单克隆抗体的制备7PPT幻灯片
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高二生物选修三《单克隆抗体的制备》精品PPT课件
Thinking In Other People‘S Speeches，Growing Up In Your Own Story
讲师：XXXXXX XX年XX月XX日
单克隆抗体
1、抗体
1.1 概念： 抗体是机体受抗原刺激
后产生的、并能与该抗原发 生特异性结合的具有免疫功 能的球蛋白 。 1.2 来源：
浆细胞（B淋巴细胞）
传统血清抗体的制备
特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏
抗原 刺激 动物体 抗原不纯
浆细胞 抗体
Байду номын сангаас抗体不纯
每个浆细胞（Ｂ淋巴细胞）只能分泌一种抗体，由一个 Ｂ淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一 的。
写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
You Know, The More Powerful You Will Be
Thank You
在别人的演说中思考，在自己的故事里成长
如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体
体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? 怎样解决这个问题？
二、单克隆抗体
设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
杂种细胞
注射抗原的目的是什么
诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性 细胞的全能性
细胞膜的流动性
细胞融合的步骤
讲师：XXXXXX XX年XX月XX日
单克隆抗体
1、抗体
1.1 概念： 抗体是机体受抗原刺激
后产生的、并能与该抗原发 生特异性结合的具有免疫功 能的球蛋白 。 1.2 来源：
浆细胞（B淋巴细胞）
传统血清抗体的制备
特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏
抗原 刺激 动物体 抗原不纯
浆细胞 抗体
Байду номын сангаас抗体不纯
每个浆细胞（Ｂ淋巴细胞）只能分泌一种抗体，由一个 Ｂ淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一 的。
写在最后
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
You Know, The More Powerful You Will Be
Thank You
在别人的演说中思考，在自己的故事里成长
如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？
体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体
体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? 怎样解决这个问题？
二、单克隆抗体
设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖
杂种细胞
注射抗原的目的是什么
诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性 细胞的全能性
细胞膜的流动性
细胞融合的步骤
(培训课件)单克隆抗体PPT幻灯片
• 种类：氢氧化铝佐剂、短小棒状杆菌、脂多 糖、细胞因子、明矾等，其中弗氏不完全佐 剂（羊毛脂：石蜡油=1:5）和弗氏完全佐剂 （弗氏不完全佐剂＋灭活的分枝结核杆菌） 是目前动物实验中最常用佐剂。
4
• 抗体：机体免疫细胞被激活后，由分化成熟的 B淋巴细胞-浆细胞合成、分泌的免疫球蛋白。
5
6
脾脏与B淋巴细胞(B lymphocytes)
淀）。
18
（2）HAT培养基的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
19
HAT培养基筛选
H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)
骨髓瘤细胞 (myeloma cells)的选择原则
①克隆效应高，能在体外连续生长，倍增期短于24小时； ②缺乏HGPRT酶和TK酶； ③本身不合成Ig，且不抑制杂交瘤细胞中的Ig合成基因。 ④与小鼠淋巴细胞融合率相当高；
脾细胞的选择
由于目前常用的骨髓瘤细胞普遍来自Bal b/c小鼠，因此应尽 量选择同源的Bal b/c健康小鼠（8-12周）作为免疫动物。
死亡
20
3、阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）
• 检测时间：杂交瘤细胞布满孔底1／10时开 始检测特异性抗体，进行筛选。
• 检测方法：最常用酶联免疫吸附法(ELISA) 间接免疫荧光法(IFA) 放射免疫法(RIA) 双相扩散法
