膜蛋白的提取方法-全攻略

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植物膜蛋白提取方法

植物膜蛋白提取方法说实话植物膜蛋白提取这事，我一开始也是瞎摸索。

我试过超声破碎法来提取。

就像敲鸡蛋，想把里头的东西弄出来那种感觉。

把植物组织放在缓冲液里，然后用超声仪来破碎细胞。

可是我发现这种法子很容易把膜也给弄破喽，得到的膜蛋白纯度不咋高，好多其他乱七八糟的东西都混进去了。

这就好比炒菜的时候把不该放的调料都倒进去了，最后味道全乱套了。

后来呢，我又尝试了差速离心法。

这就像挑豆子，把大的小的分开那样。

先把植物组织破碎后，通过不同的离心速度把细胞器啊什么的和膜蛋白分离开。

开始的时候我老是掌握不好离心速度和时间，要么离心速度不够，那些东西分不开，要么就是离心太久了，把想要的膜蛋白都给弄丢了一部分。

经过好多次的尝试，我才慢慢摸准了一点规律。

比如说，先低速度短时间离心去掉那些大的残渣，然后再逐步提高离心速度和延长时间来纯化膜蛋白。

我有段时间还听别人说密度梯度离心法好使。

这方法有点像从水里分层捞东西。

就是用不同浓度的溶液形成一个密度梯度，然后离心，让膜蛋白在适合它密度的那个层面停下来，这样和其他物质分离开。

但是这个方法操作起来比较麻烦，各种溶液的配制就要很精确，我就老在这上面出错，溶液配不对后续根本得不到像样的结果。

还有就是用化学试剂来提取。

比如说表面活性剂。

这就跟用清洁剂去油污有点像，表面活性剂能把膜蛋白从细胞膜上给“扒拉”下来。

不过这化学试剂的种类和浓度可得选好了，选错了就像洗衣粉放太多把衣服都洗坏了似的，膜蛋白的活性啥的就全没了。

我就在选择表面活性剂的种类和浓度上栽过跟头，试了好多种，结果都不理想，不是蛋白没有提取出来就是提取出来的蛋白变性了失去活性了。

如果是新手上路的话，我觉得差速离心法可以先试试，毕竟相对来说比较直白一点，虽然可能会碰到不少问题，但是在调整离心速度和时间的过程中可以慢慢学习。

可千万别像我刚开始的时候，只知道按照书上的数值来，实际情况和书上可能有差别，要多做尝试才行。

在操作的全过程里，实验设备的清洁也很重要。

细胞膜蛋白的提取

细胞膜蛋白的提取1. 引言细胞膜蛋白是细胞膜上的蛋白质，它们在细胞的结构和功能中起着重要的作用。

细胞膜蛋白具有多种功能，包括细胞识别、信号转导、运输和通道形成等。

为了研究细胞膜蛋白的结构和功能，科学家需要从细胞中提取这些蛋白质。

本文将介绍细胞膜蛋白的提取方法和步骤。

2. 细胞膜蛋白的提取方法2.1 细胞膜蛋白的提取原理细胞膜蛋白是细胞膜上的蛋白质，与细胞膜紧密结合。

因此，提取细胞膜蛋白需要破坏细胞膜，并保持蛋白质的完整性。

常用的细胞膜蛋白提取方法包括机械破碎法、化学溶解法和超声波法等。

2.2 机械破碎法机械破碎法是一种常用的细胞膜蛋白提取方法。

其步骤如下：1.制备细胞悬浮液：将培养的细胞收集，并用缓冲液洗涤，得到细胞悬浮液。

2.破碎细胞：将细胞悬浮液置于低温条件下，加入适量的缓冲液，然后用高速搅拌器或超声波破碎仪破碎细胞，使细胞膜破裂。

3.离心：将破碎后的细胞悬浮液进行离心，分离出上清液和沉淀。

4.收集上清液：将上清液转移到新的离心管中，这个上清液中含有细胞膜蛋白。

2.3 化学溶解法化学溶解法是另一种常用的细胞膜蛋白提取方法。

其步骤如下：1.制备细胞悬浮液：将培养的细胞收集，并用缓冲液洗涤，得到细胞悬浮液。

2.加入溶解剂：向细胞悬浮液中加入适量的溶解剂，如磷酸盐缓冲液或甘油，使细胞膜破裂。

3.搅拌：将细胞悬浮液与溶解剂充分混合，并用搅拌器搅拌一定时间，使细胞膜蛋白溶解在溶液中。

4.离心：将溶解后的细胞悬浮液进行离心，分离出上清液和沉淀。

5.收集上清液：将上清液转移到新的离心管中，这个上清液中含有细胞膜蛋白。

2.4 超声波法超声波法是一种快速、高效的细胞膜蛋白提取方法。

其步骤如下：1.制备细胞悬浮液：将培养的细胞收集，并用缓冲液洗涤，得到细胞悬浮液。

2.加入超声波溶解剂：向细胞悬浮液中加入适量的超声波溶解剂，如磷酸盐缓冲液，使细胞膜破裂。

3.超声波处理：将细胞悬浮液置于超声波处理器中，进行超声波处理，使细胞膜破裂。

提取膜蛋白的方法

提取膜蛋白的方法提取膜蛋白是一项关键的实验步骤，用于研究膜蛋白的结构和功能。

本文将介绍几种常用的膜蛋白提取方法。

1. 浸泡法浸泡法是一种简单的膜蛋白提取方法。

将细胞或组织样品置于适当的缓冲液中，如磷酸盐缓冲液或生理盐水中，并加入一些溶解剂（如阴离子洗涤剂）以破坏膜结构。

浸泡一段时间后，离心以分离出溶液中的膜蛋白。

2. 磷脂双层溶液法磷脂双层溶液法利用磷脂双层膜的特性来提取膜蛋白。

首先，将细胞或组织样品放入含有磷脂双层的液体中。

磷脂双层膜与细胞膜相似，可吸附并保持膜蛋白的结构和功能。

然后，用洗涤液洗涤磷脂双层，使膜蛋白释放到洗涤液中。

3. 超声法超声法是一种物理方法，通过超声波的能量来提取膜蛋白。

将细胞或组织样品置于含有缓冲液的管中，并使用超声波处理。

超声波的能量可以破坏细胞膜结构，使膜蛋白溶解到缓冲液中。

然后，对溶液进行离心，将膜蛋白分离出来。

4. 酸碱提取法酸碱提取法利用pH的变化来提取膜蛋白。

首先，将细胞或组织样品放入酸性或碱性溶液中，并搅拌。

酸性或碱性环境可以破坏细胞膜结构，使膜蛋白溶解到溶液中。

然后，通过调整pH值，使膜蛋白沉淀，进一步提纯。

5. 亲水基质法亲水基质法是一种通过亲水基质与疏水膜蛋白的选择性结合来提取膜蛋白的方法。

细胞或组织样品与亲水基质接触，亲水基质与细胞膜的亲水区域结合，使膜蛋白释放到溶液中。

然后，通过离心和洗涤步骤来分离和纯化膜蛋白。

这些方法在膜蛋白的研究中应用广泛，但根据具体的实验目的和样品特性，可以选择适合的方法进行膜蛋白提取。

实验中还应注意选择合适的缓冲液、溶液浓度和温度，并结合离心、洗涤等步骤进行蛋白的纯化和分离。

此外，需要根据实验目的选择合适的检测方法，如SDS-PAGE、Western blot等来确定提取的膜蛋白的质量和纯度。

总之，膜蛋白提取是膜生物学研究的重要一环，不同方法适用于不同的样品和实验要求。

正确选择和操作提取方法可以高效地提取膜蛋白，并为后续研究提供可靠的样品。

细菌总蛋白和膜蛋白提取方法

[【生物化学与分子生物学】]细菌总蛋白和膜蛋白提取方法膜蛋白, 细菌膜蛋白, 细菌一、从新鲜样品中提取总蛋白（简易法）1、自配裂解液（pH 8.5-9.0）：50 mM Tris-HCl，2 mM EDTA, 100 mM NaCl，0.5% Triton X-100，调pH值至8.5-9.0备用；用前加入100 μg/ml 溶菌酶，1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。

