第十五章甾体激素类药物的
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＊采用氢氧化四甲基铵效果较好
＊加入顺序
先加TTC或BT，后加(CH3)4N+OH原因：皮质激素与(CH3)4N+OH-长时间接 触，有部分分解。
（4）氧及光线的影响
对光敏感，在暗处显色。
TTC法形成的甲臢对空气中氧敏感，使 颜色强度↓，稳定性↓。 ＊BP规定： 加入试剂后，要往容器中充N2↑，以置换 反应容器中的空气。
1．四氮唑盐的种类：
（1）红四氮唑：（缩写TTC 或RT） 2,3,5—三苯基氯化四氮唑
（2,3,5—triphenyltetrazoliumchloride）
（2）蓝四氮唑：缩写BT ( Blue tetrazolium ) 3,3’-二甲氧苯基-双-4,4’-（3,5-二苯基）氯化四氮唑
{3,3-dianisole-bis[4,4’-(3,5-diphenyl) triphenyltetrazoliumchloride]}
（氧瓶燃烧、二氨基萘比色法方 法已介绍）
第四节 含 量 测 定
一、UV 1．原理
“C=C-C=C”、 “C=C-C=O” 有紫外吸收
4-3-酮结构，max在~240nm A环为苯环，max在~280nm
2．讨论
① 适用于原料药 ② 样品中“其它甾体”不合格时，不适用。
需进行分离后再测定
二、四氮唑比色法
TLC（多采用自身稀释对照法，已经介绍） HPLC（可与含量测定同时进行）
第三节 杂质检查
二、游离磷酸
原理：
H磷 3P酸 O 4 盐钼 H 酸 盐 H3[P磷 (M1钼 o0)4O nH酸 2O [ H ]
钼蓝
λma7x 30nm
与对照品比较
第三节 杂质检查
三、雌酮: Zimmermann 反应 四、甲醇和丙酮: HPLC 五、硒:
（1）溶剂：无水乙醇，无水甲醇
（2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度 常用HCl HCl：异烟肼=2M:1M时，获最大吸收度。
（3）水分、温度、光线和氧的影响 H2O↑→A↓ 温度↑→反应速度↑ 具塞玻璃容器中，光线和氧影响不大
3、反应的专属性
在该反应条件下，对△4-3-酮具有一定的专属性 C20—酮基反应慢， C17—酮基反应慢； C11—酮基不反应
C H 2O H CO
氧化剂
OH
H
C OH
CO
水和醛
2．官能团
肾上腺 皮 斐 质 林 激 C 试 2O u素 剂 水和醛
红色
肾上腺 皮 氨 质 A 制 g 激 3N T S O 素 A g水和醛
肾上腺 皮 T T质 o C B r 激 T 素 水和醛 有色 TTC：氯化三苯四氮唑（又叫红四氮唑－RT） BT：蓝四氮唑 用于肾上腺皮质激素类药物鉴别和含量测定。
体>酯类 如：可的松>醋酸可的松
② 简单酯>复杂酯， 醋酸酯>磷酸酯>琥珀酸酯>三甲基醋酸酯
（2）溶剂和水分的影响
a 常用无水乙醇 含水量≯5%，对结果无影响 含水量为10%，吸收度约降低10% 含水量为30%，反应完全受到抑制
b 醇中不能含有醛类 醛有还原性，使吸收度↑ 用无醛醇
（3）碱的种类和加入顺序
甲酮基 -OH -C≡CH
第二节 鉴 别 试 验
一、化学鉴别法
1．母核呈色反应 能与H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl等呈色 最常用的是H2SO4。
醋酸可 C 的 o 2 n S 松 .4 O H 黄褐色
2．官能团
