氨基柱使用与维护

氨基柱使用方法

Luna NH2 PH ： 1.5-11

氨基柱的使用注意事项：

说明： . 氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中，例如 LUNA 氨基柱保存在正己烷 - 乙腈（ 99 ： 1 ）中。而我们做糖分析是用反相流动相，所以要先用异丙醇过渡。

反相使用

1 先用异丙醇冲洗管路（此时不接色谱柱）；然后接上色谱柱，以低流速

（ 0.1ml/min ）用 30 倍柱体积的异丙醇过渡 ( 差不多一夜 ) 。（必须用异丙醇过渡，否则会发生乳化现象，导致色谱柱使用效果变差。）

2 再换成流动相，流动相平衡时间要长一些（为以后色谱柱的稳定打好基础）。

3 配制流动相时，应各组分分别量取，比例较小的组分要精密量取，需调 pH 值时要精密到 0.1 。

4 反相条件下使用时，要特别注意控制 pH 值范围， pH 值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。最理想的 pH 范围在

pH3.0-7.0

5 如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用 80% 水做流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。

色谱柱的冲洗：

乙腈：水（ 95 ： 5 ），过渡到乙腈：水（ 50 ： 50 ），最后保存在乙腈：水（ 95 ： 5 ）中。

色谱柱的保存

反相使用时，如短期不用，可用 95% 甲醇或乙腈保存；长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换，最后用正己烷保存。

再生：

再生方案 1 ： NH2 柱用于反相条件时， NH2 键会水解，尤其是在该柱子 pH 范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用 10 倍柱体积溶液冲洗，如下：

先用 5-10 倍的柱体积的含 0.5-1.0 ％ NH3 的乙腈 - 水 (50:50) 溶液冲洗该柱（冲洗

后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），

再进行下面操作：

95 ％水 /5 ％乙腈

THF 四氢呋喃

95 ％乙腈 /5 ％水

并保持 95 ％乙腈 /5 ％水继续冲洗，以低流速 0.2-0.5mL/min 过夜冲洗。（此方法很多人尝试）

再生方案 2 ：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱

性能 , 清洗时依次用 10 倍柱体积的下列溶液冲洗：

95 ％水 /5 ％乙腈

THF 四氢呋喃

95 ％乙腈 /5 ％水

再走流动相即可

氨基柱的活化

方案 1 ：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以

0.5ml/min 的流速， 20 倍柱体积），再换流动相。这些清洗方法，主要是针对当

样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。

6.2

方案 2 ： NH2 柱用于反相条件时， NH2 键会水解，尤其是在该柱子 pH 范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用 10 倍柱体积溶液冲洗，如下： 95 ％水 /5 ％乙腈

THF 四氢呋喃

95 ％乙腈 /5 ％水

并保持 95 ％乙腈 /5 ％水继续冲洗，以低流速 0.2-0.5mL/min 过夜冲洗。

6.3

方案 3 ：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱性能 ,

清洗时依次用 10 倍柱体积的下列溶液冲洗：

95 ％水 /5 ％乙腈

THF 四氢呋喃

95 ％乙腈 /5 ％水

再走流动相即可

Luna NH2色谱柱的冲洗：

日常冲洗：

乙腈：水（70 ：30 ）至少10倍柱体积；（柱压高了可低流速反冲）

过渡到乙腈：水（90 ：10 ）至少10倍柱体积；

最后保存在乙腈：水（ 95 ： 5 ）中。

色谱柱的保存

反相使用时，如短期不用，可用 95% 甲醇或乙腈保存；长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换，最后用正己烷保存。

再生：

再生方案：

NH2 柱用于反相条件时， NH2 键会水解，尤其是在该柱子 pH 范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用 10 倍柱体积溶液冲洗，如下：

先用 5-10 倍的柱体积的含 0.5-1.0 ％ NH3 的乙腈 - 水 (50:50) 溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），

再进行下面操作：

95 ％水 /5 ％乙腈

THF 四氢呋喃

95 ％乙腈 /5 ％水

并保持 95 ％乙腈 /5 ％水继续冲洗，以低流速 0.2-0.5mL/min 过夜冲洗。