该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。

2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。

3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。

4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。

缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。

二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。

2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。

每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。

3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。

每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。

4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。

每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min，2-8℃下7500g 离心5min，弃上清，重复洗涤2次。

最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。

5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g离心10min去除不溶物。

中药膜蛋白质提取

中药膜蛋白质提取中药是中华文化的重要组成部分，也是我们传统的医学瑰宝。

中药中的有效成分是非常复杂的，其中不乏具有药用价值的蛋白质。

通过提取中药中的蛋白质，可以广泛应用于医学、保健品等多个领域。

中药膜蛋白质提取是提取中药中蛋白质的一种方法，下面我们就来详细介绍一下此方法的步骤。

一、中药材处理中药膜蛋白质提取过程中，中药材的处理非常重要。

首先，选用新鲜的中药材进行提取。

其次，需要对中药材进行研磨，制成适合操作的形态。

最后，将中药材用水或其他溶剂进行浸泡，使药材中的蛋白质在溶液中充分溶解。

二、蛋白质提取将浸泡好的中药材经过过滤、离心、超滤等一系列步骤，得到中药膜蛋白质的提取液。

一般情况下，膜过滤是最重要的步骤之一。

利用分子筛分离出分子较小的蛋白质，大分子多糖、脂质等杂质将无法通过膜孔，从而得到纯净的膜蛋白质提取物。

三、蛋白质分离、纯化通过电泳、色谱等方法对蛋白质进行分离和纯化。

电泳技术可以根据蛋白质的电性和分子大小等特性，将其分离出来；而色谱技术则是利用不同物质在固定相和流动相之间的亲和性和分子大小等特性来进行分离和纯化。

在这些步骤中，选择适当的分离和纯化方法对于提取纯净蛋白质非常重要。

四、蛋白质鉴定、分析对分离纯化得到的蛋白质进行结构、功能鉴定，确定蛋白质的主要作用。

通过质谱、圆二色谱、红外光谱等技术手段，确定蛋白质的分子量、构型、生物活性等参数，为进一步研究和开发提供依据。

综上所述，中药膜蛋白质提取是一个复杂、多步骤的过程。

这个过程需要科学严谨的操作，才能确保提取到纯净、高效的膜蛋白质。

中药膜蛋白质提取为中药材的深度开发和应用提供了强有力的支持，也使我们更好地保护和传承中华传统医药文化。

组织膜蛋白的提取方法

组织膜蛋白的提取方法
5、取沉淀,(即提取组织胞浆蛋白最后一步离心取上清后的沉淀）加入1mL冷的抽提Buffer，涡旋振荡混匀后，4℃放置10～15min；
【注：因抽提Buffer在室温时会分层，请务必于4℃混匀后加入】
6、4℃, 3000rpm 离心5min，取上清转移至新管（注意勿将沉淀带入上清），进行下步提取；
7、置于37℃水浴10min；
8、室温,13 000rpm离心5min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）；
【注：建议使用进口透明性较好的微量离心管，可见下层为含膜蛋白的有机相。

上下两层因均为透明，只在交界处有一折光线，需仔细观察才可见到。

或室温静置30分钟～1小时亦可见分层。

以下亦同。

】
9、取下层，加入500μL冰冷灭菌水，4℃放置5min；
10、置于37℃水浴10min；
11、室温,13 000rpm离心5min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）；
12、取下层，加入500μL冰冷灭菌水，4℃放置5min；
13、置于37℃水浴10min；
14、室温,13 000rpm离心5min，样品分成上层和下层（含膜蛋白）；
15、最终得到的下层即为膜蛋白提取物，BCA法测定蛋白含量（因残留有机相可能影响测定结果，此含量为相对参考值），分装冷冻保存。

生物素标记提取膜蛋白以及WB具体步骤

生物素标记提取膜蛋白以及WB具体步骤一，Lipo2000转染1,准备细胞：转染前一天，向含9mlDMEM（含血清不含抗生素）的9cm平板接入细胞，使其在转染时长到90%。

转染前用DMEM（―）洗2遍后，加入9mlDMEM（不含血清不含抗生素） 2,准备混合物：①将6ug质粒稀释于300ulDMEM（―）中，涡旋1s，静置5min。

②将18ul Lipo2000稀释于300ulDMEM（―）中，涡旋1s，静置5min。

③将①②混匀，静置20min。

3，将混合物加入平板，前后摇匀。

4,6h后给细胞换DMEM（含血清不含抗生素）。

5，继续培养8―48h，观察。

二，生物素标记1,向皿中加入2ml 1mg/ml的生物素试剂。

2,4℃，温和shaking30min，孵育后有一些细胞会悬浮起来，转移这些细胞至离心管中，离心收集细胞，并按下面方法洗涤细胞。

3，用2ml含0.1mM Ca+，1mM mg2+，100Mm Glycine的PBS清洗细胞2次，这时也会有一些细胞悬浮起来，转移它们到一个离心管，离心收集细胞。