① -醇酮基（强还原性，与氧化剂作用） 肾上腺皮质激素类药物特征反应
供分析官能团： A环4-3-酮
代表药物
OH CH3
甲基睾丸素
O
O CO C2H5
丙酸睾丸素
O
蛋白同化激素 睾丸素结构修饰
OCOCH2CH2
苯丙酸诺龙
O
3．孕激素
21
CH3 1820C O
17
19
黄体酮
O
CH3 CO
OCOCH3
安宫黄体酮
O CH
结构特点
ⅰ．含有21个C ⅱ．A环的4-3-酮 ⅲ．17位甲酮基
2．原理
肾上腺 皮 T T质 o C B r 激 T 素 水和 有色
21
C H2O H
1820C O
HO
17
19
O
3、测定法
➢ A．TTC法 ➢ B．BT法
对照 1 m 品 无 l 水 9 m 溶 乙 l 氯 醇 液 化 2 m 四 l 氢 氮 氧 唑 1 化 m l4 四 n 8 甲 测 m 5 基 A 供试 1 m 品 无 l 水 9 m 溶 乙 l 氯 醇 液 化 2 m 四 l 氢 氮 氧 唑 1 化 m l4 四 n 8 甲 测 m 5 基 A
17
ⅳ．其它：18位、19位-甲基， O 11位羟基、羰基等
人工合成品：1、2位间有双键，6位，9位引入卤 素， 16位或16位引入甲基，16位引入羟基等。
代表药物
C H2O H CO
O
OH
可的松
O
HO O
C H2O H CO
OH
氢化可的松
代表药物
地塞米松磷酸钠
曲安奈德
人工合成药物
1、2位双键
4、讨论
结构 溶剂和水分 碱种类和加入顺序 空气中氧和光线 反应温度和时间
反应速度 呈色强度和稳定性
（1）官能团位置的影响
a C11： 11位酮基反应速度快于11位羟基 可的松>氢化可的松
C H2O H
CO
O
OH
HO
C H2O H CO
OH
O
可的松
O
氢化可的松
（1）官能团位置的影响
b C21：α-羟基（C21-OH） ① 21 -OH酯化后较母体羟基反应速度慢 即游离
HO
F O
C H2O H CO
16位-CH3
OH CH3
9位-F
1、2位双键
C H2O H CO
O
OH
O
地塞米松 泼尼松
供分析官能团
ⅰ．A环的4-3-酮 ⅱ．17位的-醇酮基
11位羟基或羰基受立体效应影响，无利用价值
2．雄性激素及蛋白同化激素
18 O H
17 19
O
睾丸素的衍生物
结构特点
ⅰ．含有19个C ⅱ．A环的4-3-酮 ⅲ．17位羟基、甲基、酯
水 or 稀H 2 SO 4荧光性红色
稀释
λ max515nm
Kober反应缺点
（1）条件较难控制，易出双色→黄+红 （2）重现性较差： ① 呈色强度和稳定性受试剂浓度、组成、反
应时间和温度的影响。 ② 甾体激素提取物中其他物质及制剂中稳定
剂、赋形剂、溶剂对测定有干扰。
五、HPLC法
广泛用于此类药物原料和制剂的含量测定 一般为内标法
亚硝基铁氰化钠
O
④ 乙炔基
OH C CH
AgNO3
HO
HO
OH C CAg
(White)
第二节 鉴 别 试 验
二、物理常数测定
三、薄层色谱法 四、红外光谱法
中国药典收载甾体激素类药物均有红外光 谱图
第二节 鉴 别 试 验
五、UV法 六、HPLC法
第三节 杂质检查 一、有关物质
（合成起始物、中间体、副产物、降解产物）
四氮唑比色法可用于下列哪个药物的含量 测定（ ）
A、 可的松 B、 睾丸素 C、 雌二醇 D、 炔雌醇 E、 黄体酮
A
Kober反应用于定量测定的药物为（ ）
A、 口服避孕药 B、 雌激素 C、 雄性激素 D、 皮质激素 E、 孕激素
B
氢化可的松因保管不当，C17-α-醇酮基有部分被分解， 欲测定未被分解的氢化可的松的含量应采用（ ）