3）离心，弃上清，加15mL HAT培养基，混匀，转入96孔 板（预先有HAT培养基培养的饲养细胞），每孔100 ul。
4
• 抗体：机体免疫细胞被激活后，由分化成熟的 B淋巴细胞-浆细胞合成、分泌的免疫球蛋白。
5
6
脾脏与B淋巴细胞(B lymphocytes)
淀）。
18
（2）HAT培养基的筛选
融合后细胞混合液
HAT培养基
2 weeks later
HT培养基
1 week later
正常培养基
19
HAT培养基筛选
H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶
(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase)
骨髓瘤细胞 (myeloma cells)的选择原则
①克隆效应高，能在体外连续生长，倍增期短于24小时； ②缺乏HGPRT酶和TK酶； ③本身不合成Ig，且不抑制杂交瘤细胞中的Ig合成基因。 ④与小鼠淋巴细胞融合率相当高；
脾细胞的选择
由于目前常用的骨髓瘤细胞普遍来自Bal b/c小鼠，因此应尽 量选择同源的Bal b/c健康小鼠（8-12周）作为免疫动物。
死亡
20
3、阳性杂交瘤细胞的筛选（抗体的检测）
• 检测时间：杂交瘤细胞布满孔底1／10时开 始检测特异性抗体，进行筛选。
• 检测方法：最常用酶联免疫吸附法(ELISA) 间接免疫荧光法(IFA) 放射免疫法(RIA) 双相扩散法
3）离心，弃上清，加15mL HAT培养基，混匀，转入96孔 板（预先有HAT培养基培养的饲养细胞），每孔100 ul。
高中生物单克隆抗体制备(共38张PPT)
2、它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步？ 3、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同？
1.1动物细胞融合的概念
鼠B淋巴细胞 鼠骨髓瘤细胞
人工诱导
动物细胞融合（细胞杂交）
是指（在一定的条件下）两
个或多个细胞结合形成一个
细胞（该单核细胞称为杂交
细胞）的过程。
杂交瘤细胞
问题：1、它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步？ 2、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同？
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
3.若细胞两两融合后， 有几种融合情况？
选择性培养基 筛选1 克隆化
多种杂 交细胞
抗原-抗体 杂交法
筛选2（有限稀释）
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
4.第一次筛选出的杂交瘤
细胞为何需进行克隆化培
选择性培养基 筛选1
养和专一抗体检测？
多种杂
（ 特异性强、灵敏度高，可大量制备）
（4）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的 迅速（ 大量增殖 ）特点，又具备淋巴细胞 的（ 分泌专一抗体）特点，经过选择性培养 的杂交瘤细胞，还需进行（ 克隆化培养 ） 和（ 抗体检测 ），经多次筛选，就可获得足
够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后将杂 交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或小 鼠腹腔内增殖，从（ 细胞培养液 ）或 （ 小鼠的腹水 ）中，就可以提取出大量 的单克隆抗体了。
一个效应bb细胞只分泌一种特异性抗体杂交瘤细胞动物细胞培养技术44单克隆抗体的制备方案动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体又能大量繁殖的细胞一个骨髓瘤细胞能无限增殖制备单克隆抗体1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验5单克隆抗体制备过程步骤注射抗原效应bb细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基筛选11抗原抗体杂交法克隆化单克隆抗体筛选22有限稀释1
1.1动物细胞融合的概念
鼠B淋巴细胞 鼠骨髓瘤细胞
人工诱导
动物细胞融合（细胞杂交）
是指（在一定的条件下）两
个或多个细胞结合形成一个
细胞（该单核细胞称为杂交
细胞）的过程。
杂交瘤细胞
问题：1、它相当于植物体细胞杂交过 程的哪一步？ 2、它们的过程、基本原理、诱 导融合方法和意义是否相同？
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
3.若细胞两两融合后， 有几种融合情况？
选择性培养基 筛选1 克隆化
多种杂 交细胞
抗原-抗体 杂交法
筛选2（有限稀释）
单克隆 抗体
注射抗原
效应B细胞
骨髓瘤细胞
融合
4.第一次筛选出的杂交瘤
细胞为何需进行克隆化培
选择性培养基 筛选1
养和专一抗体检测？
多种杂
（ 特异性强、灵敏度高，可大量制备）
