含油废水中一株高效油脂降解菌的筛选和鉴定
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生态环境学报 ２ １， ９６： ３ ８１ ８ ０ ０ １（） １７—３ ２
Ｅ ｏ ｏ ｙ ａ ｄ Ｅ ｖ ｒ ｎ ｎ ａ ｃ ｅ ｃ ｓ ｃ ｌ ｇ ｎ ｎ ｉｏ ｍｅ ｔ ｌ ｉ ｎ ｅ Ｓ
ｈｔ：ｗｗ ｊｅｃ． ｍ ｔ ／ ｗ． ｓｉ ｏ ｐ／ ｅ ｃ Ｅｍａ ：ｄｔｒ ｅｓｉ ｏ — ｉ ｅ ｉ ＠ｊｅｃ． ｍ ｌ ｏ ｃ
１ 材 料 与 方 法
１１ 材料 ．
将纯 化后 的菌 株接种 于 中性红 培养基 上 ，观察 菌落周 围是 否变 红 ，若 变红则 表 明菌株 能够 分解油 脂产 生脂 肪酸 【 。将初筛 入选 的菌 株接 种到 以豆油 １ …
为唯 一碳 源 的选 择培 养液 中 ，３ ０ｏ Ｃ，１０ｒ ｎ ４ ｍｉ ・ 条 件下 培养 ７ ，用 紫外 分 光光 度 法ＬＪ 样 品在 ２ｈ １测定 ｌ
１１１ 样 品来 源 ．．
采 自中国海洋 大 学鱼 山校 区快餐厅 后下 水道 。 １１ 培养基 ．． ２
富集 培养 液 ： Ｎ Ｃ ． ｇ ａ １ ５ ，蛋 白胨 ５０ｇ ０ ． ，牛 肉 膏 ０５ ， ．ｇ 豆油按 周期 加入 ，Ｈ７０～７５ 蒸馏 水 １ ０ ｐ ． ．， ０ ０
会飘浮于水体表面 ， 影响水体的复氧及其 自然净化过 程 ，危 害水 生生态系统 ，严 重污染周 围环 境【 Ｊ ｌ。 之 目前 ，油脂 废水 的处 理方法 主要 有物 理法 、化 学法 和生 物法 。物理法 和化 学法 由于投资 大 ，占地 广 ，流程复 杂 ，且 容易 产生 二次 污染 ，实 际应 用较 少 。而 生物 法处 理油 脂废 水 ，主要 利用 油脂 废水 Ｊ
含油废水 中一株 高效油脂降解 菌的筛选和鉴定
游但 ，朱琳 ，张艳 ，张酷 ，唐学玺 ， 肖慧 一
１ 国海洋 大学 海洋 生命学 院 ，山东 青 岛 ２６ ０ ；２ ．中 ６０ ３ ．中国水 产科 学研究 院 黄海水 产研 究所 ，山东 青 岛 ２６ ７ ６０１
摘要 ：从 中国海洋大学餐厅下水道废水中分 离 、筛选获得 ９株具有油脂降解能力的菌株。菌株 Ｓ．１ Ｓ１ 油脂 降解能力最强 ，在 初始筛选条件下其降解率达 ４ ． ％。对 Ｓ．１的降解条件进行初步研究 ，结果表明 ，在初始豆油量 为 １ ・～ ７２ ９ Ｓ１ ． ｍＬＬ ，初始 ｐ ０ Ｈ 为 ７ ，摇床转速为 １０ ． ｎ。 ７Ｃ ． ５ ４ ｍｉ。 ｒ ，３ ￣下培养 ７ ｈ ２ ，该菌的油脂 降解率达 ８ ． ％。通过菌落形 态 、生理生化特征 、１Ｓｒ ＮＡ ７５ ５ ６ Ｄ
１６， ２． ３２， ４． ． ４， ． ０ ｍＬ・ Ｌ～。
