详解显微镜的八种观察方式
显微镜的使用
显微镜的使用显微镜是一种用于观察微小对象的仪器。
常见的显微镜有两个镜片组成的光学系统：物镜和目镜。
物镜用于放大被观察物体的影像，目镜用于观察物镜形成的影像。
同时，显微镜还有焦聚调节装置和样品台等组成部分。
本文将详细介绍显微镜的使用方法，包括低倍镜和高倍镜的使用。
低倍镜的使用：1.将待观察的物体放置在显微镜的样品台上，调节样品台的位置，使得物体位于物镜光轴下方。
2.调整物镜至低倍位，选择合适的物镜（通常为4倍或10倍）。
3.调节焦聚调节装置，将物镜调至适当的焦距，使得样品清晰可见。
4.通过目镜观察物镜下的物体，使用焦聚调节装置调节焦点，使得图像更加清晰。
5.使用贴近电线的惯用方式来观察物体，即左眼通过目镜观察物镜，右眼保持闭眼，将左眼所看到的物体与右眼感受到的空间结合起来，从而获得更立体的视觉效果。
6.移动样品台，使得整个物体都能够被观察到，并观察物体的细节。
高倍镜的使用：1.将待观察物体放置在显微镜的样品台上，调节样品台的位置，使得物体位于物镜光轴下方。
2.调整物镜至高倍位，选择合适的物镜（通常为40倍或100倍）。
3.利用低倍镜的方式，先将物镜调至适当的焦距，使样品清晰可见。
4.同样使用贴近电线的方式来观察物体。
5.调节焦聚调节装置，使图像更加清晰。
使用显微镜时需要注意以下几点：1.在使用显微镜之前，需要清洁物镜和目镜的镜片，以避免脏污对观察结果的影响。
2.在放置待观察物体时，需要保持物体平稳，避免因晃动而影响观察。
3.在使用显微镜时，需要避免直接用手触摸物镜、目镜和样品台等部分，以免留下指纹或其他污染物，在观察过程中会造成影响。
4.在观察时，可以利用显微镜的聚焦装置调整焦点，以获得最清晰的观察结果。
5.在观察过程中，可以适当调整物镜的倍数，以获取所需的放大倍数。
6.观察结束后，要将显微镜存放在干燥、通风的地方，并注意盖好保护罩。
通过低倍镜和高倍镜的使用方法，我们可以观察到更加细微的物体结构和细节，这对于生物学、医学、材料科学等领域的研究非常重要。
激光扫描共聚焦显微镜操作流程详解
激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope)激光扫描共聚焦显微镜(laser sea nning con focal microscope)，英文简写LSCM，俗称con focal。
LSCM是一种高科技显微镜，属于最先进的细胞生物学分析仪器。
我们学院使用的是瑞士徕卡公司(Leica)的TCS SP5型号的LSCM。
使用流程1、登陆或5号楼606室公用电脑下载?激光共聚焦预约使用审核表?，打印并填写。
2、联系卢剑清(手机：)审核并签名。
3、持已签名的?激光共聚焦预约使用审核表? 至5号楼610室预约使用时间，及领取钥匙，联系人：窦凯飞(手机：。
4、在熟练使用者的指导下，进行实验。
5、实验结束，及时归还钥匙。
仪器构造和原理LSCM的根本结构主要包括荧光显微镜系统及样品台、激光发射器、扫描器、检测器、图像存储处理和输出设备、计算机控制系统。
激光光源：激光扫描束经照明针孔形成点光源，普通显微镜采用的自然光或灯光是一种场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射光或散射光的干扰。
而LSCM以激光为光源，激光具有单色性强、方向性好、高亮度、相干性好等优点,可以防止普通显微镜的缺点。
一般常用的气体激光器如氩(Ar)、氪(Kr)、氦(He)、氖(Ne)。
illu min ati ng pin hole (照明针孔)：使激光经过照明针孔后形成点光源，点光源具有光源方向性强、发散小、亮度高、高度的空间和时间相干性以及平面偏振激发等独特的优点。
且与detector pinhole(探测器针孔)及焦平面形成共聚焦装置。
分光镜(BeamSplitter)：点光源发出的光经分光镜反射后，通过物镜在样品聚焦。
对标本内焦平面上的每一点进行扫描，Focal plane (焦平面)：激光点光源照射物体在焦平面处聚焦，激发荧光标记的样本发射荧光，形成焦点光斑。
该光斑经过物镜和分光镜等一系列装置的处理，分别在照明针孔及探测针孔两处聚焦。
显微镜的七种观察方法
精品课件
按观察方法分 7-2
2.暗场:照明光通过物镜外
围射于试样，来自试样的干涉及 衍射光进入物镜并最终被观察到。
精品课件
暗场
精品课件
1 原理 丁道尔(Tyndall)现象，微粒对斜射光反射或衍射，增 大了人眼可见性。 2 特点 观察到极其微小物体，分辨率可达0.02 ~ 0.004 um (明场0.4um)—”超显微“。 3 缺点 只能观察到物体存在、运动和外部形态 不方便调节 标本要求高（灰尘、盖片、载片）
精品课件
使用抗衰减剂的效果
精品课件
汞灯灯箱构造
灯室，上下、左右旋钮，聚光镜旋钮
精品课件
按观察方法分 7-4
4.偏光:有些物质在两个呈
一定夹角的偏光滤片之间可现呈 鲜明的对比，或根据双折射性能 和定向呈现颜色
精品课件
偏光
精品课件
1 原理
依据波动光学原理观察和精密测定标本细节,或透明物体改变光束的物理参数,以 此判别物质结构的一种显微镜
精品课件
4 应用： 微小粒子、细菌形态观察 、细菌记数，透明标本观 察等
精品课件
按观察方法分 7-3
3.荧光:利用某些物质在受
到了紫外光或短波长的光激发照 射以后能够发射出比激发光波长 长的荧光的特性的观察方法
精品课件
荧光
精品课件
什么是荧光 ?
