动物的克隆(浙科版)30218ppt课件
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（1）贴壁生长： 悬浮液中分散的细胞紧贴培养瓶内壁才能生长。
（2）接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就
会停止分裂。
（3）正常的生命活动： 生长、分裂、有规律的衰老、死亡等现象，但不分
化。
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细胞贴壁过程
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11
接触抑制
细胞在贴壁生长过 程中,随着细胞分裂,数 量不断增加,最后形成 一个单层,此时细胞间 相互接触,细胞分裂和 生长停止。
织将在细生物胞体网内络的起生来长形环 境成，具如恒有定一的定p弹H值性和 （度韧（7.性23-77的°.4组C））织、、和稳较定器高的官的温。
相CO对2培湿养度箱（中95%）、稳 定保的温C培O2养水平（5%）， 来对细胞或组织进行体 外培养的一种装置。
选择或纯化
细胞株
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离体动物细胞的生长特性：
代
成为细胞系。
培
能连续
不能连续
养
培养的
培养的
连续细胞系 有限细胞系
（异倍体核型细胞）（二倍体细胞）
（ （12…） ）…恶保…性留细接…胞触系抑，制异，体不致致瘤癌性
（遗传物质精改品pp变t ，不死性）
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2、细胞株：
通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或 细胞系中获得的具有特殊性质的细胞系。
如：单抗细胞株 细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、 病毒敏感性和生化特性等。
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2
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3
一、动物细胞、组织培养
1、什么方法取得离体的单个动物细胞？
机械消化或者胰酶消化（胰蛋白酶）
2、离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正 常的生命活动？
能，在人工控制的培养条件下，生长、分裂乃至 接触抑制和衰老、死亡等，并呈现一定的组织特性。
3、是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表 现出生命活动？
3、有的细胞只能分化为一精品种ppt 细胞，叫单能干细胞。19
一、动物细胞全能性的表现程度
1、高等动物细胞
受精卵 > 胚胎干细胞 > 多能干细胞 > 单能干细胞 >分化的 体细胞
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1
1、动物细胞全能性的特点？ 随着细胞分化程度的提高而全能性逐渐受到限制，
分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。
2、离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆 成完整的植株，那么动物细胞和组织能否也进行同 样的克隆？ 不能，动物细胞的全能性受到限制，到现在为止 将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难，所以 动物细胞和组织不能进行与植物一样的个体克隆。
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ຫໍສະໝຸດ Baidu
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（二）培养过程
从动物胚胎或幼龄动物组织 切片中取小片样品
机械消化或胰酶消化 （胰蛋白酶）
单个细胞悬浮液 转入特殊培养液 原代培养
原代培养物 选择或纯化 细胞株
分装到多个卡氏瓶中 传代培养 细胞系
二氧动化物碳组培织养细箱胞间 隙通中过含在有培一养定箱量内模的拟 形胶成原一个纤类维似等细蛋胞白或质组，
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如何界定原代培养和传代培养？为什么要传代培养？
细胞悬 浮液
原代培养
传代培养
转入特殊培养液 首次培养
为什么？换瓶后培养
如果不进行传代培养，就会因细胞密度过大 和代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长。
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四、细胞系、细胞株
原代培养
原代培养物
细胞系：可连续传代的细胞
传
原代培养物在首次传代时就
（一）培养条件
1、含全部营养物质的培养液
成分：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等
2、适宜的环境条件
无菌、无毒环境：加抗生素，定期更换培养液
适宜的温度和pH值：温度：36.5±0.5 ℃
pH值：7.2-7.4
适宜的气体环境：O2和CO2（95%空气和
5%CO2）
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适宜的渗透压等
（二）培养过程
1、幼嫩细胞（如：动物胚胎或幼龄动物组织、器官）
2、含全部营养物质的液体培养基和适宜的环境条件。
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动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，
使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内 一样呈现一定的组织特性。
