细胞培养常用试剂生物学自然科学专业资料
高中生物实验常用的试剂（归纳总结）
高中生物实验常用的试剂（归纳总结）第一篇：高中生物实验常用的试剂(归纳总结)生物学中常用的试剂：1.斐林试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。
用法：将斐林试剂甲液和乙液混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。
2.班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。
和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。
用于尿糖的测定。
3.双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液)。
用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。
如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。
4.苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。
用于检测脂肪。
可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色)。
5.二苯胺：用于鉴定DNA。
DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色。
6.甲基绿：用于鉴定DNA。
DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。
吡罗红：检测RNA，呈红色7、50%的酒精溶液：用于洗去苏丹Ⅲ在脂肪上的浮色。
8、70%的酒精溶液：用于医学临床上的消毒灭菌。
9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA 10、15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。
11.龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色时，前者呈深蓝色，后者呈红色改良苯酚品红染液：检测染色体，红色健那绿：检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色12.20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。
（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。
14.碘液：用于鉴定淀粉的存在。
遇淀粉变蓝。
遇糖原变红15.丙酮：用于提取叶绿体中的色素16.层析液：(成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油)可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。
细胞培养中的那些常添加物
细胞培养中的那些常添加物细胞培养所用的培养基是众多科研人员凭借专业知识和丰富的经验发展起来的，它一般具有以下功能：使细胞具有极佳的生长率；延长细胞寿命；有分化功能及诱导功能；支持细胞的克隆生长。
在实验中，为了使细胞具有极佳的生长速率和生长状态，实验人员会根据不同细胞的特性加入不同的因子以促进细胞的增殖，接下来让我们盘点一下几种除了基础培养基和血清外常用的培养基添加物。
氨基酸（Amino Acids）是蛋白质组成的基本单位，也是构成生命的重要成分。
根据细胞自身合成的能力，可将氨基酸分为三类：必需氨基酸、半必需氨基酸和非必须氨基酸。
MEM非必需氨基酸溶液（Non-Essential Amino Acids, NEAA）源自MEM培养基配方，包括L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天（门）冬酰胺、L-天（门）冬氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸和甘氨酸7种非必须氨基酸，能有效改善细胞培养基配比，降低细胞培养时细胞自身生产非必须氨基酸的副作用，促进细胞增殖代谢，是细胞培养中常用的添加剂之一。
谷氨酰胺具有重要的免疫调节作用，它是淋巴细胞分泌、增殖及其功能维持所必需的。
作为核酸生物合成的前体和主要能源，谷氨酰胺可促使淋巴细胞、巨噬细胞的有丝分裂和分化增殖，增加细胞因子TNF、IL-1等的产生和磷脂的mRNA合成。
谷氨酰胺是核酸碱基从头合成的途径的重要原料，如果缺失就会造成细胞合成DNA效率下降，造成细胞分裂减少，抑制细胞增殖。
L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。
L-谷氨酰胺在溶液中不稳定（在4℃培养溶液中半衰期为3个星期，37℃中为1个星期），L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性，因此需要在使用时加入。
一般3个星期左右补一次。
表皮细胞生长因子（Epidermal Growth Factor），是人体内分泌的一种重要细胞生长因子，有很强的生理活性。
EGF是人体内存在的一种生长因子，它的主要功能是促进皮肤细胞的分裂。
细胞培养基本实验操作一般培养试剂介绍常用培养基及基本特性HBSS的配制和使用攻略
细胞培养基本实验操作一般培养试剂介绍常用培养基及基本特性HBSS的配制和使用攻略常用培养基及基本特性1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mM HEPES缓冲液。
6、McCoy’s 5AMcCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
细胞培养常用器材与试剂
器材与试剂干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等具体步骤1. 水：细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。
需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.2. PBS (也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·H2O 1.56g，KH2PO4 0. 2g ）倒入盛有双蒸水的烧杯中，玻璃棒搅动，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。
