种子生活力测定的原理培训讲学
种子生活力快速测定
种子生活力快速测定一、实验原理通过本实验，掌握种子生活力快速测定的原理和方法。
二、实验原理（1）活细胞染色：脱氢辅酶（NADH或NAFPH)存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。
当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。
（2）死细胞染色：有生命力的细胞膜是一个半透性膜，因此对内渗透的物质有选择性；而无生命力的细胞，其细胞膜已经消失，因此有的有色物质（如品红）不能进入活的细胞内，但可以进入已经死亡的细胞，从而使细胞内出现该有色成分特有的颜色，故可以据此鉴别细胞是否死亡。
三、实验材料、药品和器具1、实验材料：花生、黄豆2、实验药品和器具：品红、TTC、培养皿、吸水纸、镊子、解剖针、刀片等四、试验方法1、分别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入TTC培养1h左右，观察胚染色的情况。
胚被染色的为有活力种子，未被染色的为无活力的种子。
2、别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入品红培养10-20min，倒掉品红溶液，冲洗数次，观察胚染色的情况。
胚被染色的为无活力种子，未被染色的为有活力的种子。
五、实验结果品种测定方法测定种子总数有生活力种子粒数无生活力种子粒数种子生活率花生TTC 30 28 2 93% 品红30 28 2 93%黄豆TTC 30 30 0 100% 品红30 29 1 97% 实验结果可以得出选用TTC染色和品红染色得出的结果存在差异，用TTC染色得出的结果高于品红染色法。
结果分析：可能的原因是在清洗品红时没有清洗干净，品红粘在胚上，影响实验的观察，导致结果差异。
六、注意事项1、选取种子的时候，要尽量选取未发芽的种子，避免影响测定。
2、添加染色液时，要是然也尽量没过种胚，使种胚和染液充分接触。
测定种子活力的原理
测定种子活力的原理
测定种子活力的原理通常是通过观察种子的发芽率来判断其活力。
具体流程如下：
1. 种子浸泡：将一定数量的种子浸泡在适当的液体介质中，一般使用蒸馏水或含有营养物质的溶液，例如无机盐溶液。
2. 排水：浸泡一段时间后，将种子从液体中取出，排除多余的水分，使其表面保持适当的湿度。
3. 培养：将处理好的种子均匀放置在适当的培养基上，栽培在恰当的环境条件下，例如适当的光照、温度和湿度等。
4. 观察发芽：在一定的时间内观察种子的发芽情况，记录发芽的数量，并计算发芽率。
5. 计算活力：根据发芽率计算种子的活力，一般活力指数越高，种子的存活能力越强。
这种测定种子活力的方法主要基于种子的萌发过程，种子在合适的环境下，通过吸收水分和养分，释放出生长所需的能量，逐渐发芽生长。
通过观察发芽率，可以评估种子的存活能力和潜在增长能力，从而判断种子的活力。
第五章___种子生活力与活力测定
色情况。
20 ml乳酸＋20 ml苯酚＋40 ml甘油＋20 ml蒸馏水
注意
该药液有毒性，最好戴塑胶薄膜手套配 制，并在通风橱里操作。在使用时谨防 触及皮肤或衣服等。
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第一节 种子生活力测定原理及方法
（4） H202 ：加快酶活化和吸胀。一般用0.3%H202溶液 （5）杀菌剂和抗生素：延缓衰弱种子的劣变进程。
第一节 种子生活力测定原理及方法
2)种子预措
目的：采用适当的方法使胚的主要构造和(或)活的营
养组织暴露出来。
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第一节 种子生活力测定原理及方法
方法：
刺穿：对经过预湿的种子或硬实种子，可利用解剖针或解
剖刀，刺穿种子的非主要部位，适用于小粒（牧草等）种子。
加速四唑还原成甲臜的速度；
或在两端横切，打开胚腔，并 切去小部分胚乳(配子体组织) 针叶树种子沿胚旁 边纵切
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第一节 种子生活力测定原理及方法
（3）四唑染色
目的：通过染色反应，将胚和活的营养组织里的
健壮、衰弱和死亡部分的差异正确地显现出来。 染色程序： 将准备好的100×4种子放入适宜大小的培养皿或 烧杯中。 加入适宜浓度的四唑溶液，以淹没种子为度，移置 到一定温度的（黑暗或弱光）恒温箱内进行染色反应。
ISTA Working Sheets on Tetrazolium Testing, Volume I, 1st Edition, 2003 Volume I - Agricultural, Vegetable and Horticultural Species By N. Leist and S. Krämer Illustrated by J. Pfäfflin