（4）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的 迅速（ 大量增殖 ）特点，又具备淋巴细胞 的（ 分泌专一抗体）特点，经过选择性培养 的杂交瘤细胞，还需进行（ 克隆化培养 ） 和（ 抗体检测 ），经多次筛选，就可获得足
够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后将杂 交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或小 鼠腹腔内增殖，从（ 细胞培养液 ）或 （ 小鼠的腹水 ）中，就可以提取出大量 的单克隆抗体了。
一个效应bb细胞只分泌一种特异性抗体杂交瘤细胞动物细胞培养技术44单克隆抗体的制备方案动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体又能大量繁殖的细胞一个骨髓瘤细胞能无限增殖制备单克隆抗体1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验5单克隆抗体制备过程步骤注射抗原效应bb细胞骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞选择性培养基筛选11抗原抗体杂交法克隆化单克隆抗体筛选22有限稀释1
单克隆抗体的制备PPT
பைடு நூலகம்
现代生物技术手段越来越多的应 用在我们的生活和生产当中，关 注生物技术，关注前沿科技，让 我们用现代生物技术手段更多的
造福人类，创造充满希望的明天！
答案： (1)动物细胞培养(微生物培养)
(2)选择
(3)特异性强，灵敏度高
(4)灭活的病毒
(5)在体外大量增殖 (6)骨髓 造血干 分泌特异性抗体
(7)主动运输(主动吸收)
考一考：
1.下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过 程注射的物质和A细胞的名称分别为( )
A.抗体、T淋巴细胞 C.抗体、B淋巴细胞
青岛市首届中小学“翻转课堂”微视频参赛作品
单克隆抗体的制备
莱西一中北校
吕慧卿
学习目标：
1、单克隆抗体的优点
2、单克隆抗体的制备过程
一、单克隆抗体的优点：
特异性强 灵敏度高
可大量制备
二、单克隆抗体生产过程： 免疫小鼠
注射特定 的抗原蛋白
相应的B淋巴细胞 （效应B细胞）
骨骼瘤细胞 物理法 人工诱导融合 化学法 多种细胞 生物法
既能产生单一抗体，又能无限增殖
3、用什么方法可以诱导两种细胞融合？
物理法：离心、振荡、电激等 化学法：常采用聚乙二醇 生物法：灭活的病毒
4、单克隆抗体制备过程需要哪些技术的支持？
动物细胞融合、动物细胞培养等
练一练：
(1)__________________技术是单克隆抗体技术的基础。 (2)根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于_______培养基。 (3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_____。 (4)动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外， 还可以采用______。 (5)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞_______的特点，又具备淋 巴细胞______的特点。 (6)淋巴细胞是由动物体_______中的_______细胞分化、发育而来 的。 (7)杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是 _______。
现代生物技术手段越来越多的应 用在我们的生活和生产当中，关 注生物技术，关注前沿科技，让 我们用现代生物技术手段更多的
造福人类，创造充满希望的明天！
答案： (1)动物细胞培养(微生物培养)
(2)选择
(3)特异性强，灵敏度高
(4)灭活的病毒
(5)在体外大量增殖 (6)骨髓 造血干 分泌特异性抗体
(7)主动运输(主动吸收)
考一考：
1.下图是单克隆抗体制备过程示意图，其中1过 程注射的物质和A细胞的名称分别为( )
A.抗体、T淋巴细胞 C.抗体、B淋巴细胞
青岛市首届中小学“翻转课堂”微视频参赛作品
单克隆抗体的制备
莱西一中北校
吕慧卿
学习目标：
1、单克隆抗体的优点
2、单克隆抗体的制备过程
一、单克隆抗体的优点：
特异性强 灵敏度高
可大量制备
二、单克隆抗体生产过程： 免疫小鼠
注射特定 的抗原蛋白
相应的B淋巴细胞 （效应B细胞）
骨骼瘤细胞 物理法 人工诱导融合 化学法 多种细胞 生物法
既能产生单一抗体，又能无限增殖
3、用什么方法可以诱导两种细胞融合？
物理法：离心、振荡、电激等 化学法：常采用聚乙二醇 生物法：灭活的病毒
4、单克隆抗体制备过程需要哪些技术的支持？
动物细胞融合、动物细胞培养等
练一练：
(1)__________________技术是单克隆抗体技术的基础。 (2)根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于_______培养基。 (3)单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_____。 (4)动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外， 还可以采用______。 (5)选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞_______的特点，又具备淋 巴细胞______的特点。 (6)淋巴细胞是由动物体_______中的_______细胞分化、发育而来 的。 (7)杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是 _______。
