pFGC5941植物表达载体

peaq-egfp植物表达载体

peaq-egfp植物表达载体
表达载体：
1.一般植物表达载体是成套使用的，一套中有两个，一个是带有可以供插入外源表达基因的MCS和筛选标签的融合蛋白（通常是GFP 或Gus）的普通载体。

另一个载体就是双元载体（binary-vector）了。

通常我们是先将外源基因插入带有筛选标记的载体，然后将此载体上的35S promoter-expression gene-gfp这段全部切下，然后构建亚克隆，其过程就是将上述的片断插入双元载体的LB和RB之间，其插入方向是可以任意的。

然后将带有35S promoter-expression gene-gfp的双元载体转化农杆菌，再通过农杆菌转染植物，最后可以通过农杆菌特有的ti-DNA转染机制，将双元载体的LB和RB之间的片段融合进宿主的基因组上。

我以前用的是pCAMBIA3101+pUC-35S-GFP以及pZPZ211和pAA等
2.双元表达载体系统主要包括两个部分
3.一部分为辅助Ti 质粒，这类Ti质粒由于缺失了T－DNA 区域，完全丧失了致瘤作用，主要是提供vir基因功能，vir基因能识别并切割LB、RB区域中的相应位点，激活处于反式位置上的T－DNA的转移。

4.另一部份是微型Ti质粒(Mini-Ti plasmid)，它在T－DNA左右边界序列之间提供植株选择标记如NPTII基因以及Lac Z基因等。

5.双元载体系统的构建的原理是Ti质粒上的vir基因可以反式激活T－DNA 的转移。

与共整合载体所不同的是，它不依赖两个质粒之间的同源序列，不需要共整合过程就能在农杆菌内独立复制。

6.外源DNA克隆到微型Ti质粒T－DNA 左右边界序列之间。

芸薹属ANR(BAN)基因家族RNA干扰载体的构建

芸薹属ANR(BAN)基因家族RNA干扰载体的构建摘要：花青素还原酶(ANR)是原花青素生物合成的关键酶，对种皮色素的积累起重要作用。

黄子是油莱的重要优质性状，但甘蓝型油菜中其基因型缺乏，表型不稳定，分子机理不清。

该实验克隆了芸薹属ANR基因家族的RNA干扰片段BANRI，将其反反片段、正义片段采用NcoI+AatII、BamHI+Xbal分别插入到改进型植物RNA干扰基础载体pFGC5941M的启动子与间隔区、间隔区与终止子之间，形成重组载体pFGC5941M—BANRI(简称为pBANRI)，复合PCR鉴定表明载体构建成功，并转化根癌农杆菌菌株LBA4404，获得工程菌株。

pBANRI 的构建有助于揭示芸薹属物种种皮色素合成的机理。

探索对油莱等植物种皮色素进行分子育种的可能性。

关键词：芸薹属；甘蓝型油菜；原花青素；ANR(BAN)；RNAi；载体芸薹属(Brassica)植物甘蓝型油菜(B.napus L.)是世界上重要的油料作物之一，与拟南芥(Arabidopsisthaliana)亲缘关系较近。

在相同遗传背景下，黄子油菜比黑子油菜具有种皮薄，出油量高，油和饼粕中色素、木质素含量低等优点，因此黄子性状是油菜遗传改良的一个重要目标。

甘蓝型油菜中不存在天然的黄子基因型，但通过远缘杂交培育的黄子甘蓝型油菜存在黄子表型欠稳定、一致性差的问题。

对拟南芥等植物的研究表明，主要种皮色素是原花青素(Proanthocvanidin.PA)，也叫缩合单宁。

PA经公共苯丙烷一核心类黄酮一原花青素复合途径而合成，先后涉及12个关键酶(PAL、C4H、4CL、CHS、CHI、F3H、F3，H、DFR、LDOXJANS、LAR、ANR、LAC)的催化反应和3种转运蛋白(GST、MATE、ATPase)的胞内转运，并有6种转录因子(WIP ZF、MYB、bHLH、WD40、WRKY、MADS)参与调控PA的合成与积累。

pfgc5941载体干扰原理

pfgc5941载体干扰原理pfgc5941载体可以通过转录后基因沉默的方式实现基因干扰。

在该干扰机制中，载体中的基因序列与目标基因的序列具有互补性，通过RNA依赖的RNA聚合酶（RdRP）介导的反向转录，将载体中的基因序列转录成双链RNA（dsRNA）。

