08 平板菌落计数法应用

5．计数 培养24小时后，取出培养皿，算出同一稀释度 两个平皿上的菌落平均数，并按下列公式进行计 算： 每毫升中总活菌数=同一稀释度两次重复的菌落 平均数×稀释倍数
四

实验结果
填表
一般选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫 升的菌数最为合适。 同一稀释度的两个重复的菌数不能相差很悬殊。 不同稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差悬 殊，如相差较大，表示试验不精确。
实验八 平板菌落计数法
一、目的要求 学习平板菌落计数的基本原理和方法。 二、基本原理 平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基 上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成 的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个 单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释， 再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其 均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由 单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目， 即可换算出样品中的含菌数。
3．取样 用4支1mL无菌吸管分别精确地吸取10-5、10-6、10-7、 10-8的稀释菌液1ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。
4．倒平板 于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶 化后冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基约 10—15mL，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后， 倒置于37℃温室中培养。
2．稀释 用1ml无菌吸管精确地吸取1mL原菌悬液放入10-2的三 角瓶中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，容 器内液体外溢。然后仍用此吸管将瓶内悬液来回吸吹三 次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。另 取一支吸管自10-2三角瓶中吸1mL放入10-3试管中，吸吹 三次，……其余依次类推。整个稀释过程如图。
三、器材
酵母菌悬液， 牛肉膏蛋白胨培养基， 1mL无菌吸管 无菌平皿 盛有9 mL无菌水的试管
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四、操作步骤
1．编号： 取无菌平皿 8套，在皿底分别标记10-5、10-6 、10-7、10 8各2套。（不得开盖，） 取1只装有99mL无菌水的三角瓶1只，标明10-2。 另取6支盛有9mL无菌水的试管，排列于试管架上，依次 标记10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8。

操作录像
实验安排
培养基配制:3种,分实验台配制（每组400mL） 第一台:牛肉膏蛋白胨固体培养基: 平板菌落计 数法用. 第二台:高氏一号固体培养基: 分离放线菌
第三台:土豆蔗糖培养基: 分离霉菌
分装:三角瓶(装99mL水(加玻璃珠)，每台1只) 斜面试管(装土豆蔗糖培养基,每人2只) 稀释用试管(事先装无菌水4.5mL,每组3只) 相关材料.
灭菌:轮流值守
摆放斜面试管:
土壤及细菌原液稀释:土壤稀释分离 倒平板:每人3个,分离用2个,计数用1个. 接种:平板菌落计数每人一只平板.土壤稀释分离: 每人划2个平板,放线菌和霉菌各一个.
培养:细菌37℃;放线菌,霉菌28℃(分开放置)
观察,分离和计数:平板菌落计数48小时后;放线菌和 霉菌接种3天后开始 形态观察:一周后.