甾体激素类

0.30
Propylparaben
0.25
AU
0.20
Uracil
0.15
0.10
0.05
0.00 0.00
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
5.50
6.00
6.50
7.00
Minutes
二、特殊杂质检查
（1）游离磷酸盐
磷酸酯化时残存的过量磷酸盐 采用钼蓝比色法检查
酯化吸收减慢，作用时间长。
雄性激素及蛋白同化激素
主要活性基团 △4 – 3–酮
性
质
UV、与羰基 试剂反应
可成酯
C17 – β – 羟基
孕激素
CH3 C O H H O H
黄体酮
1.母核有21个碳原子
2. A环△4-3-酮基
3.C17位上有甲酮基
孕激素
主要活性基团 △4 – 3–酮 性 质
UV、与羰基试 剂反应
1. 四氮唑比色法 （1）原理
还原性
肾上腺皮质激素类 C17 -α－醇酮基
C 醇酮基
四氮唑盐
OH - [还原]
有色甲臜
氯化三苯四氮唑（TTC）
N N
C
N NCl
+
红四氮唑（RT）
2e
OH

三苯甲瓒↓深红
max 480 ~ 490nm
N N H
C
N N
蓝四氮唑 （BT）
UV、与羰基试 剂反应
C17 – α – 醇酮基
还原 性
常见药物有氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸氟轻松、倍他 米松等。
雄性激素及蛋白同化激素
O O H H H O H
O H H H O
CH3
O H
睾酮
苯丙酸诺龙
1.雄性激素母核有19个碳原子,蛋白同化激素 C10位上一般无角甲基,母核有18个碳原子 2. A环△4-3-酮基 3.C1ห้องสมุดไป่ตู้位上有β-羟基,或由它们形成的酯
方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位 置与对照品溶液的主斑点相同。
炔诺酮 TLC图
8. HPLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如： 醋酸氟轻松软膏）
方法：对照品法 要求在含量测定项 下记录的色谱图中， 供试品峰的tR与对照品 峰的tR一致。
0.40
0.35
Ethylparaben
对照品法
地塞米松磷酸钠 氢化可的松磷酸钠 倍他米松磷酸钠
氢化泼尼松磷酸钠
MoO
原理： 方法：
PO 还原
H PO
H
钼蓝 H PMoO nH O


A样 供试液 钼 酸 铵 还原 nm A对 对照液
OH
[Fe CN NO]
黄体酮
OH 蓝紫色
（4）有机卤素 呈蓝紫色 茜素氟蓝 硝酸亚铈 有机氟 有机破坏 有机氯 Fˉ Clˉ 硝酸-硝酸银 AgCl↓
2. 沉淀反应 1）. 与菲林试剂的沉淀反应
肾上腺 皮质激 素药物
碱性酒石酸铜 （斐林试剂）
Cu2O↓橙红色
2）. 与硝酸银的沉淀反应 含炔基的 甾体激素 硝酸银
常用的羰基试剂： 2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼
睾酮
异烟腙（黄色）
（2） C17 – α – 醇酮基 肾上腺皮质 激素药物 四氮唑盐
呈色
OHˉ
（3）甲酮基
具有甲酮基或 活泼亚甲基的 甾体激素类药 物
亚硝基铁氰化纳 间二硝基酚、芳香醛
呈色
黄体酮
亚硝基铁 氰化纳
蓝紫色
淡橙色
其他甾体
不显色