这种dsRNA可以被核糖核酸内切酶（RNase III）切割成小片段，称为小干扰RNA（siRNA）。

siRNA 与RNA诱导靶向基因沉默复合体（RISC）结合，导致靶向基因mRNA 的降解或翻译抑制，从而实现基因沉默。

pfgc5941载体还可以通过RNA降解的方式实现基因干扰。

在该干扰机制中，载体中的基因序列与目标基因的序列具有互补性，通过RdRP介导的反向转录，产生dsRNA。

这种dsRNA被核糖核酸酶III （Dicer）切割成长度约为21-23个核苷酸的小片段，称为小干扰RNA（siRNA）。

siRNA与Argonaute蛋白等组成RNA诱导靶向RNA降解复合体（RdRNP）结合，导致靶向基因mRNA的降解。

pfgc5941载体的干扰原理已经被广泛应用于基因功能研究和基因治疗领域。

在基因功能研究中，通过设计合适的pfgc5941载体，可以实现对特定基因的沉默或降解，从而研究该基因的功能和作用机制。

这种方法可以帮助科学家们揭示基因在生物体内的重要作用，为疾病的研究提供重要线索。

在基因治疗领域，pfgc5941载体的干扰原理也被用于治疗一些遗传性疾病。

通过设计合适的pfgc5941载体，可以实现对病因基因的沉默或降解，从而达到治疗疾病的目的。

这种方法可以为一些无法通过传统药物治疗的疾病提供新的治疗策略。

pfgc5941载体通过转录后基因沉默和RNA降解两种方式实现基因干扰。

其干扰原理已经被广泛应用于基因功能研究和基因治疗领域。

通过合理设计pfgc5941载体，可以实现对特定基因的沉默或降解，从而揭示基因的功能和作用机制，为疾病的研究和治疗提供新的思路和方法。

黄瓜bZIP_基因家族鉴定及功能分析

中国瓜菜2023，36（4）：26-36黄瓜bZIP 基因家族鉴定及功能分析范鹏飞，赵丽君，王月玲，许娜娜，胡瑞坤，陈明月，张梦瑶，杨路明，杨森（河南农业大学园艺学院郑州450002）摘要：为研究bZIP 家族基因在黄瓜表皮毛发育过程中的功能，利用生物信息学方法对黄瓜bZIP 家族基因进行全基因组鉴定、染色体定位、系统进化分析、基序分析和结构域预测，并结合转录组分析和拟南芥异源转化，筛选与黄瓜表皮毛发育相关的基因。

结果表明，黄瓜全基因组编码75个bZIP 家族成员，不均等地分布在黄瓜的7条染色体上。

该家族成员分为10个亚家族，各亚族成员具有相似的基因结构和保守基序。

其中，对4个差异表达的bZIP 基因CsaV3_7G003290、CsaV3_4G004890、CsaV3_2G031960和CsaV3_3G046530的拟南芥同源基因突变体表型观察发现，Atbzip47和Atbzip56拟南芥突变体茎秆处表皮毛数量显著减少。

将CsaV3_2G031960和CsaV3_3G046530基因在Atbzip56突变体中进行异源转化，回补了Atbzip56突变体的表型。

此结果为进一步解析CsbZIPs 基因成员在黄瓜表皮毛发育中的功能和调控路径提供了参考。

关键词：黄瓜；bZIP 基因家族；家族分析；表皮毛发育中图分类号：S642.2文献标志码：A文章编号：1673-2871（2023）04-026-011Identification and preliminary explorating function of cucumber bZIP gene familyFAN Pengfei,ZHAO Lijun,WANG Yueling,XU Na na,HU Ruikun,CHEN Mingyue,ZHANG Meng-yao,YANG Luming,YANG Sen（Horticulture College of Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,Henan,China ）Abstract:The purpose of this study was to understand the roles of bZIP family genes during trichome development in cucumber,The genome-wide identification,chromosomal localization analysis,phylogenetic tree analysis,conserved sequence analysis,motif analysis and structure domain prediction of bZIP family genes were performed using bioinformatics methods,and combined with transcriptome analysis and Arabidopsis heterotransformation to screen genes associated with cucumber trichome development.The results showed that the cucumber genome encodes 75members of the bZIP family,these members were unevenly distributed on nine chromosomes.These members were divided into 10subfamilies,and the same subfamily shared the similar genetic structures and conserved motifs.The phenotypic observation of the Arabidopsis homologous gene mutants of four differentially expressed bZIP genes CsaV3_7G003290,CsaV3_4G004890,CsaV3_2G031960and CsaV3_3G046530,the number of trichome on the stem of Atbzip47and Atbzip56Ara-bidopsis mutants was significantly reduced.Heterologous transformation of CsaV3_2G031960and CsaV3_3G046530gene in Atbzip56mutant complements the phenotype of Atbzip56mutant.This result provides a reference for further understanding the function and regulation pathway of CsbZIPs gene members in cucumber trichome development.Key words:Cucumber;bZIP gene family;Family analysis;Trichome development收稿日期：2023-01-11；修回日期：2023-03-09基金项目：国家自然科学基金（31902020）作者简介：范鹏飞，男，在读硕士研究生，研究方向为蔬菜遗传育种。