组 织 培 养
动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持
生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最 终成为细胞培养。
动物器官培养：体外培养动物器官原基、部分
或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的
结构、功能及分化能力。
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二、动物组织培养技术的发展
1.1885年，鸡神经板在生理盐水“组中织培培养养成”活一。词产生
2.1903年，皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月， 且观察到细胞分裂。 3看.1到9神07经年末，端蛙的胚阿神米经巴管运在动蛙。淋真创巴正立液的了中组悬悬织 浮浮培 培培养 养养开 法，始成；功
有限细胞株：传代次数有限的细胞株
连续细胞株：可连续多次传代的细胞株。
细胞系：泛指可传代的细胞。
细胞株: 具有特殊性质的细胞系。
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五、克隆培养法（细胞克隆）
1、概念： 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，
使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。
异质性细胞系
克隆培养
纯系（克隆）
2、特点： 遗传性状均一、表现的性状相似，便于研究
6、细胞克隆的主要用途：
从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系。
用于研究细胞的遗传规律精品和ppt 生理特性。
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一、动物细胞全能性的表现程度
受精卵
二分 裂球
四分 裂球
八分 裂球
桑椹胚 囊胚
原肠胚
组织、器官
幼体
1、动物的受精卵，卵裂球含有2-8个细胞时，每个 细胞具有全能性。 2、随着胚胎发育的继续，有的细胞只具有分化出 各种组织细胞的潜能，这样的细胞叫多能干细胞。
3、最基本要求:
保证所建成的克隆来源于单个细胞
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4、适合于克隆的细胞：
对环境有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞
群体细胞> 单细胞 无限细胞系、转化或肿瘤细胞 >原代细胞、有限细胞系
5、提高细胞克隆形成率的措施：
•选择适宜的培养基 •添加血清 （胎牛血清） (能促进细胞的生长、增殖和贴附) •以滋养细胞支持生长（经射线照射的小鼠成纤维细胞） •激素刺激（胰岛素等） •使用CO2培养箱，调节PH
4.1912年，鸡胚浸出液对鸡胚成心功脏进组行织了块传进代行培原养代；培养
和传代培养。
发明了卡氏瓶；
5.1943年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞
克隆。
标志着组织培养工作进入
6.1950年，人工培养液“199全”研新制阶成段功
7.1951年，海拉细胞系的建成。
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三、动物细胞培养过程
（2）接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就
会停止分裂。
（3）正常的生命活动： 生长、分裂、有规律的衰老、死亡等现象，但不分
化。
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细胞贴壁过程
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接触抑制
细胞在贴壁生长过 程中,随着细胞分裂,数 量不断增加,最后形成 一个单层,此时细胞间 相互接触,细胞分裂和 生长停止。
织将在细生物胞体网内络的起生来长形环 境成，具如恒有定一的定p弹H值性和 （度韧（7.性23-77的°.4组C））织、、和稳较定器高的官的温。
相CO对2培湿养度箱（中95%）、稳 定保的温C培O2养水平（5%）， 来对细胞或组织进行体 外培养的一种装置。
选择或纯化
细胞株
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离体动物细胞的生长特性：
代
成为细胞系。
培
能连续
不能连续
养
培养的
培养的
连续细胞系 有限细胞系
（异倍体核型细胞）（二倍体细胞）
（ （12…） ）…恶保…性留细接…胞触系抑，制异，体不致致瘤癌性
（遗传物质精改品pp变t ，不死性）
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2、细胞株：
通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或 细胞系中获得的具有特殊性质的细胞系。
如：单抗细胞株 细胞株一般具有恒定的染色体组型、同工酶类型、 病毒敏感性和生化特性等。
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一、动物细胞、组织培养
1、什么方法取得离体的单个动物细胞？
机械消化或者胰酶消化（胰蛋白酶）
2、离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正 常的生命活动？
能，在人工控制的培养条件下，生长、分裂乃至 接触抑制和衰老、死亡等，并呈现一定的组织特性。
3、是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表 现出生命活动？
3、有的细胞只能分化为一精品种ppt 细胞，叫单能干细胞。19
一、动物细胞全能性的表现程度
1、高等动物细胞
