三种常用检测种子生活力方法比较

植物生理学小论文三种常用检测种子生活力方法的比较班级：09级生物技术2班学号:系别: 化学与生命科学系: 雪婷日期：2012年5月15日浅谈三种常用检测种子生活力的方法雪婷（师学院化学与生命科学系675000）[摘要] 种子活力是种子最重要的生理及生产指标之一，近年来，无论在育种选种方面还是植物生理实验方面都得到广泛关注。

本文基于对种子活力的概念、影响种子活力的因素和种子活力快速测定的最新研究进展为基准, 对TTC法、BTB法及红墨水染色法三种常见种子活力快速检测方法进行了简要综述。

结论：四氮唑染色法是蔓荆子种子生活力测定的最佳方法，生活力与发芽率呈显著的正相关。

关键词：种子活力；TTC法；BTB法；红墨水染色法；研究进展The discussion on three kinds of methods todetect seed vigorSUN-xueting（Chuxiong normal university，chuxiong，yunnan675000，China）Abstracts: The seed vigor is the most important physiological and seed production indexes. In recent years，No matter in selecting seeds breeding or in plant physiology experiments. The seed vigor is widely mentioned This paper based on the concept of the seed vigor influence factors of the seed vigor and the seed vigor rapid determination of the latest research progress Comparition of three kinds of methods to determine seed vigor.Keywords: seed vigor ；Triphenyl Tetrazolium Chloride method；Bromo—thymol blue method; red ink method;research progress种子生活力是检测种子质量最重要的指标之一，它对于种子的发育，萌发，成熟以及成长为植株的潜在能力具有十分紧密的联系。

对于科学选种，快速预测种子的利用价值也具有重要的意义。

快速检测种子生活力的方法很多，但生产实验及植物生理实验中常用的主要有氯化三苯基四氮唑(TTC)法、溴麝香草酚蓝(BTB)法和红墨水染色法。

这三种方法都能快速测定种子的正常生理代功能是否受到损害，胚是否存活,以了解种子是否还具有发芽的潜力。

种子生活力（seed viability)是指种子的发芽潜在能力和种胚所具有的生命力，通常是指一批种子中具有生命力（即活的）种子数占种子总数的百分率。

早在1876年种子学的创始人Nobbe（德国）[1]就指出在同一批种子存在个体间发芽和幼苗生长速度的差异，并且不同种子批的平均值通常也不同。

他将这种现象称为生长力（triebkraft)，意为推动力（driving force）。

1950年在国际种子协会（ISTA）[1] [2]的年会上首次讨论了种子活力测定这一概念。

此次会议对发芽试验和幼苗活力的测定方法取得了一致意见：发芽试验一般应在无机发芽床上、适宜的条件下进行；而某些特殊试验，如土壤试验、砖砾试验则称为活力测定（Franck,1950）。

[2]尽管如此，长期以来对种子活力的定义仍不统一，因为种子活力不像发芽率那样是一个单一的质量指标，而是描述若干特性的概念，不同学者对于种子活力的定义仍然有分歧。

通过长达1/4世纪的争论，直到1977年，才在国际种子检验协会（ISTA）的代表大会上通过了种子活力的定义（Perry，1978)[2]，即“种子活力是决定种子或种子批在发芽和出苗期间的活性水平和行为的那些种子特性的综合表现。

种子表现良好的为高活力种子”[2]。

高活力种子具有生产优越性。

对于农业生产而言种子的好坏是其根本，保证种子的优良性的前提下才可能高产高收。

高活力的种子其出苗率更高，及时迅速的测得种子活力有利于选种，为提高产量打下前提。

高活力的种子其生命力更加顽强，抵御不良环境的能力也更强。

如遇到干旱，高活力种子适当深播，便可吸收足够的水分而萌动发芽，由于其储备了更丰富的营养物质，所以植株成活的可能性更大，而低活力种子则在深播情况下无力顶出土面更无足够的养分支撑其呼吸作用等新代活动。