实验7 种子生活力的快速测定讲解
数据记录与处理
不同方法测定种子生活力统计表
方法
供试粒数
பைடு நூலகம்
有生活力 种子粒数
无生活力 种子粒数
有生活力种子 占供试粒数的%
TTC
30
红墨水
30
BTB
30
注意事项
? 沿种胚中央准确切开，同粒 TTC/红墨水法各一半 ? TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色
瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 ? 染色结束后立即进行鉴定，因放久会褪色。 ? 显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中 ? 溶胶倒至培养皿 1/3处； ? 取完好小麦种子，将种胚向下插入 BTB琼脂胶。
染料染色法
1. 有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选 择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内， 胚部不染色。
2. 而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了 选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使胚部染色。 所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命 力。
活种子 死种子
材料、设备及试剂
思考题
TTC法和红墨水法测定种子生活力的理论依据 有何不同 ?
氯化三苯基四氮唑
三苯甲腙
活种子 死种子
BTB溴麝香草酚蓝法
1. 活细胞呼吸释放 CO2， CO2溶于水成H2CO3解 离，使种胚周围环境酸度增加，用 BTB来反映 酸度的改变；
2. BTB变色范围为 pH6.0-7.6，酸性呈黄色，碱 性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为 pH7.1）。
3. 本实验观察种胚周围的黄色晕圈。
BTB法
1. 煮沸的1％BTB琼脂胶约20 ml，冷却倒胶至培 养皿（ 1/3皿）；
2. 取30粒完好的小麦种子，种胚向下插入胶 (不软 不硬 )；
种子生活力测定原理及方法讲课讲稿
2012/03/10
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• 3、种子活力就是指高发芽率种子批间在田间 表现的差异。
• 种子活力是比发芽率更敏感的指标，在高发芽 率的种子批中，
• 仍然表现出活力的差异（高低）。通常发芽率 高的种子具有较高的活力，但两者不存在正相 关。
• 四、种子活力测定方法分类 种子活力测定方法达数十种，其分类方法
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出苗（如陈种子发芽率虽正常，但早春播种出苗 率低）。
• 二、种子活力测定的重要意义（同读本；颜启 传）
• 1、高活力种子的生产优越性 • 高活力种子具有明显的生长优势和生产潜力。 • (1)提高田间出苗率：高活力种子播到田间后
出苗迅速，均匀一致，保证苗全苗壮和作物的 田间密度，为增产打下良好的基础。
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活力测定有助于育种工作者在选择抗寒、抗病、 抗逆、早熟、丰产的作物新品种。
• 三、活力、生活力和发芽力的区别与联系 衡量种子生理质量有发芽力、生活力和活
力三个指标，三者有密切的关系，却有完全不 同的含义： • 1、种子生活力：是指种子发芽的潜在能力或 种胚具有的生命力。 • 通常用供检样品中活种子数占样品总数的百分 率。
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2、种子发芽力：是指种子在适宜条件下(实验室 控制条件下)长成
• 正常植株的能力。通常用供检样品中长成正常 幼苗数占样品总数的百分率，即发芽率表示。
• 在下列情况下，如果鉴定正确，生活力测定与 发芽率测定结果
• 基本是一致的： • ①无休眠、无硬实或破除了休眠和硬实。 • ②没有感染病害。
种子生活力测定PPT课件
.
8
任务4 冲洗与观察鉴定：染色后的种子用清水冲洗种子 至少2次，直至洗液无红色为止（注意要缓慢冲洗，不 要让水流直接冲到种子上），观察种胚被染色的情况 （可借助放大镜查看），凡种胚不着色的为有生活力 的种子，种胚和胚乳都被染成相同红色的就是无生活 力的种子。
有
无生活力的种子
生活Leabharlann 力的种子
.
