转基因检测培训教材基因成分检测.pptx
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基因检测基础培训.ppt
1. 疾病相关基因变异携带者的发现 2. 常见疾病的遗传风险预测和提示 3. 指导个体化用药 基因检测和其它正在发展遗传筛选和预防技 术将对人类的健康医疗产生巨大的影响。”
— 美国国家疾病控制中心基因检测部
2024/2/17
4
一. 什么是基因？
基因是DNA起作用的单位。DNA含有 大量的化学信息数据库，携带合成所有细胞 所需蛋白质的整套信息。每个基因含有一套 指导信息，通常编码一个特定蛋白。
2024/2/17
20
多基因疾病与多个基因有关，如高血压病 与近20个基因有关。癌症、高血压病、糖 尿病、老年性痴呆、中风、冠心病等，大 多数疾病与基因的关系是：
1. 疾病症状与几个或者更多突变等位基因 有关,
2.各个基因分别对疾病只产生小的影响, 3.基因的表现受到大量外界因素的影响。
疾病是基因与外界因素相互作用的结果, 基因突变并不一定导致疾病。因此 通过基因检测了解等位基因的突变, 可以调节外界因素(生活环境/生活习惯/ 饮食)。做到避免或延缓疾病，或减轻症状，及早治疗。
2024/2/17
9
二. 基因是如何工作的？
虽然每个细胞含有一套完整的基因， 但是细胞使用基因的时候是有选择性的， 使得脑细胞与骨细胞不同。
一个正常细胞只会激活实时需要的基 因而抑制其它基因的活力。 基因通过它 们所编码的蛋白质决定人体的特征，包括 人体如何应对环境带来的挑战
2024/2/17
10
家族的遗传学检测, 推荐个体化的预防措施
2024/2/17
48
九. 基因检测的好处是什么？
出身于高危家族的人们生活在未知的恐惧 中。一个阴性检测可以带来极大的心理缓解作 用，而一个阳性检测也会带来好处。它可以消 除不确定性，让人们可以决定自己的未来。
— 美国国家疾病控制中心基因检测部
2024/2/17
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一. 什么是基因？
基因是DNA起作用的单位。DNA含有 大量的化学信息数据库，携带合成所有细胞 所需蛋白质的整套信息。每个基因含有一套 指导信息，通常编码一个特定蛋白。
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多基因疾病与多个基因有关，如高血压病 与近20个基因有关。癌症、高血压病、糖 尿病、老年性痴呆、中风、冠心病等，大 多数疾病与基因的关系是：
1. 疾病症状与几个或者更多突变等位基因 有关,
2.各个基因分别对疾病只产生小的影响, 3.基因的表现受到大量外界因素的影响。
疾病是基因与外界因素相互作用的结果, 基因突变并不一定导致疾病。因此 通过基因检测了解等位基因的突变, 可以调节外界因素(生活环境/生活习惯/ 饮食)。做到避免或延缓疾病，或减轻症状，及早治疗。
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二. 基因是如何工作的？
虽然每个细胞含有一套完整的基因， 但是细胞使用基因的时候是有选择性的， 使得脑细胞与骨细胞不同。
一个正常细胞只会激活实时需要的基 因而抑制其它基因的活力。 基因通过它 们所编码的蛋白质决定人体的特征，包括 人体如何应对环境带来的挑战
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家族的遗传学检测, 推荐个体化的预防措施
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九. 基因检测的好处是什么？
出身于高危家族的人们生活在未知的恐惧 中。一个阴性检测可以带来极大的心理缓解作 用，而一个阳性检测也会带来好处。它可以消 除不确定性，让人们可以决定自己的未来。
转基因成分PCR定性检测技术ppt课件
转基因成分PCR定性检测技术
转基因成分PCR定性检测技术
• 电泳及分析
1、琼脂糖凝胶电泳 2、结果分析 3、异常情况分析
转基因成分PCR定性检测技术