物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变 为高能状态，再回到低能状态时释放出的光，是 非温度辐射光——冷光。即：物质吸收短波光， 发射出的长波光。
精品课件
按观察方法分 7-7
显微观察的方式
2022年高考生物总复习：显微观察的方式1.显微观察的两种方式(1)原色观察：即观察材料不用染色，直接用显微镜观察即可。
相关实验有：使用高倍显微镜观察几种细胞、用高倍显微镜观察叶绿体、观察植物细胞的吸水和失水等。
(2)染色观察：即观察材料要经染色剂染色后才可用显微镜观察。
相关实验有：观察DNA和RNA在细胞中的分布、用高倍显微镜观察线粒体、观察细胞的有丝分裂或减数分裂等。
2.显微观察类实验的染色剂与材料选择3.显微观察3种临时装片的制作方法【高考例证】1.(2016·江苏卷，19)下列实验都需要使用光学显微镜进行观察，有关实验现象描述合理的是()A.实验①B.实验②C.实验③D.实验④解析观察植物细胞的质壁分离和复原时，紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞中液泡大，占据整体细胞体积的绝大部分，呈紫色，不同细胞的细胞液浓度大小不同，质壁分离的位置、程度并不一致，A正确；用光学显微镜观察多种多样的细胞时，不能观察到核糖体，B错误；洋葱根尖分生区细胞呈正方形，多数细胞处于分裂间期，观察不到染色体，C错误；线粒体需染色后才能观察到清晰的形态且酵母菌无大液泡，D错误。
答案A2.(2015·山东卷，3)下列有关生物学实验的叙述，正确的是()A.叶绿体色素滤液细线浸入层析液，可导致滤纸条上色素带重叠B.低温诱导大蒜根尖时间过短，可能导致难以观察到染色体加倍的细胞C.用显微镜观察洋葱根尖装片时，需保持细胞活性以便观察有丝分裂过程D.将洋葱表皮放入0.3 g/mL蔗糖溶液中，水分交换平衡后制成装片观察质壁分离过程解析色素分离时，若滤液细线浸入层析液，不能分离出各色素带，A错误；低温诱导染色体数目加倍实验中，若诱导大蒜根尖时间过短，染色体数目可能并未加倍，B正确；用显微镜观察洋葱根尖细胞装片时，细胞在解离时已死亡，不可能再继续分裂进程了，C错误；观察植物细胞质壁分离时，先制作装片，再观察细胞质壁分离状况，D错误。
显微镜观察方式对比
显微镜观察方式比较：1.明场（Brightfield-BF/H）用于常规镜检，观察；病理或染色标本。
优点：1.应用广泛，操作简单；2.视野亮度高，均匀；3.价格相对较低；4.物镜适用于荧光观察。
缺点：1.对比度低（透明或未染色标本）；2.成像没有立体感。
2.相差（Phase Contrast-PH）最常规的活细胞观察方式，用于对无色透明的标本进行观察，尤其适用于培养的活细胞，组织观察。
优点：目前观测活细胞标本最经济，实用的方法。
缺点：1.需要特殊的相差物镜（Ph）；2.需要光强高；3.切片不能太厚；4.操作较麻烦；5.荧光效果不如明场物镜。
物镜上的相位板不同，可以分为正/负相差两种不同的观察效果，负相差多用于生殖医学中精子形态的观察。
（正负相差的区别在于一个背景更黑，一个样品更黑）原理：利用物体不同结构成分之间的折射率和厚度的差别，把通过物体不同部分的光程差转变为振幅（光强度）的差别，经过带有环状光阑的聚光镜和带有相位片的相差物镜实现观测的显微镜。
在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜4个特殊之处：1.环形光阑（annular diaphragm）位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。
2.相位板（annular phaseplate）在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。
分为两种：（1）A+相板：将直射光推迟1/4λ，两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标本结构比周围介质更加变亮，形成亮反差（或称负反差）。
（2）B+相板：将衍射光推迟1/4λ，两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（或称正反差），结构比周围介质更加变暗。
3.合轴调节望远镜：用于调节环状光阑的像与相板共轭面完全吻合。
3.微分干涉（Differential Interference Contrast-DIC）使被检物体产生三维立体浮雕感觉。
用于无色透明标本的形状轮廓、内部结构、运动情况等观测及显微操作等。
显微镜使用知识
显微镜使用知识显微镜使用知识显微镜的认识1、目镜盖：保护目镜，以免将灰尘、油污、尖锐物件进入目镜，操作镜片，影响观察。
2、目镜：观察物体之用。
如有油污、灰尘等，可用镜头纸沾上乙醇，做圆圈状清洗。
千万不能用手去触摸镜片。
3、调焦手轮：用手轮来调整镜筒的上下位置，以便得到清晰的聚集来观察物体。
4、反光镜：有两种光源：a 可用反光镜借助自然光源或灯光的折射，将光束从载物台中心的通光孔中通过，并通过角度的变动来获得自己满意的光强度，使观察物更清晰。
B 装上电池，将灯泡向上，调节光源至满意的效果。
5、载物台：是用来置放所观察物体的。
载物台上的两个金属压片是用来固定载玻片的。
6、镜座：取下底垫就可以更换电池，注意电池的正、负极。
7、转盘：轻轻的用手旋转转盘，听到清晰的“咔嗒”声，则表示定位准确。