9
任务5 计算： 种子生活力（%）=（有生活力的种子数／检测种子数）
模块三 快速测定种子生活力
➢ 红墨水染色法
.
1
种子生活力：是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生 命力。没有生活力的种子是死亡的种子，不能萌发。
.
2
项目一. 实验目的 ➢ 掌握快速测定种子发芽率的方法。 ➢ 能正确计算发芽率。
项目二. 实验方法 ➢ 红墨水染色法。
.
3
项目三. 实验原理
➢有生活力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选择吸 收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不 染色。
×100%（保留整数） 先计算每份实验的种子生活力。再计算其平均生活力。
.
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项目六. 结果报告
姓名：
送检单位 作物名称
种子生活力测定的记载表
产地 送检样品重（g）
品种名称
重复
Ⅰ
Ⅱ
检验粒数
种子 生活 力测 定
有生活力种子数 种子生活力
Ⅲ
Ⅳ
平均种子生活力
. 填表日期：
年月日
11
项目七. 注意事项
1）切取时，一定要沿胚的中线切开； 2）染色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中； 3）染色时间不足或太长，否则不易区分； 4）冲洗次数不够，冲洗时把麦粒冲到废液杯中； 5）鉴别错误，把活种子看着死种子，把死种子看着活种子； 6）计算结果4组平均生活力保留整数。
(精品)种子生活力测定的原理
(精品)种子生活力测定的原理种子生活力测定是种子品质检测的重要方法之一。
其原理是利用种子的代谢活动作为生活力的指标，通过测定种子的呼吸率、发芽率、抽胚率等参数来评价种子的生活力。
下面将详细介绍种子生活力测定的原理。
一、种子呼吸率的测定原理呼吸作为种子的代谢过程之一，可反映种子的生物化学活性。
种子呼吸率是指在单位时间内种子的氧气消耗量或二氧化碳产生量，即呼吸强度。
呼吸率的大小直接关系到种子的能量来源和消耗。
种子在用氧进行呼吸作用时，主要的代谢物质是葡萄糖和氨基酸，产生 ATP 等能量分子和二氧化碳、水等代谢产物。
利用呼吸量，可以评价种子存活度和质量。
测定种子呼吸率的方法有很多种，如使用光谱法、显微镜熔点计、低温燃烧法、气体检测法等。
其中，气体检测法是应用最广泛的一种方法。
方法是将种子装在呼吸率仪中，通过不断加入氧气和排出二氧化碳实现测定。
常用的仪器有 WSTE-1、WTmod1-1 等。
种子发芽率是种子生活力测定中最基本的参数之一。
它是指单位时间内种子的发芽数，反映种子生长发育的潜力和种子质量的优劣。
种子发芽过程主要涉及种子萌发、根和胚芽的形成和生长等，需要有充足的水分、适温、氧气和光照等条件。
种子发芽率受多种因素影响，如种子保存条件、处理方式、种子来源、品种特性等。
测定种子发芽率，常用的方法有常规温室法、纸巾培养法、挂网法等。
其中，常规温室法是最常用的一种方法。
其原理是将一定数量的种子放置在经过灭菌处理的仿土或营养物质充足的培养土壤中，在一定的温度和湿度条件下观察种子发芽情况，测定发芽率。
一般情况下，种子发芽率可以在 7-14 天内达到稳定。
种子抽胚率是指在不同水分和温度条件下，种子实现一定程度的萌发至抽胚的百分比。
它是种子品质的重要指标之一，同样受到多种因素影响，如种类、存储条件、处理方式等。
抽胚率的测定，常用的方法是室内拟真鉴别法和高温处理法。
室内拟真鉴别法是将种子放置在一定温度和湿度条件下，观察其抽胚情况；高温处理法是将种子暴露在高温环境中，观察其能否抽胚。
实验三 种子生活力测定
衰弱和死亡部分的差异显现出来，判断种子生活力。 染色方法：将经过样品准备或不须准备的规定数量种子 分别放入四唑溶液（0.1%）里染色。 将不同重复的样品分别放在小烧杯中，加入四唑溶液， 以淹没种子为宜；
移置在30℃的黑暗恒温箱内或弱光下进行染色2小时。因 为光线可能使四唑盐类还原而降低其浓度，影响染色效 果。
实验方法和步骤
观察鉴定 凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的 鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力种子。
凡是胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色和 光泽，并且活营养组织不染色部分已超过1/2，或超 过允许范围，以及组织软化的，为不正常种子。