１ ． 油脂 降解 菌的 分 离 ．２ ２ 从 驯化样 中选 取油 脂分 解较 充分 的菌液 ，以最 佳 稀 释浓 度 １ 稀 释 涂 布 于牛 肉膏蛋 白胨 培养 基 ０ 上 ，３ ０℃培 养 ４ 。挑选不 同形 态特 征 的菌 落 ， ８ｈ 划 线 纯化培 养 。
中，３ ０℃，１０ｒ ｉ ４ ｍ ｎ ． 条件下震荡培养 ，并同时做
３个 平行 样 。每 ２ ｄ观 察 ，若油脂 降解 效果好 则适 量补 加豆油 。每 ６ ｄ为 ｌ 期 ，接种 １ 周 ０ｍＬ菌液 到 ４ ０ｍＬ新培养 液 中 以促 进菌 株 的生长 ，驯化 持续 ５ 个 周期 。初始 加油 量 随周期 逐次递 增 ，分别为 ０８ ．，
序列系统发育分析 ，将其 鉴定 为产 酸克 雷伯 氏菌 （ ｌｂｉｌ ｙｏ ａ ｏ Ｋ ｅｓ ｌ ｏ ｔｃ ｅａ ｘ 关键词 ：油脂降解菌 ；产酸克雷伯氏菌 ；１Ｓｒ ６ ＤＮＡ；系统发育分析 中图分类号 ：Ｘ７３ ０ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１ ７—９ ６（ ０ ０） ６１７ —５ ６ ４５０ ２ １ ０ —３ ８０
我 国对 油脂 废 水 的 生物 处 理 主要 采 用 活 性 污
豆油 １ ． ｍＬ， Ｈ ７ ０ ｐ ． ．， ２～７４ 蒸馏 水 １ ０ Ｌ。１ １℃ ０ｍ ０ ２
灭 菌２ ａｉ。 ０ｒ ｎ பைடு நூலகம்１２ 方 法 ．
１２１ ．． ｌ ｌ 化
将采 集 到的样 品用无 菌水 １ ０倍 稀释后 充分混 合 ，制成 样液 。取 ５ｍＬ样 液到 ４ ５ｍＬ富集 培养液
１ ． 油 脂 降解 菌的 筛选 ．３ ２
泥法 ，然而传 统 使用 的活性 污泥对 含油 废水 的直 接 处 理能 力较低 、效果差 ｐ。 因此从 自然 环境 中筛 选 】 高 效 油 脂 降解 菌 ，采 用 投 菌 法 对 活 性 污 泥 加 以 改 善 ，对处理 油脂 废水 具有 重要 意义 。
ｍＬ １ １℃灭菌２ ｉ 。 。 ２ ０ｒ ｎ ａ
２ ５ｎ 波长下 的吸光度 值 ， ２ ｍ 同时 以豆油 为溶质 石油 醚为溶剂 ，测定 不 同豆油 浓度 的 吸光度值 ，绘制标
中性红培养基 ： 肉膏蛋白胨培养基加豆油 １ 牛 ０
ｍＬ，０６ ．％中性红 水溶 液 １ 。 １ １℃灭菌２ ｎ ｍＬ ２ ０ｍｉ。
随着我 国经济 的迅速发展 ， 油脂加 工厂以及餐饮 业排 出的油脂废水量 日益增 多 。 直接排放 的油脂废水
选 择 培 养 液 ：蛋 白胨 １ ，ＮＨ ＮＯ０２ ｇ， ． ｇ ０ ４ ３．
Ｋ２ ＨＰＯ４ ． ０ ５ ｇ， ＫＨ２ ＰＯ４ ． ０ ５ ｇ， Ｍ ｇＳ ‘Ｈ２ ０． Ｏ４７ Ｏ １ ｇ，
中的微 生物 具有 一定 的油脂 降解 能力 ，能将油 脂作 为碳 源和能 源 ，并通 过微 生物 生长 过程 中产生 的脂 肪 酶等 降解 酶 系 的 作 用 将 油脂 水 解 为 甘油 、脂 肪 酸，最终分解氧化为水和二氧化碳等代谢产物【 ４ ； 整 个处 理过程 投资 小 ，成 本低 ，效率 高且 无二 次污 染 ，现 已成 为 国内外研 究 的热点 ［８ ６］ －。