(完整版)所有质粒载体汇总,推荐文档

酿酒酵母表达载体pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP,酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF，pY15TEF，pY16TEF,酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47,酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424, 酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109；质粒pGADT7,pGBKT7；对照质粒pGBKT7-53，pGBKT7-lam，pGADT7-T，PCL1，酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,Y187,Y190,毕赤酵母表达载体pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZαA,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPink hc，配套毕赤酵母Pichiapink,毕赤酵母宿主X33，KM71，KM71H，GS115，原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括pET系列，pET-GST，pGEX系列（含GST标签），pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis系列，pQE系列,pTrc99a,pTrcHis系列，pBV220,221,222,pTXB系列，pLLP-ompA,pIN-III-ompA （分泌型表达系列）,pQBI63（原核表达带荧光）pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49b pET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9 pQE30,31,32, pQE 40 pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-C pGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPinPoint-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1, pGEM7ZF（+）, pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk233-3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK （+）,pBlueScript SK（-）pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质粒： pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒：pACYCduet-1,pETduet-1,pCDFduet-1，pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣： pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞： DH5a JM101 JM103JM105 JM107 JM109 JM110 Top10 Top10F BL21（DE3）HB101 ER2529 E2566 C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21（AI）BL21（DE3）plysS TG1 TB1 DH5a（pir）Tuner（DE3）Bl21 codonplusRIPL Novablue （DE3）Rosetta Rosetta（DE3）Rosetta（DE3）plys Rosetta-gami（DE3）Rosetta-gamiB（DE3）, Rosetta-gamiB（DE3）plysS Orgami（DE3）OrgamiB（DE3）HMS174（DE3）植物表达/RNAi载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301,pUN1301,pRTL2 , pRTL2-GFP , pRTL2-CFP, pRTL2-RFP , pRTL2-YFP,pCAMBIA 1300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z,1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIA super1300,pCAMBIAsuper1300-GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RNAi载体pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2,T-DNA插入载体（随机突变体库）pSKI015,pSKI074,真菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1枯草芽孢杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43,pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5, pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK,pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641,pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01，配套菌株BS 168,WB600,WB800,WB700,WB800N,1012,FZB42,1A747,广宿主质粒pVLT33RNAi基因沉默干扰敲除载体pSilencer1.0，pSilencer 2.1-U6 hygro， pSilencer 3.1-H1 hygro，pSilencer 3.1-H1 neo， pSilencer 4.1-CMV neo， pSilencer 4.1-CMV puro pMIR-REPORT Luciferase RNAi载体（oligoengine）pSuper-puro RNAi逆转录病毒载体（clontech）: RNAi-Ready pSIREN-Retro Q， RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-ZsGreen（Luciferase shRNA Annealed Oligonucleotide）RNAi慢病毒载体（addgene）: pLKO.1哺乳动物表达载体pcDNA3.1+/-,pcDNA4/HisMax B，pSecTag2 A，pVAX1，pBudCE4.1,pTracer CMV2，pcDNA3.1（-）/myc-His A ，pcDNA6-Myc/His B，pCEP4， pIRES，pIRESneo，pIRES hyg3，pCMV-myc，pCMV-HA，pIRES-puro3，pIRES-neo3,pCAGGS哺乳动物双杂交系统pACT，pBIND，pACT-MyoD，pBIND-Id，pG5luc,pCMV-BD, pCMV-AD, pBD-p53, pFR-luc,Cytotrap Two-Hybrid System:pSos, pSos MAFB, pMyr蜕皮激素诱导系统pIND, pVgRxR,LacSwith II哺乳动物诱导表达系统:pOPRSVI ，pOPI3CAT，pCMVLacI,GeneSwitch System:pSwitch哺乳动物表面展示系统:pDisplay, 四环素调控系统（Invitrogen）：pcDNA4/TO/Myc-His A，pcDNA4/TO/Myc-His B，pcDNA4/TO/Myc-His C，pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ，pcDNA6/TR四环素调控系统（Clontech）：pTet-On，pTet-Off，pTRE2,pRevTRE，pRevTet-On，pRevTet-off信号通路报告载体:pGAS-TA-Luc，pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc，pIκB-EGFP，pNFAT-TA-Luc，pCaspase3-sensor，pAP1（PMA）-Luc;pGL4.26[luc2P/minP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.30[luc2P/NFA T-RE/Hygro]，pGL4.75;p53-Luc，pAP-1-Luc， pNF-κB-Luc，pSRE-Luc，pFA2-Elk1，pFC-MEKK，pFR-luc,Gateway系统（invitrogen）pcDNA6.2-GWEmGFP-miR negative, pLenti 6/TR,pcDNA 6.2-GW EmGFP-miR，乳酸菌表达载体及各种乳酸菌乳酸杆菌菌株，pNZ8148,pLEISS,pMG36e,pBBR1MCS-5,pBBR1MCS-6,pRV610,pLEM415,pHY3 00PLK,分泌型乳酸菌表达载体pVE5523，pPG611.1,pPG612.1等和乳酸杆菌菌株宿主菌NZ9000,MG1363,Lactobacillus casei 1.539,Lactobacillus casei,acidophilus NCFM,1.2,Lactobacillus sakei 23K,L.plantarum,L.rhamnosusGG,B.coagulans,Bifidobacterium bifidum,Bifidobacterium infantis,Lactococcus lactis M17,1663,Lactobacillus reuterii广宿主表达载体链球菌表达敲除载体假单胞菌表达载体pVLT33,pBBR1MCS-2,3,4,5,6, pJRD215,pJN105,pME6032,Cos载体pLAFR3,pMP2444（GFP）, pHY300PLK,pRT102,pRL1063a, 转座子载体pUT-miniTn5,pMGS100, pWHM10,pKC1139,pSET152,pOJ260,pPG611.1,pPG612.1，腺病毒载体/慢病毒，逆转录病毒表达载体及包装包膜质粒，腺病毒系统（Stratagene）: pAdEasy-1,pShuttle-CMV,pShuttle,pAdTrack, pAdTrack-CMV, pShuttle-IRES-hrGFP-1、pShuttle-IRES-hrGFP-2、pShuttle-CMV-lacZ,pShuttle-CMV-EGFP-C,pXC1, pBHGE3, 配套大肠杆菌BJ5183,293,293T cellline 腺相关病毒系统（Stratagene）： pAAV-MCS，pAAV-RC，pHelper，pAAV-LacZ，pAAV-IRES-hrGFP，pCMV-MCS，慢病毒载体:pLVX-DsRed-Monomer-N1,pLVX-IRES-ZsGreen1,pLVX-AcGFP1-N1,Lenti6/v 5-EDST-EGFP,pWPXL, FUGW,pLentilox 3.7,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q-ZsGreen,pSUPER.Retro-GFP/Neo,pSUPER-Retro-Neo, pSUPER.Retro-puro,PLNCX PLNCX2 pMSCV-HYG pMSCV-neo pMSCV-puro pLEGFP-C1 pLOX-CW-CRE pLOX-GFP-IRES-TK pRetroX-IRES-DsRedExpress, pLVX-IRES-mCherry质粒载体。