凡是完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色， 且组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种 子。
实验方法和步骤
结果表示与报告
计算各个重复中有生活力的种子数，重复
间最大容许差距不得超过规定值；
平均百分率计算到最近似的整数。
实验三 种子生活力的测定
一、实验目的和要求
1、实验目的
了解四唑法测定种子生活力的原理
掌握主要农作物种子四唑染色测定种子生
活力的方法步骤和判别有无生活力的鉴定 标准。
一、实验目的和要求
2、实验要求
要求每组同学独立完成同一材料的生活力 测定。
二、实验原理
2、四唑染色法测定种子生活力的基本原理 利用四唑的无色溶液作为一种指示剂，以显示活 细胞中所发生的还原反应。 有生活力的种子胚部细胞具有脱氢酶，被种子吸 收的四唑盐类的无色溶液，参与了活细胞的还原 反应，从脱氢酶脱氢，被还原为红色而稳定的、 不扩散的、不溶于水的三苯基化合物。 无生活力的种子则无此反应。 借此可鉴别有生活力种子和无生活力种子。
课件：实验六 种子活力的快速测定
BTB显色： pH6.0
pH7.1
pH7.6
二.实验材料
小麦种子（随机）, 培养皿，镊子，刀片，玻璃板， 培养箱（30℃）试剂：0.5%TTC，红墨水，BTB琼脂。
三 实验步骤
(一).TTC法和红墨水法
• 1.取小麦种子20粒。沿胚中线成二半，每半均有胚，分别置于2个培养 皿中。
• 2.其中一只培养皿加0.5%TTC,约5ML，培养箱30℃放置0.5h，倒出TTC液， 冲洗1-2次，观察染色情况：3种（死，活，不正常），计算活种子的百 分数。
实验六 种子活力的快速测定
一 实验原理
1. TTC法：凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有 氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来 的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性TTF ，而且种 子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越 深。死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将 TTC 还原 为红色。种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅 或局部被染色。因此，可以根据种胚染色的部位以及染色 的深浅程度来判定种子的生活力。
2.红墨水法：有生活力的种子其胚细胞的原生 质具有半透性，有选择吸收外界物质能力， 某些染料如红墨水中的大红 G 不能进入细胞 内，胚部不着色。而丧失生活力的种子其胚 部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染 料进入细胞内使胚部染色，所以可根据种子 胚部是否染色来判断种子的生活力。
3.BTB法：凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中的 O 2 放 出 CO 2 。 CO 2 溶于水成为 H 2 CO 3 ， H 2 CO 3 解离 成 H + 和 HCO 3 ˉ，使得种胚周围环境的酸度增加， 可用溴麝香草酚蓝（ BTB ）来测定酸度的改变。 BTB 的变色范围为 pH6.0 ～ 7.6 ，酸性呈黄色，碱性呈蓝 色，中间经过绿色（变色点为 pH 7.1 ）。色泽差异显 著，易于观察。
第五章 种子生活力与活力测定
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第一节 种子生活力测定原理及方法
2、种子生活力测定在农业生产上的作用 ① 测定休眠种子的生活力，利于正确评定种子品
质、合理利用种子（发芽率低而生活力高） ；
② 快速预测种子发芽能力。
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0.5%青霉素等抗菌素。
（6）硬化剂：有些种子（西瓜）浸种后，种皮表面出现
胶黏物质而变得非常光滑，难以拿牢进行样品准备，可用
硫酸钾K2SO4、硫酸铝Al2(SO4)3等硬化剂 。
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第一节 种子生活力测定原理及方法
6、四唑测定方法
试验样品 染色前的准备（预湿、预措）
