凝胶电泳操作注意事项

凝胶电泳操作注意事项

琼脂糖：不同品牌琼脂糖的纯度和质量有较大的差异，对琼脂糖电泳的效果影响很大，建议在实验中使用品质稳定的琼脂糖。

凝胶的制备：凝胶制备用缓冲液应与电泳缓冲液一致，确保凝胶充分融化，制胶过程中要尽量避免产生气泡，凝胶需充分凝固但不宜放置时间过长，可根据实验环境适当调节以确保电泳效果。

DNA凝胶的浓度：不同分子量的 片段应选择适宜的凝胶浓度来进行分离。

电泳缓冲液：电泳缓冲液应经常更换，确保电泳环境清洁和保持电泳所需的离子强度和pH值。

电泳样品：PCR样品最好在24h内进行电泳，回收样品应尽量缩短在紫外光下的照射时间，提取的DNA样品在电泳前须去除蛋白和多余的盐分。

电泳样品上样量：各样品的上样量应基本一致，上样量过多可能导致上样孔超载，出现条带拖尾，上样量太少不足以铺满孔底会导致条带亮度不均匀。

电泳时的电压：电泳时应根据电泳槽、凝胶浓度和所分离样品的片段大小选择合适的电压，最大电压不宜超过20V/cm，温度<30℃，大分子量DNA电泳，温度<15℃