所有质粒载体汇总

pEZZ18 pkk232-8,pkk 233-3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK（+）,pBlueScript SK（-） pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质粒： pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒：pACYCduet1,pETduet-1,pCDFduet-1，pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣： pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞： DH5a JM101 JM103 JM105 JM107 JM109 JM110 Top10 Top10F BL21（DE3） HB101 ER2529 E2566 C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21（AI） BL21（DE3）plysS TG1 TB1 DH5a（pir） Tuner（DE3） Bl21 codonplusRIPL Novablue（DE3） Rosetta Rosetta（DE3） Rosetta（DE3）plys Rosetta-gami（DE3） RosettagamiB（DE3）, Rosetta-gamiB（DE3）plysS Orgami（DE3） OrgamiB（DE3） HMS174（DE3）植物表达/RNAi载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301, pUN1301,pRTL2 , pRTL2-GFP , pRTL2-CFP, pRTL2-RFP , pRTL2YFP,pCAMBIA 1300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z,1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIA super1300,pCAMBIA super1300GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RNAi载体pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2, T-DNA插入载体（随机突变体库）pSKI015,pSKI074,真菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1 枯草芽孢杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43, pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5, pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK, pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641, pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01，配套菌株BS 168,WB600,WB800,WB700, WB800N,1012,FZB42,1A747,广宿主质粒pVLT33

载体图谱

一、pGADT7(Amp)酵母表达载体(AD-Amp)AD forward primer: 5'-TAATACGACTCACTATAGGGC-3'AD reverse primer: 5'-AGATGGTGCACGATGCACAG-3'F：GC AT CGA TAC ATG GC T TG T GCTACTCTGAR：GGCC GGATCC TTAAGAGAGGTAGCTGGGAGAD forward primer: 5'-TAATACGACTCACTATAGGGC-3'AD reverse primer: 5'-AGATGGTGCACGATGCACAG-3'二、pGBKT7(Kan0酵母表达载体(BD-Kan)三、BIFC(Kan)验证互做蛋白表达载体（德国）四、pGR107(Kan)表达载体（PVX-10kb）吴建国MCS:ClaI/SmaI/SalI(pgR107)MCS:ClaI/AscI/NotI/SalI(pgR106) 五、BIFC(Amp)载体（美国）3075（nEYFP-329bp）3076 (cEYFP-218bp)F：GGC GAATTC ATG GCTTGTGCTACTCTGA R：GGC CCTAGG AGAGAGGTAGCTGGGAG TAA TAG TGA六、RNAI(Kan)载体-pFGC5941（王宗华）七、pGEX-4T-1(Amp)原核表达载体八：pET-29a(Kan)原核表达载体九、. pEGAD(Kan)植物表达载体*XbaⅠ cleavage blocked by overlapping dam methylation. Must grow in dam-strain to cut. Note, XhoⅠ is not unique.pTRV2(a) Genome organization of TRV. The TRV-RNA1 open reading frames (ORFs) correspond to 134 and 194 kDa replicase, movement protein (MP) and a 16-kDa cysteine-rich protein. The TRV-RNA2 ORFs corresponds to coat protein (CP), and the 29.4 and 32.8 kDa proteins. gRNA, genomic RNA; sgRNA, subgenomic RNA. Asterisks (*) indicate the readthrough of 134 kDa protein.(b) TRV based VIGS vectors. TRV cDNA clones were placed in betweenthe duplicated CaMV 35S promoter (2×35S) and the nopaline synthase terminator (NOSt) in a T-DNA vector. LB and RB refer to left and right borders of T-DNA. Rz, self-cleaving ribozyme. MCS, multiple cloning sites.十、十一、1103-YFP十二：pBINPLUS十三、pBin438。