1、琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯 化和鉴定核酸的方法。 1）琼脂糖：
根据琼脂糖溶解温度，把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点 琼脂糖。低熔点琼脂糖熔点为62～65℃，溶解后在37℃下维持 液体状态约数小时，主要用于DNA片段的回收，质粒与外源性 DNA的快速连接等。
Terminator
转基因作物现状
• 转基因作物现状
转基因作物的研究最早始于20世纪八十年代，1983年全球第一例 转基因植物在美国问世，1987被允许进入田间鉴定试验，1992年开始 大田产量试验，1995年完成安全性评价研究，1996年在美国最早开始 商业化生产，当年种植面积174万公顷。
据“农业生物技术应用国际服务组织（ISAAA）”2011年3月7日发 布的年度报告称：2010年，共有29个国家种植了1.48亿公顷转基因作 物；1996年到2010年，全球转基因作物累计种植面积超过10亿公顷。
转基因成分PCR定性检测技术
2）凝胶浓度选择：
琼脂糖凝胶的浓度与DNA分离范围
琼脂糖浓度(%) 0.3 0.6
0.7 0.9 1.2 1.5 2.0
线型DNA分子的分离范围(Kb)
5～60 1～20
0.8～10 0.5～7 0.9～6 0.2～3 0.1～2
转基因成分PCR定性检测技术
3）电泳缓冲液
•转基因生物
是指遗传物质基因被改变的生物，其基因改变的方式是 通过转基因技术，而不是以自然增殖或自然重组的方式产生。 简称：GMOs
食品理化检验食品中转基因成分的检验优秀课件
荧光素酶
催化不同底物氧化发光的一类酶， 哺乳细胞无内源性荧光素酶。
最常用的荧光素酶有细菌荧光素酶、 萤火虫荧光素酶。
用荧光比色计即可检测酶活性。
技术特征 ❖利用载体系统（细菌质粒、病毒的环
形基因）的重组DNA技术 ❖利用物理、化学和生物学等方法将重
组DNA导入有机体的技术
显微注射、基因枪等 农杆菌介导转化法
转基因食品的特征
产品特征
❖具有食品或食品添加剂的特征 ❖产品的基因组构成发生了改变，并存在
外源DNA（基因重组体构成元件） ❖产品中存在外源DNA表达产物及其生
测特性
常用的报告基因有氯霉素乙酰转移酶基因 （cat）、荧光素酶基因（luc）、β-葡萄糖苷 酸酶基因（gus）等
氯霉素乙酰基转移酶(CAT)：
可催化乙酰CoA的乙酰基转移到氯霉 素3羟基，而使氯霉素解毒
用同位素、荧光素和酶联免疫吸附测 定(ELISA)检测其活性，也可进行蛋 白质印迹(Westernblotting)和免疫组 织化学分析
营养问题：科学家们认为外来基因会以一种人们目
前还不甚了解的方式破坏食物中的营养成分。
对抗生素的抵抗作用：当科学家把一
个外来基因加入到植物或细菌中去，这 个基因会与别的基因连接在一起。人们 在服用了这种改良食物后，产生抗药性
对环境的威胁：不在改良范围之内的
其它物种有可能成为改良物种的受害者
转基因食品的特征
4.目的基因的扩大培养及嫁入寄 主细胞
5.选择性的标记基因
6.为控制基因表达而必需的 DNA序列（启动子、终止子的 DNA序列必须结合其中）
7.筛选和繁殖。经过转基因的 寄主细胞必须经过严格筛选、 测试才能用于食品生产。
目前上市的转基因食品
转基因成分PCR定性检测技术PPT课件
医药
用于药物研发、基因治疗 等领域，如利用转基因技 术生产重组蛋白药物、疫 苗等。
工业
用于生产特殊化学品、酶 等，如利用转基因微生物 生产燃料、生物塑料等。
转基因技术的发展历程
1970年代
重组DNA技术的出现，标志着 转基因技术的诞生。
1980年代
转基因作物的研究和开发开始 起步，如转基因烟草、转基因 玉米等。
pcr扩增
设计特异性引物
根据转基因作物的目标基因序列， 设计特异性引物，用于扩增目的 基因片段。
pcr反应
将提取的DNA作为模板，加入引 物、dNTPs和DNA聚合酶等反应 成分，进行pcr扩增。
温度循环
按照预定的温度循环程序进行pcr扩 增，使目的基因片段在体外进行指 数扩增。
电泳检测与结果分析
众利益。
06 实际应用案例分析
案例一：转基因大豆的pcr定性检测
01