N N C N NCl
+
N
+
C
N N
N Cl
OCH 3
OCH 3
OH

4e
双甲瓒（暗蓝）
max 525nm
甾基甲酸衍生物 醇酮基 [O] 酮 醛基
e
分子重排
OH-
羟基 羧酸衍生物
醋酸泼尼松龙软膏 含量测定 对照液：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg， 臵100ml量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并 稀释至刻度，摇匀，即得。 供试液：精密称取本品4g（约相当于醋酸泼 尼松龙20mg），臵烧杯中，加无水乙醇约 30ml，臵水浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼 尼松龙溶解，再臵冰浴中冷却，滤过，滤液 臵100ml量瓶中，同法提取三次，滤液并入量 瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
不相同，因此在甾体激素类药物的质量控制中，
1、定义：与标示药物结构不同的甾体化合物都称为
“其他甾体”
2 来源：原料、中间体、异构体、降解产物 3、特点：（1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似
检查方法： TLC法（高低浓度对比法） HPLC法（类似高低浓度对比法）
（1）TLC法（高低浓度对比法） 判定方法： 规定杂质斑点数目
测定法：精密量取上述溶液各1ml，分别臵干燥
具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯
四氮唑试液2ml，摇匀，再各精密加氢氧化四甲 基铵试液1ml，摇匀，在25℃暗处放臵40～50分 钟，照分光光度法，在485nm的波长处分别测 定吸收度，计算，即得。操作应避光。
（4）影响因素
1. 结构的影响
（2）甲醇和丙酮（残留溶剂） GC法 甲醇 不得出峰 （灵敏度法） 检测限= 3.1ng
丙酮
≤5.0% 内标法 + 校正因子
（3）雌酮
原理 Zimmermann反应
高纯度
O C CH2
紫红色 碱性KOH乙醇
间二硝基苯
（4）硒的检查
有毒 来源
方法
合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢
C11= O＞ C11－OH
2. 溶剂、水分的影响
C21－OH＞ C21-酯
盐酸羟胺
（4）.酯的水解 丙酸睾酮
醇制的氢氧化钾
游离睾酮 熔点为150～156°C
4.水解产物的反应
醇 制NaO H 戊酸雌二醇 戊酸 H
特臭
5. UV法
规定最大吸收波长 最大吸收波长处的吸收度 某两个吸收波长处吸收度的比值
C C C O △４-3-酮 约240nm
少一个C
这是苯环
• 环上双键的表示方法： • 用“”表示 ,双键的位置写在的右 上角。双键位置
5 4
4
1,4
5 6
5 5(10)
1 2
10
5 4
5
• 环上取代基构型表示方法： ＊构型： • 与母核连接的取代基,指向环平面的前 面时,为构型.用实线表示“———” ＊构型： • 与母核连接的取代基,指向环平面的背 面时,为构型.用虚线表示“”
规定杂质斑点颜色
特点： （1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量；
（4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。
（2）HPLC法（高低浓度对比法）
判定方法：
规定杂质峰数目
规定杂质峰面积
特点： （1）需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）可以控制杂质的总量；
一、结构与性质
肾上腺皮质激素
O HO H OH CH2OH
HO O H O
O CH3
OH CH3 F H H
H O
H
O
氢化可的松 1.均有21个碳原子
醋酸地塞米松
2. A环△4-3-酮基, UV、与羰基试剂反应
3.C17位上有a-醇酮基,具还原性
1. 肾上腺皮质激素
主要活性基团
△4 – 3–酮
性 质
白色的银盐沉淀
↓
3）、与氨制硝酸银试液的反应 银（Ⅰ）在碱性条件下可被还原物质还原为黑色的 金属银沉淀。如：中国药典鉴别醋酸去氧皮质酮
CH2OCOCH3 CH2OCOCH3 C=O C=O
＋2Ag
OH
+
+ 2OH
-
NH3
O
CH
O
OH
C=O
+2Ag
黑色
O
+ CH3COOH
4）. 与硝酸-硝酸银的沉淀反应 含有氯取代的甾体激素类药物。
C
8 7 6 14
D
15
A
5
B
甾体激素类药物的母核是由 A、B、C、D四个环组成的。环 上碳原子编号：1－17。 D环：环戊烷结构 A、B、C环：全氢化菲（菲烷 )