《单克隆抗体的制备》课件
总结与参考文献
单克隆抗体是当代生物医学研究的重要手段，具有广泛的应用前景。参考： 参考文献1，参考文献2，参考文献3。
筛选合适的杂交瘤细胞， 增加培养和传代条件的 控制。
在单克隆抗体筛选过程 中，严格控制细胞数目， 避免细胞混合。
单克隆抗体的应用领域
癌症治疗
自身免疫疾病
单克隆抗体可用于靶向癌细胞， 抑制肿瘤生长和扩散。
单克隆抗体可以干预异常的免 疫反应，调节免疫系统功能。
传染病防治
单克隆抗体用于抵御病原体， 增强人体免疫力。
2
免疫动物注射
将免疫原注射到小鼠或兔子等动物体内，激发免疫反应。
3
细胞融合
从免疫动物体内取出脾细胞和骨髓细胞，与癌细胞融合，形成杂交瘤细胞。
4
单克隆抗体筛选
通过筛选，选择具有特异性并高亲和力的单克隆抗体。
单克隆抗体制备中常见问题及解决方法
1 低抗体产量
优化免疫动物的免疫方 案和细胞培养条件。
2 杂交瘤细胞稳定性 3 克隆混杂
《单克隆抗体的制备》
单克隆抗体是生物医学研究和临床应用中的重要工具，能够精确靶向病理标 志物，具有巨大的应用潜力。
单克隆抗体的定义和作用
单克隆抗体是由一种特定的细胞克隆产生的抗体，能够与特定抗原高度特异性地结合。它在疾病诊断、 治疗和研究中发挥着重要作用。
制备单克隆抗体的步骤
1
免疫原制备
选择合适的免疫原，如蛋白质或多肽，制备免疫原样品。
单克隆抗体的市场前景
市场规模
预计未来几年内，单克隆抗体市场将继续增长。
新兴应用
单克隆抗体在精准医疗和个性化治疗领域有着广阔的市场前景。
技术进步
随着技术的不断进步，单克隆抗体的制备和应用将变得更加高效和便捷。
《单克隆抗体制备》课件
单克隆抗体制备流程
1
免疫原选择
选择合适的免疫原，如细胞、蛋白或多肽。
2
免疫动物免疫
将免疫原注射到小鼠或其他动物中，激发其产生抗体。
3
融合细胞制备
将免疫细胞与癌细胞融细胞与癌细胞融合， 形成杂交瘤细胞，从而制备 出单克隆抗体。
重链变异法
通过重链基因的变异和筛选， 获得带有特定抗原亲和性的 单克隆抗体。
转基因动物法
通过将人类抗体基因转入小 鼠等动物，使其产生人类单 克隆抗体。
单克隆抗体制备的应用
在疾病的早期诊断中起重要作用 治疗癌症、自身免疫疾病等疾病 用于药物研发和生物学研究
单克隆抗体制备与疾病治疗
单克隆抗体在疾病治疗中发挥着重要的作用。它们可以通过靶向特定抗原或信号通路来抑制疾病的发展，为患 者提供更加个体化和有效的治疗方案。
单克隆抗体制备
欢迎来到《单克隆抗体制备》的PPT课件！本课程将介绍单克隆抗体的概念、 制备流程、方法、应用、与疾病治疗的关系，以及制备过程中的挑战。让我 们一起开始探索这个令人兴奋的领域吧！
什么是单克隆抗体
单克隆抗体是由一种单一的抗体细胞克隆所产生的抗体，具有高度专一性和 亲和性。它们被广泛应用于疾病的诊断和治疗领域。
单克隆抗体制备的挑战
• 免疫原选择的挑战 • 克隆纯化的困难 • 制备时间和成本的考虑
结论和总结
单克隆抗体制备是一项复杂而重要的技术，它为研究和治疗领域提供了丰富 的工具和机会。通过深入了解单克隆抗体的制备流程和应用，我们能够更好 地应对疾病挑战，为人类的健康保驾护航。
单克隆抗体的制备.ppt
单克隆抗体制备
总结
单克隆抗体是由单一B淋巴细胞克隆所产生 的、只作用于一个特定抗原表位的均一抗体。
动物免疫 细胞融合 HAT选择性培养
阳性杂交瘤细胞的筛选
克隆化培养
建系与冻存
单克隆抗体的大量制备
谢 谢！
Balb/c 6-8周龄
3天
免疫脾细胞
单克隆抗体制备
制备流程 细胞融合
免疫脾细胞
+
PEG
SP2/0
骨髓瘤细胞（HGPRT-/TK-）
几种细胞类型？ ？
单克隆抗体制备
制备流程 选择性培养：HAT培养基
HGPRT－/ TK－ 不能生长
死亡
HGPRT+, TK+ 能够长期生长
生长繁殖
单克隆抗体制备
制备流程
单克隆抗体制备
单克隆抗体
(monoclonal antibody, McAb)
由单一B淋巴细胞克隆所产生的、只作 用于一个特定抗原表位的均一抗体。
三个“一”
单克隆抗体制备
制备原理
致敏的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
杂交瘤
杂交瘤技术
单克隆抗体制备
制备流程
动物免疫
1 23
采用与骨髓瘤细胞系来源相同的品系动物。
单克隆抗体制备
制备流程 杂交瘤细胞的建系与冻存
1、连续两次克隆化阳性率达100%； 2、体外连续传代三个月以上仍能稳定分泌抗体。
单克隆抗体制备
制备流程 单克隆抗体的大量制备
体外培养法（产量10-100μg/ml）
单克隆抗体制备
制备流程
单克隆抗体的大量制备 动物体内诱生法 （产量3-10mg/ml）
临床免疫学检验技术
单克隆抗体的制备 PPT课件
单克隆抗体的制备
五、应用
这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性 问题，可用于探讨