4，加2ml含0.1mM Ca+，1mM mg2+的PBS到皿中。

5，4℃，45min停止未反应的生物素试剂的反应。

（使生物素试剂失活），并收集浮起来的细胞，离心收集细胞。

6，收集细胞：将皿中的细胞和浮起来的细胞转移进入一个1.5ml的离心管。

7，向1.5ml的离心管中加入1ml RIPA/lysis buffer。

（含蛋白酶抑制剂1table /50ml） 8，4℃涡旋1h。

9,20000g,10min,4℃,以沉淀核酸与其他残渣。

10，把上清转入新的EP管，（这是总蛋白，T，一般情况下浓度应该在1-5mg/ml，可以用Bradford method来测定浓度，并调整全部样品至同一浓度）11，向300ul pre-cleared sample中加入300ul含50% slurry-Avidin beads的PBS,PI孵育。

细胞膜蛋白的提取

细胞膜蛋白的提取
细胞膜蛋白的提取可以通过以下步骤进行：
1. 细胞收集：从所需的细胞类型中收集足够数量的细胞。

可以使用细胞培养方法培养细胞，或者从活体组织中分离细胞。

2. 细胞破碎：将细胞用适当的方法破碎，以释放细胞内的蛋白。

可以使用机械方法（如超声波破碎器或高压细胞击碎器）或化学方法（如洗涤液或界面活性剂）来破碎细胞。

3. 蛋白质提取：使用适当的缓冲液或溶液将细胞破碎物悬浮并离心，以去除细胞碎片和细胞核。

随后，可以使用不同的方法来提取膜蛋白，例如溶解细胞膜并提取蛋白。

4. 蛋白质纯化：使用不同的技术来纯化细胞膜蛋白。

这包括以蛋白质的特定性质为基础的方法，例如亲和层析、凝胶过滤层析、离子交换层析等。

5. 蛋白质浓缩：将纯化的细胞膜蛋白浓缩到所需的浓度。

可以使用蛋白质浓缩技术，例如氨基酸纤维柱、浓缩管或旋转蒸发器等。

6. 蛋白质鉴定：利用蛋白质检测方法，如SDS-PAGE、Western blotting或质谱分析等，确定提取的蛋白质的纯度和数量。

细胞膜蛋白的提取过程需根据实验目的和具体需求来选择和优化各个步骤。

膜蛋白的提取方法

膜蛋白的提取方法
膜蛋白的提取方法通常包括以下几个步骤：
1. 细胞裂解：将包含膜蛋白的细胞或组织用不同的方式进行裂解，例如超声波处理、酸碱处理、高压处理等。

2. 膜蛋白分离：通过离心、过滤等方法将膜蛋白分离出来。

3. 纯化：采用膜层联萃取、柱层析、电泳等方法对膜蛋白进行纯化。

4. 确认：通过蛋白质定量、SDS-PAGE、Western blot等方法验证膜蛋白的存在和纯度。

常见的膜蛋白提取方法有：
1. 酸性洗涤法：利用低pH值时，膜蛋白和膜脂亲性增强的特性，将细胞裂解物在酸性条件下洗涤获得膜蛋白。

2. 有机溶剂提取法：利用膜蛋白亲性较强的有机溶剂，如丙酮、甲醇等，将膜蛋白从细胞裂解物中提取出来。

3. 离心法：通过离心分离膜细胞，从而获得膜蛋白。

4. 免疫亲和层析法：利用特异性抗体将目标膜蛋白从混合蛋白中分离纯化。

以上方法的选择需根据具体情况来定，不同的细胞类型或膜蛋白性质有着不同的最佳提取方法。

膜蛋白提取方法(双向电泳)

膜蛋白提取试剂盒（双向电泳用）产品组成：产品组成 BB-3188-1 BB-3188-2规格 50T 100T试剂A 10ml 20ml试剂B 20ml 40ml试剂C 10ml 20ml蛋白酶抑制剂混合物 250μl 500μl储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液A和B 2-8℃保存；试剂C室温保存。

有效期：一年。

产品简介：哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。

膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。

传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。

去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。

贝博双向电泳膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织提取双向电泳用膜蛋白样品。

提取过程简单方便，可在1小时内完成。

提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。

提取的蛋白可直接用于双向电泳蛋白研究。

使用方法：A．细胞蛋白提取1.取5-10×106个以上细胞①，在4℃，500g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

2.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3.细胞样品中加入200μl冷的试剂A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上10-15分钟。

4.再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，13000×g条件下离心5分钟。

5.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴5-10分钟，37℃下②1000g力离心3分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层是膜蛋白部分约为20μl。

6.移除上层溶液和界面层，收集下层膜蛋白样品。

一般可直接跳过步骤7和步骤8直接进行步骤9，如果对膜蛋白样品纯度要求极高，可以进行步骤7或者步骤7和8，此时膜蛋白回收率会稍有降低。

7.用150-200μl冰冷的试剂B稀释下层膜蛋白样品，混匀后冰浴2min，37℃水浴5-10分钟，37℃下②1000g力离心3分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层是膜蛋白部分约为20μl。