Volume II, 1st Edition, 2003 Volume II - Tree and Shrub Species By N. Leist and S. Krämer Illustrated by J. Pfäfflin
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第一节 种子生活力测定原理及方法
色情况。
20 ml乳酸＋20 ml苯酚＋40 ml甘油＋20 ml蒸馏水
注意
该药液有毒性，最好戴塑胶薄膜手套配 制，并在通风橱里操作。在使用时谨防 触及皮肤或衣服等。
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第一节 种子生活力测定原理及方法
（4） H202 ：加快酶活化和吸胀。一般用0.3%H202溶液 （5）杀菌剂和抗生素：延缓衰弱种子的劣变进程。
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种子生活力测定原理及方法综述
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• • • •
（1）种子发芽、幼苗生长速率和整齐度； （2）种子在不利环境条件下的出苗能力； （3）贮藏后，特别是能保持发芽力的性能。 高活力种子批即使在不适宜的环境条件下，仍 具有良好性能的潜力。 • 高活力种子发芽、出苗整齐、迅速，对不良环 境抵抗力强。 • 低活力种子，在适宜条件下虽能发芽，但发芽 缓慢，在不良环境条件下出苗不整齐，甚至不
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应将过湿或过干的种子平衡至相近的含水量。 • 3、幼苗评定试验 • 适用于大粒豆类种子。这些种子不能用幼苗长 度表示活力。 • 因其细弱苗可达相当的长度。此法是采用标准 发芽方法，幼苗评定时分成不同等级。 例如，豌豆种子试验方法如下： • 取4份试样，每份50粒。砂床发芽，于20℃、 相对湿度95～98％、光照12h、光强度
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• • • • •
该分类体系被广泛接受。 现将常用的种子活力测定方法分类介绍如下： 五、种子活力测定方法： （一）发芽测定法 这类测定方法是根据高活力种子幼苗生长快、 幼苗健壮、生长正常、幼苗株大和重量较重等 生长特性，来评定种子生活力水平的方法。 • 而低活力种子则相反。 • 1、标准发芽试验法测定（发芽速率测定）
第二节 种子活力测定原理 及方法
• 种子活力（seed vigor）是种子质量的重要指 标之一，与种子田间出苗质量密切相关。活力 测定经过几十年的研究，已取得了重大进展。 在美国和欧洲，许多种子公司把活力测定作为 常规的检验项目，但国内没被列于国标。 • 一、种子活力的概念 种子活力的定义长期得不到统一，不同学 者有不同的定义，经过27年的争论，直到 1977年ISTA才确定了种子活力的定义： • 1、种子活力是决定种子或种子批在发芽和出
第五章种子生活力和活力测定
第五章种子生活力和活力测定第五章种子生活力与活力测定本章讲2节§1、种子生活力测定原理及方法§2、种子活力测定原理及方法第一节种子生活力测定的原理与方法在种子贸易中，时常需要在短时间内掌握种子批的生活力状况，如果种子处于休眠状态难以通过发芽测定得到结果，种子生活力测定可以满足这一要求。
一、种子生活力概念：种子生活力(seed viability)指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力；种子生活力和发芽具有不同的含义：一些休眠种子在发芽试验中不能发芽，但它是有生活力的，破除休眠后，能长成正常幼苗。
而生活力反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总和。
所以，种子生活力测定，反映的是种子批的最大发芽潜力。
二、种子生活力测定的意义1、测定休眠种子的生活力新收获的或在低温贮藏处于休眠状态的种子，正常发芽条件下，其发芽力很低，这种情况下，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率。
必须进行生活力测定，了解种子的发芽潜力，合理利用种子。
（怎样利用？）播种之前对发芽率低而生活力高的种子，应进行适当处理后播种。
种子检验时，发芽试验末期有新鲜不发芽的种子或硬实种子，就应接着进行生活力测定；或破除休眠后做发芽试验。