用于疾病诊断方面
用于疾病的治疗
用作研究工具
单克隆抗体的制备
可用以检测淋巴细胞表面分子, 以区分不同分化阶段的淋巴细胞, 用于 鉴别淋巴细胞。
可用于鉴定病原体, 准确诊断感染性疾病。 可以用于肿瘤的诊断和分型。
1946年--1995年
米尔斯坦 César Milstein（英国） 英国医学研究委员会 分子生物实验室 1927年--
单克隆抗体的制备
1994年Winter等创建了以噬菌体抗体库技术为代表的基因工程 抗体，是单克隆抗体技术的又一重要进步，该技术是按人工设 计所重新组装的新型抗体分了，使不经免疫既可获得任何一种 动物(包括人)的特异性抗体成为可能，目前基因工程抗体在疾 病的预防、诊断、及治疗方面已获得广泛应用。
三、分类：
非人源抗体
人-鼠嵌合抗体
人源化抗体
全人源抗体 抗体的应用经历了非人源抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体，最
终同的阶 段。
单克隆抗体的制备
四、优缺点：
1、优点
具有特异性高、效价高、纯度高、 理化性状均一、重复性强且来源稳 定可大量生产等优点。
单克隆抗体的制备
二、制备原理
1. 致敏淋巴细胞 2. 骨髓瘤细胞 3. 饲养层细胞 4. 细胞融合 5. 选择性培养 6. 特异性抗体的检测 7. 杂交瘤细胞的克隆化 8. 杂交瘤的冻存和复苏 9. 单克隆抗体的大量制取 10.单克隆抗体的纯化
单克隆抗体的制备
单克隆抗体的制备
B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针
单克隆抗体制备(共44张PPT)
单克隆抗体制备流程图
亲本细胞的选择与制备
骨髓瘤细胞 (NS-1)
骨髓瘤细胞需定期用
细胞株稳定，易传代培养；
细胞株本身不产生Ig
是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖 转换酶 缺陷株
(hypoxanthine-guanine phos phoribosyl transferase ,HGPRT)
最常用的骨髓瘤细胞是NS-1 和SP2/0细胞株
PEG可导致细胞膜上 脂类物质的物理结构 重排，使细胞膜容易 打开而有助于细胞融 合。
常见的几种融合形式
细胞DNA合成途经
HAT选择培养基
三种关键成分：
次黄嘌呤（hypoxanthine,H）
氨基蝶呤（aminopterin,A）
胸腺嘧啶（thymidine ，T）
◆是根据细胞内嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的 生物合成途径设计的用于筛选杂交瘤细胞
因此在传统抗血清中，都含有许多种不同的抗体，分别针对这些不同的eptope。
每 mL 含有100 个 但除非抗原来源困难或有其它目的，我们仍采用传统方法，因免疫反应的启动机制非常复杂，生物整体的免疫反应是最可靠的。
单克隆抗体的制备流程和应用
细胞，若只要取一个 试采血 确定有抗体产生后，即可取出 脾脏以收集脾脏细胞(大多为B 细胞) 与骨髓瘤细胞进行 细胞融合。
2)体外增量培养法： 把杂交瘤细胞在大型培养槽 中培养，收集培养液上清即得抗体，但每 mL 只得 约数 mg，浓度较腹水稀约一千倍。最近有一种细 胞培养瓶，可产生如腹水般浓度的上清，但价格极 为昂贵 (IBS Integra Bioscience: Integra Celline)。
单克隆抗体的性质鉴定
种抗体；因此在传统抗血清中， 都含有许多种不同的抗体，分
单克隆抗体制备课件
细胞培养：选择合适的细胞 系进行培养
克隆化：将杂交瘤细胞进行 克隆化培养
抗体纯化：通过亲和层析法 纯化抗体
抗体鉴定：通过ELISA法鉴 定抗体的特异性和亲和力
PART FOUR
单克隆抗体在诊断试剂中的应用 单克隆抗体在免疫诊断中的应用 单克隆抗体在肿瘤诊断中的应用 单克隆抗体在传染病诊断中的应用
PPT,a click to unlimited possibilities
汇报人：PPT
CONTENTS
PART ONE
PART TWO
单克隆抗体：由 单一B细胞克隆产 生的抗体
特性：特异性强， 只识别一种抗原
制备方法：杂交 瘤技术、基因工 程等
应用：疾病诊断、 治疗、科学研究 等
制备过程：通过细胞融合技术， 将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融 合，形成杂交瘤细胞
产生来源：单克隆抗体是由 B淋巴细胞产生的
筛选：通过筛选，得到能够产 生特异性抗体的杂交瘤细胞
培养：将杂交瘤细胞进行培养， 使其大量增殖，产生大量的单 克隆抗体
PART THREE
确定抗原：选择合 适的抗原，如蛋白 质、多肽等
纯化抗原：通过离 心、层析等方法纯 化抗原
抗原处理：对纯化 后的抗原进行化学 修饰，如偶联、标 记等
PART FIVE
特异性强：能够识别并结合特异性 抗原
稳定性好：不易受环境因素影响
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
灵敏度高：能够检测低浓度的抗原
应用广泛：可用于疾病诊断、治疗 和预防
制备过程复杂，需要较高 的技术水平
成本较高，需要大量的资 金投入
制备周期较长，需要较长 的时间才能得到结果
存在一定的风险，如免疫 反应、过敏反应等