转盘上有三个物镜，通过变换物镜的倍数，可以获得不同的放大倍数，以便清晰地观察物体。
建议：先用最小的倍数的物镜来观察，然后逐步放大倍率。
显微镜的附件：1、塑胶瓶：可放置做实验所需的物品。
如海盐、虾卵、染色剂、胶水等。
2、孵卵盒：用来孵化虾卵或当培养皿。
3、标签盒和盖片盒：存放空白标签和盖片。
是为你动手做标本的。
4、标本载片：先学会观察这些标本。
5、空白载片：你可以用身边熟悉的东西做标本观察。
6、吸管：吸取染色剂之用。
7、蝴蝶标本：通过显微镜的放大，可以看到蝴蝶的角须、足、鳞粉等。
8、滤色盘：将滤色盘安装在载物台的下面，转动滤色盘，可变换红、黄、蓝三种不同的颜色来分别观察物体的奇异变色现象。
1、取镜和安装把显微镜放在实验台距边缘7厘米左右处，略偏左。
检查一下物镜和目镜。
2、对光转动转盘，使低倍率物镜对准通光孔。
调整光源，使光线通过通光孔，达到最好的效果。
3、观察把所要观察的载玻片放在载物台上，用压片夹住，标本要正对通光孔的中心。
或自制一个字母装片。
A、从报纸或书刊上剪下一个字母；B、将字母放在干净的空白载片上；C、用吸管吸水后挤上一滴水；D、将透明盖玻片取出，盖在滴水后的纸片上；E、置于压片下，将其移放到载台小孔中央。
显微镜的七种观察方式
显微镜的七种观察方法发布时间：2013-1-7一．明视野观察（Brightfield）明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。
二．暗视野观察（Darkfield）暗视野实际是暗场照明发。
它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。
因此，视场成为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的象。
暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的情况下，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。
若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了体积，为人眼可见。
暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。
它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。
暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02—0.004三．相差镜检法（Phasecontrast）在光学显微镜的发展过程中，相差镜检术的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。
我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本.相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。
这大大便利了活体细胞的观察，因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。
1相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。
光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ（波长），如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减下，提高反差。
在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处：1.环形光阑（annulardiaphragm）位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。
显微镜观察方法
(三)相差观察方式
2 特点 鉴定活体细胞最实用、最经济的方法 3 缺点 需要光强高 切片不能太厚(5~10um) 盖片、载片需符合标准 最好配用单色滤光镜 操作较麻烦 荧光效果不如明场物镜 高倍有光晕
(三)相差观察方式
4 应用： 无色透明活体标本的细微结构，检查,鉴定 活体细胞(培养细胞,分离细胞)
霍夫曼
UNIQUE!
Power [mW]
Prometheus EL 6000
UV 334
100,0%
UV Viol4 Blue 365 05 436
Green 546
Yellow 578
90,0% 80,0%
FITC
70,0%
60,0%
50,0%
40,0%
30,0%
20,0%
10,0%
0,0% 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 La mbda [nm]
23
Fluorescence Filters
22 July 2008
Matthew Issoukis, Leica Microsystems CMS GmbH
24
荧光显微镜的构造
荧光显微镜构造
Leica ---新一代荧光技术
(1) 视场光栏技术
Leica ---新一代荧光技术
(3) 独家可重复荧光光强调节技术
潜伏的影像分开 分离 d 是少於光学系统的 解析度 分离相应为相位移 .
