《分子生物学检验技术》基本知识点

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临床分子生物学检验技术

04
优势：快速、准确、灵敏度高
05
局限性：成本高、技术要求高、需要专业人员操作
遗传病诊断
基因检测：通过基因测序技术，检测遗传病相关基因突变
产前诊断：通过基因检测，评估胎儿遗传病风险，指导优生优育
遗传咨询：根据基因检测结果，提供遗传病风险评估和预防建议
药物治疗：根据基因检测结果，制定个性化的药物治疗方案
04 跨界合作：与其他领域的技术相结合，如人工智能、大数据等，为分子生物学检验技术带来更多的市场机遇。
汇报人：xxx
液体活检技术的发展：通过血液样本检测肿瘤细胞，提高了肿瘤检测
的准确性和便捷性
生物芯片技术的应用：用于基因表达分析、基因分型等，提高了检测效率和准确性
单细胞测序技术的发展：实现了对单个细胞的基因表达分析，提高了检
测的灵敏度和分辨率
基因编辑技术的发展： CRISPR/Cas9等基因编辑技术的出现，为基因治疗提供了新的可能
市场前景与机遇
01 市场需求：随着人们对健康重视程度的提高，分子生物学检验技术在医疗领域的应用将越来越广泛。
02 技术进步：随着分子生物学技术的不断发展，检验技术将更加精准、高效，为市场带来更多机遇。
03 政策支持：政府对医疗领域的投入加大，为分子生物学检验技术的发展提供了有利的政策环境。
生物学与工程学的融合：分子生物学检验技术需要利用工程学原理和方法，如微流控芯片、纳米材料等，进行生物大分子的检测和分析。
技术瓶颈与难题
技术难度：分子生物学检验技术涉及多个学科，技术难度较大
成本问题：分子生物学检验技术成本较高，难以普及
检测准确性：分子生物学检验技术检测准确性有待提高