口服避孕药
OH C CH
OH C CH
O
炔诺酮
O
异炔诺酮
炔诺孕酮
A环有4-3-酮结构； 有的第17位有羟基和乙炔基；第10位无甲基。
小结
甾体激素 碳原子数 A环
肾上腺皮质激素 21
4-3-酮
雄性激素
19
4-3-酮
孕激素 雌激素
21
4-3-酮
18
苯环 C3-酚OH
17位取代基
-醇酮基
-OH -CH3
② 羰基
3位、20位羰基可与羰基试剂反应 羰基试剂:羟胺、2,4-二硝基苯肼、异烟肼、苯肼、氨基脲
OH CH3
+
CONHN H2 _H2O
CONHN
OH CH3
O
N
N
③ 甲酮基
孕激素特征反应 第17位的甲酮基和亚硝基铁氰化钠作用， 形成蓝紫色的络合物。
CH3 CO
N 2a[F e( C N )5 N O ]蓝紫色
△4-3-酮：室温下，30′反应完全。
四 kober反应及铁-酚试剂比色法
1、Kober反应：
原理：雌激素与硫酸-乙醇共热呈色，用水或稀硫酸 稀释后，重新加热发生颜色改变，在515nm附近有最 大吸收的反应。（雌激素特征反应）
雌激素类药 H 物 2 SO 4 - 乙 醇 黄色
λ max465nm
（5）温度与时间
一般室温或30℃
Ch.P: 25℃，暗处反应40-45min
三、异烟肼法
1．原理
C3-酮基及某些其他位置上的酮基能与羰基试剂异烟 肼在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长下具 有最大吸收，可用于定量。
OH CH3
+
CONHN H2 _H2O
CONHN
OH CH3
O
N
N
2、反应条件
供分析官能团 ⅰ．A环的4-3-酮 ⅱ．17位上的甲酮基。
代表药物
米非司酮
4．雌激素
18 O H
17
HO
雌二醇
OH C CH
HO
炔雌醇
O
HO
衍生物-雌酮
结构特点
ⅰ．含有18个C (10位无甲基) ⅱ．A环：苯环，3位ຫໍສະໝຸດ Baidu有酚羟基； ⅲ．17位：羟基、乙炔基
供分析官能团： A环的酚羟基及17位的羟基
甾体激素类药物的分析
The analysis of Steroid Hormon Drugs
第一节 概 述
甾体激素是一类具有甾体结构的激素类药物
维持生命 调节性功能 免疫调节 皮肤病治疗 生育控制
第一节 概 述
一、母 核
12
17
13
11
16
C
D
2
1 10 9
A
B
14 8
15
3
5
7
4
6
环戊烷骈多氢菲
1．肾上腺皮质激素
21
C H2O H
1820C O
HO
17
19
C H 2O H CO
O
O
皮质酮的衍生物
去氧皮质酮
结构特点
12
17
13
11
16
C
D
2
1 10 9
A
B
14 8
15
3
5
7
4
6
ⅰ．含有21个C
ⅱ．A环：4-3-酮结构（,-不饱和酮） H O
ⅲ．17位：-醇酮基，有还原性。
19
21
C H2O H 1820C O
环上双键的表示方法：
用“”表示 双键的位置:双键位置
5 4
1 2
5 4
4 1,4
5 6
10
5
5 5(10)
环上取代基构型表示方法
＊构型：
取代基指向环平面的前面 用实线表示“———”
＊构型：
取代基指向环平面的背面 用虚线表示“”
二、分类
按生理作用分为：
①肾上腺皮质激素 性激素 ②雄性激素 ③雌激素 雌性激素 ④孕激素
A、 三氯化铁比色法 B、 紫外分光光度法 C、 异烟肼比色法 D、 四氮唑比色法 E、 酸性染料比色法
D
多选题
在酸性溶液中能与异烟肼试剂反应产生黄 色化合物的甾体激素有（ ）