（五）微分干涉观察方法
3 缺点
需要光强高，双折射物质不能达到DIC镜检效果，不能应用于 塑料容器培养物的观察，镜检灵敏度有方向性，调节较复杂
舌
卵细胞
神经细胞
光学显微镜的七种观察方式
上海超益光电科技有限公司
5.7、荧光观察
什么是荧光？
• 物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光， 是非温度辐射光——冷光。即：物质吸收短波光，发射出的长波光。
• 显微镜荧光利用光源激发——光化荧光
2019/7/17
16
五、显微镜的七种观察方式
5.7、荧光观察
共轭面：吸收光线，直射光通过 物镜相板
补偿面：相位推迟，衍射光通过
聚光镜环状光阑
2019/7/17
5
五、显微镜的七种观察方式
5.3、相差观察
• 特点：
鉴定活体细胞最实用、最经济的方法
• 缺点：
需要光强高； 切片不能太厚(5~10um)； 盖片、载片需符合标准； 需增加单色滤镜以提高相差效果； 操作较麻烦； 相差荧光物镜的荧光成像效果较明场荧光物镜差。
2019/7/17
13
五、显微镜的七种观察方式
5.6、霍夫曼观察
• 原理：斜射光照射到标本产生折射、衍射，光线通 过物镜光密度梯度调节器产生不同阴影，从而使透 明标本表面产生明暗差异，增加观察对比度。
上海超益光电科技有限公司
2019/7/17
14
五、显微镜的七种观察方式
5.6、霍夫曼观察
• 优点：
体荧光等
发荧光量的测定对物质定性、定量分析
2019/7/17
17
上海超益光电科技有限公司
2019/7/17
18
• 缺点：
只能观察到物体存在、外部轮廓、运动状态等； 物镜使用的局限，不方便调节； 对标本要求较高（灰尘、盖片、载片等）。
• 应用：
微小粒子、细菌形态观察、细菌记数，透明标 本观察等。
显微镜的使用及细胞形态的观察
显微镜的使用及微生物形态观察(1)人的眼睛只能识别大小为㎜的物体。
显微镜是精密的放大仪器，是生物学研究不可缺少的工具。
我们用它可以观察肉眼看不见的微小生物的结构。
中学最常用的是光学显微镜，为了正确操作、妥善保管和维护显微镜，使之延长使用年限，我们必须首先了解显微镜的结构和功能。
一台显微镜包括机械装置和光学系统两大局部，注意比拟和识别。
〔一〕、显微镜的根本结构：显微镜构造很复杂，种类很多，但根本结构是由机械和光学两大局部构成，现分述如下：１、机械局部：它是为光学局部效劳的部件，包括以下九局部：、镜座：显微镜最下面呈马蹄形或园形的局部，起稳定和支持镜身作用。
、镜柱：从镜座向上直立的短柱。
上连镜臂，下连镜座，可以支持镜臂和载物台。
、镜臂：弯曲成马蹄形的局部，便于手持，下端与镜柱相连接的地方有一个倾斜关节，可使镜臂倾斜，便于观察。
、载物台：自镜臂下端向前伸出，放置标本用的平台，其中央有一个园孔，叫通光孔。
台上有一移动器〔老式的左右各有一个压片夹〕，用以固定和移动标本。
、镜筒：和镜臂上方连接的园筒局部。
有的显微镜镜筒内有一抽管，可适当抽长，一般长度是１６０－１７０毫米。
镜筒上端装有目镜，下端有一个可转动的园盘，叫物镜转换器〔或叫物镜旋转盘，固着在镜筒下端，分两层，上层固着不动，下层可自由转动。
转换器上有2～4个圆孔，用来安装不同倍数的低倍或高倍物镜〕。
作用是保护成像的光路与亮度。
、调节器〔也叫调节螺旋〕：为镜壁上两种可转动的螺旋，一大一小，能使镜筒上下移动，调节焦距。
大的叫粗准焦螺旋，位于镜臂的上方，可以转动，以使镜筒能上下移动，从而调节焦距，升降镜筒较快，用于低倍镜对焦；小的叫细准焦螺旋，位于镜臂的下方，它的移动范围较粗准焦螺旋小，升降镜筒较慢，可以细调焦距。
、倾斜关节：镜柱和镜臂交界处有一个能活动的关节。
它可以使显微镜在一定的范围内后倾〔一般倾斜不得超过45°〕便于观察。
但是在使用临时封片观察时，禁止使用倾斜关节，尤其是装片内含酸性试剂时严禁使用，以免污损镜体。
初中生物知识点梳理：显微镜
显微镜的使用方法是初中生物课上必然会教的内容，并且在生物会考时，有时也会考到这个知识点。
今天有家长问到这个内容，老师特地给大家整理出来。
1.使用显微镜和模仿制作临时装片(重点在使用显微镜)(1)显微镜的结构和作用载物台：放置玻片标本的地方。
中央有通光孔，两旁各有一个压片夹，用于固定所观察的物体。
遮光器：上面有大小不等的圆孔，叫光圈。
每个光圈都可以对准通光孔。
用来调节光线的强弱。
反光镜：可以转动，使光线经过通光孔反射上来。
其两面是不同的：光强时使用平面镜，光弱时使用凹面镜。
镜筒：上端装目镜，下端有转换器，在转换器上装有物镜，后方有准焦螺旋。
粗准焦螺旋：转动时镜筒升降的幅度大;细准焦螺旋：转动时镜筒升降的幅度小。
转动方向和升降方向的关系：顺时针转动准焦螺旋，镜筒下降;反之则上升显微镜结构识记口诀：目镜物镜反光镜，镜座镜柱和镜臂，镜筒下连转换器，准焦螺旋分粗细，载物台上压片夹，通光孔下遮光器。
(2)显微镜的使用的图要掌握显微镜的使用步骤：①取镜和安放：右手握住镜臂，左手托住镜座。
②对光：转动转换器，使低倍物镜对准通光孔，把一个较大的光圈对准通光孔。
