四唑法测定种子生活力Word版

四唑染色法测定种子生活力

福建农林大学20**级农学0******* *****

一、目的

1、了解种子生活力测定方法

2、熟悉利用四唑染色法测定种子活力方法及操作方式

二、原理

有生活力的种子活细胞在呼吸过程中都发生氧化还原反应，四唑溶液作为一种无色的指示剂，被种子吸收后参与活细胞的还原反应，从脱氢酶接受氢离子，在活细胞里产生红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲。化学反应如下：DPNH2 + TTC DPN + TTCH + HCl

（辅酶IH2）（四唑）（辅酶Ⅰ）（甲）（氯化氢）

H

N‐N‐C6H5N‐N‐C6H5

∥2H ∥

C6H5‐C C6H5‐C +HCl \ \

N﹦N+‐C6H5 N＝N‐C6H5

无生活力的种子则无此反应。

根据种子的四唑显色的部位，即可区分有活力的部分和死亡部分。一般鉴定原则是，凡是胚的主要结构及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力的种子。凡是胚的主要构造局部不染色或染色成异常的颜色和光泽，并且活营养组织部染色成无光泽的淡红色或灰白色，且组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种子。

三、试材与设备

1、材料大豆种子

2、设备烧杯、滤纸、刀片、镊子、恒温培养箱

3、试剂 1.0%的四唑溶液

四、实验步骤

从净度分析后并经过充分混合的大豆种子中，随机抽取30粒，3次重复。

1、种子预湿将选取的大豆种子水浸预湿，室温下浸泡8h，使其充分吸胀。

2、种子处理将吸胀的大豆种子的种皮去除，掰开子叶，露出子胚芽，保持湿润备用。

3、四唑染色将处理好的种子放入烧杯中，加入1.0%的四唑溶液，将种子淹没，然后置于35℃恒温培养箱中避光染色0.5~1 h。

4、观察鉴定将染色后的大豆种子经清水冲洗后进行染色情况的观察鉴定。胚部全部显成鲜红色、仅子叶远离胚芽部分少量未染色、仅子叶边缘少许未染色，为有生活力的种子。

5、结果计算及处理统计各个重复中有生活力的大豆种子数，并计算其平均值。

五、结果分析

根据生活力测定重复间的最大容许差距，得平均生活力百分比在22%的最大容许差距为16%。其中16%＞23.33%－20.00%、16%＞23.33%－20.69%、16%＞20.69%－20.00%。以上均在误差允许范围内，实验数据合理。

六、注意事项：

1、四唑染色时，恒温箱内要求黑暗或弱光，因为光线可使四唑盐类还原。

2、已用过的四唑溶液不能再循环利用。

3、染色温度过高或染色时间过长，也会引起种子组织的劣变，这样可能掩

盖由于遭受冻害、热伤和本身衰弱而呈现不同颜色或异常的情况。

鉴定结

组别 果 1 2 3 4 5 6 生活力百分率%

2 6 1 0 0 0 2

3 23.33% 3 6 0 0 3 2 18 20.69%

平均值 5.67 0.67 0.33 2.33 1.00 20.00 21.00%（取整）