花粉管萌发步骤

花粉管萌发步骤
种子植物特有的结构，相当于一
个小孢子和由它发育的前期雄配 子体。在被子植物成熟花粉粒中 包含2个或3个细胞，即一个营养 细胞和一个生殖细胞或由其分裂 产生的两个精子。在两个细胞的 花粉粒中，两个精子是在传粉后 在花粉管中由生殖细胞分裂形成 的。在裸子植物的成熟花粉粒中 包含的细胞数目变化较大，从 1～5个或更多个细胞，其中有 1～2个原叶细胞，是雄配子体中 残留的几个营养细胞，形成后往 往随即退化，在被子植物的雄配 子体中已完全消失。
结果
所参与或记录 记录时间 的实验号
萌发率（%） 花粉管平均长 度长（μm）
▪ 花粉多为球形，赤道轴长于极轴的
称为扁球形；特别扁的称为超扁球 形；相反地，极轴长于赤道轴的称 为长球形，特别长的称为超长球形。 花粉在极面观所见赤道轮廓，可呈 圆形，具角状，具裂片状等等。在 赤道面观，花粉轮廓可呈圆形、椭 圆形、菱形、方形等等。
▪ 花粉大小因种而不同，变化很大。最小的花粉见于紫草科
野，统计萌发率，花粉管长度（3个视野中总花粉数>50个）
*萌发率：花粉管长度>花粉直径的一半为有效数据； *花粉管长度：在3个视野中随机记录。
序列号
硼酸
Ca
B-Ca
蔗糖
误差
a
b
a*b
c
1
1
1
1
1
1
2
1
2
2
2
2
3
1
3
3
3
3
4
1
4
4
4
4
5
2
1
2
3
4
6
2
2
1
4
3
7
2
3
4
1
2
8
2
4
3
2
1
9
3
1
3
4
2
10
3
▪ 许多植物的花粉可以在培养基
上萌发，长出花粉管。
▪ 花粉萌发一般要求有一种碳水
化合物，最常用的是蔗糖。糖 在培养基中有两个作用：一是 保持渗透压，二是作为花粉代 谢的底物。硼对花粉管生长有 促进作用，钙对花粉管生长也 有明显作用。
▪ 成熟花粉具有较强的活力，在适宜的培养
条件下能萌发和生长。
▪ 影响因素：物种、花粉成熟程度、气候、
氯化钙 mg/L
0 100 200 300
0 100 200 300
0 100 200 300
0 100 200 300
蔗糖 g%
0 10 20 30 20 30 0 10 30 20 10 0 10 0 30 20
观察个数 萌发个数 花粉管长1 （μm） 花粉管长2
…
原始数据
视野1
视野2
视野3
座位号
▪ 花粉萌发和花粉管生长一般分为四个阶段：
吸涨、停滞、花粉管发端及花粉管迅速伸长 阶段。各个阶段所需时间因种而不同，并决 定于花粉本身所储存食物及外界因子。花粉 管的生长区只限于末端几个微米。区内富含 RNA，蛋白质以及PAS-正反应物质。生长 区有许多小泡，可能从高尔基体的嵴膜末端 形成。生长区后面的细胞质含细胞器和淀粉 体。萌发的特征是静止的高尔基器转变为一 个活动的器官，产生小泡，在细胞质中形成 液泡。
实验步骤2（每人）
▪ 1. 按每人实验要求在小培养皿内加 1ml相应培养基，迅速
将其展开成薄层培养基。
▪ 2. 将花粉洒落在培养液面上悬浮培养，切忌猛烈晃动，以
免花粉下沉在溶液中，影响萌发
▪ 3. 将小培养皿盖好放置于大培养皿中（垫湿纸巾）； ▪ 4. 定时观察，花粉数量 >40 为有效视野，观察至少3个视
▪ 在自然界柱头为花粉萌发提供