克隆化：将杂交瘤细胞进行 克隆化培养
抗体纯化：通过亲和层析法 纯化抗体
抗体鉴定：通过ELISA法鉴 定抗体的特异性和亲和力
PART FOUR
单克隆抗体在诊断试剂中的应用 单克隆抗体在免疫诊断中的应用 单克隆抗体在肿瘤诊断中的应用 单克隆抗体在传染病诊断中的应用
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CONTENTS
PART ONE
PART TWO
单克隆抗体：由 单一B细胞克隆产 生的抗体
特性：特异性强， 只识别一种抗原
制备方法：杂交 瘤技术、基因工 程等
应用：疾病诊断、 治疗、科学研究 等
制备过程：通过细胞融合技术， 将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融 合，形成杂交瘤细胞
产生来源：单克隆抗体是由 B淋巴细胞产生的
筛选：通过筛选，得到能够产 生特异性抗体的杂交瘤细胞
培养：将杂交瘤细胞进行培养， 使其大量增殖，产生大量的单 克隆抗体
PART THREE
确定抗原：选择合 适的抗原，如蛋白 质、多肽等
纯化抗原：通过离 心、层析等方法纯 化抗原
抗原处理：对纯化 后的抗原进行化学 修饰，如偶联、标 记等
PART FIVE
特异性强：能够识别并结合特异性 抗原
稳定性好：不易受环境因素影响
添加标题
添加标题
添加标题
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灵敏度高：能够检测低浓度的抗原
应用广泛：可用于疾病诊断、治疗 和预防
制备过程复杂，需要较高 的技术水平
成本较高，需要大量的资 金投入
制备周期较长，需要较长 的时间才能得到结果
存在一定的风险，如免疫 反应、过敏反应等
《单克隆抗体制备》课件
02
单克隆抗体制备的流程
免疫动物
免疫动物选择
选择适合的动物作为免疫原注 射的宿主，如小鼠、大鼠等。
免疫方案设计
根据免疫原的性质和目的，设 计合适的免疫方案，包括免疫 途径、免疫次数、免疫剂量等 。
免疫原注射
将免疫原物质注射到选定的动 物体内，激发免疫反应。
杂交瘤细胞的培养
脾细胞与骨髓瘤细胞融合
免疫学研究
细胞生物学研究
单克隆抗体可以用于标记、分离和鉴定细胞，研究 细胞的生长、分化和凋亡等过程。
单克隆抗体是免疫学研究的重要工具，可用 于研究抗原、抗体和免疫反应的机制。
蛋白质组学研究
单克隆抗体可以用于蛋白质的检测、纯化和 相互作用研究，推动蛋白质组学的发展。
单克隆抗体的未来发展与挑战
技术创新
单克隆抗体的应用
01
02
03
04
生物研究
用于免疫学、细胞生物学和分 子生物学等领域的基础研究， 如检测、分离和纯化等。
医学诊断
用于疾病诊断和治疗监测，如 免疫组织化学、酶联免疫吸附 试验和放射免疫分析等。
生物制药
用于药物研发和生产，如治疗 性抗体、诊断试剂和疫苗等。
生物安全
用于检测和预防生物恐怖袭击 和传染病爆发，如检测生物武 器和病原微生物等。
特点
单克隆抗体在结构和功能上均具有高 度一致性，使其在生物研究和医学诊 断治疗中具有广泛应用。
单克隆抗体的特性
80%
高度特异性
单克隆抗体能够特异性识别和结 合抗原，具有极高的选择性。
100%
高纯度
单克隆抗体由单一B细胞克隆产 生，纯度高，避免了多克隆抗体 中不同抗体的交叉反应。
80%
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PEG:一般把分子量1000、1500、4000 的 PEG是最常用的细胞融合剂 作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重 排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合 作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、 分子量的PEG，其纯度与毒性有所不同
3. 杂交瘤细胞的选择性培养
HGPRT
次黄嘌呤
(Hypoxanthine)
邓念华 临床微免教研室
人体
Ag
B
B
Ag
Ag Ag
B 你 有 何 新 策 略？
用传统方法能否制
备单克隆抗体？
人体
体内
B
B
Ag
Ag Ag
B
Ag
？体外
单克 隆抗 体制 备思 路：
B
B B
B
B
B
体外
癌细胞 B
Hybridoma Technology
癌细胞
体外
体外
既可增殖 又可产生抗体
• Hybridoma Technology and Production of Monoclonal Antibodies -
一、杂交瘤技术的基本原理
二)阳性杂交瘤细胞的克隆化与冻存
B细胞
B细胞
B细胞
Ag
B细胞
B细胞
瘤细胞 B细胞
瘤细胞
B细胞瘤细胞
B细胞
B细胞
瘤细胞
B细胞
瘤细胞
B细胞
瘤细胞
1、阳性杂交瘤细胞的克隆化
有限稀释法(limiting dilution) 显微操作法(micromanipulation) FACS法（fluorescence activated cell sorter） 软琼脂平板法(soft agar method)
Niels K. Jerne 1/3 of the prize
Georges J.F. Köhler 1/3 of the prize
César Milstein 1/3 of the prize