三个六元环+一个五元环
菲
所以甾体激素类药物的母核叫环戊烷并多氢菲。
分类：
肾上腺皮 糖皮质激素 质激素 甾体激素 性激素
盐皮质激素
雄性激素及蛋白同 化激素
孕激素 雌激素
风湿病学家Philip Hench致力于风湿性关节炎的治疗，他在1930 年发现得黄疸或怀孕的病人，其风湿病情就会减轻。于是他就 猜测关节炎不大可能是感染引起的疾病，而可能与内分泌有关， 相应的治疗药物也应当是人体自身分泌的物质。他与同事 Reichstein和Edward Kendall一起，研究肾皮质激素并分离了可 的松。不过由于纯度不高而无法体现出疗效。 最后，默克公司参与进来，默克公司的资深化学家Lewis Sarett 通过36步全合成反应，打通了可的松的合成工艺。在19481949年左右，Hench得到了纯度较高的可的松并进行临床试验， 临床效果非常喜人。 由于发现用激素来治疗风湿性关节炎的方法，整个科学界为之 震动。1950年，三人一起获得了诺贝尔医学奖。其颁奖速度可 与胰岛素相媲美。 虽然可的松的副作用太大，而无法在临床推广，但用激素治疗 免疫性疾病的疗法却从此广泛应用，氢化可的松等相关衍生物 也迅速被推向市场。
3 制备衍生物测定m.p. （1）酯的生成
炔雌醇 苯甲酸酯 KOH m.p. ~ ℃
苯甲酰氯
（2）缩氨基脲的生成 如苯丙酸诺龙（甾酮）+ 盐酸氨基脲
-H2O
苯丙酸诺龙缩氨脲 熔点为178-185°C
（3）.肟的生成 羰基与羟胺生成肟，测熔点
黄 体 酮 黄 体 酮 双 酮 肟 △ m. p.235 240℃
CCCCCC
苯环 约280nm
6. IR法
ν OH
3750～3300cm-1 3300～3000cm-1
C H
ν CO
ν CH
3000～2700cm-1
1900～1650cm-1 1650～1450cm-1
CC
CH
1000～650cm-1
7 .TLC法
主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别
pH . . ,二氨基萘
Se ,苯并苯硒二唑
环己烷
A nm
Se
氧瓶燃烧
Se 二氨基萘比色
盐酸羟胺
法测定
5.其他甾体
甾体激素类药物多由其它甾体化合物或结 构类似的其它甾体激素经结构改造而来，所以 可能带来原料、中间体、异构体、降解产物以 及试剂和溶剂等杂质。有些杂质与该甾体激素 药物结构类似，也具有一定的药理作用而又互 “其他甾体”的限度检查显得很重要。
甾体激素药物 H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl
荧光
呈色
加水稀释 褪色并澄清
显 色 醋酸可的松 黄或微带橙 炔雌醇 炔雌醚 泼尼松 泼尼松龙 橙红 橙红 橙 深红
黄绿 黄绿 黄→蓝绿
絮状↓玫红 ↓红色 絮状↓灰
2. 官能团的呈色反应 （1）C3–酮基和C20–酮基
甾酮激素 类药物
羰基试剂
呈色
甾体激素类药物的分析
概
述
激素（Hormone，荷尔蒙）----是人体内各 种内分泌腺所分泌的一种生物活性物质。激
素作用于特定的称为靶器官的组织、细胞上
而发挥作用。 如果激素分泌出现平衡失调，
可使人体发生病变，如甲亢、糖尿病等。
概述
12 11 1 2 3 4 10 9
基本结构：环戊烷并多氢菲
17 13 16
（对照液
0.035mg/ml KH2PO4）
供试品中游离磷酸盐按磷酸计算的限量：
H PO KH PO
. .% % .% L .
地塞米松磷酸钠
检查 游离磷酸
精密称取本品20mg，臵25ml量瓶 中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫 酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶 液1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放 臵30～50分钟，照分光光度法，在740 nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法 处理的吸收度比较，不得更大。
C17 –甲酮基
与亚硝基铁氰 化钠反应
雌性激素
18
OH
17
OH C CH
HO
HO
雌二醇
2. A环为苯环, C3位上有酚羟基
3.C17位上有β-羟基
炔雌醇
1.母核有18个碳原子,C10无角甲基
雌激素
主要活性基团
性
质
UV、与重氮苯 A环为3–OH 苯环 磺酸盐反应 C17 –乙炔基 与AgNO3反应
C17 –羟基
可成酯
• 小结
甾体激素 碳原子数 A环 4-3-酮 4-3-酮 4-3-酮 17位取代基 -醇酮基 -OH -CH3 甲酮基
肾上腺皮质 21 激素 雄性激素 孕激素 19 21
雌激素
18
苯环C3-酚 OH
-OH -C≡CH
二、鉴别试验 （一）与强酸的呈色反应 （母核）