检测目标：对大豆样本进行转基因成分的pcr定性检测， 确定是否含有转基因成分。
04
2. 利用pcr技术扩增DNA片段。
02
实验步骤
05
3. 通过凝胶电泳检测扩增产物，判断是否含有转基因成 分。
03
1. 提取大豆样本DNA。
06
结果分析：经过pcr定性检测，若凝胶电泳结果显示存在 特定大小的DNA片段，则表明大豆样本中含有转基因成 分。
电泳分离
将pcr扩增产物进行电泳分离， 使扩增产物在凝胶上形成条带。
染色与观察
对凝胶进行染色，使扩增产物显 色，并在紫外灯下观察条带。
结果分析
根据条带的亮度、大小和特异性， 对pcr扩增产物进行定性分析，
判断是否存在转基因成分。
04 转基因成分pcr定性检测 技术的优缺点
转基因PPT-PPT精选
转基因食品 的利与弊
前言
• 面对越来越多的转基因食品，人们的认识并 非一致，以美国为首的主吃派和欧洲为首的反 对派在全球范围内形成了两大阵营。
• 那么，转基因食品的安全性到底怎么样？是 否能吃？
• 让我们，一起来探讨……
目录
•转基因技术的定义
转基因作物的分类
转基因动物
关于转基因的图表
转基因植物 总结
• 2019推出保丰抗玉米螟玉米，应用种内基因技术对抗 欧洲玉米螟。收购Asgrow的经济类作物种子业务。
• 推出抗农达蓖麻，棉花这种产品具有抗农达和其他草 甘膦基除草剂的特性。推出保铃抗虫抗农达棉花，成 为第一家推出组合基因棉花的公司。这种产品同时包 含孟山都的保铃防虫技术和抗农达技术。
• 2000最初的孟山都公司被合并，更名为法玛西亚公司。
购了另一家生物研究公司Calgene的部分股份。
（对Calgene公司的收购在下一年完成）
•
推出抗农达大豆，这种产品可以抗农达和其他
草甘膦基除草剂。
•
推出保铃抗虫棉花，通过种内基因技术，抵抗
棉花螟蛉、番茄蚜虫和粉螟蛉的侵害。
•
弊
最初的孟山都公司
• 2019完成对迪卡（DeKalb）生物科技公司的收购。推 出抗农达玉米，这种玉米可以抗农达和其他草甘膦基 除草剂。推出保丰抗玉米螟虫和抗农达玉米，成为第 一家推出组合基因产品的公司。
到3，270万公顷，占总转基因植种植面积的 72%，其中主要为抗除草剂大豆。举例： Roundup Ready soybean (RR大豆)，耐美国孟 山都公司Roundup除草剂。
转基因作物的分类
• 抗虫转基因作物
• 2000年全球种植抗虫转基因作物 的面积达到830万公顷，占总转基 因植物种植面积的19%，其中以 抗虫玉米为主。
转基因检测技术PPT(完整版)
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转基因存在的检测主要方法
该技术是由 ce。ntus 公司的karymullis 发明，于1985年由 saiki等首次报道， 是近年来开发的体 外快速扩增dna技术。 1988年，等人又成 功地将热稳定 taqdna聚合酶应用 于pcr扩增，是pcr 技术上向实用化的 一次突破性的进展。
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Page 6
Page 7
Page 8
世界上对转基因食品的态度
目前，世界上已经形成了两大阵营。 一个阵营以 为代表，包括加拿大和阿根廷等国支持
转基因食品。据国际农业生物技术应用服务组织 报告， 年，全球1.34上亿公顷的转基因作物中 ， 占到了47.8%，居全球之首。 另一个阵营以欧盟为代表，包括澳大利亚、新西兰 、 、英国等国反对转基因食品。欧盟的转基因作 物种植面积还不到全球的0.3%。
质的测定方法。 转基因存在的检测主要方法
此外，免疫P例CR被如广，泛应色用于谱医药技卫生术领域、，毛它也细可以管被应电用于泳转基技因术食品、检测近领域红。 外波谱技术和超分支 H34ur亿bu公rg顷h等的利滚转用基环近因红作扩外物波中增谱，技技占术到初术了步4解等7.决了。这食个问品题。加工过程可能破坏植物纤维结构，以致 食据品国加际工农过业程生转可物能技基破术因坏应植用检物服纤务测维组结织方构报，告法以，致难转年以基，因全判检球测1断.方法食难以品判断是食否品是含否含有有转转基因基成分因。成分。Hurburgh 等利用近红外波谱技术初步解决了这个问题。 此外，免疫PCR 转基因作为一种新兴的生物技术手段，它的不成熟和不确定性，必然使得转基因食品的安全性成为人们关注的焦点。