用HCl或NaOH调PH到7.4。
移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（大的吊针瓶）内，盖上胶帽，并插上针头放入高压锅内8磅消毒20分钟。
注意高压消毒后要用灭菌蒸馏水补充蒸发掉的水份。
3. 胰蛋白酶溶液：胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。
不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。
胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。
使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。
终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为0.25％，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调PH到7.2左右）或PBS（D-hanks）液中。
搅拌混匀，置于4℃内过夜。
用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（0.22微米微孔滤膜）抽滤除菌。
然后分装成小瓶于-20℃保存以备使用。
4. 0.05％胰蛋白酶－0.02%EDTA溶液称取胰蛋白酶粉末（1：250）0.05g，EDTA 0.02g，加入PBSA 100ml，0.22um微孔滤膜过滤除菌，分装，于－20℃保存。
本试剂仅供研究使用
本试剂仅供研究使用猪促甲状腺素释放激素(TRH)elisa试剂盒使用说明书试剂盒组成：48孔配置/96孔配置说明书：1份封板膜：2片（48）/2片（96）密封袋：1个目的：【猪促甲状腺素释放激素(TRH)elisa试剂盒说明书】本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中促甲状腺素释放激素(TRH)的含量。
服务承诺：供货期：款到发货。
工作时间内免费的技术咨询和指导。
请来电咨询为客户提供来样检测服务，最大限度实验结果的有效性(免费代测)。
试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%保存条件及有效期：1.试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期：6个月检测范围：0.2IU/L - 6IU/L实验原理：【猪促甲状腺素释放激素(TRH)elisa试剂盒说明书】本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪促甲状腺素释放激素(TRH)水平。
用纯化的猪促甲状腺素释放激素(TRH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入促甲状腺素释放激素(TRH)，再与HRP标记的促甲状腺素释放激素(TRH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的促甲状腺素释放激素(TRH)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪促甲状腺素释放激素(TRH)浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
细胞培养试剂的配制
细胞培养试剂的配制一、Hank’s液配方：KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至1000ml注：Hank’s液可以高压灭菌。
4℃下保存。
二、磷酸盐缓冲液(PBS)的配制母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L 的NaH2PO4，81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。
然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。
0.01M PB（PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。
0.02M PB（PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。
若需要NaCl的话，加入NaCl至0.9%（g/100ml）即可。
三、胰蛋白酶溶液的配制配制胰蛋白酶时，要注意药品的牌号，活性及保存时间。
不同的牌号、质量会有差别，更重要的应注意酶的活性。
配制时，应按所标活性(一般活性为1：250)配制最适浓度的溶液。
配制方法下：0．25％胰蛋白酶(活性1：250)溶液的配制：1：250 胰蛋白酶0.25gHank 液100ml配制时，先用少量Hank 液溶解胰蛋白酶，然后再将余液加入。
置于370C 水浴中，溶解lh(时间长短取决于溶解程度，待溶液全部透彻清亮为止)。
溶解后，用除菌滤器过滤，无菌分装，密封，贴好标签，置于低温冰箱(-20℃)保存。
使用前，用7.4％NaHCO3调PH 至7.6-7.8。
常用生物学试剂
X-gal
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，是IPTG的显色试剂，在IPTG的催化下显蓝色。常跟IPTG一起用与蓝白斑筛选。
5.
G418:
一种抗生素，对几乎所有的细胞都有毒性，是稳定转染最常用的选择试剂。当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。Ｇ418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
9
BSA
牛血清白蛋白. 主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。常用于蛋白定量中的内参和抗体稀释液。
10.
甲酰胺
甲酰胺被用作凝胶电泳中RNA的稳定剂，也用于稳定毛细管电泳中的变性单股DNA。
11.
TEMED
四甲基乙二胺。促凝剂。在中性及碱性pH条件下，加入TEMED可加速凝胶聚合
12.