A、 黄体酮 B、 睾丸素 C、 炔雌醇 D、 可的松 E、 地塞米松
ABDE
＊加入顺序
先加TTC或BT，后加(CH3)4N+OH原因：皮质激素与(CH3)4N+OH-长时间接 触，有部分分解。
（4）氧及光线的影响
对光敏感，在暗处显色。
TTC法形成的甲臢对空气中氧敏感，使 颜色强度↓，稳定性↓。 ＊BP规定： 加入试剂后，要往容器中充N2↑，以置换 反应容器中的空气。
1．四氮唑盐的种类：
（1）红四氮唑：（缩写TTC 或RT） 2,3,5—三苯基氯化四氮唑
（2,3,5—triphenyltetrazoliumchloride）
（2）蓝四氮唑：缩写BT ( Blue tetrazolium ) 3,3’-二甲氧苯基-双-4,4’-（3,5-二苯基）氯化四氮唑
{3,3-dianisole-bis[4,4’-(3,5-diphenyl) triphenyltetrazoliumchloride]}
（氧瓶燃烧、二氨基萘比色法方 法已介绍）
第四节 含 量 测 定
一、UV 1．原理
“C=C-C=C”、 “C=C-C=O” 有紫外吸收
4-3-酮结构，max在~240nm A环为苯环，max在~280nm
2．讨论
① 适用于原料药 ② 样品中“其它甾体”不合格时，不适用。
需进行分离后再测定
二、四氮唑比色法
TLC（多采用自身稀释对照法，已经介绍） HPLC（可与含量测定同时进行）
第三节 杂质检查
二、游离磷酸
原理：
H磷 3P酸 O 4 盐钼 H 酸 盐 H3[P磷 (M1钼 o0)4O nH酸 2O [ H ]
钼蓝
λma7x 30nm
与对照品比较
第三节 杂质检查
三、雌酮: Zimmermann 反应 四、甲醇和丙酮: HPLC 五、硒:
（1）溶剂：无水乙醇，无水甲醇
（2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度 常用HCl HCl：异烟肼=2M:1M时，获最大吸收度。
（3）水分、温度、光线和氧的影响 H2O↑→A↓ 温度↑→反应速度↑ 具塞玻璃容器中，光线和氧影响不大
3、反应的专属性
在该反应条件下，对△4-3-酮具有一定的专属性 C20—酮基反应慢， C17—酮基反应慢； C11—酮基不反应
C H 2O H CO
氧化剂
OH
H
C OH
CO
水和醛
2．官能团
肾上腺 皮 斐 质 林 激 C 试 2O u素 剂 水和醛
红色
肾上腺 皮 氨 质 A 制 g 激 3N T S O 素 A g水和醛
肾上腺 皮 T T质 o C B r 激 T 素 水和醛 有色 TTC：氯化三苯四氮唑（又叫红四氮唑－RT） BT：蓝四氮唑 用于肾上腺皮质激素类药物鉴别和含量测定。
体>酯类 如：可的松>醋酸可的松
② 简单酯>复杂酯， 醋酸酯>磷酸酯>琥珀酸酯>三甲基醋酸酯
（2）溶剂和水分的影响
a 常用无水乙醇 含水量≯5%，对结果无影响 含水量为10%，吸收度约降低10% 含水量为30%，反应完全受到抑制
b 醇中不能含有醛类 醛有还原性，使吸收度↑ 用无醛醇
（3）碱的种类和加入顺序
甲酮基 -OH -C≡CH
第二节 鉴 别 试 验
一、化学鉴别法
1．母核呈色反应 能与H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl等呈色 最常用的是H2SO4。
醋酸可 C 的 o 2 n S 松 .4 O H 黄褐色
2．官能团
① -醇酮基（强还原性，与氧化剂作用） 肾上腺皮质激素类药物特征反应
供分析官能团： A环4-3-酮