一、杂交瘤技术的基本原理
一)杂交瘤技术 1、亲本细胞的选择 2、细胞融合 3、杂交瘤细胞的选择性培养
细胞融合 PEG 杂交瘤细胞筛选 HAT 阳性克隆化（反复3-5次）
加饲养细胞 抗体检测
克隆扩大生产
收集抗体上清 单抗的纯化及鉴定 细胞的冻存及复苏
一)、抗原的提纯与动物免疫
1、抗原： • 纯度越高越好。 • 细胞抗原：10×107个细胞作腹腔免疫。 • 可溶性抗原：与佐剂配合使用。
2、动物选择： • 选择BALB/c健康小鼠，8-12周，雌雄不限；同
小分子 化合物
叶酸
经典途径
DNA RNA
补偿途径
TK
胸腺嘧啶核苷
(Thymidine)
DNA合成的途径：
HAT培养基：
Hypoxanthine 次黄嘌呤 Amniopterin 氨基蝶呤 Thymidine 胸腺嘧啶核苷 该培养基中细胞不能利用经典途径只能利用 补偿途径合成DNA。
骨髓瘤细胞（ HGPRT-, TK- ）：不能生长 杂交瘤细胞（ HGPRT+, TK+ ）：能够生长
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1984
"for theories concerning the specificity in development and control of the immune system and the discovery of the principle for production of monoclonal antibodies"
浆细胞 (B)
瘤细胞
融合 多种 筛选 细胞
杂交瘤 细胞
Hybrid cell
1.亲本细胞的选择 1)小鼠骨髓瘤细胞
a.稳定，易培养； b.它是B细胞恶性肿瘤，与脾细胞同源，融合率高； c.能与细胞杂交形成稳定的杂交瘤细胞，并分泌免 疫球蛋白； d.本身不分泌免疫球蛋白； e.次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)或胸腺嘧 啶激酶(TK)缺陷的细胞株( ？)；
请简述多克隆制备过程。 采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从
动物血清中分离出所需抗体的方法。 此类抗体作为诊断试剂有何缺点？
产量低、特异性差、纯度低，反应不够灵敏。 为克服多抗的缺点，可用什么物质替代？
单克隆抗体。
人体
Ag
B
B
Ag
Ag Ag
B
传统免疫学清制备
机制
人体
第四章 单克隆抗体制备
有限稀释法
计数
103/ml 102/ml 10/ml 0.5-2/孔
特点： 不需任何特殊设备；克隆出现效率高； 实验室常用方法。
效率最高 价格昂贵
FACS
2、细胞的冻存及复苏
配制方案：杂交瘤细胞（（1～5）x106/ml) + 细 胞冻存液(30%～40% 牛血清，50%～60% RPMI-1640培养液，10%DMSO ) “慢冻”：分步冷冻，30℃→-70℃→液氮 “快融”：取出立即浸入37℃～40℃水浴中，使其 迅速融化、复苏
• Monoclonal antibodies can be produced in specialized cells through a technique now popularly known as hybridoma technology. This technology was discovered in 1975 by two scientists, Georges Kohler of West Germany and Cesal Milstein of Argentina, who jointly with Niels Jerne of Denmark were awarded the 1984 Nobel, Prize for Physiology and Medicine.
1.亲本细胞的选择 1)小鼠骨髓瘤细胞 2)免疫脾细胞
经抗原免疫的BALB/c小鼠的脾细胞，具有分 泌抗体的能力。
动 物：
BALB/c小鼠 7～12周龄 20g～25g体重
2. 细胞融合
B
癌细胞
融合剂 如何才能得到杂
交瘤细胞？
B
B
癌细胞 B
癌细胞
癌细胞
癌细胞
自然选择
癌细胞 B 癌细胞
体外
细胞融合剂：
细胞冷冻的意义
防止污染 避免染色体丢失 防止非分泌细胞的过度生长 防止细胞密度过高而死亡
单抗纯化
抗
原
选择性
培养
致敏 淋巴 细胞
融 合
骨髓瘤 细胞
抗体分泌 细胞筛选
克隆化Βιβλιοθήκη 单抗制取单抗鉴定三、杂交瘤技术制备单克隆抗体流程
抗原提纯和动物免疫
骨髓瘤细胞复苏
ELISA 检测抗体
制取脾细胞悬液
收集骨髓瘤细胞
3. 杂交瘤细胞的选择性培养
HGPRT
次黄嘌呤
(Hypoxanthine)
邓念华 临床微免教研室
人体
Ag
B
B
Ag
Ag Ag
B 你 有 何 新 策 略？
用传统方法能否制
备单克隆抗体？
人体
体内
B
B
Ag
Ag Ag
B
Ag
？体外
单克 隆抗 体制 备思 路：
B
B B
B
B
B
体外
癌细胞 B
Hybridoma Technology
癌细胞
体外
体外
既可增殖 又可产生抗体
• Hybridoma Technology and Production of Monoclonal Antibodies -
一、杂交瘤技术的基本原理
二)阳性杂交瘤细胞的克隆化与冻存