受精卵 > 胚胎干细胞 > 多能干细胞 > 单能干细胞 >分化的 体细胞
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1
1、动物细胞全能性的特点？ 随着细胞分化程度的提高而全能性逐渐受到限制，
分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。
2、离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆 成完整的植株，那么动物细胞和组织能否也进行同 样的克隆？ 不能，动物细胞的全能性受到限制，到现在为止 将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难，所以 动物细胞和组织不能进行与植物一样的个体克隆。
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（二）培养过程
从动物胚胎或幼龄动物组织 切片中取小片样品
机械消化或胰酶消化 （胰蛋白酶）
单个细胞悬浮液 转入特殊培养液 原代培养
原代培养物 选择或纯化 细胞株
分装到多个卡氏瓶中 传代培养 细胞系
二氧动化物碳组培织养细箱胞间 隙通中过含在有培一养定箱量内模的拟 形胶成原一个纤类维似等细蛋胞白或质组，
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如何界定原代培养和传代培养？为什么要传代培养？
细胞悬 浮液
原代培养
传代培养
转入特殊培养液 首次培养
为什么？换瓶后培养
如果不进行传代培养，就会因细胞密度过大 和代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长。
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四、细胞系、细胞株
原代培养
原代培养物
细胞系：可连续传代的细胞
传
原代培养物在首次传代时就
（一）培养条件
1、含全部营养物质的培养液
成分：无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等
2、适宜的环境条件
无菌、无毒环境：加抗生素，定期更换培养液
适宜的温度和pH值：温度：36.5±0.5 ℃
pH值：7.2-7.4
适宜的气体环境：O2和CO2（95%空气和
5%CO2）
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适宜的渗透压等
（二）培养过程
1、幼嫩细胞（如：动物胚胎或幼龄动物组织、器官）
2、含全部营养物质的液体培养基和适宜的环境条件。
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动物细胞培养：体外培养分散后的单个细胞，
使其得以生存，并保持生命活动现象。像体内 一样呈现一定的组织特性。
组 织 培 养
动物组织培养：体外培养动物组织，使其维持
生活状态或生长特性。可以伴随组织分化，但最 终成为细胞培养。
动物器官培养：体外培养动物器官原基、部分
或整个器官，使之得以保存、生长。保持器官的
结构、功能及分化能力。
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二、动物组织培养技术的发展
1.1885年，鸡神经板在生理盐水“组中织培培养养成”活一。词产生
2.1903年，皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月， 且观察到细胞分裂。 3看.1到9神07经年末，端蛙的胚阿神米经巴管运在动蛙。淋真创巴正立液的了中组悬悬织 浮浮培 培培养 养养开 法，始成；功
有限细胞株：传代次数有限的细胞株
连续细胞株：可连续多次传代的细胞株。
细胞系：泛指可传代的细胞。
细胞株: 具有特殊性质的细胞系。
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五、克隆培养法（细胞克隆）
1、概念： 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，
使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。
异质性细胞系
克隆培养
纯系（克隆）
2、特点： 遗传性状均一、表现的性状相似，便于研究
6、细胞克隆的主要用途：
从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系。
用于研究细胞的遗传规律精品和ppt 生理特性。
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精品ppt
18
一、动物细胞全能性的表现程度
受精卵
二分 裂球
四分 裂球
八分 裂球
桑椹胚 囊胚
原肠胚
组织、器官
幼体
1、动物的受精卵，卵裂球含有2-8个细胞时，每个 细胞具有全能性。 2、随着胚胎发育的继续，有的细胞只具有分化出 各种组织细胞的潜能，这样的细胞叫多能干细胞。
3、最基本要求:
保证所建成的克隆来源于单个细胞
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4、适合于克隆的细胞：
对环境有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞
群体细胞> 单细胞 无限细胞系、转化或肿瘤细胞 >原代细胞、有限细胞系
5、提高细胞克隆形成率的措施：
•选择适宜的培养基 •添加血清 （胎牛血清） (能促进细胞的生长、增殖和贴附) •以滋养细胞支持生长（经射线照射的小鼠成纤维细胞） •激素刺激（胰岛素等） •使用CO2培养箱，调节PH
4.1912年，鸡胚浸出液对鸡胚成心功脏进组行织了块传进代行培原养代；培养
和传代培养。
发明了卡氏瓶；
5.1943年，获得长期培养细胞系（可连续传代）和细胞
克隆。
标志着组织培养工作进入
6.1950年，人工培养液“199全”研新制阶成段功
7.1951年，海拉细胞系的建成。
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三、动物细胞培养过程