一边向目镜内观察，一边转动反光镜，看到白色光亮的圆形视野，表示对光成功。
(光线不足时用大光圈、凹面镜)③观察：把要观察的玻片标本放在载物台上，用压片夹压住，玻片标本要正对通光孔的中心。
转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止(眼睛在一旁看着物镜，以免物镜压碎载玻片)。
一只眼向目镜内看，同时逆时针方向转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐上升，当看到物像的时候，改用细准焦螺旋进行调节，使物像更加清晰(左、右都要眼睁开)。
利用显微镜观察装片用显微镜进行观察的材料一定要薄而透明。
因此常用的玻片标本有以下三种：切片、涂片、装片。
(3)洋葱表皮细胞装片的制作和观察制作步骤：①先在洁净的载玻片中央滴一滴清水。
②用镊子从鳞片叶的内面撕下一小块透明的薄膜。
③把撕下的薄膜放在载玻片中央的水滴中，用解剖针轻轻地把它展平。
显微镜的使用方法与观察技巧
显微镜的使用方法与观察技巧通过显微镜可以放大物体的细节，从而观察到肉眼无法察觉的微小结构。
在科学研究、医学诊断、教学实验和工业制造等领域，显微镜都是不可或缺的工具之一。
本文将介绍显微镜的使用方法与观察技巧，旨在帮助读者更好地利用显微镜进行观察与分析。
一、显微镜的基本构造与操作显微镜由物镜、目镜、支架及照明系统等组件构成。
在使用显微镜前，我们需要先调整显微镜的焦距，以确保观察的是清晰的图像。
首先，通过移动装置或转动手轮来移动物镜和目镜，将两者的焦距调整至适当位置。
接下来，利用焦距锁定装置锁定物镜和目镜的位置，以防止调整过程中的偏移。
二、标本的制备与选择在观察前，我们需要准备好要观察的标本。
标本可以是生物组织、细胞、细菌、矿物等。
对于生物标本，我们可以通过剖解、切片、染色等方式，提高其对比度，以便更好地观察。
同时，我们需要保持标本的湿润，避免其干燥，这有助于提高显微镜下的图像质量。
三、调整照明系统显微镜的照明系统需要经常调整以获得最佳的观察效果。
首先，我们可以使用透射照明或反射照明的方法，根据不同的标本类型和需要，选择适当的照明方式。
然后，我们可以调节光源的亮度，以获得适宜的亮度。
此外，我们可以通过调整孔径光圈的大小，来控制光线的散射和聚焦程度，进一步提高图像清晰度。
四、调节目镜与物镜在观察过程中，我们可以通过调节目镜与物镜的焦距和位置，来调整放大倍数和景深。
较低的放大倍数适用于大范围观察，可以观察到更多的结构与细节；而较高的放大倍数适用于细节观察，可以更清晰地显示物体的微小结构。
然而，较高的放大倍数可能会导致景深减小，因此我们需要通过移动标本或调整焦点，来获取想要的景深区域。
五、观察技巧观察标本时，我们可以采用不同的技巧来获得更丰富的信息。
首先，我们可以改变标本的旋转角度、倾斜角度或刻度位置，从不同的角度观察标本，以获取更多的信息。
其次，可以采用对比度增强的方法，如差分干涉法、相移法等，来提高标本的对比度，使其更易于观察。
高中必修一显微镜的使用方法知识点汇总
高中必修一显微镜的使用方法知识点汇总
1、显微镜的使用方法
（1）先低倍镜观察、后高倍镜观察。
简称“先低后高”；
高倍镜观察口诀：找、移、转、调：
①找：在低倍镜下找到目标；
②移动装片，使目标位于视野中央；
③转：转动转换器，换用高倍镜；
④调：调节光圈，使视野亮度适宜，
调节细准焦螺旋，使物象清晰（不能使用粗准焦螺旋）。
（2）注意事项：
①必须先用低倍镜找到物象，然后移到视野中央，再换用高倍镜观察；
②观察颜色深的标本时，光线应强；调节方法：放大光圈、使用凹面镜；观
察颜色浅的标本时，光线不宜太强，调节方法：缩小光圈。
2、显微镜的成像特点：放大倒立的虚像
①显微镜成的像为左右相反、上下颠倒的虚像
②物像移动规律：偏哪往哪移
3、放大倍数与观察效果的关系
4、放大倍数与目镜、物镜的关系
①目镜与物镜放大倍数与镜头长度的关系：
②目镜放大倍数与镜头长度成反比，物镜放大倍数与镜头长度成正比；
物镜放大倍数与装片距离的关系：离装片距离越近，放大倍数越大；
③放大倍数=物镜的放大倍数х目镜的放大倍数；
④放大倍数的实质：指放大的长宽，不是指面积或体积；
5、野范围中细胞数目与放大倍数的关系
（1）若视野中的细胞为单行，计算时只需要考虑长度和宽度，则：细胞数量＝，N为视野中观察到的细胞数目；
(2)若视野中充满细胞，计算时要考虑面积的变化，则：
细胞数量＝，N为视野中观察到的细胞数目。
6、污点位置的判断方法
污点可能存在的位置：装片、物镜、目镜。
显微镜的七种观察方法 ppt课件
显微镜的七种观察方法
应用： 矿物质、化学物品鉴别 鉴别纤维、染色体、淀粉粒、细胞中晶体 植物病理检验 鉴别骨骼、牙齿、胆固醇、神经纤维、肿 瘤细胞、横纹肌和毛发等
BAND PASS
落射荧光显微镜各部件特性和 作用
• 分色镜:
T%
反射激发光,荧光透过 ＜A 反射
＞A 透过
A
nm
• 吸收滤色镜:
T%
荧光透过,阻挡杂光
＜B 阻挡
＞B 透过
显微镜的七种观察方A法
B
nm
落射荧光显微镜各部件特性和 作用