又如在多雨或土壤私重的地区，土壤容易板结，高活力种子同样有足够力量顶出土面，而低活力种子则不能抵抗不良条件很难发芽。

高活力的种子对病虫害的抵御能力更强，具有更高的竞争力。

高活力的种子抗寒力更强，如一些需要早播的作物，高活力种子储备了更丰富的供其自身生长萌发的营养物质，故对早春低温条件具有抵抗能力，可适当提早播种。

早播对于提高产量增加收入有很重要的帮助。

在果蔬供应锐减的冬季或者早春，如果提前上市，明显可以大大增加收益。

增加作物产量高活力种子不仅可以全苗壮苗，且可提早和增加分靡及分枝，增加有效穗数和果枝，因而可以明显增产。

据美国对大豆、玉米、大麦、小麦、燕麦、芭、萝卜、黄瓜、南瓜、青椒、番茄、芦笋、蚕豆等14 种作物的统计资料，高活力种子可以增产20％-40％。

[3]对于叶菜类和根菜类等蔬菜作物及牧草作物，因为不必收获它们的种子，高活力种子长出幼苗及营养器官均较快速，增产作用则更为明显。

[7]1 材料与方法1.1 材料玉米种子（Zea maysL.）1.2 试验方法1.2.1 TTC法将随机购买的种子分四组编号后，在室温下浸泡4小时前处理，沿果实顶端约纵轴长度1/5处横切，使露出果实的四室，然后沿与纵轴成30°角斜切种子以暴露出种胚，放入盛有四氮唑溶液的培养皿中。

在20℃-30℃下染色，四氮唑的浓度分别为0.1%、1%两个水平（用磷酸缓冲液配制2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶液，pH 6.5-7.5），染色时间为15min。

染色后根据胚着色程度和部位鉴定种子的生活力，计算有生活力种子的百分率。

每个处理设1组重复，每次重复用50粒。

1.2.2红墨水染色法将随机购买的种子分四组编号后，每批随机分为两组，一组用沸水煮10min，作为空白对照（死种子），一组直接染色。

红墨水浓度为5%（1ml的红墨水加19ml的蒸馏水），染色时间分别为30min。

染色完毕后，用自来水冲洗5次，根据胚着色程度部位和空白对照来鉴定种子的生活力，计算有生活力种子的百分率。

每个处理设4次重复，每次重复用50粒。

1.2.3 BTB法随机购买的种子分四组编号后，每批随机分为两组，一组用沸水煮10min 至灭活，作为空白对照，一组浸泡于蒸馏水中12h。

然后分别把种子整齐的包埋于备好的0.1%的BTB琼脂凝胶中，在30℃恒温条件下，2h后观察种子周围出现的黄色晕圈情况，出现晕圈表明有活力。

每个浓度水平设1次重复，每次重复用50粒。

2 结果与分析2.1生活力的测定结果表明，生活力测定最佳条件为TTC浓度为1%，染色的最佳温度为30℃，时间为30min。

红墨水法最佳的染色条件为：30℃，染色0.5小时.采用BTB法得到的黄色晕圈比较明显，但死种子和活种子间没有显著性差异。

分别测得玉米种子的生活力见表2。

表1 同一生活力测定四次重复间的最大容许差距Table 1 life with activity assay four times the maximum allowed gap between repeated表2 四种检测玉米种子生活力的实验结果(％)Table 2 four detection of corn seed life force of the experimental results (%)2.2 结果表明：同一批种子所测得的种子生活力测定方法中以红墨水法高于TTC法。

3.结论与讨论通过对种子活力的概念、影响种子活力的因素和种子活力快速测定的相关文献的查阅及了解, 快速测定其活力的的三种方法即TTC法、BTB法及红墨水染色法原理及相关步骤的介绍和对比，可以看出三种方法对于种子活力的测定中实验材料的选择都具有一定局限性，如TTC法一般适用于收获后需马上播种的种子、具有深休眠的种子、发芽缓慢的种子等[10]，BTB 法则更适用于个头较大的种子[11]，红墨水染色法和TTC法选种的要求一样[9]TTC法与其他法比较，测定结果准确率比较高，并且能分辨出种子生活力的强弱。