pFGC5941植物表达载体pFGC5941编号载体名称北京华越洋生物VECT0360 pFGC5941pFGC5941载体基本信息出品公司: --‐--‐载体名称: pFGC5941质粒类型: 植物表达载体；植物干扰载体高拷贝/低拷贝: --‐--‐启动子: --‐--‐克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 11405 b p 5' 测序引物及序列: --‐--‐3' 测序引物及序列: --‐--‐载体标签: --‐--‐载体抗性: 羧苄西林筛选标记: --‐--‐备注: --‐--‐产品目录号: --‐--‐稳定性: --‐--‐组成型: --‐--‐病毒/非病毒: --‐--‐载体质粒图谱和多克隆位点信息其他植物载体质粒：pBI101 pDF15pBI121 pEarleyGate 100pBI221 pEarleyGate 101pBI221--‐GFP pEarleyGate 102 pBin19 pEarleyGate 103 pBINPLUS pEarleyGate 104 pCambia0105.1R pEarleyGate 201 pCambia0305.1 pEarleyGate 202 pCambia0305.2 pEarleyGate 203 pCambia0380 pEarleyGate 204 pCambia0390 pEarleyGate 205pCambia1105.1 pEarleyGate 301pCambia1105.1R pEarleyGate 302 pCambia1200 pEarleyGate 303 pCambia1201 pEarleyGate 304 pCambia1281Z pFGC5941 pCambia1291Z pGA643 pCambia1300 pGreen pCambia1300GFP pGreen 0029 pCambia1301 pGreen0029 pCambia1302 pGreen029 pCambia1303 pGreenII pCambia1304 pGreenII 0049 pCambia1305.1 pGreenII 0179 pCambia1305.2 pGreenII 0229 pCambia1380 pGreenII 0579 pCambia1381 pHANNIBAL pCambia1381Xa pHELLSGATE pCambia1381Xb pHELLSGATE 12 pCambia1381Xc pHELLSGATE 4 pCambia1381Z pHELLSGATE 8 pCambia1390 pKANNIBAL pCambia1391 pPZP100 pCambia1391Xa pPZP101 pCambia1391Xb pPZP102 pCambia1391Xc pPZP111 pCambia1391Z pPZP112 pCambia2200 pPZP121 pCambia2201 pPZP122 pCambia2300 pPZP200 pCambia2301 pPZP201 pCambia2301--‐101 pPZP202 pCambia3200 pPZP211 pCambia3201 pPZP212 pCambia3300 pPZP221 pCambia3301 pPZP222 pCambia35s--‐ECFP pPZp--‐RCS2--‐Bar pCambia35s--‐EGFP pRI 101--‐AN pCambia35s--‐EYFP pRI 101--‐ON pCambia5105 pRI 201--‐AN pSB1 pRI 201--‐ON pSB11 pRI 909 pSoup pRI 910 pSPYCE(MR) pRI101 pTCK303 pSAT1--‐cCFP--‐C Super1300 pSAT1--‐cCFP--‐NpSAT6nCeruleanC(A+) pSAT4--‐nVenus--‐C。