2、快速预测种子的发芽力:休眠种子可借助于各种预处理打破休眠，进行发芽试验，但时间较长；而种子贸易中，因时间紧迫，不可能采用标准发芽试验来测定发芽力，因为发芽试验所需的时间较长。
如小麦8d，水稻14d，菠菜21d。
而多数林木种子则需要更长的时间（如月季15～25℃发芽，70d 计算发芽率）。
这时，可用生物化学法测定种子生活力作为参考；而林木种子可用生活力来代替发芽力。
种子生活力测定方法有四唑染色法、靛蓝染色法、红墨水染色法、软X射线造影法等。
本节将重点介绍四唑染色法，并简要介绍其他方法。
三、四唑测定法（GB）(一)四唑测定法概述1、发展简史四唑测定法于1942年由德国kon(莱康)教授发明，二战期间传人美国。
种子生活力测定的原理
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
（5）观察鉴定
① 目标：
计算种子生活力百分率 按染色程度和组织特性，判断种子活力强弱，并分级 查明种子劣变和生活力丧失的原因
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
（5）观察鉴定
② 鉴定：
裸眼或在解剖镜下逐个鉴定，分清健壮组织，衰弱 活组织，衰弱死组织和死亡组织并综合判断种子活 力
在 20～45℃ 范围内，温度每增加 5℃，其染色时间可减少一半。
达到规定时间或染色已很明显时，倒去四唑溶液，用清水冲洗。
已达到规定时间，样品的染色仍不够充分，可适当延长染色时间，以便证 实是由于四唑溶液渗入缓慢引起，还是由于种子本身的缺陷所引起的。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
✓ 所以该试剂需用棕色瓶装盛，并用黑纸外面包装。 ✓ 已配好的四唑溶液应装入棕色玻璃瓶里，存放在暗处。 ✓ 在进行种子染色时，也许将其放在暗处和弱光处进行。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
△ 测定方法
建议使用 0.1%～1.0% 四唑盐的水溶液
➢ 切开的种子用 0.1%～0.5% 浓度的四唑溶液； ➢ 整个胚、整粒种子或斜切、横切或穿刺的种子需用 1.0% 浓度
（2）染色前的样品准备
目的：使四唑溶液快速和充分渗入种子全部活组织，加快染色反 应，采用适当方法使胚的主要构造和活的营养组织暴露出来。
a) 不需预湿和附加准备：如苜蓿种子
b) 采用缓慢预湿后不需样品准备：如大豆种子等
c) 穿刺或切开胚乳：小粒牧草等种子
d) 沿胚纵切：水稻、玉米、和麦类等 e) 近胚纵切：松柏和伞形科等植物种子 f) 上半粒纵切：莴苣和其他菊科等植物种子
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
△ 测定方法
建议使用 0.1%～1.0% 四唑盐的水溶液
➢ 切开的种子用 0.1%～0.5% 浓度的四唑溶液； 整个胚、整粒种子或斜切、横切或穿刺的种子需用 1.0% 浓度
种子生活力测定的原理
第六章 种子生活力测定的原理和方法
2、测定种子生活力的意义
（1）休眠的种子必须进行生活力测定 （2）快速预测种子发芽能力
第六章 种子生活力测定的原理和方法
二、种子生活力四唑染色测定（TTC test or TZ test）
1、发展简史
1942年由德国H. Lakon发明 1950年ISTA成立四唑测定技术委员会 1953年ISTA世界大会第一次将四唑测定列入国际种子检验规程 《四唑测定手册》（Handbook on Tetrazolium Test），Moore，
（2）染色前的样品准备
目的：使四唑溶液快速和充分渗入种子全部活组织，加快染色反 应，采用适当方法使胚的主要构造和活的营养组织暴露出来。
a) 不需预湿和附加准备：如苜蓿种子
b) 采用缓慢预湿后不需样品准备：如大豆种子等
c) 穿刺或切开胚乳：小粒牧草等种子
d) 沿胚纵切：水稻、玉米、和麦类等 e) 近胚纵切：松柏和伞形科等植物种子 f) 上半粒纵切：莴苣和其他菊科等植物种子
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
① 四氮唑：2,3,5-氯（溴）化三苯基四氮唑
（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride or Bromide） 简
称：四唑或红四唑 缩写：TTC， TTB，TZ
△ 理化性质
白色或淡黄色的粉剂，熔点243℃； 当温度达到245℃时就会分解，易溶于水，具有微毒； 遇到直射光线时会被还原成粉红色，
预湿
水浸快速预湿：适合于水稻、大豆和花生等作物种子