是一大类技术，被科学 由于许多获得批准的
工作者用于分离不同物 遗传工程体(gmo)表现
转基因存在的检测主要方法
该技术是由 ce。ntus 公司的karymullis 发明，于1985年由 saiki等首次报道， 是近年来开发的体 外快速扩增dna技术。 1988年，等人又成 功地将热稳定 taqdna聚合酶应用 于pcr扩增，是pcr 技术上向实用化的 一次突破性的进展。
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世界上对转基因食品的态度
目前，世界上已经形成了两大阵营。 一个阵营以 为代表，包括加拿大和阿根廷等国支持
转基因食品。据国际农业生物技术应用服务组织 报告， 年，全球1.34上亿公顷的转基因作物中 ， 占到了47.8%，居全球之首。 另一个阵营以欧盟为代表，包括澳大利亚、新西兰 、 、英国等国反对转基因食品。欧盟的转基因作 物种植面积还不到全球的0.3%。
质的测定方法。 转基因存在的检测主要方法
此外，免疫P例CR被如广，泛应色用于谱医药技卫生术领域、，毛它也细可以管被应电用于泳转基技因术食品、检测近领域红。 外波谱技术和超分支 H34ur亿bu公rg顷h等的利滚转用基环近因红作扩外物波中增谱，技技占术到初术了步4解等7.决了。这食个问品题。加工过程可能破坏植物纤维结构，以致 食据品国加际工农过业程生转可物能技基破术因坏应植用检物服纤务测维组结织方构报，告法以，致难转年以基，因全判检球测1断.方法食难以品判断是食否品是含否含有有转转基因基成分因。成分。Hurburgh 等利用近红外波谱技术初步解决了这个问题。 此外，免疫PCR 转基因作为一种新兴的生物技术手段，它的不成熟和不确定性，必然使得转基因食品的安全性成为人们关注的焦点。
是一大类技术，被科学 由于许多获得批准的
工作者用于分离不同物 遗传工程体(gmo)表现
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二、以核酸为基础的检测方法介绍
主要内容
1.核酸提取纯化方法 2.定性检测方法 3.定量检测方法 4.可能产生误差的原因及消除 5.案例分析
1.核酸提取纯化方法
使用标准方法 GB/T 19495.3-2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法
核酸提取纯化方法
A 酚-氯仿法提取DNA B PVP法提取DNA
（Polyvinylpyrrolidone,聚乙烯吡咯烷酮）
C CTAB法提取DNA
（Cetyltrimethyle Ammonium Bromide,十六烷基三乙基溴化铵）
D 硅土法提取DNA E 胍-氯仿法提取DNA
• 建议使用商业试剂盒
核酸提取纯化方法
• 酚-氯仿法提取DNA、胍-氯仿法提取DNA
植物基因组Recipient genome
Plant genome
重组产生GMO
Recombinant Plant
作物种属检测 Taxon detection
Plant genome
品系特异性检测 Event Specific Detection
结构特异性检测 Construct Specific Detection
种植国家不断增多
25
25
23 22
21
20
17
15
13 12
9 10
6
5
0 1996 1998 1999 2000 2004 2005 2006 2008 2009
商业化种植： 美洲、亚洲、 大洋洲、 欧洲、非洲 25国
9
转基因作物种植比例
油 菜, 5 棉 花, 13
玉 米, 25
大 豆, 57
2009年
10
非转基因油菜
喷施草甘膦前
抗草甘膦油菜RT73
喷施草甘膦后
中国培育的转基因抗虫水稻Bt63介绍
母本对照 Bt63
标识类 别
强制性标 识
自愿性标 识
转基因产品标识制度
标识阈 值
0 0.9%
1%
2% 3% 5%
国家/地区
中国、印度、菲律宾、印度尼西亚 欧盟、爱尔兰、以色列
澳大利亚、新西兰、巴西、南非、斯洛文尼 亚、克罗地亚、捷克共和国、瑞士、俄罗 斯、沙特阿拉伯 智利、挪威