pFGC5941的改造及芸薹属透明种皮1基因(TT1)家族RNA干扰载体构建

基因第２内含子（ｎＡ２２的新型间隔区取代了ＢＰＰ１）
ｐＧ５４ＦＣ９１的原有ＰＣｓ间隔区，并在新间隔区与启动子之间的多克隆位点处新增了一个ＡａＩ切点，ｈｈＡｔＩ改进后的载体取名为ｐＧ９１ＦＣ５４Ｍ。克隆了芸薹属透明种皮ＩＴ１基因家族Ｒ（Ｔ）ＮＡ干扰片段Ｂ册Ｉ，其反义将
癌农杆菌（ｇｏａｔｒｍｔｍｆｃｎ）Ｂ４０ＡｒｂｃｅｉｅｉｓＬＡ４４后获得工程菌株。ｐＴ１Ｉ的构建有助于揭示芸薹属种皮发ｕｕａｅＢＴ
育和种皮色素积累的机理和探索黄籽性状分子育种。关键词芸薹属，甘蓝型油菜，明种皮１Ｔ１，ＮＡｉ载体透（Ｔ）Ｒ，
研究资源
Ｒｅｏｒｅｓｕｃｓ
ｐＧ５４的改造及芸薹属透明种皮１因（）ＦＣ９１基刑家族ＲＮＡ干扰载体构建
马丽娟冯瑜江丽萍申敏柴友荣
西南大学农学与生物科技学院，农业部生物技术与作物品质改良重点实验室，重庆市作物品质改良重点实验室，重庆市油菜工程技术研究
ＭａｉａＦｎＪｎｉｉｇＳｅｎｈｉｕｏｇｊｎｅｇＬｕＹｕｉｇｐｎｈｎＭｉＣａＹｏｒｎａＬ
ＣｏｇｉｇＲｐｓｅｅｈｏｏｙＲｓａｃｅｔ；ｈｎｑｎｙＬｂｒｔｒｆｒｐＱａｉｒｖｍｅｔＫｙＬｂｒｔｒｆＢｏｅｌｌｇ＆ｈｎｑｎａｅｅｄＴｃｎｌｇｅｅｒｈＣｎｅＣｏｇｉｇＫｅａｏａｏｙｏｏｕｌｙＩｏｅｎ；ｅａｏａｙｏｉｔｍｏｏｒＣｔｍｐｏｃｙ

所有质粒载体汇总

酿酒酵母表达载体pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP,酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF，pY15TEF，pY16TEF,酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47,酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424, 酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109；质粒pGADT7,pGBKT7；对照质粒pGBKT7-53，pGBKT7-lam，pGADT7-T，PCL1，酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,Y187,Y190,毕赤酵母表达载体pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZαA,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPink hc，配套毕赤酵母Pichiapink,毕赤酵母宿主X33，KM71，KM71H，GS115，原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括pET系列，pET-GST，pGEX系列（含GST标签），pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis系列，pQE系列,pTrc99a,pTrcHis系列，pBV220,221,222,pTXB系列，pLLP-ompA,pIN-III-ompA （分泌型表达系列）,pQBI63（原核表达带荧光）pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49b pET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9 pQE30,31,32, pQE 40 pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-C pGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPinPoint-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1, pGEM7ZF（+）, pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk233-3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK （+）,pBlueScript SK（-）pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质粒： pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒：pACYCduet-1,pETduet-1,pCDFduet-1，pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣： pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞： DH5a JM101 JM103JM105 JM107 JM109 JM110 Top10 Top10F BL21（DE3）HB101 ER2529 E2566 C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21（AI）BL21（DE3）plysS TG1 TB1 DH5a（pir）Tuner（DE3）Bl21 codonplusRIPL Novablue （DE3）Rosetta Rosetta（DE3）Rosetta（DE3）plys Rosetta-gami（DE3）Rosetta-gamiB（DE3）, Rosetta-gamiB（DE3）plysS Orgami（DE3）OrgamiB（DE3）HMS174（DE3）植物表达/RNAi载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301,pUN1301,pRTL2 , pRTL2-GFP , pRTL2-CFP, pRTL2-RFP , pRTL2-YFP,pCAMBIA 1300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z,1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIA super1300,pCAMBIAsuper1300-GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RNAi载体pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2,T-DNA插入载体（随机突变体库）pSKI015,pSKI074,真菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1枯草芽孢杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43,pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5, pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK,pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641,pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01，配套菌株BS 168,WB600,WB800,WB700,WB800N,1012,FZB42,1A747,广宿主质粒pVLT33RNAi基因沉默干扰敲除载体pSilencer1.0，pSilencer 2.1-U6 hygro， pSilencer 3.1-H1 hygro，pSilencer 3.1-H1 neo， pSilencer 4.1-CMV neo， pSilencer 4.1-CMV puro pMIR-REPORT Luciferase RNAi载体（oligoengine）pSuper-puro RNAi逆转录病毒载体（clontech）: RNAi-Ready pSIREN-Retro Q， RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-ZsGreen（Luciferase shRNA Annealed Oligonucleotide）RNAi慢病毒载体（addgene）: pLKO.1哺乳动物表达载体pcDNA3.1+/-,pcDNA4/HisMax B，pSecTag2 A，pVAX1，pBudCE4.1,pTracer CMV2，pcDNA3.1（-）/myc-His A ，pcDNA6-Myc/His B，pCEP4， pIRES，pIRESneo，pIRES hyg3，pCMV-myc，pCMV-HA，pIRES-puro3，pIRES-neo3,pCAGGS哺乳动物双杂交系统pACT，pBIND，pACT-MyoD，pBIND-Id，pG5luc,pCMV-BD, pCMV-AD, pBD-p53, pFR-luc,Cytotrap Two-Hybrid System:pSos, pSos MAFB, pMyr蜕皮激素诱导系统pIND, pVgRxR,LacSwith II哺乳动物诱导表达系统:pOPRSVI ，pOPI3CAT，pCMVLacI,GeneSwitch System:pSwitch哺乳动物表面展示系统:pDisplay, 四环素调控系统（Invitrogen）：pcDNA4/TO/Myc-His A，pcDNA4/TO/Myc-His B，pcDNA4/TO/Myc-His C，pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ，pcDNA6/TR四环素调控系统（Clontech）：pTet-On，pTet-Off，pTRE2,pRevTRE，pRevTet-On，pRevTet-off信号通路报告载体:pGAS-TA-Luc，pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc，pIκB-EGFP，pNFAT-TA-Luc，pCaspase3-sensor，pAP1（PMA）-Luc;pGL4.26[luc2P/minP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.30[luc2P/NFA T-RE/Hygro]，pGL4.75;p53-Luc，pAP-1-Luc， pNF-κB-Luc，pSRE-Luc，pFA2-Elk1，pFC-MEKK，pFR-luc,Gateway系统（invitrogen）pcDNA6.2-GWEmGFP-miR negative, pLenti 6/TR,pcDNA 6.2-GW EmGFP-miR，乳酸菌表达载体及各种乳酸菌乳酸杆菌菌株，pNZ8148,pLEISS,pMG36e,pBBR1MCS-5,pBBR1MCS-6,pRV610,pLEM415,pHY3 00PLK,分泌型乳酸菌表达载体pVE5523，pPG611.1,pPG612.1等和乳酸杆菌菌株宿主菌NZ9000,MG1363,Lactobacillus casei 1.539,Lactobacillus casei,acidophilus NCFM,1.2,Lactobacillus sakei 23K,L.plantarum,L.rhamnosusGG,B.coagulans,Bifidobacterium bifidum,Bifidobacterium infantis,Lactococcus lactis M17,1663,Lactobacillus reuterii广宿主表达载体链球菌表达敲除载体假单胞菌表达载体pVLT33,pBBR1MCS-2,3,4,5,6, pJRD215,pJN105,pME6032,Cos载体pLAFR3,pMP2444（GFP）, pHY300PLK,pRT102,pRL1063a, 转座子载体pUT-miniTn5,pMGS100, pWHM10,pKC1139,pSET152,pOJ260,pPG611.1,pPG612.1，腺病毒载体/慢病毒，逆转录病毒表达载体及包装包膜质粒，腺病毒系统（Stratagene）: pAdEasy-1,pShuttle-CMV,pShuttle,pAdTrack, pAdTrack-CMV, pShuttle-IRES-hrGFP-1、pShuttle-IRES-hrGFP-2、pShuttle-CMV-lacZ,pShuttle-CMV-EGFP-C,pXC1, pBHGE3, 配套大肠杆菌BJ5183,293,293T cellline 腺相关病毒系统（Stratagene）： pAAV-MCS，pAAV-RC，pHelper，pAAV-LacZ，pAAV-IRES-hrGFP，pCMV-MCS，慢病毒载体:pLVX-DsRed-Monomer-N1,pLVX-IRES-ZsGreen1,pLVX-AcGFP1-N1,Lenti6/v 5-EDST-EGFP,pWPXL, FUGW,pLentilox 3.7,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q-ZsGreen,pSUPER.Retro-GFP/Neo,pSUPER-Retro-Neo, pSUPER.Retro-puro,PLNCX PLNCX2 pMSCV-HYG pMSCV-neo pMSCV-puro pLEGFP-C1 pLOX-CW-CRE pLOX-GFP-IRES-TK pRetroX-IRES-DsRedExpress, pLVX-IRES-mCherry质粒载体。