但是价格昂贵，进口分装的TIC每l0 g一般要100—200元不等；TTC法除夏季不需要保温箱外，温度低于25℃时要放在温箱里保温一段时间。

[12]BTB法对于琼脂凝胶层软硬厚薄要求较高、琼脂浓度也要适当，否则测定结果偏低。

琼脂浓度过大过小都不适宜[13]，浓度过大则琼脂凝胶层较硬，种子插进去时凝胶层容易出现裂缝，呼吸放出的C02气体容易跑掉，这样会延长试验的时间；浓度过小则造成凝胶层稀软，不容易支撑起个头较大的种子，从而影响试验效果。

红墨水法：此方法不需要设备和特殊药品，此方法由于该染料市场上容易买到，价格便宜，且具有对种子的毒性小、染色速度快、染色后的废液对环境污染小等优点，所以是一种既经济环保，又简便易行的测定方法。

但是，由于红墨水法的原理是染料能进人种子的死细胞而使其着色，因此，若在试验中不小心划伤种子的表面，也会使其被染上色，使其值偏高。

从结果中可以看出，红墨水中染色的是没有生活力的胚分成有生活力和无生活力两类。

注意有些种子在种胚或种子，而TTC则与红墨水完全相反，染色的是有生活力的胚乳上呈现未着色斑色，表明是一些坏死的组织，判断这种子。

所以对每种种子的最终的种子生活力的测定则可以样的种子有无生活力的主要标准是看坏死组织的部位和以TTC中各种子的染色率为准。

需要注意的是由于种子是其大小。

而不一定在于颜色的深浅。

鉴定后分别记录，见随机选取以及人为操作和判断，所以各个重复间有一定的差异，这种情况是允许的。

[参考文献][1] 安平，瑞祥，亚丽.浅谈种子活力[J].种子科技，2009，7：1005-2690(2009)07-0017-02[2]阎富英.国外种子生活力和活力测定技术的最新进展[J].种子（seed），2005,24(6)[3] 豪，冉苇.保持和提高种子活力的研究进展[J]农业科学，2009，13(5)：50—52[4] 王建华，Wang Janghua.四唑(TTC)生活力测定法在种子科研、生产中的应用[J]种子世界（SEED WORLD），2001(z1)[5] 吕海忠，文欣，丹.浅析种子生活力的四唑测定[J]种子科技(SEED SCICENCE & TECHNOLOGY), 2009,27(10)[6] 景彦彪，JING Yan-biao,种子生活力的四唑测定在质检中的运用[J]种子科技(SEED SCIENCE & TECHNOLOGY), 2006,24(2)[7] 汪瀚宇，佳赢，项超，程程，浅谈种子活力的测定方法[J] NEW COUNTRYSIDE，2010(4)[8] 雪明，利用植物的药效反应鉴别千年桐的雌雄性[J] 经济林研究，1989，1：7[9] 建浩，吴永美，红墨水(酸性大红G)染色法测定大豆生活力[J] 农业技术与装备（AGRICULTURAL TECHNOLOGY & EQUIPMENT），2009(12)[10] 清，王伟，种子活力的快速测定[J]现代农业科技（XIANDAI NONGYE KEJI），2006(21)[11]亚丽，喜亭，Liu Yali，Zhao Xiting，测定种子生活力方法的比较与改进[J] 实验技术与管理（EXPERIMENTAL TECHNOLOGY AND MANAGEMENT），2011,28(1)[12]王丽红，几种常用检测玉米种子生活力的方法比较[J] 种子科技（Seed Science & Technology），2012,30(1)[13] Veasey E.A;M.G.Karasawa;P.P.Santos Variation in the Loss of Seed Dormancy during After-ripening ofWild and Cultivated Rice Species[外文期刊] 2004(94)[14]成雪峰，凤云，CHENG Xue-feng，ZHANG Feng-yun，种子检验技术的现状与展望[J] 种子（SEED），2009,28(8)。