两种常见的转基因食品检测技术

两种常见的转基因食品检测技术

由于转基因物质有可能在耕种、收割、运输、储存和加工过程中混入食品，对食品造成偶然污染。因此，不论是对转基因食品贴示标签，或是对转基因与非转基因原料进行分别输送，转基因原料和食品的检测都是必不可少的；另外，要区分转基因与非转基因食品，对转基因食品进行选择性标记，对食品中的转基因含量的多少加以限制，也需要准确有效的基因检测技术。从发展来看转基因食品的检测技术根据检测的直接对象可分为三类：(1)利用导入外源基因所表达的特殊性状直接鉴定；(2)针对导入外源基因表达的蛋白质的鉴定方法；(3)以导入外源基因的特定DNA序列为检测对象的检测技术。其中目前用的比较多的是PCR技术、ELISA技术（酶联免疫法）和生物芯片技术三种。

3.1免疫学检测法

是从蛋白质水平对转基因食品进行检测(即对外源蛋白质的测定可将其分为Western杂交、酶联免疫法(ELISA)、试纸条法和快速检测试剂盒法。免疫学检测法，其基本原理是通过抗原(antigen)抗体之间的特异反应来实现的。抗原抗体反应是一种非共价键特异性吸附反应，即通常情况下，抗原只和它自己（或者具有相同抗原决定族的抗原）诱导产生的抗体发生反应。

3.1.1杂交

Western杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异蛋白检测方泫，它具有很高的灵敏性，可以从植物细胞总蛋白中检测出50ng的特异蛋白。Western杂交检测的关键是抗体的制备。

3.1.2酶联免疫吸附法

ELISA(EnzymeLinkedImmuneabsorbentAssay)，此法则通过酶反应将抗原抗体反应信号放大，从而提高了检测灵敏度，而且还能产生有颜色的底物，通过仪器或肉眼识别，此法一般在酶联板上或膜上进行，检测一次需要4小时左右。

3.1.3试纸条法试纸条法(LateralFlowStrip)，此法主要将特异的抗体交联到试纸条上和有颜色的物质上，当纸上抗体和特异抗原结合后，再和带有颜色的特异抗体进行反应，就形成了带有颜色的三明治机构，并且固定在试纸条上，如果没有抗原，则没有颜色。

3.1.4快速检测试剂盒法

此法具有操作简易%使用方便的特点，但是试剂盒本身价格较昂贵，在称取样量上用量较少，代表性不能保证，这将影响到检测结果的正确性。目前见得多的产品主要是国外的，如DneasyPlantMiniKit(QIAGEN)等试剂盒）．

3.2PCR检测法

PCR检测法是目前转基因存在的检测方法中最为成熟的，它具有灵敏度较高／特异性强厂可准确定量等优点，PCR技术即“．聚合酶链反应技术”，是指模拟体内DNA复制方式在体外选择性扩增DNA某个特殊区域的技术，它能在短时间内准确地将目的顺序大量复制，PCR的基本要素包括模板、引物、合成DNA 的原料即DNTP和DNA聚合酶．PCR即可做定性又可做定量分析。目前大多以定性检测为主，定性检测的检出范围为0.1%，但该项技术的检测结果也有可能与实际不相符合，会出现假阴性或假阳性结果（即检测物质本身含有转基因特制而未被检出，或是本身没有转基因物质，而检出有转基因成分）。

3.2.1定性PCR技术

转基因食品重组DNA的基本结构包括启动动子、目的基因、终止子和标记基因，到目前为止，全世界已有30多种源基因食品得到相关国家的安全评价，在现有的商品化源基因食品中绝大多数含转录启动子CaMV35、转录终止子NOS及抗生素抗性基因NPTII。这就为人们建立相应的PCR筛选检测方法提供了便利[22]迄今为止，利用定性PCR检测技术可检测如大豆、玉米、番茄、油菜等多种转基因作物.

3.2.2定量PCR技术

近年来随着人们对转基因食品量化要求的提高，研究者们在定性筛选PCR方法的基础上发展了不同的定量转基因食品的PCR检测方法#目前转基因成分的定量检测方法有定量竞争

PCR(QuantitativecompetitivePCR)和实时(Real-time)荧光定量检测分析PCR。定量竞争PCR的基本原理是采用构建的竞争DNA与样品DNA相互竞争相同底物和引物，并根据电泳结果以竞争模板的稀释度和结果做标准曲线，从而得到可靠的定量分析结果。其特定是含有内部标准子，可降低实验室之间的检测误差。实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时检测整个PCR进程，然后在标准曲线上对未知模板进行定量分析，此法采用了独特的全封闭反应，减少了污染，具有高度的灵敏性。

3.2.3PCR-ELISA

这是一种将PCR的高效性、高灵敛度与ELISA的高准确度相结合的方法，它是以地高辛标记的特异性探针诱捕PCR产物在合适条件下杂交，在用碱性磷酸脂酶标记的链酶亲和素进行ELISA反应，既适合于快速的定性筛选又可进行准确的定量分析。