水稻OsNCED3基因的RNAi载体构建

水稻OsNCED3基因的RNAi载体构建冯光秀;陈惠【摘要】OsNCED3 gene is an important gene during stress tolerance. The genomic DNA was isolated from the seedings of Oryza sati-υa "zhonghua NO. 10. " The specific genomic DNA segment was chosen, the restriction site was inserted, the genomic DNA was used as a template for KNAi-0sNCED3 cis-and trans fragments of PCR amplification. The PCR amplification fragments was connected to the pMD19 - T vectors and sequenced after restriction enzyme digestion and PCR. The sequencing results showed that RNAi-OsNCED3 cis-and trans fragments were correctly connected to the pMD19 - T vectors. The RNAi-OsNCED3 cis-and trans-fragment was digested by restriction enzyme and connected to the plasmid pFGC5941with a hairpin structure. PCR and double digestion verification showed that constructed pFGC5941-OsNCED3 vector (KNAi-0sNCED3) structural integrity.%水稻OsNCED3基因是水稻抗逆过程中重要的基因之一.以水稻中花10号幼苗为材料,提取基因组DNA.设计引物扩增区段cDNA 并引入相应的酶切位点,以基因组DNA作为模板,进行RNAi-OsNCED3顺式和反式目的片段的PCR扩增.将PCR产物连接到pMD19-T载体上,经酶切和PCR检测后进行测序.测序结果表明:RNAi-OsNCED3顺式和反式目的片段均已正确的连接到pMD19-T载体上.然后将RNAi-OsNCED3顺式和反式目的片段通过酶切和连接,连接到含有发夹结构的质粒pFGC5941上.PCR及双酶切结果显示,构建的pFGC5941-OsNCED3即RNAi-OsNCED3载体结构完整.【期刊名称】《生物学杂志》【年(卷),期】2012(029)001【总页数】5页(P47-50,58)【关键词】水稻;RNAi;OsNCED3;pFGC5941【作者】冯光秀;陈惠【作者单位】山西师范大学,生命科学学院植物生理实验室,山西临汾,041000;山西师范大学,生命科学学院植物生理实验室,山西临汾,041000【正文语种】中文【中图分类】Q782;Q943.2脱落酸(abscisic acid，ABA)是植物体内存在的一种重要的具有半萜结构的植物内源激素。