植物膜蛋白提取方法

植物膜蛋白提取方法今天咱们来聊聊植物膜蛋白提取这个超有趣的事儿，就像是在植物的微观小宇宙里搞一场“寻宝大冒险”呢。

植物膜蛋白啊，那可是一群超级神秘的小家伙。

它们就像躲在城堡（细胞膜）里的小魔法师，外面有着层层的防护。

要把它们提取出来，就如同要闯进一个戒备森严的魔法城堡。

我们首先得想办法打破这个“城堡”的防御。

传统的方法就像是拿着大锤子去敲城堡的墙，用一些化学试剂去破坏细胞膜。

这时候就像一场激烈的攻城战，试剂们像一群勇猛的小战士，冲向细胞膜这个坚固的堡垒。

但是呢，这个过程可不能太鲁莽。

因为膜蛋白很脆弱，就像娇贵的小花朵。

要是用力过猛，那这些小魔法师可就被“砸晕”或者直接被破坏掉了，就像不小心把珍贵的瓷器给摔碎了一样，那可就前功尽弃啦。

在提取过程中，离心这个步骤就像是一场神奇的“大筛选”。

高速旋转的离心机就像一个巨大的旋转木马，把那些不属于膜蛋白的杂质都甩出去，只留下我们的“小宝贝”膜蛋白。

这就好比在一堆沙子里挑出闪闪发光的金子，那可是相当考验技术的。

还有一种方法是用去污剂来提取膜蛋白。

去污剂就像是一群超级狡猾的小狐狸，它们悄悄地钻进细胞膜这个“狐狸窝”，把膜蛋白给哄骗出来。

不过，这些小狐狸有时候也会调皮捣蛋，如果控制不好量，就会把整个局面搞得一团糟，就像一群调皮的孩子在屋子里乱跑，把东西弄得乱七八糟。

有时候，为了更精准地提取膜蛋白，我们还得像侦探一样小心翼翼。

观察各种反应，调整各种条件，就像侦探在寻找破案的关键线索。

一点点温度的变化，一点点试剂浓度的改变，都可能影响到我们是否能成功抓到这些“小魔法师”。

当我们终于提取到了膜蛋白，那感觉就像是找到了传说中的宝藏一样兴奋。

这些膜蛋白在我们的实验管里，就像一群被收服的小精灵，等待着我们去进一步研究它们的神奇魔法，去探索它们在植物生命活动中到底扮演着怎样神秘而又重要的角色。

整个植物膜蛋白提取过程，就像是一场充满惊喜、刺激又带着点小危险的奇妙旅程。

每一次尝试都是一次新的冒险，每一次成功提取都是一次值得欢呼的胜利。

(完整word版)膜蛋白提取

1分离组织膜蛋白的方法：1、取组织，加入10ml Buffer A 于冰上充分匀浆。

2、J6-HC离心机800rpm，4℃离心10min后，所得上清液转入超速离心管。

3、100000g，4℃离心1hr。

弃去上清，沉淀用适量的Buffer B重悬，冰上孵育2hr后分装至EP管，Eppendorf台式离心机10000rpm，4℃离心30min。

4、收集所得上清液即为膜组份。

Buffer A：0.32M 蔗糖，5mM Tris-HCl（PH 7.5），120mM KCl，1mM EDTA,1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。

冰上预冷。

Buffer B：20mM HEPES（PH 7.5），10%甘油，2% Triton X-100, 1mM EDTA, 1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。

冰上预冷。

2取约0.1g肝组织，加入2ml粉碎缓冲液，冰浴中超声粉碎，每次20秒，间隔30秒，共3次，4°c 105xg条件下离心2小时，上清液为胞浆蛋白，沉淀部分加入1ml胞膜蛋白提取液，超声粉碎，4°c 105xg条件下离心2小时，上清液为胞膜蛋白。

样品蛋白含量测定采用酚试剂法。

3我们实验室提取膜蛋白的方法如下：1．将细胞种于T75 或T175的培养瓶中培养数天，细胞铺满瓶底后，吸去培养液。

将PBS/EDTA 溶液(NaCl:0.1M,NaH2PO4:0.01M,EDTA:0.04%)加入量以覆盖细胞为止，置于培养箱或在超净台内消化3～5分钟，如仍未脱落瓶底，用吸管吹打，使细胞完全脱落。

2．收集细胞悬液于10毫升或50毫升的离心管中，1000rpm离心10分钟，去上清液。

细菌总蛋白和膜蛋白提取方法

该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。

2、将40ml 菌液在12000g，4℃下离心15分钟收集菌体，沉淀用PBS悬浮洗涤2遍，沉淀加入1ml裂解液悬浮菌体。

3、超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。

4、1000g离心去掉大碎片，上清可直接变性后PAGE电泳检测，或者用1% SDS溶液透析后冻存。

缺点：Western blotting结果表明，疏水性跨膜蛋白提取效率有限。

二、从Trizol裂解液中分离总蛋白1、Trizol溶解的样品研磨破碎后，加氯仿分层，2-8℃下10000g离心15min，上层水相用于RNA提取，体积约为总体积的60%。

2、用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。

每使用1ml Trizol加入0.3ml无水乙醇混匀，室温放置3min，2-8℃不超过2000g离心5min。

3、将上清移至新的EP管中，用异丙醇沉淀蛋白质。

每使用1ml Trizol加入1.5ml异丙醇，室温放置10min，2-8℃下12000g离心10min，弃上清。

4、用含有0.3M 盐酸胍的95%乙醇洗涤。

每1ml Trizol加入2ml洗液，室温放置20min，2-8℃下7500g 离心5min，弃上清，重复洗涤2次。

最后加入2ml无水乙醇，涡旋后室温放置20min，2-8℃下7500g离心5min，弃上清。

5、冷冻干燥5-10min，1%SDS溶液溶解，反复吹打，50℃温浴使其完全溶解，2-8℃下10000g离心10min去除不溶物。

膜蛋白的分离方法

膜蛋白的分离方法
膜蛋白是一类位于细胞膜上的蛋白质，它们在细胞的代谢、信号传递、物质运输等方面起着重要作用。

以下是一些常见的膜蛋白分离方法：
1.超速离心法：利用超速离心机产生的强大离心力，将细胞膜和膜蛋白分离开来。

这种方法常用于制备纯净的细胞膜和膜蛋白。

2.电泳法：通过电泳技术，可以根据膜蛋白的电荷性质和分子量大小，将其分离开来。

电泳法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）等。

3.层析法：层析法是一种基于膜蛋白物理化学性质差异的分离方法。

常用的层析技术包括凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。

4.浮选分离法：利用浮力密度的差异，通过离心使不同密度的膜蛋白在溶液中分层，从而实现分离。

5.免疫沉淀法：基于抗体与抗原的特异性结合，使用特异性抗体将目标膜蛋白从混合物中沉淀出来。

6.密度梯度离心法：根据膜蛋白的密度差异，将其在密
度梯度介质中进行离心分离。

7.膜蛋白提取试剂盒：市面上有一些商业化的膜蛋白提取试剂盒，它们通常结合了多种分离技术，简化了膜蛋白的提取过程。

需要根据具体的实验需求和膜蛋白的特性选择合适的分离方法。

在膜蛋白分离过程中，需要注意保持膜蛋白的活性和稳定性，避免蛋白质的变性和降解。

膜蛋白纯化方法

膜蛋白纯化方法
膜蛋白是一类在生物体内广泛存在的蛋白质，它们扮演着许多重要的生物学功能角色。

由于其特殊的结构和生物学功能，膜蛋白的纯化一直是生物化学和分子生物学领域中的热门话题。

以下是几种常用的膜蛋白纯化方法：
1. 磷脂层萃取法：膜蛋白主要存在于生物体细胞膜中，因此利用磷脂层分离膜蛋白是一种常见的纯化方法。

该方法的基本原理是通过磷脂的亲水性和疏水性来分离膜蛋白。

2. 隔离膜蛋白的膜片：将膜蛋白采集到膜片上，然后离子交换或凝胶过滤来纯化膜蛋白。

该方法适用于小规模的样品。

3. SDS-PAGE：SDS-PAGE是一种凝胶电泳技术，可用于分离和纯化蛋白质。

在SDS-PAGE中，蛋白质会被SDS包裹并带有负电荷，从而使蛋白质分子按照大小分离。

4. 亲和层析法：亲和层析法是一种利用特定亲和性标记物分离蛋白质的方法。

例如，可以使用亲合柱将含有膜蛋白的混合物分离出来。

这些方法都有各自的优缺点，具体的选用方法需要根据实验要求和条件来确定。

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两种提取红细胞膜蛋白方法的比较

两种提取红细胞膜蛋白方法的比较在制备抗血型抗原单克隆抗体时，为了提高红细胞血型抗原的免疫效果，获得更多的阳性克隆，我们比较了两种提取红细胞膜蛋白的方法。

1 材料和方法1.1 低渗溶血法粗提红细胞膜蛋白1.1.1 方法一[1]略有改良取25 ml A(或 B )型抗凝混合血加0.01 mol/L PBS ( pH7.4)，离心3000 r/min，20 min，弃上清和上清下的白细胞、血小板层。