巯基乙醇
一种强还原剂。可还原蛋白二硫键，从而使蛋白保持溶解状态，有利于与SDS的结合。使蛋白解离成单个亚基。
1.
蛋白酶K：
能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白。再尿素和SDS中稳定。一般工作浓度是50—100μg/ml，推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。
2.
SDS:
十二烷基硫酸钠. 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀
细胞培养中的常用试剂
1.pbs缓冲液PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。
它是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液，主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。
如有需要PBS还可以补加1 mmol/L CaCl2和0.5 mmol/L MgCl2，以提供双价阳离子。
注：PBS不是磷酸缓冲液（phosphate buffer solution，PB）保存方法高温高压灭菌后置于4摄氏度冰箱保存待用。
PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 10mmol/L， KH2PO42mmol/LPBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用，具体试剂一般也有不同的比例配方，在针对性上就有了更好的效果。
1x PBS缓冲液就是0.01M的PBS,可直接使用,2x PBS 就是2倍浓度,使用时稀释一倍使用。
0.1M的PBS一般不用来配置缓冲液,用于其它用处。
作用PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称，不仅伪狂犬病毒要用它稀释，一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。
原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性；生理盐水不具有调整pH的作用，对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应，所以使用PBS是首选。
PBS也不是万能的，有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高，就需要在平衡缓冲液中加入2.DMEM培养液DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。
与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。
高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等 DMEM 是 dulbecco's modified eagle medium的缩写，所以其特点主要包括以下：（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等；（2）维生素含量为依格尔培养基的4倍；（3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸；（4）含有微量的铁离子。
细胞培养试剂
一．PBS磷酸缓冲盐溶液（一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）PBS 1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)：0.27g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)：1.42g，氯化钠(NaCl)：8g，氯化钾(KCl)：0.2g，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L高温高压灭菌后置于4摄氏度冰箱保存待用。
（一般情况下，最好现配现用，易变质暴露在空气中）二．细胞消化液0.25%胰酶-0.02%EDTA的配制配方：100ml PBS,0.25g胰酶步骤：1先配100mlPBS2称胰酶0.25g3加入PBS中，低速搅拌〈4h冰浴中,或者4℃过夜低速搅拌0.5h 冰浴中(储存-20摄氏度冰箱中，使用保存4摄氏度)4调PH7.45仍在冰浴中6过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完Tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，酶就变性了。
低温，防止酶失活对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)Tip:因为EDTA可以络合Ca2 ，增加消化效力注意事项：1、胰酶是0.25%,这是质量体积比，就是说0.25g胰酶溶于100ml PBS,注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。
2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。
EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。
EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。
如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。