DOF转录因子AtDof1.7 RNA干扰载体的构建及拟南芥的遗传转化

作物学报ACTA AGRONOMICA SINICA 2011, 37(7): 1196−1204/zwxb/ ISSN 0496-3490; CODEN TSHPA9E-mail: xbzw@DOI: 10.3724/SP.J.1006.2011.01196DOF转录因子AtDof1.7 RNA干扰载体的构建及拟南芥的遗传转化尹明智官梅肖钢李栒官春云*湖南农业大学油料作物研究所 / 国家油料作物改良中心湖南分中心, 湖南长沙 410128摘要: DOF (DNA binding with one finger)转录因子是植物特有的转录因子家族, 含有一个独特的富含Cys残基的单锌指DNA结合区域, 在植物生长发育中参与多种生物学过程。

本研究根据拟南芥AtDof1.7基因(GenBank登录号为AT1G51700)序列设计含有不同酶切位点的特异性扩增引物, 以拟南芥总DNA为模板, 扩增AtDof1.7基因片段, 将AtDof1.7基因正向反向分别插入表达载体的相应位置, 构建成AtDof1.7基因的RNA干扰载体pADOF1。

利用改良的floral-dip方法将干扰载体pADOF1成功转入野生型拟南芥, 经草甘膦抗性筛选和PCR检测获得5株阳性转基因植株。

利用RT-PCR技术和气相色谱法分别分析了AtDof1.7基因的表达和种子脂肪酸组成, 结果表明, 5株转基因植株中AtDof1.7基因的表达量不同程度低于野生型植株, 种子油酸含量明显上升, 亚麻酸含量明显下降, 说明AtDof1.7转录因子与拟南芥种子脂肪酸代谢途径有一定的关系, 为进一步研究其在脂肪酸代谢过程中的调控作用以及在油菜中研究该类转录因子的功能奠定了基础。

关键词: DOF转录因子; AtDof1.7; 拟南芥; RNA干扰载体; 脂肪酸代谢途径RNAi Vector Construction of AtDof1.7 Transcription Factors and Genetic Transformation into Arabidopsis thalianaYIN Ming-Zhi, GUAN Mei, XIAO Gang, LI Xun, and GUAN Chun-Yun*Oilseed Crops Institute / National Oil Crops Improvement Center, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, ChinaAbstract: The DOF (DNA binding with one finger) transcription factors are members of a family of plant-specific transcription factors that have a highly conserved DNA-binding domain, namely Dof domain which contains a single C2C2-type zinc-finger- like motif and specifically recognizes an (A/T)AAAG sequence as the recognition core. It suggests that the Dof transcription fac-tors play diverse roles in specific biological processes in plants. Members of this protein family in plants are found to be involvedin the gene regulation of many processes, but the roles in fatty acid metabolism are rarely reported. To investigate whether At-Dof1.7 Dof transcription factor can regulate fatty acid metabolism, on the basis of the sequence of AtDof1.7 (GenBank accession No. AT1G51700), we designed the specific primer containing different enzyme sites. With the template of Arabidopsis thaliana DNA, the AtDof1.7 gene fragment was isolated, which was inserted into the expression vector by forward and reverse ways re-spectively. The RNA interference vector of pADOF1 containing AtDof1.7 gene fragment was constructed. Using floral-dip method, pADOF1 was successfully transformed into wide-type Arabidopsis thaliana. Glyphosate resistance screening and PCR detection showed that five positive transgenic plants were obtained. The result of RT-PCR showed that transgenic plants had lower expression level of AtDof1.7 gene than the wild type. Fatty acid content was analyzed by gas chromatography which showed that the content of oleic acid increased and the content of linolenic acid decreased drastically in each transgenic plant compared with wide-type plants. These results indicated that AtDof1.7 transcription factor has certain relation with fatty acid metabolic pathwayin Arabidopsis thaliana seed which provides a good foundation for further study on the function of AtDof1.7 transcription factorin fatty acid metabolic regulation.Keywords: DOF transcription factors; AtDof1.7; Arabidopsis thaliana; RNA interference vector; Fatty acid metabolic pathway本研究由国家重点基础研究计划(973计划)项目(2006CB101600)资助。