高中生物第二章克隆技术第6课时动物的克隆(Ⅱ)浙科版选修3

__合__物_
， 原 因 是 一 般 特抗异探血针 清 中 的 抗 体 是
_结__构_____细__胞__学__分__布________功__能__
。
(4)单克隆抗体的应用：单抗可作为
，研究相应抗原
蛋白的
助学巧记
血清抗体与单克隆抗体比较
项目
分泌细胞
特点
生产
单克隆抗体
杂交瘤细胞
特异性强、灵敏度 产量高，易纯化
答案
6.获取单克隆抗体的场所：若在培养基中进行杂交瘤细胞培养，则从
培养液
中 提 取 ； 若 在 小 鼠 或 其 他 动 物 腹 腔 中 培腹养水 ， 则 从
中提取。
例1 (2017·浙江选考联考)TOP2A蛋白在多种肿瘤细胞中大量表达，成为 抗肿瘤的研究靶点，某科研单位制作了TOP2A蛋白的单克隆抗体。请回答： (1)利用基因工程制备TOP2A蛋白：TOP2A蛋白基因和质粒用___限__制__性__核__酸 _内__切__酶__和__D_N_A_连__接__酶___处理并连接成重组质粒，然后导入经_C_a_C_l_2_处理的 大肠杆菌，并将大肠杆菌接种到含氨苄青霉素的LB液体培养基中培养，经 离心得到菌体，破碎提纯得到TOP2A蛋白。
体外培养
2.用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因是什么？ 答案 (1)每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体；不同种类的B淋巴 细胞分泌的抗体不同； (2)B淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖，骨髓瘤细胞能够无限增殖。
答案
3.杂交瘤技术制备单克隆抗体的最大优点：可以从特异抗原成分比例极少
的抗原混合物中获得 单抗
选修3 现代 生物技术专题
第二章 克隆技术
第6课时 动物的克隆(Ⅱ)
知识内容
要求
考情解读
动物的克隆
1.简述动物的细胞融合技术及应用。 2.描述动物细胞全能性的表现程度，说出动物难以克 隆的原因。 a 3.简述动物细胞核移植的概念和程序。 4.列举动物细胞培养与动物细胞核移植的应用和发展 前景。
内容索引
一、动物的细胞融合技术及其应用 二、动物的克隆繁殖 达标检测
一、动物的细胞融合 技术及其应用
新知导学
1.细胞融合与细胞杂交
(1)细胞融合
①含义：指 两个或多个细胞
融合成一个细胞的现象。
②促融方法：灭活的 仙台病毒 技电术融等合，技其术中
聚乙二、醇
介导、电融合
是效率很高的新型细胞融合技术。
(2)细胞杂基交因型不同
解析 在基因工程中常用限制性核酸内切酶和DNA连接酶处理并连接目的 基因和质粒。为提高重组质粒导入大肠杆菌的概率，常用CaCl2处理大肠 杆菌，以增大大肠杆菌细胞壁的通透性。
解析 答案
(2)TOP2A蛋白单克隆抗体的制备：将TOP2A蛋白反复多次注射到小鼠体内， 使 其 发 生 _____免__疫__反_ ，应取 经 过 免 疫 的 小 鼠 B 淋 巴 细 胞 和 骨 髓 瘤 细 胞 在 __聚__乙__二__醇__(填物质名称)介导下发生细胞融合，形成杂交瘤细胞。并将各 杂交瘤细胞单独分装培养，经筛选、_克__隆__培__养__后，获得能产生单一抗体 的__C_(A.连续细胞系 B.有限细胞系 C.连续细胞株 D.有限细胞株)。
应用
进行
；制备基___因__的___定__位_
单克隆抗体
探究2——图示解读 下列是制备单抗的基本方法步 骤。请完善右图并思考回答相 关问题： 1.制备单克隆抗体的关键思路 是：(1)克隆单一的B淋巴细胞， 形成细胞群；(2)将_B_淋__巴__细__胞_ 与骨髓瘤细胞融合，获得杂交 瘤细胞。
骨髓瘤 杂交细胞 杂交瘤细胞
。
4.制备单克隆抗体过程中的几种细胞的特点：(1)免疫的B淋巴细胞：能产
生 单一抗体
， 但 不 能 无 限 增 殖 。 (2) 骨无髓限增瘤殖细 胞 ： 能
，但不能产生特抗定体的。抗(体3)杂交瘤细胞：既能产生
无限增殖
，又能在培养条件下进行
。
5.单克隆抗体制备过程中有两次筛选，其目的分别是什么？ 答案 第一次筛选是在B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合之后，筛选出只有B淋 巴细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞。第二次筛选需先在多孔培养皿上培 养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产 生特异性抗体的细胞群。
高
分离
血清抗体
特异性差、灵敏度 产量低，分离困
各B淋巴细胞
低
难
互动探究 探究1——理性思维 下列是A细胞与B细胞融合杂交的过程图解。思考回答相关问题：
指两个或多个动物细胞融合成一个细胞的现象，其中基因型不同的
概念
细胞间的融合就是__________
细胞杂交
原理
细__胞___膜__的__流___动__性__
(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞,则B细胞是取自_感__染__H_5_N_1_病__毒__的__动__物__或__人__ 的细胞，C过程化学诱导试剂常用__聚__乙__二__醇_。
①概念：
染色体 的细胞间的融合。
染色体丢
②失应用：细胞杂交中
容 易 丢 失 ， 利 用基杂因交定细位胞 检 测 特 定
_________
2.单克隆抗体的制备 (1)过程
B淋巴 细胞 骨髓瘤细胞
产生特定 抗体的杂 交细胞
提取 抗体
(2)杂交瘤细胞的特点：无限增殖
单克隆抗体，
产
生
。
优越
(3得) 单多 克 隆 抗 体 的 优 点 ： 其 识 别 抗 原 部一群位识的别专不一同性抗，原比部一位般的抗抗血体混清
①物理、化学方法：聚乙二醇、电刺激等；②生物方法： 诱导融合的方法
_________灭__活的病毒
过程描述 融合成功的标志
膜融合→质融合→核融合
杂交细胞进行__有__丝___分__裂_
重组细胞的特点 杂交细胞具有两个细胞的遗传信息，能表现两个亲本的性状
检测特定染色体丢失与特定基因产物(蛋白质)减少的对应关系
解析 在杂交瘤细胞制备过程中，常用聚乙二醇作介导物质，选择发生免
疫的B细胞和可无限传代的骨髓瘤细胞融合，筛选后获得能产生某一特定
抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞能够无限增殖，且筛选后已分离纯化，因
此杂交瘤细胞单独分装培养，经筛选、克隆培养后，获得的是能产生单一
抗体的连续细胞株。
解析 答案
例2 (2016·瑞安期中节选)科学家从病死的家禽和候鸟体内分离到了 H5N1禽流感病毒，用以生产可以预防和治疗禽流感的抗体，如图为单பைடு நூலகம்隆 抗体制备过程示意图，图中A～G分别表示生物技术或细胞名称，请回答有 关问题：