分色镜: 反射激发光,荧光透过
T% ＜A 反射
＞A 透过
吸收滤色镜:
依据波动光学原理观察和精密测定标本细节,或透明物体改变光束的物理参数,以 此判别物质结构的一种显微镜
偏振器1
自然光（多 振动面）
偏振器2
偏振光（单 一振动面）
各向同性：单折射体，光性质不因照射方向而改变，普 通气体、液体、非结晶固体等
各向异性：双折射体，光速度、折射率、吸收和振动面、
振幅随照射方向不同，晶体、纤维等
）
显微镜的七种观察方法
显微镜的七种观察方法
显微镜的七种观察方法
按观察方法分七种
明场
DIC 暗场
荧光
偏光
霍夫曼 相差
显微镜的七种观察方法
显微观察方式
显微镜的七种观察方法
按观察方法分 7-1
1.明场:照明光直接通过聚
光镜入射于试样，并透过试样后 进入物镜并最终被观察到。
显微镜的七种观察方法
明场
显微镜的七种观察方法
明场观察方式
常规观察方式 应用领域：
常规镜检、病理、染色标本 优点：
光学显微镜的种类和使用方法
光学显微镜的种类和使用方法光学显微镜是一种常用的实验室设备，它可以帮助我们观察微小的物质结构。
不同种类的光学显微镜有着不同的特点和用途，了解它们的特点和使用方法可以帮助我们更好地使用它们，提高观察效果。
本文将介绍常见的几种光学显微镜的种类和使用方法，让读者更好地了解它们。
一、简单光学显微镜简单光学显微镜是最基本的光学显微镜，由镜头、光源、物镜、目镜、舞台等组成。
它适用于初学者，用于观察大致结构和简单器官。
使用简单光学显微镜时，首先需要将样本放在舞台上，然后通过旋转物镜和目镜缩放以获得最清晰的图像。
使用时需要注意光源的亮度和样本和物镜之间的距离。
二、复合光学显微镜复合光学显微镜是一种更高级的光学显微镜，它由两个或多个光学系统组成，可以通过投影、照射等方式观察样本。
它的功能非常全面，适用于观察更复杂的结构和细胞。
使用时，可以通过选择不同的光源和目镜来调整放大倍数和观察角度，以获得需要的图像。
三、荧光显微镜荧光显微镜是一种使用特殊光源照射样本，产生荧光效应的显微镜。
这种显微镜可以帮助科学家观察细胞内的活性成分，如细胞核、蛋白质和DNA等。
使用荧光显微镜时，需要光源产生特定波长的荧光来照射样本，然后通过特定的荧光滤镜观察荧光的颜色和强度，以确定样本的结构和性质。
四、原位杂交显微镜原位杂交显微镜是一种通过分子探针寻找细胞中特定序列的显微镜。
它可以帮助科学家诊断疾病、研究细胞基因表达。
使用原位杂交显微镜时，需要首先将探针与样本DNA杂交，然后使用荧光或其他显微镜观察样本以确定探针的定位和结构。
五、成像荧光显微镜成像荧光显微镜是一种新型的显微镜，其灵敏度和分辨率比传统显微镜更高。
它通常配备高速摄像机和计算机软件，可以实时捕捉样本的荧光信号并对图像进行处理和分析。
成像荧光显微镜广泛应用于细胞生物学、分子药理学等领域，可以帮助科学家深入研究生命科学中的各种细胞和分子过程。
结语光学显微镜已经成为现代实验室不可或缺的重要工具，不同种类的光学显微镜有着不同的特点和用途，熟悉它们的特点和使用方法可以帮助我们更好地使用它们并提高观察效果。
显微镜的使用方法
显微镜的使用方法显微镜是一种广泛应用于科学研究、医学诊断及工业检测领域的重要工具。
它可以放大物体的微小细节，使其可视化，帮助人们更深入地了解微观世界。
本文将介绍显微镜的使用方法。
一、放置显微镜使用显微镜之前，首先需要将其放置在一个稳定的平台上。
确保显微镜周围的环境光线适中，以避免产生过多的反射或光线干扰。
二、调节光源显微镜通常配备有自带光源，可以通过滑动或旋转开启。
调节光源可以提供良好的照明效果。
可以根据具体需要调整光源的强度和角度。
三、调整物镜物镜是显微镜的一个重要部分。
显微镜通常配备有多个物镜，不同倍数的物镜可以实现不同放大倍数的观察效果。
在使用显微镜之前，需要选择合适的物镜，并将其安装在显微镜的物镜孔上。
四、调整放大倍率显微镜一般具有多个放大倍率可供选择，可以通过旋转物镜转盘或调节滑动杆来调整放大倍率。
根据具体需求选择合适的倍率，并注意不要使用过大的倍率，以免影响观察结果。
五、调整焦距调整焦距是显微镜使用中十分重要的环节。
通过转动调焦轮或移动镜筒，使目标物体处于清晰的观察范围内。
可以通过观察物体轮廓和细节的清晰度来判断焦距是否合适。
六、调整眼镜显微镜一般配备有两个眼镜，用于观察者的双眼观察。
可以通过调节眼镜之间的距离和角度来获得合适的观察效果。
确保眼镜对准物镜孔，可以通过调节亮度和对焦来观察目标物体。
七、观察目标当显微镜调节完成后，可以将目标物放置在显微镜的样品台上。
通过调节焦距和放大倍率，可以观察到目标物的微小细节。
可以移动样品台来改变观察的位置，观察不同区域的细节。
八、记录观察结果在使用显微镜观察目标物之后，可以通过绘制或拍摄的方式记录观察结果。
可以使用纸笔将观察到的细节和结构画出来，或者使用相机拍摄下来。
记录结果有助于后续的分析和研究。
九、清洁和保养使用完显微镜后，应及时清理和保养。
可以使用柔软的镜头纸轻轻擦拭物镜和眼镜，注意避免碰触镜片表面。
同时，应保持显微镜周围的整洁，避免灰尘和污垢进入显微镜。