纸床缓慢预湿：适合于葱、玉米和小麦等作物种子
◎ 纸床预湿(小粒豆类种子)
◎ 纸卷预湿(大豆、菜豆、豌豆）
H2O2溶液浸种： （为了加快种子吸胀和促进酶的活化以及 缩短预湿时间） 0.3%, 20～30℃, 1 h
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
1984年，650多个属和种 1995年我国将四唑测定列入农作物种子检验规程
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
2、原理
无色的的三苯基四氮唑被种子吸收后，在胚部活细胞 中脱氢酶的作用下，还原成为红色的、稳定、不扩散的 三苯基甲 ，这样，就可根据染色的部位和深浅来区分种 子红色的有生活力部分和无色的死亡部分。
解于1000 ml 蒸馏水； ➢ 然后取 2 份母液Ⅰ和 3 份母液Ⅱ混合即成。
AOSA 规程法
➢ 在1000 ml 蒸馏水中加入 5.45 g NaH2PO4 和 3.79 g Na2HPO4 ，充分溶解即成。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
③ 乳酸苯酚透明液
称取 0.1 g 四唑粉剂溶解于 100 ml 磷酸缓冲溶液中，即配成 0.1% 四唑溶液；
可用 NaOH 或 NaHCO3 溶液调节 ph 值。
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
5、所需试剂
② 磷酸缓冲液
ISTA TZ手册法
➢ 母液Ⅰ：称取 9.078 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）溶解于1000 ml 蒸馏水中； ➢ 母液Ⅱ：称取 9.472 g 磷酸氢二钠（Na2HPO4）或 11.876 g Na2HPO4 ·2H2O 溶
6、测定程序
（1）预处理 预措：是指在种子预湿前除去种子外部的附属物和在种子
非要害部位弄破种皮。
预湿: 为加快种子充分吸湿，软化种皮，便于样品准备，以
提高染色的均匀度，通常种子在染色前要进行预湿。
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6、测定程序
（1）预处理
农作物种子四唑染色技术规定
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（2）染色前的样品准备
g) 切去种子基端：茜草科等植物种子 h) 斜切种子：菊科、十字花科和蔷薇科等 i) 横切胚乳：黑麦草、羊茅等植物种子 j) 剥去种皮：矮牵牛、茶籽和棉花等植物种子 k) 剥开胚乳取出胚：杜仲等林木种子 l) 横切胚轴和盾片：大麦和小麦等 m) 从果实内取出胚：桃等 n) 横切种子两端：山茱萸和胡颓子等 o) 平切果种皮和胚乳，露出胚的构造：洋葱和菠菜等植物种子
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
3、特点
➢ 原理可靠 ➢ 结果准确(与标准发芽率误差一般不超过3-5%) ➢ 不受休眠限制 ➢ 简便快速 6-24h Vitascope 20-30min ➢ 成本低廉
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第六章 种子生活力测定的原理和方法
4、适应范围
✓ 测定休眠种子的发芽潜力 ✓ 测定收获后马上要播种的种子的发芽潜力 ✓ 测定发芽缓慢的种子的发芽潜力 ✓ 测定发芽末期未发芽种子的生活力 ✓ 测定种子收获或加工期间损伤种子的生活力 ✓ 解决发芽期间遇到的问题 ✓ 查明种子贮藏期间劣变衰老程度 ✓ 时间紧迫，调种时快速测定种子生活力
的四唑溶液； ➢ 种子染色时间与四唑溶液浓度有关。
浓度增加，染色反应所需时间也随之缩短，从染色效果看，以较低浓度为宜； 测定时，要求四唑溶液的 ph 值在 6 ～7 范围之内。
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5、所需试剂
△ 配制方法
称取 1 g 四唑粉剂溶解于 100 ml 磷酸缓冲溶液中，即配成 1.0% 四唑溶液；
用于小粒豆类种子或牧草种子,染色后种皮、稃壳或胚乳变为透明。
④ 过氧化氢溶液
用于某些牧草种子（黑麦草）的预湿浸种，加快酶的活化和吸胀。
⑤ 杀菌剂和抗生素
延缓衰弱种子的劣变进程。
⑥ 胶液硬化剂
有些种子浸种后，种皮表面出现胶液而变得非常光滑，难以拿牢进行 样品准备。
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