用相当于红细胞压积3倍的预冷PBS(pH7.4)洗涤3次(4℃ 5 000 r/min,15 min)。

加预冷的0.01 mol/L Tric-HCl(pH7.4)与红细胞(V∶V=40∶1)混合，4℃放置2 h。

再以9 000 r/min离心20 min，弃上清(重复3~5次)至无肉眼可见的红细胞为止。

沉淀物加0.01 mol/L PBS(pH7.4)置-20℃保存。

1.1.2 方法二[2]略有改进4 ml A(或B)型血加40 ml NS,离心2 000 r/min,20 min,洗3次。

沉淀物加入40 ml预冷蒸馏水，离心5 000 r/min,10 min，洗4次。

因沉淀物中仍有少量红细胞，故加40 ml 0.01 N冰醋酸，置4℃2 h后离心9 000 r/min，15 min。

沉淀物加4 ml NS混匀后，再加0.2 ml 0.1 N NaOH，室温30 min,离心转速同上，弃上清后加4 ml NS,用0.1 N HCl(约0.1 ml)调pH至7.4。

紫外分光光度计测蛋白含量。

1.2 红细胞膜抗原的活性测定1.2.1 血凝抑制试验将提取的A(或B)型红细胞膜蛋白倍比稀释，分别加相应抗体(原液~1∶128倍比稀释)，震摇后置室温1 h，再加入2%A或B型红细胞，水平振荡20 min,室温静置1 h观察结果。