代表药物
OH CH3
甲基睾丸素
O
O CO C2H5
丙酸睾丸素
O
蛋白同化激素 睾丸素结构修饰
OCOCH2CH2
苯丙酸诺龙
O
3．孕激素
21
CH3 1820C O
17
19
黄体酮
O
CH3 CO
OCOCH3
安宫黄体酮
O CH
结构特点
ⅰ．含有21个C ⅱ．A环的4-3-酮 ⅲ．17位甲酮基
2．原理
肾上腺 皮 T T质 o C B r 激 T 素 水和 有色
21
C H2O H
1820C O
HO
17
19
O
3、测定法
➢ A．TTC法 ➢ B．BT法
对照 1 m 品 无 l 水 9 m 溶 乙 l 氯 醇 液 化 2 m 四 l 氢 氮 氧 唑 1 化 m l4 四 n 8 甲 测 m 5 基 A 供试 1 m 品 无 l 水 9 m 溶 乙 l 氯 醇 液 化 2 m 四 l 氢 氮 氧 唑 1 化 m l4 四 n 8 甲 测 m 5 基 A
17
ⅳ．其它：18位、19位-甲基， O 11位羟基、羰基等
人工合成品：1、2位间有双键，6位，9位引入卤 素， 16位或16位引入甲基，16位引入羟基等。
代表药物
C H2O H CO
O
OH
可的松
O
HO O
C H2O H CO
OH
氢化可的松
代表药物
地塞米松磷酸钠
曲安奈德
人工合成药物
1、2位双键
4、讨论
结构 溶剂和水分 碱种类和加入顺序 空气中氧和光线 反应温度和时间
反应速度 呈色强度和稳定性
（1）官能团位置的影响
a C11： 11位酮基反应速度快于11位羟基 可的松>氢化可的松
C H2O H
CO
O
OH
HO
C H2O H CO
OH
O
可的松
O
氢化可的松
（1）官能团位置的影响
b C21：α-羟基（C21-OH） ① 21 -OH酯化后较母体羟基反应速度慢 即游离
HO
F O
C H2O H CO
16位-CH3
OH CH3
9位-F
1、2位双键
C H2O H CO
O
OH
O
地塞米松 泼尼松
供分析官能团
ⅰ．A环的4-3-酮 ⅱ．17位的-醇酮基
11位羟基或羰基受立体效应影响，无利用价值
2．雄性激素及蛋白同化激素
18 O H
17 19
O
睾丸素的衍生物
结构特点
ⅰ．含有19个C ⅱ．A环的4-3-酮 ⅲ．17位羟基、甲基、酯
水 or 稀H 2 SO 4荧光性红色
稀释
λ max515nm
Kober反应缺点
（1）条件较难控制，易出双色→黄+红 （2）重现性较差： ① 呈色强度和稳定性受试剂浓度、组成、反
应时间和温度的影响。 ② 甾体激素提取物中其他物质及制剂中稳定
剂、赋形剂、溶剂对测定有干扰。
五、HPLC法
广泛用于此类药物原料和制剂的含量测定 一般为内标法
亚硝基铁氰化钠
O
④ 乙炔基
OH C CH
AgNO3
HO
HO
OH C CAg
(White)
第二节 鉴 别 试 验
二、物理常数测定
三、薄层色谱法 四、红外光谱法
中国药典收载甾体激素类药物均有红外光 谱图
第二节 鉴 别 试 验
五、UV法 六、HPLC法
第三节 杂质检查 一、有关物质
（合成起始物、中间体、副产物、降解产物）
四氮唑比色法可用于下列哪个药物的含量 测定（ ）
A、 可的松 B、 睾丸素 C、 雌二醇 D、 炔雌醇 E、 黄体酮
A
Kober反应用于定量测定的药物为（ ）
A、 口服避孕药 B、 雌激素 C、 雄性激素 D、 皮质激素 E、 孕激素
B
氢化可的松因保管不当，C17-α-醇酮基有部分被分解， 欲测定未被分解的氢化可的松的含量应采用（ ）
口服避孕药
OH C CH
OH C CH
O
炔诺酮
O
