山梨酸的测定

山梨酸的检测

简介

山梨酸及山梨酸钾（以下简称山梨酸及钾盐）是一种良好的食品防腐剂。

性状

本品为白色至微黄白色结晶性粉末；有特臭。本品在乙醇中易溶，在乙

醚中溶解，在水中极微溶解。

主要用途

广泛用于食品、化妆品、农产品等行业。霉菌和酵目菌的抑制剂、食品防霉剂、干性油类变性剂、杀菌剂等。

山梨酸的检测方法

1 .高效液相色谱法测定山梨酸

[1] 采用高效液相色谱法测定咸菜中的山梨酸,方法简单,快速,分离效果好,灵

敏度较高。

2.1.1 实验部分

2.1.1.1 试剂甲醇（色谱纯）。 2.1.1.2 山梨酸标准溶液由国家标准物质中心提供,标准溶液浓度为1mg/mL。再用水稀释10倍配制成100μg/mL混合标准溶液。

2.1.1.3 仪器HP1000 高效液相色谱仪(带紫外检测器)；离心机；pH 计。

2.1.1.4 色谱仪工作条件色谱柱：HPODS Hypersil（C18）5μm ，125×4mm；流动相：甲醇-乙酸铵缓冲溶液(pH4.6)(60+40)；流速：1.0mL/ min。扫描波长：200.0~300.0；测定波长：220.0。

2.1.1.5 样品预处理准确称取切碎样品

3.000-5.000g，放入。50mL 比色管中，并加水至刻度，振荡、摇匀、静置半小时后，用定量滤纸过滤，备用。取上述

过滤液用1+1 氨水调至pH7，经0.45μm 滤膜过滤后作为待测液。

2.1.1.6 标准曲线绘制取100μg/mL 混合标准溶液0.0, 0.5, 1.0,2.0 ,5.0

mL于10mL 容量瓶中,用水定容至刻度,配制成0, 5,10,20, 50μg/mL 混合标准

系列, 取10μL注入高效液相色谱仪中,记录各色谱峰保留时间,峰面积,绘制标

准曲线。

2.1.1.7 样品测定取10μL 样品待测液注入液相色谱仪中，比较样品与标准组分的保留时间,吸收光谱特性进行定性,用外标法定量。

2.1.2 结果与讨论 2.1.2.1 分离条件的选择在上述色谱条件下测定，保留时

间为山梨酸1.682 min，各组份分离效果较好。标准曲线的回归系数均达到

0.999。

2.1.2.2 样品处理咸菜中所含蛋白较少可以不需加沉淀剂,直接浸泡后测定.咸菜中的氯化钠对实验不干扰。

2.1.2.3合格样品通过对所采10份样品进行检测,样品中所含的山梨酸

<0.1mg/kg,全部合格。 2.1.2.4 准确度试验分别对窄菜,咸黄瓜,糖醋蒜进行加标回收测定，山梨酸平均回收率为97.6%，结果见表1。表1 样品加标回收率测定结果样品项目加标量（μg）测量值（μg）回收率（%）窄菜山梨酸 50 45.2 90.4 咸

黄瓜山梨酸 50 52.0 104 糖醋蒜山梨酸 50 44.7 89.4 2.1.2.5 精密度

试验对同一样品重复测定5 次，山梨酸含量的平均值分别为0.0969 mg/kg (范

围为0.0945~0.100 mg/kg)、0.0932mg/kg(范围0.0893~0.0964mg/kg),相对标准偏差分别为2.4%、2.3%。

2. HPLC法测定山梨酸的含量

将多维生素糖浆直接用纯水稀释后以 HPLC 法测定防腐剂山梨酸的含量。方法

快速、简便、灵敏、准确, 可有效控制多维生素糖浆的质量和用药安全。

2.2.1 试剂与仪器

2.2.1.1 试剂山梨酸对照品( 中国药品生物制品检定所) ; 多维生素糖浆

( 韩国永进药品有限公司); 甲醇为色谱纯, 水为超纯水, 己烷磺酸钠、三乙胺、乙酸为分析纯。 2.2.1.2 仪器岛津 LC-2010C高效液相色谱-紫外仪和CLASSVP色谱工作站。 2.2.2 方法与结果 2.2.2.1 色谱条件色谱柱:

Allthna C18柱(4.6*250mm, 5um);流动相 A: 8mmol* L- 1己烷磺酸钠溶液(1000mL溶液加入三乙胺0.25mL和乙酸9.2mL)；流动相B:甲醇; 流

速:1.0mL*min-1，按表2进行梯度洗脱；检测波长：280nm；柱温：25℃；进样量:10uL。

2.2.2.2 对照品储备溶液的制备精密山梨酸对照品11.67mg(99.7%),分别置10mL 量瓶中, 均加水溶解并稀释至刻度,摇匀,得到山梨酸(1.1635mg* mL- 1)对照品储备溶液。 2.2.2.3 系统适用性试验分别量取2.2项下各对照品储备液适量, 加水制成每1mL中约含。山梨酸0.15mg 的混合标准溶液, 精密量取该混合标准溶液10uL, 按上述色谱条件分析, 记录色谱图。结果该物质与相邻色谱峰分离度均大于1.5, 理论塔板数均大于2000。山梨酸的保留时分别为

30.1min、17.6min、19.3min、40.3min

2.2.2.5样品测定与结果取多维生素糖浆(乐唯多)3批,各精密量取10mL,50mL 量瓶中, 用水洗出移液管内的附着液并入量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,为供试品溶液; 另取山梨酸对照品各适量, 加水制成每1mL中约含山梨酸。0.3mg 的溶液, 作为对照品溶液。精密量取供试品溶液和对照品溶液各10uL注入液相色谱仪, 记录色谱图; 按外标法以峰面积计算含量。根据该品种质量标准规定山梨酸的含量应不超过。标示量的100.0%

3．紫外分光光度法

1 材料与方法

1. 1 仪器

PE - Lambda 35紫外可见分光光度计。

1. 2 试剂

乙醚(分析纯), 浓度为40 g /LNaOH 溶液,50%浓度的HC l溶液, 1 mg /mL 苯甲酸钠标准溶

液(国家标准物质中心)。

2 实验内容和步骤

2. 1 测定波长的确定

准确吸取苯甲酸钠标准溶液1. 00 mL 于100mL容量瓶中, 用蒸馏水稀释成浓度为10mg /L的苯甲酸钠溶液, 摇匀, 以蒸馏水作参比, 在波长分别在200~ 400 nm 波长范围内扫描, 得知苯甲酸