一个合适的场所。花粉粒落在 柱头上后，即发生吸涨水合， 大量吸水，并由于营养核中 mRNA的大量形成而产生专一 性蛋白质，使花粉萌发，长出 花粉管。这些专一性蛋白质与 柱头表膜的专一性蛋白质起识 别作用，双方是否亲和，决定 于花粉外壁和柱头表膜上的酶 和抗体的特性。如果是亲和的， 花粉可以萌发，并长进花柱组 织和胚囊。
培养皿的盖。
▪ 同样培养另外一皿花粉，不加中性红。 ▪ 室温放置培养 10 ~ 15min 后开始镜检（10×）。
中性红浓度 (% ) 0(对照组 ) 0. 01
观察花粉总数
萌发的花粉数
花粉萌发率 (% )
▪ 在培养45 ~ 60min后，置于显微镜下观测。
每种处理观测3个视野（花粉数量 >40 为有 效视野），统计萌发率（3个视野中总花粉 数>=100个），将结果记入表格。
2
4
3
1
11
3
3
1
2
4
12
3
4
2
1
3
13
4
1
4
2
3
14
4
2
3
1
4
15
4
3
2
4
1
16
4
4
1
3
2
终浓度 实验序列号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
硼酸 mg/L
0 0 0 0 100 100 100 100 200 200 200 200 300 300 300 300
培养条件。ห้องสมุดไป่ตู้
▪ 实验中通过改变培养条件，利用正交实验
法测定花粉管长度，可以找出促进花粉管 生长的最住培养条件。
实验材料
▪ 培养皿、滴管、显微镜、恒温培养箱、电
炉、培养基 (质量分数为 5% ~ 20% 的蔗糖、 0. 5% ~1% 的琼脂、0. 04% 的硼酸, pH5. 8~ 6. 4) 、0. 01%中性红染液。
的勿忘草，约（4～8）微米×（2～4）微米。大型花粉 直径为100～200微米〔姜属〕，120～150微米〔锦葵科 的许多属种，以及牵牛，芭蕉属等〕。大多数花粉最大直 径约为20～50微米。水生植物大叶藻花粉细长，约为 （1200～2900）微米×（3.5～9.5）微米。
▪ 花粉粒的内壁通过花粉外壁上的萌发孔（或
培养基的配制（固体）
▪ 在配制培养基时，琼脂浓度不变，硼酸、蔗糖的
浓度改变，pH和培养温度也改变，用以观察何种 组合更适于花粉萌发和生长。
▪ 若培养基不是当天使用，则需要高压灭菌。 ▪ 确定硼酸、蔗糖、温度、pH 4种因子的水平值。
实验中对选择低、中、高3种水平（以l,2,3表示， 见因子水平表）。按配制方案表配制培养基。
沟）向外伸出的细管。一般每个花粉粒萌发 时产生一个花粉管，具多萌发孔的花粉粒开 始可以同时长出数个花粉管，但最终只有一 个继续生长。花粉管是靠其末端生长的，在 高倍显微镜下可见花粉管末端有一个透明的 半球形区域称帽区。帽区之后的细胞质中含 有多种细胞器，这与花粉管的生长有关。花 粉管长到一定长度后，原来花粉粒中的内含 物全部集中到花粉管的前端，花粉管从柱头 经花柱到子房，再进入胚珠及胚囊，将花粉 管中的两个精子及全部内含物释放到胚囊中， 以便受精作用的进行。
▪ *本次实验不做
步骤1（每组）
▪ 在小培养皿盖内侧加 0.5ml培养基溶液。 ▪ 将花粉散播在培养基上。将花粉洒落在培养液面上悬浮培养，
切忌猛烈晃动，以免花粉下沉在溶液中，影响萌发
▪ 吸取 0. 5mL中性红染色液滴到培养基上有花粉处，
将花粉染色 0. 5min。
▪ 用吸水纸在培养基边缘将染液吸干。 ▪ 吸取 2mL水注入到培养皿的底，盖上散播有花粉的