如果对贴壁没影响，那么可不离心。
3、EDTA的浓度也是质量体积比。
和胰酶一起溶于PBS。
4、注意，血清可终止胰酶的作用，但不能终止EDTA的作用，对有些细胞来说，终止消化后的离心是必要的。
5、胰酶和EDTA在pH 为8左右的时候最易溶解，在配制时可先滴几滴NaOH将pH调至8，注意，胰酶可使溶液变酸，所以要边溶边测pH，随时调整。
4.2细胞培养常用液体
缺点：来源受限。
成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验 结果的分析。易发生支原体污染
合成培养基
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用 人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基， 如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、 无机盐和其它一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定。 成本低
缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 Note：人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞
生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血 清）。
培养基的基本要求
• 营养成分:氨基酸、单糖、维生素、无机离 子与微量元素
• 促生长因子及激素：胰岛素 、泌乳素 • 渗透压 • pH • 无毒、无污染
宜的PH; • 酚红作指示剂：PH7.4呈红色； PH7.0呈橘红色；
PH6.5呈柠檬黄；PH低于6.5呈黄色；PH高于7.8呈紫红 色； • 大多情况下细胞培养液PH值可凭肉眼判断或PH试纸， 只有在染色如荧光染色时，需要用PH计来测定。
无毒、无污染
• 体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质无任何 抵抗力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生 物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他 对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、 补体等）。
Na2HPO4H2O NaH2PO42H2O KH2PO4 NaHCO3 葡萄糖
PBS 8.00 0.20 1.56 0.20 -
Hank’s D-Hank’s
8.00 8.00
0.40 0.40
0.14 -
-
-
常用的细胞培养方法、污染及污染处理
常用的细胞培养方法、污染及污染处理一、本文概述细胞培养是生物学和医学领域中一种重要的实验技术，广泛应用于基础研究和实际应用。
通过模拟细胞在体内生长的环境，细胞在体外得以繁殖、分化并维持其特定功能。
本文旨在概述常用的细胞培养方法，包括培养基的选择、细胞传代、细胞冻存与复苏等，同时探讨细胞培养过程中可能出现的污染问题，包括细菌、真菌和支原体等微生物污染，以及污染的检测和处理方法。
通过本文的阐述，读者可以对细胞培养的基本流程和污染防控有更为全面的了解，为实验操作提供指导和参考。
二、常用的细胞培养方法细胞培养是生物学和医学研究中的核心技术，用于模拟体内环境，研究细胞生长、分化和功能。
以下是几种常用的细胞培养方法：贴壁培养法：这是最常见的细胞培养方法。
细胞在培养瓶或培养板的表面上贴壁生长，形成单层细胞。
这种方法适用于大多数哺乳动物细胞系。
悬浮培养法：某些细胞，如血液细胞、肿瘤细胞和某些干细胞，可以在液体培养基中悬浮生长。
这种方法不需要细胞贴壁，可以方便地扩大细胞数量。
微载体培养法：微载体是一种微小的、可以悬浮在培养基中的颗粒，通常用于大规模细胞培养。
细胞可以在微载体的表面上贴壁生长，从而增加细胞与培养基的接触面积，提高细胞生长效率。
三维培养法：这种方法模拟体内组织的三维结构，使用支架或凝胶等基质支持细胞生长。
它有助于研究细胞间的相互作用和组织的形成。
共培养法：将不同类型的细胞放在同一个培养环境中进行培养，以模拟体内细胞间的相互作用。
例如，将内皮细胞和肿瘤细胞共培养，可以研究肿瘤血管生成的过程。
在进行细胞培养时，需要选择适合细胞类型和实验目的的培养方法，同时严格控制培养条件，包括温度、湿度、pH值、营养成分等，以确保细胞的正常生长和繁殖。
三、细胞培养污染及其影响在细胞培养过程中，污染是一个常见且严重的问题，可能对细胞生长、实验结果和细胞治疗产生负面影响。
污染主要来源于微生物，包括细菌、真菌、支原体和病毒等。
细胞培养专用的试剂和耗材介绍
细胞培养技术也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。
不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术。
细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。
细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。
通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。
因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
细胞培养泛指所有体外培养，其含义是指从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境特定的体内条件下，进行孵育培养，使之生存并生长。