观察细胞的10种显微镜方法
观察细胞的10种显微镜方法自1665年英国物理学家罗伯特·胡克创造了“细胞”一词来描述软木塞的微观视图以来，科学家们一直在开发越来越复杂的显微镜工具，借助这些显微镜,他们能够观察到细胞的更小的细节。
与17世纪和18世纪用于细胞研究的显微镜不同，今天的显微仪器与技术具有较高的放大倍数和非常精细的分辨率,可以以10 nm或更低的分辨率（1 nm=10-9米）来显示细胞的结构细节,甚至可以做到识别细胞上或细胞内的特定分子，并随着时间在活细胞和整个生物体（如小鼠）中追踪分子。
以下内容重点介绍10种前沿的观察细胞甚至分子的显微镜。
一近场扫描光学显微镜近场扫描光学显微镜（NSOM）通过超越衍射极限来可视化样品中的纳米级特征，在传统光学显微镜中，衍射极限会阻止靠近结构的分辨率。
在NSOM中，为了解析低于衍射极限的特征，光波在非常靠近试样表面的地方发射（因此称为近场）。
尽管仅限于研究细胞表面，但NSOM可以实现约20nm的横向分辨率和2-5nm 范围内的轴向（垂直）分辨率。
因为它能分辨低于衍射极限的特征，所以被认为是一种超分辨率显微镜。
二原子力显微镜原子力显微镜（AFM）允许样品具有非常高的表面分辨率，为研究人员提供有关表面特征的信息。
AFM的工作原理是在样品表面拖动一个锋利的尖端（只有几个原子宽），并测量尖端和样品表面之间的力,所得信号可以转化为表面形貌的描述，表面力扫描可以转换为样品表面的三维图像。
在生物科学中，AFM已被用于研究细胞行为和细胞间相互作用，以及评估某些细胞表面特征。
三激光扫描共聚焦显微镜激光扫描共聚焦显微镜对生物标本进行深度成像，并消除或减少焦平面以外区域的信息，从而产生清晰的图像。
20世纪60年代末和70年代初，第一台激光扫描共聚焦显微镜的发展标志着显微镜的重大进步。
激光技术、探测器和滤光片以及附着在细胞和组织中高度特异性靶标上的荧光化学物质的持续发展使共聚焦显微镜成为生物研究的关键工具。
怎么看显微镜
怎么看显微镜显微镜有两个微调，一个粗调转动时比较大，一个细调，转动时比较小。
显微镜下降物镜时,眼睛要从（一侧）看着物镜,向前转动（粗准焦螺旋）,使镜筒慢慢下降,注意不要让物镜碰到（载玻片）.慢慢的移动载玻片时,可以发现目镜中的物象一栋方向跟载片的移动方向（相反）.这说明显微镜中看到的物象是原物的（倒像）.注意移动显微镜时不可以压碎载玻片光学显微镜需要光源穿透观察的东西，电子显微镜有的不需要，可直接利用光在物体表面反射。
显微镜包括两大部分，分别是显微镜的机械装置和显微镜的光学系统，下面具体介绍这两个部分（一）显微镜的机械部分1．镜筒为显微镜上部圆形中空的长筒，筒口上端安装目镜，下端与物镜转换器相连。
作用是保护成像的光路与亮度。
2．转换器固着在镜筒下端，分两层，上层固着不动，下层可自由转动。
转换器上有2～4个圆孔，用来安装不同倍数的低倍或高倍物镜。
3．粗准焦螺旋位于镜臂的上方，可以转动，以使镜筒能上下移动，从而调节焦距。
4．细准焦螺旋位于镜臂的下方，它的移动范围较粗准焦螺旋小，可以细调焦距。
5．镜座是位于镜臂的下方，显微镜的底部，呈马蹄形的金属座。
用以稳固和支持镜身。
6．镜柱从镜座向上直立的短柱。
上连镜臂，下连镜座，可以支持镜臂和载物台。
7．倾斜关节镜柱和镜臂交界处有一个能活动的关节。
它可以使显微镜在一定的范围内后倾（一般倾斜不得超过45°）便于观察。
但是在使用临时封片观察时，禁止使用倾斜关节，尤其是装片内含酸性试剂时严禁使用，以免污损镜体。
8．载物台从镜臂向前方伸出的金属平台。
呈方形或圆形，是放置玻片标本的地方。
其中央具有通光孔，在通光孔的左右有一个弹性的金属压片夹，用来压住载玻片。
较**的显微镜，在载物台上常具有推进器，它包括夹片夹和推进螺旋，除夹住切片外，还可使切片在载物台上移动。
如何识别显微镜（二）显微镜光学部分1．目镜它是安装在镜筒上端的镜头。
是由一组透镜组成的，它可以使物镜成倍地分辨、放大物像，例如5×、10×、15×、20×。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
详解显微镜的八种观察方式
方式一明视野观察(Bright field,BF)
明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。
方式二暗视野观察(Dark field)
暗视野实际是暗场照明。
它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。
因此，视场为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的像。
暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的情况下，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。
若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了体积，为人眼可见。
暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。
它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图像。
暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02-0.004μm。
方式三相差镜检法(Phase contrast,PH)
在光学显微镜的发展过程中，相差镜检法的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。
我们知道，人眼只能区分光波的波长(颜色)和振幅(亮度)。
对于无色透明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本。
相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效的利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。
这大大便利了活体细胞的观察，因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。
相差图片
相差显微镜的基本原理是，把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。
光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ(波长)，如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减小，提高反差。
在构造上，相差显微镜又不同于普通光学显微镜，具有两个特殊之处：
(1)环形光阑(annular diaphragm)位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。
(2)相位板(annular phaseplate)在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。
分为两种：
①A+相板：将直射光推迟1/4λ，两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标本结构比周围介质更加明亮，形成亮反差(或称负反差)。
②B+相板：将衍射光推迟1/4λ，两组光波合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差(或称正反差)，结构比周围介质更暗。
相差原理
方式四微分干涉镜检术(DIC)
微分干涉镜检术出现于60 年代，它不仅能观察无色透明的物体，而且图像呈现出浮雕状的立体感，并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点，观察效果更为逼真。
原理：微分干涉镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。
分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等，光束分别在距离很近的两点上通过被检物体，在相位上略有差别。
由于两光束的裂距极小，而不出现重影现象，使图像呈现出立体的三维感觉。
DIC 显微镜的物理原理完全不同于相差显微镜，技术设计要复杂得多。
DIC 利用的是偏振光，有四个特殊的光学组件：偏振器(polarizer)、DIC 棱镜、DIC 滑行器和检偏器(analyzer)。
偏振器直接装在聚光系统的前面，使光线发生线性偏振。
在聚光器中则安装了偌玛斯基棱镜，即DIC 棱镜，此棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光(x 和y)，二者成一小夹角。
聚光器将两束光调整成与显微镜光轴平行的方向。
最初两束光相位一致，在穿过标本相邻的区域后，由于标本的厚度和折射率不同，引起两束光发生了光程差。
在物镜的后焦面处安装了第二个偌玛斯基棱镜，即DIC 滑行器，它把两束光波合并成一束。
这时两束光的偏振面(x 和y)仍然存在。
最后光束穿过第二个偏振装置，即检偏器。
在光束形成目镜DIC 影像之前，检偏器与偏光器的方向成直角。
检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光，从而使二者发生干涉。
x 和y 波的光程差决定着透光的多少。
光程差值为0 时，没有光穿过检偏器；光程差值等于波长一半时，穿过的光达到最大值。
于是在灰色的背景上，标本结构呈现出明暗差。
为了使影像的反差达到最佳状态，可通过调节DIC 滑行器的纵行微调来改变光程差，光程差可改变影像的亮度。
调节DIC 滑行器可使标本的细微结构呈现出正或负的投影形象，通常是一侧亮，而另一侧暗，这便造成了标本的人为三维立体感，类似大理石上的浮雕。