Ｅ ｏ ｏ ｙ ａ ｄ Ｅ ｖ ｒ ｎ ｎ ａ ｃ ｅ ｃ ｓ ｃ ｌ ｇ ｎ ｎ ｉｏ ｍｅ ｔ ｌ ｉ ｎ ｅ Ｓ
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１ 材 料 与 方 法
１１ 材料 ．
将纯 化后 的菌 株接种 于 中性红 培养基 上 ，观察 菌落周 围是 否变 红 ，若 变红则 表 明菌株 能够 分解油 脂产 生脂 肪酸 【 。将初筛 入选 的菌 株接 种到 以豆油 １ …
为唯 一碳 源 的选 择培 养液 中 ，３ ０ｏ Ｃ，１０ｒ ｎ ４ ｍｉ ・ 条 件下 培养 ７ ，用 紫外 分 光光 度 法ＬＪ 样 品在 ２ｈ １测定 ｌ
１１１ 样 品来 源 ．．
采 自中国海洋 大 学鱼 山校 区快餐厅 后下 水道 。 １１ 培养基 ．． ２
富集 培养 液 ： Ｎ Ｃ ． ｇ ａ １ ５ ，蛋 白胨 ５０ｇ ０ ． ，牛 肉 膏 ０５ ， ．ｇ 豆油按 周期 加入 ，Ｈ７０～７５ 蒸馏 水 １ ０ ｐ ． ．， ０ ０
会飘浮于水体表面 ， 影响水体的复氧及其 自然净化过 程 ，危 害水 生生态系统 ，严 重污染周 围环 境【 Ｊ ｌ。 之 目前 ，油脂 废水 的处 理方法 主要 有物 理法 、化 学法 和生 物法 。物理法 和化 学法 由于投资 大 ，占地 广 ，流程复 杂 ，且 容易 产生 二次 污染 ，实 际应 用较 少 。而 生物 法处 理油 脂废 水 ，主要 利用 油脂 废水 Ｊ
含油废水 中一株 高效油脂降解 菌的筛选和鉴定
游但 ，朱琳 ，张艳 ，张酷 ，唐学玺 ， 肖慧 一
１ 国海洋 大学 海洋 生命学 院 ，山东 青 岛 ２６ ０ ；２ ．中 ６０ ３ ．中国水 产科 学研究 院 黄海水 产研 究所 ，山东 青 岛 ２６ ７ ６０１
摘要 ：从 中国海洋大学餐厅下水道废水中分 离 、筛选获得 ９株具有油脂降解能力的菌株。菌株 Ｓ．１ Ｓ１ 油脂 降解能力最强 ，在 初始筛选条件下其降解率达 ４ ． ％。对 Ｓ．１的降解条件进行初步研究 ，结果表明 ，在初始豆油量 为 １ ・～ ７２ ９ Ｓ１ ． ｍＬＬ ，初始 ｐ ０ Ｈ 为 ７ ，摇床转速为 １０ ． ｎ。 ７Ｃ ． ５ ４ ｍｉ。 ｒ ，３ ￣下培养 ７ ｈ ２ ，该菌的油脂 降解率达 ８ ． ％。通过菌落形 态 、生理生化特征 、１Ｓｒ ＮＡ ７５ ５ ６ Ｄ
１６， ２． ３２， ４． ． ４， ． ０ ｍＬ・ Ｌ～。
１ ． 油脂 降解 菌的 分 离 ．２ ２ 从 驯化样 中选 取油 脂分 解较 充分 的菌液 ，以最 佳 稀 释浓 度 １ 稀 释 涂 布 于牛 肉膏蛋 白胨 培养 基 ０ 上 ，３ ０℃培 养 ４ 。挑选不 同形 态特 征 的菌 落 ， ８ｈ 划 线 纯化培 养 。
