染色呈紫红色；Macchiavello染色呈蓝色；Giménez染色呈暗红色。

背景为绿色。

·培养特性专性细胞内寄生。

鸡胚卵黄囊培养或细胞培养。

动物接种：小鼠。

·抗原耐热性多糖抗原和特异性抗原。

与变形杆菌OX k株具有共同抗原成分。

恙虫病立克次体——微生物检验·标本采集·形态学检查·核酸检测Boryong株为线性DNA，G+C含量为30.5mol%，Ikeda株为环状DNA，G+C含量为30mol%。

·分离培养·血清学检查：外斐反应、间接免疫荧光试验、ELISA等。

恙虫病立克次体——致病性及临床意义·致病物质：死后所释放的毒素样物质。

·所致疾病：恙虫病。

通过恙螨幼虫叮咬传给人。

疫区主要分布在东亚、南亚、东南亚、太平洋岛屿、日本和我国的东南与西南地区。

可表现为高热，寒战、头痛、肌肉痛。

皮疹一般在发病后3～8天出现。

严重者常出现并发症，包括肺炎、肝炎、心脏的病变、肾功能损害、脑膜炎和脑炎等。

贝纳柯克斯体·专性细胞内寄生，在细胞空泡中繁殖。

·有荚膜，呈绒毛状。

可有芽胞。

·颗粒性抗原。

·抵抗力强，对乙醇、乙醚、三氯甲烷等脂溶剂敏感。

·致病物质为脂多糖。

导致Q热。

对人的感染力特别强，是立克次体中唯一可不借助于媒介节肢动物，而感染动物的排泄物污染环境后，经呼吸道、消化道等途径感染人及动物。

·患者有发热、头痛及肌肉痛，还会出现肺炎和肝炎为其主要的临床特征。

埃立克体·G-小球菌，呈多形性，Romanowsky染色呈蓝色和紫色。

电镜下受侵细胞胞质内可见包涵体。

·有7种主要蛋白抗原。

·有腺热埃立克体、查菲埃立克体和人粒细胞埃立克体3个种，分别引起人腺热埃立克体病、人单核细胞埃立克体病及人粒细胞埃立克体病。

汉赛巴通体·弯曲的杆状小体，呈多形性。

·革兰染色阴性、Giemsa染色呈紫蓝色，镀银染色呈黄色。

·初分离的汉赛巴通体有菌毛。

·唯一可胞外生长的立克次体。

·营养要求苛刻的需氧杆菌，用新鲜血琼脂或巧克力、活性炭-酵母浸液琼脂以及心脑浸液或心浸液琼脂等。

于35～37℃5%C02环境下培养。

·可引起人类杆菌性血管瘤-杆菌性紫癜和猫爪病。

经典例题由立克次体引起的疾病是A.梅毒B.沙眼C.莱姆病D.性病淋巴肉芽肿E.恙虫病『正确答案』E『答案解析』恙虫病立克次体可引起恙虫病。

关于立克次体生物学特征的描述，正确的是A.Giemsa染色呈紫红色B.革兰染色为阳性杆菌C.有鞭毛D.有群特异性抗原，无种特异性抗原E.大多数立克次体不能在活的真核细胞内生长『正确答案』A『答案解析』立克次体Giemsa染色呈紫红色，革兰染色为阴性杆菌，无鞭毛，有群特异性抗原和种特异性抗原，大多数立克次体必须在活的真核细胞内生长。