细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域，成为最重要的基础科学之一。
细胞培养专用试剂
细胞培养专用耗材。
3.细胞培养的基本条件-07资料
1）无菌室
◆
为无菌操作而设计的空间，包括操作间和缓冲间。
◆
操作间又可分为细胞室和感染室
缓冲间能保护无菌间的无菌环境，可兼有更换无 菌衣帽和进行一些简单操作（如放孵育箱、离心 等）的功能。
◆
◆
整个面积约10m2，通入经滤过的无菌空气，与周 围实验室比较应保持正压，常备紫外灯，室内其 他陈设尽量减少。
常用的消化液： 胰蛋白酶 依地酸二钠（disodium edetate,EDTA-2Na） 胶原酶
（1）胰蛋白酶
◆
胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽
健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨 架，从而使细胞分离。
◆
胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定
限度会损伤细胞。 胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无 Ca2+ 、 Mg2+ 的PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25 ％ 。用滤器过滤除菌。
◆二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞生长繁
殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于
维持培养基的PH值。
◆大多数细胞的适宜PH为7.2-7.4，偏离这一范
围对细胞培养将产生有害的影响。但细胞耐酸 性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞 生长。有资料显示，原代羊水细胞培养PH6.8 时最适。
3）抗菌素溶液：
素的影响
具体工作： 器皿洗刷 孵育 细胞传代
试剂和培养液的配 制
制备细胞
细胞的冻存、复苏和运 输
无菌观念
◆必须树立无菌观念，坚持一贯的无菌操作，进
行无菌处理。
◆实验室应分为无菌室、准备室和洗刷消毒室，
除洗刷消毒室须分隔开外，无菌室和准备室可 在同一房间内，但需划分出不同功能区，即无 菌操作区和培养、观察区。
本试剂仅供研究使用
本试剂仅供研究使用猪补体蛋白3(C3)elisa试剂盒使用说明书试剂盒组成：48孔配置/96孔配置说明书：1份封板膜：2片（48）/2片（96）密封袋：1个目的：【猪补体蛋白3(C3)elisa试剂盒说明书】本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中小补体蛋白3(C3)的含量。
服务承诺：供货期：款到发货。
工作时间内免费的技术咨询和指导。
请来电咨询为客户提供来样检测服务，最大限度实验结果的有效性(免费代测)。
试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%保存条件及有效期：1.试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期：6个月检测范围：0.2IU/L - 6IU/L实验原理：【猪补体蛋白3(C3)elisa试剂盒说明书】本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪补体蛋白3(C3)水平。
用纯化的猪补体蛋白3(C3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入小补体蛋白3(C3)，再与HRP标记的小补体蛋白3(C3)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小补体蛋白3(C3)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪补体蛋白3(C3)浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
细胞培养-细胞培养用液及培养基
培养基（液）-无血清培养基
·为什么要使用无血清培养基？
➢血清成分复杂，干扰实验结果 ➢血清含有毒性物质、抑制性物质、影响
某些细胞功能
培养基（液）-无血清培养基
·无血清培养基-缺点
➢通用性较差 ➢细胞增殖缓慢、成本较高 ➢可能失去血清的一些保护性作用
培养基（液）-无血清培养基
·无血清培养基-配置方法
工作浓度： 0.02%
培养用液
·消化液-EDTA
注意事项 ① 需用不含离子的平衡盐缓冲液溶解 ② 与胰酶联合使用可提高消化效率 ③ EDTA不能被血清中和，消化后应彻底
清洗
培养基（液）
维持体外细胞生存和生长的基本 溶液，是组织细胞培养最重要的条件 分类 ·天然培养基 ·合成培养基
培养基（液）-天然培养基
维持渗透压、调节PH、供给细胞生存所需 能量及无机离子成分。 ➢用途
合成培养基（液）的基础液及用于洗涤组 织、细胞等
培养用液
·平衡盐溶液
培养用液
·消化液-用途
➢分散组织、细胞 ➢使细胞脱离附着底物
培养用液
·消化液-成分
➢胰蛋白酶 ➢二乙烯四乙酸二钠（EDTA） ➢胶原酶溶液
培养用液
·消化液-胰蛋白酶
细胞培养用液及培养基（液）
主要内容
· 培养用液 · 培养基（液）
主要内容
· 培养用液 · 培养基（液）
培养用液
细胞培养时，除需要培养基，还 需要大量的液体，包括
·水 ·盐溶液 ·消化液 ·缓冲液 ·维生素液等
培养用液
·水
➢细胞培养所必须的成分（吸收与代谢） ➢维持细胞形态、调节渗透压及PH ➢细胞培养对水质的要求极高
取自动物体液或从动物的组织中 分离提取 优点 ·营养成分丰富，培养效果良好 缺点