另用A或B型红细胞代替A或B型红细胞膜蛋白作为对照。

能使加入的2%红细胞不出现凝集所需膜抗原的量作为膜抗原的血凝抑制效价。

完整版膜蛋白提取

1别离组织膜蛋白的方法1、取组织,参加10ml Buffer A 于冰上充分匀浆.2、J6-HC离心机800rpm , 4 c离心10min后,所得上清液转入超速离心管.3、100000g , 4c离心1hr.弃去上清,沉淀用适量的Buffer B重悬,冰上孵育2hr后分装至EP 管, Eppendorf 台式离心机10000rpm , 4 c离心30min.4、收集所得上清液即为膜组份.Buffer A : 0.32M 蔗糖,5mM Tris-HCl (PH 7.5), 120mM KCl , 1mM EDTA,1mM EDTA,0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin .冰上预冷.Buffer B : 20mM HEPES (PH 7.5 ) , 10% 甘油,2% Triton X-100, 1mM EDTA, 1mM EDTA,0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin .冰上预冷.2取约0.1g肝组织,参加2ml粉碎缓冲液,冰浴中超声粉碎,每次20秒,间隔30秒,共3 次,4° c 105xg条件下离心2小时,上清液为胞浆蛋白,沉淀局部参加1ml胞膜蛋白提取液,超声粉碎,4.c 105xg条件下离心2小时,上清液为胞膜蛋白.样品蛋白含量测定采用酚试剂法.3我们实验室提取膜蛋白的方法如下：1.将细胞种于T75或T175的培养瓶中培养数天,细胞铺满瓶底后,吸去培养液.将PBS/EDTA 溶液(NaCl:0.1M,NaH2PO4:0.01M,EDTA:0.04%) 参加量以覆盖细胞为止,置于培养箱或在超净台内消化3〜5分钟,如仍未脱落瓶底,用吸管吹打,使细胞完全脱落.2.收集细胞悬液于10毫升或50毫升的离心管中,1000rpm离心10分钟,去上清液.3. 按2.5毫升(T75 ) /每瓶或5毫升(T175/每瓶参加冰冷的匀浆液(HEPES:50mM,PH7.4,MgCl2:3mM,EGTA:1mM )于离心管中,将溶液和沉淀转移到匀浆器中,匀浆.4.将匀浆液转入离心管中, 参加适量的Tris - HCl (50mM, PH7.4)4oC, 18000rpm (40000g) 10分钟.在沉淀中参加同前量的匀浆液,再匀浆,匀浆后参加适量的tris-HCl buffer. 4度18000rpm(40000g)离心,共离心三次.5.在最后一次离心彳#到沉淀中按250微升每瓶(T75)或500微升每瓶(T175)参加tris-HClbuffer,匀浆,取50微升匀浆液测量蛋白浓度.6.按实验要求,将匀浆分装于1毫升的Eppendoff管中,其于-80oC冰箱中待用.主要基于膜蛋白分子量较大,在40000g时易沉降来别离.做膜蛋白的免疫荧光, 可以用荧光抗体染色, 然后用荧光显微镜或共聚焦显微镜观察,具体的protocol可以找到,就不多说了.需要注意的是,要弄清楚你所使用的一抗结合部位是在膜蛋白的胞外结构域还是胞内结构域,如果是胞外,可以直接染色；如果在胞内,那么需要用无水甲醇在-20度处理10min,使细胞膜通透,然后再用抗体孵育,这样抗体才能进入细胞内与蛋白结合. 一般对膜蛋白的提取都是采用梯度离心或者高速离心的方法别离,可是我们现有的离心机都无法到达所需要的转速,所以我们试着采用分布溶解分布沉淀的方法.1)预冷的pbs洗去组织血液,除去结缔组织、脂肪.2) 4 C剪碎,加bufferA玻璃匀浆器匀浆至无大块状物,10 C超声波10min ,重悬,再破碎5—10min.3)12000rpm 离心10min,沉淀用bufferB 重悬,20 C超声波10min.4)12000rpm 离心10min,沉淀用bufferC 抽提.5)12000rpm离心10min,所得上清含有9%的膜蛋白.6)12000rpm离心10min,沉淀加bufferD沸水煮5min , 12000rpm离心10min,上清含有1%的膜蛋白. bufferA: 40mM Tris basebufferB: 8M urea ,100mM DTT, 40mM Tris basebufferC: 6-7M urea, 0.2mmol/L PMSF,40mM Tris basebufferD: 1% SDS, 50mM DTT,25%Glycerol,in 0.4M Tris-HCl pH8.8我们做的是动物组织的膜蛋白,提出来电泳条带还可以,只是我们没有专一膜蛋白抗体来检测提出来的是否是膜蛋白.但是这个方法是可行的5三、蛋白提取操作步骤I实体组织蛋白的提取1、组织样本(200〜300mg)尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织,于冰上剪碎；2、组织样本中参加1mL Lysis Buffer (注：使用前,每mL Lysis Buffer参加1科L蛋白酶抑制剂和1科L 1M DTT ),置玻璃均浆器冰上均质30〜50次(或超声破碎细胞, 每次30 S ,3〜4次,每次间隔1 min),置于冰上冷却.均质或超声破碎细胞后应镜检,细胞破碎率不小于90%;3、将均浆液转移至冷的离心管中,于4C, 3000 rpm离心10 min,弃沉淀；4、取上清转移至新冷离心管中,于4 C , 14 000 rpm离心30 min ,所得上清转至新管中, 即为胞浆蛋白,分装冷冻保存；5、取沉淀,参加1mL冷的抽提Buffer,涡旋振荡混匀后,4c放置10〜15min；【注：因抽提Buffer在室温时会分层,请务必于4c混匀后参加】6、4 ℃ , 3000rpm离心5min ,取上清转移至新管(注意勿将沉淀带入上清),进行下步提取;7、置于37 c水浴10min；8、室温,13 000rpm离心5min ,样品分成上层和下层〔含膜蛋白〕；【注：建议使用进口透明性较好的微量离心管,可见下层为含膜蛋白的有机相. 上下两层因均为透明,只在交界处有一折光线,需仔细观察才可见到.或室温静置30分钟〜1小时亦可见分层.以下亦同.】9、取下层,参加500d L冰冷灭菌水,4c放置5min； 10、置于37 c水浴10min； 11、室温,13 000rpm离心5min ,样品分成上层和下层〔含膜蛋白〕；12、取下层,参加500d L冰冷灭菌水,4c放置5min；13、置于37 c水浴10min；14、室温,13 000rpm离心5min ,样品分成上层和下层〔含膜蛋白〕；15、最终得到的下层即为膜蛋白提取物,BCA法测定蛋白含量〔因残留有机相可能影响测定结果,此含量为相对参考值〕,分装冷冻保存.6用RIPA强配方,把脱氧胆酸钠浓度调整至1.0%,同时参加NP-40和Triton X-100 ,浓度均为1%.我刚做了一个7次跨膜蛋白,LHR的WB.7提取总蛋白的方法不能用于膜蛋白的提取, 提供一个常用的方法：先别离膜,在提取膜蛋白. 这类方法在园子里有不少介绍. 我们实验室曾经采用蔗糖梯度超速离心别离膜,据说效果还可以.您可以试一下.呵呵——8细胞破碎后,先低速离心,除去未破碎的细胞和大的细胞碎片.保存上清,超速离心,可获得细胞膜.然后用detergent溶液萃取,就可以得到膜蛋白溶液了.9我有新的问题了...哪位仁兄有好的提取细胞膜蛋白的裂解液配方...我的膜蛋白总提不出来.我的细胞是HEPG2;目的蛋白是LDL受体；我的配方是这样的：4%CHAPS , 8 mol/L urea, 0.1 mmol/L leupeptin, and 1.5 mmol/L phenylmethylsulfonyl fluoride但是总提不出来....急！ ! ! ! !呵呵,CHAPS提取膜蛋白水平较差,尝试参加1%ASB-14 ,或者参加1 % Triton X-100,与CHAPS联合抽提.另外最好参加2M thiourea.祝好运1.6% Triton X-100, 5 mol/L urea, 0.1 mmol/L leupeptin, and 1.5 mmol/L phenylmethylsulfonyl fluoride ;2M thiourea; thiourea很贵吗我现在没有,又要急着用,能不能不用thiourea??thiourea不是很贵,merck250g才300多rmb.电泳时可以考虑用ASB-14 , sb3-10.没有的话,提取最好加点NP-40, 2M thiourea还是要的,要是有TBP就更好了.NP lysis buffer.NP 配方,stock solution 20ml (50mM Tris-HCL (PH8.0), 5mMEDTA, 0.05%NaN3, 0.14M NaCL, 100mM NaF), 1% Nonidet P40, 0.2TIU/ml aprotinin, 1.5uM pepstatin A, 20mM Iodoacetamide.NP配好后分装,-80度保存.用之前,参加NaV和PMSF.混匀后立即置于冰上.10如果你研究的蛋白表达比拟丰富没有必要提取膜蛋白,直接用RIPA裂解液裂解后离心取可溶性蛋白变性做WB就可以了；如果你蛋白的含量低或抗体特异性很差的话,你应该用试剂盒或超速离心提取膜蛋白,可以起到富集和纯化的作用,使你更容易得到好的结果！11RAPI的裂解液只能说是强的非变性裂解液,而算不上是强的变性裂解液.提取膜蛋白一般都在变性条件下才可以.所以,你应该改用其他更适合的强的变性裂解液,如含SB3-10、DM、ASB-14等膜助溶剂,或者SDS-Bolied loading bufffer,2-D 裂解液7M thiourea+2M urea 也可以12组织膜蛋白提取：所在操作冰上进行(1)取组织,用PBS冲洗干净组织上的血液.参加10ml Buffer A ,用剪刀尽可能剪碎组织,于冰上充分匀浆.每次30秒,重复3-5次.(2)离心机1000rpm , 4 C离心10min后,所得上清液转入超速离心管.(去掉大块组织及结缔组织)(3)100000g, 4c离心1hr,弃去上清.(此为胞浆蛋白,假设只提取胞浆蛋白,可用10000rpm, 4 度,30分钟离心,取上清即可).沉淀用适量的Buffer B重悬,4度过夜后,分装至EP管, Eppendorf 台式离心机10000rpm, 4 C 离心30min.(4)收集所得上清液即为膜组份.Buffer A :0.32M 蔗糖,5mM Tris-HCl (PH 7.5), 120mM KCl , 1mM EDTA, 1mM EGTA,0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin .冰上预冷.Buffer B 20mM HEPES (PH 7.5), 10% 甘油,2% Triton X-100, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 0.2mM , PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin .冰上预冷.所得蛋白分装EP管(每管约50ul),取一管测蛋白浓度,其它放入-70度深冻冰箱保存.如果要定量的话,最好能立即根据浓度,参加上样缓冲,煮沸, 4度保存.反复冻融蛋白会降解,浓度不准.13我用来抽提大鼠脑组织细胞膜蛋白方法：取两只大鼠的整个脑组织,参加10ml Buffer A 于冰上充分匀浆.J6-HC离心机800rpm , 4 C离心10min后,所得上清液转入超速离心管.100000g, 4c离心1hr.