中，３ ０℃，１０ｒ ｉ ４ ｍ ｎ ． 条件下震荡培养 ，并同时做
３个 平行 样 。每 ２ ｄ观 察 ，若油脂 降解 效果好 则适 量补 加豆油 。每 ６ ｄ为 ｌ 期 ，接种 １ 周 ０ｍＬ菌液 到 ４ ０ｍＬ新培养 液 中 以促 进菌 株 的生长 ，驯化 持续 ５ 个 周期 。初始 加油 量 随周期 逐次递 增 ，分别为 ０８ ．，
序列系统发育分析 ，将其 鉴定 为产 酸克 雷伯 氏菌 （ ｌｂｉｌ ｙｏ ａ ｏ Ｋ ｅｓ ｌ ｏ ｔｃ ｅａ ｘ 关键词 ：油脂降解菌 ；产酸克雷伯氏菌 ；１Ｓｒ ６ ＤＮＡ；系统发育分析 中图分类号 ：Ｘ７３ ０ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１ ７—９ ６（ ０ ０） ６１７ —５ ６ ４５０ ２ １ ０ —３ ８０
我 国对 油脂 废 水 的 生物 处 理 主要 采 用 活 性 污
豆油 １ ． ｍＬ， Ｈ ７ ０ ｐ ． ．， ２～７４ 蒸馏 水 １ ０ Ｌ。１ １℃ ０ｍ ０ ２
灭 菌２ ａｉ。 ０ｒ ｎ பைடு நூலகம்１２ 方 法 ．
１２１ ．． ｌ ｌ 化
将采 集 到的样 品用无 菌水 １ ０倍 稀释后 充分混 合 ，制成 样液 。取 ５ｍＬ样 液到 ４ ５ｍＬ富集 培养液
１ ． 油 脂 降解 菌的 筛选 ．３ ２
泥法 ，然而传 统 使用 的活性 污泥对 含油 废水 的直 接 处 理能 力较低 、效果差 ｐ。 因此从 自然 环境 中筛 选 】 高 效 油 脂 降解 菌 ，采 用 投 菌 法 对 活 性 污 泥 加 以 改 善 ，对处理 油脂 废水 具有 重要 意义 。
ｍＬ １ １℃灭菌２ ｉ 。 。 ２ ０ｒ ｎ ａ
２ ５ｎ 波长下 的吸光度 值 ， ２ ｍ 同时 以豆油 为溶质 石油 醚为溶剂 ，测定 不 同豆油 浓度 的 吸光度值 ，绘制标
中性红培养基 ： 肉膏蛋白胨培养基加豆油 １ 牛 ０
ｍＬ，０６ ．％中性红 水溶 液 １ 。 １ １℃灭菌２ ｎ ｍＬ ２ ０ｍｉ。
随着我 国经济 的迅速发展 ， 油脂加 工厂以及餐饮 业排 出的油脂废水量 日益增 多 。 直接排放 的油脂废水
选 择 培 养 液 ：蛋 白胨 １ ，ＮＨ ＮＯ０２ ｇ， ． ｇ ０ ４ ３．
Ｋ２ ＨＰＯ４ ． ０ ５ ｇ， ＫＨ２ ＰＯ４ ． ０ ５ ｇ， Ｍ ｇＳ ‘Ｈ２ ０． Ｏ４７ Ｏ １ ｇ，
中的微 生物 具有 一定 的油脂 降解 能力 ，能将油 脂作 为碳 源和能 源 ，并通 过微 生物 生长 过程 中产生 的脂 肪 酶等 降解 酶 系 的 作 用 将 油脂 水 解 为 甘油 、脂 肪 酸，最终分解氧化为水和二氧化碳等代谢产物【 ４ ； 整 个处 理过程 投资 小 ，成 本低 ，效率 高且 无二 次污 染 ，现 已成 为 国内外研 究 的热点 ［８ ６］ －。