异炔诺酮
炔诺孕酮
A环有4-3-酮结构； 有的第17位有羟基和乙炔基；第10位无甲基。
小结
甾体激素 碳原子数 A环
肾上腺皮质激素 21
4-3-酮
雄性激素
19
4-3-酮
孕激素 雌激素
21
4-3-酮
18
苯环 C3-酚OH
17位取代基
-醇酮基
-OH -CH3
② 羰基
3位、20位羰基可与羰基试剂反应 羰基试剂:羟胺、2,4-二硝基苯肼、异烟肼、苯肼、氨基脲
OH CH3
+
CONHN H2 _H2O
CONHN
OH CH3
O
N
N
③ 甲酮基
孕激素特征反应 第17位的甲酮基和亚硝基铁氰化钠作用， 形成蓝紫色的络合物。
CH3 CO
N 2a[F e( C N )5 N O ]蓝紫色
△4-3-酮：室温下，30′反应完全。
四 kober反应及铁-酚试剂比色法
1、Kober反应：
原理：雌激素与硫酸-乙醇共热呈色，用水或稀硫酸 稀释后，重新加热发生颜色改变，在515nm附近有最 大吸收的反应。（雌激素特征反应）
雌激素类药 H 物 2 SO 4 - 乙 醇 黄色
λ max465nm
（5）温度与时间
一般室温或30℃
Ch.P: 25℃，暗处反应40-45min
三、异烟肼法
1．原理
C3-酮基及某些其他位置上的酮基能与羰基试剂异烟 肼在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长下具 有最大吸收，可用于定量。
OH CH3
+
CONHN H2 _H2O
CONHN
OH CH3
O
N
N
2、反应条件
供分析官能团 ⅰ．A环的4-3-酮 ⅱ．17位上的甲酮基。
代表药物
米非司酮
4．雌激素
18 O H
17
HO
雌二醇
OH C CH
HO
炔雌醇
O
HO
衍生物-雌酮
结构特点
ⅰ．含有18个C (10位无甲基) ⅱ．A环：苯环，3位ຫໍສະໝຸດ Baidu有酚羟基； ⅲ．17位：羟基、乙炔基
供分析官能团： A环的酚羟基及17位的羟基
甾体激素类药物的分析
The analysis of Steroid Hormon Drugs
第一节 概 述
甾体激素是一类具有甾体结构的激素类药物
维持生命 调节性功能 免疫调节 皮肤病治疗 生育控制
第一节 概 述
一、母 核
12
17
13
11
16
C
D
2
1 10 9
A
B
14 8
15
3
5
7
4
6
环戊烷骈多氢菲
1．肾上腺皮质激素
21
C H2O H
1820C O
HO
17
19
C H 2O H CO
O
O
皮质酮的衍生物
去氧皮质酮
结构特点
12
17
13
11
16
C
D
2
1 10 9
A
B
14 8
15
3
5
7
4
6
ⅰ．含有21个C
ⅱ．A环：4-3-酮结构（,-不饱和酮） H O
ⅲ．17位：-醇酮基，有还原性。
19
21
C H2O H 1820C O
环上双键的表示方法：
用“”表示 双键的位置:双键位置
5 4
1 2
5 4
4 1,4
5 6
10
5
5 5(10)
环上取代基构型表示方法
＊构型：
取代基指向环平面的前面 用实线表示“———”
＊构型：
取代基指向环平面的背面 用虚线表示“”
二、分类
按生理作用分为：
①肾上腺皮质激素 性激素 ②雄性激素 ③雌激素 雌性激素 ④孕激素
A、 三氯化铁比色法 B、 紫外分光光度法 C、 异烟肼比色法 D、 四氮唑比色法 E、 酸性染料比色法
D
多选题
在酸性溶液中能与异烟肼试剂反应产生黄 色化合物的甾体激素有（ ）
A、 黄体酮 B、 睾丸素 C、 炔雌醇 D、 可的松 E、 地塞米松
ABDE