弃去上清,沉淀用适量的Buffer B重悬,冰上孵育2hr后分装至EP管,Eppendorf台式离心机10000rpm, 4 C 离心30min.所得上清液即为膜组份.Buffer A : 0.32M 蔗糖,5mM Tris-HCl 〔PH 7.5〕,120mM KCl , 1mM EDTA,1mM EDTA, 0.2mMPMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin .冰上预冷.Buffer B ： 20mM HEPES 〔PH 7.5〕, 10%甘油,2% Triton X-100, 1mM EDTA, 1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin .冰上预冷.CHAPS〔一种离子去污剂〕是提取膜蛋白的常用试剂一般用10mMol的浓度即可,你可以试试加到你的Buffer中,看效果如何.不过此药品很贵！lysis buffer的选择依赖于你所研究蛋白质的位置和性质：1〕细胞浆蛋白〔可溶性〕：Tris Buffer2〕细胞浆蛋白〔结合到细胞骨架〕：Tris-Triton buffer3〕膜结合蛋白：Np-40或RIPA4〕核蛋白：RIPA5〕线粒体蛋白：特殊的抽提裂解液6〕全细胞蛋白：Np-40 or RIPAWestern blotAdipose tissue membrane protein was extracted from approx. 20mg of adipose tissue. PAGE was performed according to Laemmli [ 8]. A portion of 2 g of adipose t issue membrane protein was applied per lane. In addition, 10 q of mononuclear cell membrane protein 〔corresponding to 1.7 106 mononuclear cells〕 was applied and used as a positive control for verification of blotting, incubation and detection. Tank blotting to nitrocellulose was performed according to standard protocols, with transfer for 3h at 70V and 15 C.°The blots were incubated with 1 闵/ml rabbit anti-〔human b2-adrenoceptor〕 IgG 〔Santa Cruz Biotechnology Inc.〕, and were then re-incubated with alkaline phosphatase-labelled goat anti-rabbit antibody. Detection was performed using DDAO [9H-(1,3-dichloro-9,9-dimethylacridin-2-one-7-yl)] phosphate (Pro-Q Western Blot Stain Kit; Molecular Probes Inc.) on a Fujifilm FLA-3000 instrument.Quantification of b2-adrenoceptor protein was performed by determining the fluorescence intensity of b2-adrenoceptor-antibody-immunoreactive bands. The concentration of b2-adrenoceptor protein is expressed as the intensity of the immunoreactive bands of the tissue samples in relation to the intensity of the immunoreactive bands of the mononuclear cell membrane protein internal standard. Like others before us trying to isolate the b2-adrenoceptor [9], we observed several immunoreactive bands on our Western blots ( Figure 1). On all blots we found a single major band at 57kDa and several smaller immunoreactive bands (38-52kDa). Theb2-adrenoceptor is known to have a molecular mass of 64kDa and to be very fragile, so the immunoreactive bands on our blots must represent proteolytic degradation products and/or secondarily modified b2-adrenoceptor. When trying toquantify the receptor it is therefore uncertain whether to include all visible bands [total band area (T)] or to include only the single major band (S). We have done both. Figure 1 shows the area included in determining the intensity of the single major band and total band area intensity.All blots were loaded with the same amount of membrane protein per well, but since we wished to determine the level of protein expression in relation to individual cells, the concentration is expressed as intensity of b2-adrenoceptor protein per ng of DNA. The coefficient of variation based on 13 double determinations was 28% for total band area determinations and 29% for single major band determinations14凯基膜蛋白提取试剂盒凯基膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒一、描述：本试剂盒提供独特的组份提取细胞及组织中的膜蛋白.其原理是裂解细胞后,先离心别离出质膜粗提物,再利用特殊的抽提Buffer,选择性地别离提取膜蛋白,抽提Buffer含一种特殊的去污剂,在4c时所有的蛋白质均可都溶于抽提Buffer,但在37c时,抽提Buffer分为水相和去污相；此时亲水性蛋白溶于水相,疏水的膜蛋白溶于去污剂相中,根楣该性质别离出膜蛋白.产物不仅含细胞膜蛋白,也含胞器质膜蛋白.提取方法简单,可靠, 快速.获得的膜蛋白纯度高,可用于PAGE电泳、Western Blot、免疫共沉淀等后续研究. 二、试剂盒组份三、蛋白提取操作步骤I实体组织蛋白的提取1、组织样本〔200〜300mg〕尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织,于冰上剪碎；2、组织样本中参加1mL Lysis Buffer 〔注：使用前,每mL Lysis Buffer参加1科L蛋白酶抑制剂和1 ^L 1M DTT 〕,置玻璃均浆器冰上均质30〜50次〔或超声破碎细胞,每次30 S ,3〜4次,每次间隔1 min〕,置于冰上冷却.均质或超声破碎细胞后应镜检,细胞破碎率不小于90%;3、将均浆液转移至冷的离心管中,于4C, 3000 rpm离心10 min,弃沉淀；4、取上清转移至新冷离心管中,于 4 C , 14 000 rpm离心30 min ,所得上清转至新管中, 即为胞浆蛋白,分装冷冻保存；5、取沉淀,参加1mL冷的抽提Buffer,涡旋振荡混匀后,4c放置10〜15min；【注：因抽提Buffer在室温时会分层,请务必于4c混匀后参加】6、4 ℃ , 3000rpm离心5min ,取上清转移至新管〔注意勿将沉淀带入上清〕,进行下步提取；7、置于37 c水浴10min；8、室温,13 000rpm离心5min ,样品分成上层和下层〔含膜蛋白〕；【注：建议使用进口透明性较好的微量离心管,可见下层为含膜蛋白的有机相. 上下两层因均为透明,只在交界处有一折光线,需仔细观察才可见到.或室温静置30分钟〜1小时亦可见分层.以下亦同.】9、取下层,参加500d L冰冷灭菌水,4c放置5min；10、置于37 c水浴10min；11、室温,13 000rpm离心5min ,样品分成上层和下层〔含膜蛋白〕；12、取下层,参加500d L冰冷灭菌水,4c放置5min；13、置于37 c水浴10min；14、室温,13 000rpm离心5min ,样品分成上层和下层〔含膜蛋白〕；15、最终得到的下层即为膜蛋白提取物,BCA法测定蛋白含量〔因残留有机相可能影响测定结果,此含量为相对参考值〕,分装冷冻保存.四、SDS PAGE电泳操作步骤1、进彳T PAGE电泳前,取该提取物,每100 dL膜蛋白提取物,参加约300 dL的溶解Buffer 和约100 dL三氯乙酸〔TCA〕试剂, 混匀后置冰上20〜30 min后,13 000rpm ,离心15 min ,尽可能除去上清；2、沉淀参加1mL丙酮,室温静置10min后,13 000rpm离心15 min；3、弃上清,沉淀真空旋干或置冰上枯燥约10 min 〔敞开离心管盖〕,参加适当体积的LoadingBuffer 〔使用前每100 ^L Loading Buffer参加2〜5dL疏基乙醇〕溶解,彻底分散〔枪头反复吹吸或剧烈涡旋〕；【注：参加Loading Buffer后如有局部难溶物,可取上清继续上样；如参加Loading Buffer 后澳酚蓝转呈黄色,此为少量TCA残留所致,不影响电泳结果.请参照Marker标准.】4、上样进行SDS PAGE电泳.五、考前须知：1、所有的试剂及器具均需预冷后使用.细胞或组织量需到达要求.2、抽提Buffer 4 C时,为混悬状态,请于此温度下混匀后吸取参加粗提物中.3、室温25c〜37c时,抽提Buffer需静置30分钟以上可看到分上下两层,其中约9/10 至4/5为上层水相,下层只占1/10至1/5为有机相.4、因产品采用不透明的包装瓶,因此无法观察到上述分层现象,可将该BUFFER倒入玻璃烧杯或试管中静置30分钟〜1小时可见分层.5、TCA试剂具强腐蚀性,操作时请带适宜的手套并注意防护.六、储存蛋白酶抑制剂-200C, Loading Buffer室温保存,其余40C,保存一年。