B细胞
B细胞
B细胞
Ag
B细胞
B细胞
瘤细胞 B细胞
瘤细胞
B细胞瘤细胞
B细胞
B细胞
瘤细胞
B细胞
瘤细胞
B细胞
瘤细胞
1、阳性杂交瘤细胞的克隆化
有限稀释法(limiting dilution) 显微操作法(micromanipulation) FACS法（fluorescence activated cell sorter） 软琼脂平板法(soft agar method)
Niels K. Jerne 1/3 of the prize
Georges J.F. Köhler 1/3 of the prize
César Milstein 1/3 of the prize
一、杂交瘤技术的基本原理
一)杂交瘤技术 1、亲本细胞的选择 2、细胞融合 3、杂交瘤细胞的选择性培养
细胞融合 PEG 杂交瘤细胞筛选 HAT 阳性克隆化（反复3-5次）
加饲养细胞 抗体检测
克隆扩大生产
收集抗体上清 单抗的纯化及鉴定 细胞的冻存及复苏
一)、抗原的提纯与动物免疫
1、抗原： • 纯度越高越好。 • 细胞抗原：10×107个细胞作腹腔免疫。 • 可溶性抗原：与佐剂配合使用。
2、动物选择： • 选择BALB/c健康小鼠，8-12周，雌雄不限；同
小分子 化合物
叶酸
经典途径
DNA RNA
补偿途径
TK
胸腺嘧啶核苷
(Thymidine)
DNA合成的途径：
HAT培养基：
Hypoxanthine 次黄嘌呤 Amniopterin 氨基蝶呤 Thymidine 胸腺嘧啶核苷 该培养基中细胞不能利用经典途径只能利用 补偿途径合成DNA。
骨髓瘤细胞（ HGPRT-, TK- ）：不能生长 杂交瘤细胞（ HGPRT+, TK+ ）：能够生长
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1984
"for theories concerning the specificity in development and control of the immune system and the discovery of the principle for production of monoclonal antibodies"
浆细胞 (B)
瘤细胞
融合 多种 筛选 细胞
杂交瘤 细胞
Hybrid cell
1.亲本细胞的选择 1)小鼠骨髓瘤细胞
a.稳定，易培养； b.它是B细胞恶性肿瘤，与脾细胞同源，融合率高； c.能与细胞杂交形成稳定的杂交瘤细胞，并分泌免 疫球蛋白； d.本身不分泌免疫球蛋白； e.次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)或胸腺嘧 啶激酶(TK)缺陷的细胞株( ？)；
请简述多克隆制备过程。 采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从
动物血清中分离出所需抗体的方法。 此类抗体作为诊断试剂有何缺点？
产量低、特异性差、纯度低，反应不够灵敏。 为克服多抗的缺点，可用什么物质替代？
单克隆抗体。
人体
Ag
B
B
Ag
Ag Ag
B
传统免疫学清制备
机制
人体
第四章 单克隆抗体制备
有限稀释法
计数
103/ml 102/ml 10/ml 0.5-2/孔
特点： 不需任何特殊设备；克隆出现效率高； 实验室常用方法。
效率最高 价格昂贵
FACS
2、细胞的冻存及复苏
配制方案：杂交瘤细胞（（1～5）x106/ml) + 细 胞冻存液(30%～40% 牛血清，50%～60% RPMI-1640培养液，10%DMSO ) “慢冻”：分步冷冻，30℃→-70℃→液氮 “快融”：取出立即浸入37℃～40℃水浴中，使其 迅速融化、复苏
• Monoclonal antibodies can be produced in specialized cells through a technique now popularly known as hybridoma technology. This technology was discovered in 1975 by two scientists, Georges Kohler of West Germany and Cesal Milstein of Argentina, who jointly with Niels Jerne of Denmark were awarded the 1984 Nobel, Prize for Physiology and Medicine.
1.亲本细胞的选择 1)小鼠骨髓瘤细胞 2)免疫脾细胞
经抗原免疫的BALB/c小鼠的脾细胞，具有分 泌抗体的能力。
动 物：
BALB/c小鼠 7～12周龄 20g～25g体重
2. 细胞融合
B
癌细胞
融合剂 如何才能得到杂
交瘤细胞？
B
B
癌细胞 B
癌细胞
癌细胞
癌细胞
自然选择
癌细胞 B 癌细胞
体外
细胞融合剂：
细胞冷冻的意义
防止污染 避免染色体丢失 防止非分泌细胞的过度生长 防止细胞密度过高而死亡
单抗纯化
抗
原
选择性
培养
致敏 淋巴 细胞
融 合
骨髓瘤 细胞
抗体分泌 细胞筛选
克隆化Βιβλιοθήκη 单抗制取单抗鉴定三、杂交瘤技术制备单克隆抗体流程
抗原提纯和动物免疫
骨髓瘤细胞复苏
ELISA 检测抗体
制取脾细胞悬液
收集骨髓瘤细胞