细胞跨膜蛋白提取方法

细胞蛋白提取试剂盒
BB-3121
细菌膜蛋白提取试剂盒
BB-3151
组织蛋白提取试剂盒
BB-3122
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BB-3124
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BB-3152
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BB-3125
蛋白酶抑制剂混合物
BB-3301
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BB-3105
磷酸酶抑制剂混合物
细胞跨膜蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成 规格
跨膜蛋白 试剂 A 跨膜蛋白 试剂 B 跨膜蛋白 试剂 C 蛋白酶抑制剂混合物 磷酸酶抑制剂混合物
BB-3114-1 50T 10ml 20ml 10ml
250μl 250μl
储存条件： 蛋白酶抑制剂-20℃保存； 蛋白提取液 2-8℃保存。磷酸酶抑制剂 2-8℃保存。
B． 组织跨膜蛋白提取 1. 取适量组织样本剪碎，加冷 PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或 用液氮研磨），冰上静置 5 分钟，小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。 2. 在 4℃，500g 条件下离心 2-3 分钟，弃上清。 3. 按照细胞蛋白的提取方法的第 3 步骤往下操作即可。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴 5-10 分钟，37℃下②2000g
离心 5 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层是水相，下层是有机相约 为 20μl。 6. 收集水相留作备用分析③。 7. 用 150-200μl 冰冷的试剂 B 稀释有机相，混匀后冰浴 2min，37℃水浴 5-10 分钟，
应用实例：
1
4
4
图片说明：用细胞跨膜蛋白提取试剂盒提取细胞样本的SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。
图1泳道中1、4分别为Marker、膜蛋白样本。图2为以上样品的EGFR的WB结果照片。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头
● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器
● 冰箱，冰盒
使用方法： A． 细胞跨膜蛋白提取 1. 取 5-10×106 个以上细胞①，在 4℃，500g 条件下离心 2-3 分钟，小心吸取培养 基，尽可能吸干，收集细胞。 2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 3. 细胞样品中加入 200μl 冷的试剂 A，2ul 蛋白酶抑制剂混合物，2ul 磷酸酶抑制 剂混合物，高速涡旋振荡 15 秒，置冰上 10-15 分钟。 4. 再次高速涡旋振荡 5 秒，然后在 4℃，13000×g 条件下离心 5 分钟。
贝博细胞跨膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产跨膜蛋白提取 试剂盒。本试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织温和、高效地抽提膜/跨膜蛋白 和膜蛋白复合物。用本试剂盒抽提和富集到的蛋白包括从分子量很小到很大的蛋白，单次跨 膜至 7 次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白复合物。提取过程简单方便，可在 1 小时内完成。 提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于 Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
有效期： 一年。
BB-3114-2 100T 20ml 40ml 20ml 500μl 500μl
产品简介： 哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。跨
膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此跨膜蛋白样 本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备跨膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂 增溶。去污剂处理会使跨膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了跨膜蛋白的功能研究。
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SDS-PAGE 上样 Buffer
BB-3703
37℃下②2000g 离心 5 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层是水相，
下层是有机相约为 20μl。 8. 按步骤 7 再次抽提有机相(此步骤可以选做)。 9. 用 80-200μl 冰冷的试剂 C 稀释有机相，即得跨膜蛋白。 10. 将上述蛋白提取物定量④后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验⑤。