biovision膜蛋白提取

biovision膜蛋白提取BioVision膜蛋白提取膜蛋白是细胞膜的主要组成成分，具有重要的生物学功能。

它们参与细胞信号传导、物质运输以及细胞间相互作用等关键过程。

为了研究膜蛋白的结构和功能，科学家们开发了多种方法来提取膜蛋白。

其中，BioVision膜蛋白提取试剂盒是一种常用的工具，它可以高效地从细胞中提取膜蛋白。

BioVision膜蛋白提取试剂盒采用一种特殊的离子洗涤剂和蛋白酶抑制剂的组合，能够迅速破坏细胞膜，并保护膜蛋白不被降解。

该试剂盒的提取步骤简单、操作方便，适用于各种类型的细胞，包括哺乳动物细胞、昆虫细胞和酵母细胞等。

使用BioVision膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白的步骤如下：1. 细胞培养：首先，将所需的细胞培养在适当的培养基中，使其达到指定的生长状态。

2. 细胞收集：收集细胞后，用磷酸盐缓冲液洗涤细胞，去除培养基和杂质。

3. 细胞裂解：将洗涤后的细胞加入BioVision提取试剂，充分裂解细胞膜，释放膜蛋白。

可以通过旋转离心等方法加速细胞裂解过程。

4. 膜蛋白提取：离心裂解后的细胞，将上清液转移到新的离心管中，以去除细胞碎片和细胞核等杂质。

上清液中富含膜蛋白。

5. 蛋白质浓度测定：使用蛋白质浓度检测试剂盒，测定提取的膜蛋白的浓度。

根据需要，可以调整蛋白质的浓度。

BioVision膜蛋白提取试剂盒的优势在于其高效性和可靠性。

该试剂盒能够完整地提取细胞膜中的蛋白质，并保持其天然的结构和功能。

此外，BioVision提供的试剂盒还具有良好的稳定性和重复性，可以在不同实验条件下反复使用。

膜蛋白提取是研究细胞生物学和蛋白质功能的关键步骤之一。

BioVision膜蛋白提取试剂盒的出现，为科学家们提供了一种高效、方便的方法来提取膜蛋白。

通过使用这种试剂盒，研究人员可以更深入地探究膜蛋白的功能和相互作用，从而推动细胞生物学和生物医学研究的进展。

BioVision膜蛋白提取试剂盒是一种有效的工具，可用于从细胞中提取膜蛋白。

膜蛋白的提取方法-全攻略

膜蛋白的提取方法-全攻略一、膜蛋白简介膜蛋白在细胞中扮演着重要的角色：例如被熟知的识别、信号转导、运输等功能，也是用药的理想的靶点，虽动物细胞主要有9种膜脂，而膜蛋白的种类繁多，多数膜蛋白分子数目较少，但却赋予细胞膜非常重要的生物学功能。

根据膜蛋白分离的难易及其与脂分子的结合方式，膜蛋白可分为两大类型：外在膜蛋白、内在膜蛋白。

(1) 外在膜蛋白为水溶性蛋白，靠离子键或其它较弱的键与膜表面的蛋白质分子或脂分子结合，因此只要改变溶液的离子强度甚至提高温度就可以从膜上分离下来，膜结构并不被破坏。

(2) 内在膜蛋白与膜结合非常紧密，一般只有用去垢剂(detergent)使其膜解后才可分离出来。

附注：使用分级抽提方法获得的“膜蛋白”中只有很少一部分是具备多跨膜区的整合膜蛋白。

二、膜蛋白的提取方法谈及蛋白分离，我们想到：超速离心，盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法……有时这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化。

由于蛋白质种类繁多，不同的蛋白质由于结构和组成的差异，其溶解度也各不相同.根据蛋白质的溶解特性，同时可选择不同的溶剂提取，分为水溶液提取和有机溶剂提取.但是与胞质蛋白，核蛋白提取不同之处在于膜蛋白是嵌在膜中的，水溶性不好，基本方法就是用不同的离心速度去掉胞质蛋白等，然后用去污剂把蛋白从膜中释放出来。

膜蛋白分离纯化的重要步骤是选择适当的增溶用表面活性剂，一般常用的有胆酸盐，CHAPS(一种离子去污剂），Emulgen和Lubrol等表面活性剂。

1）先分离膜，然后提取；如选用冷热交替法、反复冻融法、超声破碎法、玻璃匀浆法、自溶法和酶处理法使得细胞破碎，然后通过梯度离心得到含有膜蛋白的粗组分。

（例如：用液氮研磨组织，加入匀浆缓冲液及蛋白酶抑制剂，然后差速离心、蔗糖密度梯度离心。

收集37%与41%间的成分，即为质膜部分。

裂解即可收集膜蛋白）2）用特殊的去污剂选择性的分离。