• 硅土法提取DNA
利用硅土对核酸的吸附作用，分离核酸。
转基因产品的检测策略
Strategy for GMO Detection
启动子 增强子
Promoter Enhancer
基因Gene
终止子 Terminator
筛选 检测 Screen detection
转基因 transformation
筛选 检测 Screen detection
4 GB/T19495.4-2004
5
GB/T 19495.5-2004
6 GB/T19495.6-2004
7 GB/T19495.7-2004
8 GB/T19495.8-2004
国家标准名称
转基因产品检测 通用要求和定义 转基因产品检测 实验室技术要求 转基因产品检测 核酸提取纯化方法 转基因产品检测 核酸定性PCR检测方法 转基因产品检测 核酸定量PCR检测方法 转基因产品检测 基因芯片检测方法 转基因产品检测 抽样和制样方法 转基因产品检测 蛋白质检测方法
第一批标识管理的转基因生物
（5大类17种）
大豆 玉米 油菜
种子，豆粒，豆粉，豆油， 豆粕
种子，玉米粒，玉米粉，玉 米油，玉米面
种子，油菜籽，菜籽油
棉花
种子
番茄
种子，新鲜番茄，番茄酱
转基因检测国家标准
序
号
标准号
1 GB/T19495.1-2004
2 GB/T19495.2-2004
3 GB/T19495.3-2004
A.方法简介
• 普通PCR+电泳方法 原理 聚合酶链式反应（PCR）在反应缓冲液中，脱氧 核糖核酸、寡核苷酸引物在DNA聚合酶的作用下经循 环反应对目标序列进行复制。 PCR产物可用琼脂糖凝胶电泳方法依据DNA分子 长度的不同加以分离。
A.方法简介
• 缺点： 1. 普通PCR灵敏度可达到0.1％，而实时荧光PCR检测
利用酚和胍使蛋白质变性，释放出核酸,同时抑制了DNase 的降解作用，保护核酸。 利用氯仿加速有机相与液相分层。
• PVP法提取DNA、 CTAB法提取DNA
利用高浓度去垢剂在高温（55～65℃）条件下裂解细胞， 蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度 的方法使蛋白质及多糖杂质沉 淀，得到水相中的核酸。
质检系统实验室技术能力培训教材
食品中转基因成分、真伪鉴别和过敏原及其成分检测
主要内容
• 食品中转基因成分检测 • 食品中过敏原及其成分检测 • 食品真伪鉴别（动物源性成分检测）
第一部分 食品中转基因成分检测
一、全球转基因作物种植情况 和有关法规介绍
全球转基因作物种植面积（1996-2009）
使用标准方法
GB/T 19495.4-2004 转基因产品检测 核酸定性PCR检测方法
主要内容
本标准方法规定了转基因产品检测的核酸定 性PCR方法，适用于种子、饲料、食品和环境 样品中转基因成分的定性检测。从以下五个方 面进行介绍：
A.方法简介 B.检测目标物 C.检测体系 D.结果判定 E.结果表述
2
0
0
9 年 不 同 国 家 转 基 因 作 物 种 植 面 积
1996年到2009年美国转基因作物的种植百分率
巴西、加拿大、中国、印度 转基因作物占作物种植面积的比例
从2008年的65%增加到2009年的71%
从2008年的86%增加到2009年的93%
棉花种植量减少，但仍为68%
从08年的80%增长到09年的87%
韩国、马来西亚 日本、中国台湾、泰国
5%
中国香港、美国、加拿大、阿根廷
《农业转基因生物安全管理条例》
• 2001年5月23日，国务院发 布了第304号令《农业转基 因生物安全管理条例》
《农业转基因生物标识管理办法》 2002年颁布实施
标识的标注方法
转基因动植物（种子、种畜禽、水产苗木）和微生物， 直接标注“转基因××”。 转基因农产品的直接加工品,标准为“转基因XX加工品 （制成品）”或“加工原料为转基因XX” 用农业转基因生物或用含有农业转基因生物成份的产品 加工制成的产品，但最终销售产品中已不再含有或检测 不出转基因成分的产品标注为“本产品为转基因XX加工 制成， 但本产品中已不再含有转基因成分”或“本产品 加工原料中、 有转基因XX，但本产品中已经不再含有转 基因成分”