分子生物学检验技术复习题与答案

分子生物学检验技术复习题与答案一、单选题（共80题，每题1分，共80分）1、世界上首次用已经分化成熟的体细胞核通过克隆技术培育的动物是A、克隆猪B、克隆绵羊C、克隆鼠D、克隆猴E、克隆奶牛正确答案：B2、检测靶序列是DNA的技术是A、Norther杂交B、Southern杂交C、Western杂交D、Eastem杂交E、杂交淋巴瘤正确答案：B3、有关核酶的恰当解释是A、它是RNA分子，但具有酶的功能B、它是蛋白质C、是专门水解核酸的蛋白质D、它是由RNA和蛋白质构成的E、它是由DNA和蛋白质构成的正确答案：A4、下列哪种物质在 PCR 反应中不能作为模板：A、单链DNAB、RNAC、cDNAD、肽链E、双链DNA正确答案：D5、双链DNA的Tm值主要与下面哪项有关A、C-T含量B、A-T含量C、T-G含量D、A-G含量E、C-G含量正确答案：E6、寡核苷酸芯片主要采用A、原位合成法制备B、杂交技术C、探针固化技术D、显微光蚀刻技术E、DNA微阵列的制作方法正确答案：A7、在已知序列信息的情况下获取目的基因的最方便方法是：A、聚合酶链反应B、组织细胞提取C、cDNA文库法D、基因组文库法E、化学合成法正确答案：A8、凝胶色谱分离蛋白质的依据是A、等电点B、亲和作用C、固定相对蛋白质的吸附作用不同D、分子大小E、疏水作用正确答案：D9、α互补筛选法属于：A、免疫化学筛选B、酶联免疫筛选C、原位杂交筛选D、标志补救筛选E、抗药性标志筛选正确答案：D10、关于DNA双螺旋结构模型的叙述中，除了哪一项外其余都是正确的A、螺旋直径为2nmB、两股链间有严格的碱基配对关系C、两股核苷酸链呈反向平行D、为右手螺旋，每个螺距含10对碱基E、极性磷酸二酯键位于双螺旋内侧正确答案：E11、DNA变性的本质是下列哪种键的断裂？A、氢键B、二硫键C、离子键D、盐键E、共价键正确答案：A12、从细菌体内分离出的质粒DNA，在体外的状态是A、线性B、开环C、多聚体D、单链E、超螺旋正确答案：E13、下述双链DNA序列（仅列出其中一条链序列）中，不属于完全回文结构的是A、AAGATCTTB、AGAATTCTC、GGAATTCCD、CGTTAAGCE、TGAATTCA正确答案：D14、在基因工程中所使用的质粒DNA通常存在于：A、酵母染色体外B、哺乳类细胞染色体外C、细菌染色体上D、细菌染色体外E、酵母染色体上正确答案：D15、目前常用的基因表达体系细胞包括A、以上都是B、昆虫细胞C、大肠埃希菌D、哺乳动物细胞E、酵母细胞正确答案：A16、EB溴化乙锭作为核酸电泳指示剂的原理是A、EB是一种可视物质B、EB特异性结合核酸分子C、EB插入核酸分子之间并在紫外光下产生荧光D、EB在紫外光下放射荧光E、EB是核酸转性染料正确答案：C17、EB溴化乙锭作为核酸电泳指示剂的原理是A、EB特异性结合核酸分子B、EB在紫外光下放射荧光C、EB是核酸传性染料D、插入核酸分子之间并在紫外光下产生荧光E、EB是一种可视物质正确答案：D18、DNA提取中不能有效去除蛋白质的是A、RNaseB、酚-氯仿抽提C、蛋白酶KD、SDSE、高盐洗涤正确答案：A19、下列几种DNA分子的碱基组成比例,其中Tm值最高的是A、G+C-40%B、G+C=60%C、G+C=25%D、A+T=80%E、A+T=15%正确答案：E20、DNA超螺旋结构中哪项恰当A、核小体由DNA和非组蛋白共同构成B、以上都不恰当C、核小体由DNA和H1，H2，H3，H4各二分子构成D、组蛋白的成分是H1，H2A，H2B，H3和H4E、核小体由RNA和H1，H2，H3，H4各=分子构成正确答案：D21、最早发现的抑癌基因是A、VHLB、p53C、DCD、RbE、APC正确答案：D22、Southem杂交通常是指A、RNA与RNA杂交B、DNA与RNA杂交C、DNA与蛋白质杂交D、蛋白质与蛋白质杂交E、DNA与DNA杂交正确答案：E23、在已知序列信息的情况下获取目的基因的最方便方法是：A、聚合酶链反应B、cDNA文库法C、组织细胞提取D、基因文库法E、化学合成法正确答案：A24、镁离子在DNA或RNA体外扩增反应的浓度一般为A、0.5-2mmol/LB、0.3-1mmol/LC、0.5-1mmol/LD、2-2.5 mmol/LE、0.3-2mmol/L正确答案：A25、DNA双螺旋结构模型的描述中哪一条不恰当A、体内以B构型最常见B、腺嘌呤的克分子数等于胸腺嘧啶的克分子数C、DNA双螺旋中碱基对位于外侧D、同种生物体不同组织中的DNA碱基组成极为相似E、二股多核苷酸链通过A与T或C与C之间的氢键连接正确答案：C26、一些标记物可与某种物质反应产生化学发光现象，通过化学发光可以像核素一样直接使X线胶片上的乳胶颗粒感光。

《分子生物学检验技术》基本知识点

分子生物学基本知识点一、填充题1、质粒按功能分类有F质粒、R质粒和Col质粒。

2、基因病分为单基因病和多基因病.3、分子杂交反应主要由预杂交、杂交和洗脱三个步骤组成。

4、临床基因扩增检验实验室必须包括四个工作区域①试剂贮存和准备区；②标本制备区;③扩增反应区；④产物分析区.5、肿瘤发生分三个阶段：启动阶段、促癌阶段和转化阶段。

6、生物芯片技术是根据生物分子之间特异性相互作用的原理，如DNA—DNA、DNA-RNA、抗原-抗体、受体-配体之间可以发生的复性与特异性结合，设计其中的一方为探针.7、核酸分子杂交技术按杂交探针标记的不同可以分为同位素杂交和非同位素杂交。

8、PCR反应中，模板包括基因组DNA、RNA、质粒DNA和线粒体DNA.9、DNA芯片技术可应用于基因诊断、DNA序列测序、临床药物筛选以及其它领域。

10、质粒提取方法主要有碱裂解法、煮沸裂解法、SDS裂解法和其它方法。

11、PCR反应中的dNTP指的是dATP、dCTP、dGTP和dTTP四种脱氧核苷三磷酸。

12、在试管中进行的DNA复制过程称为PCR，其反应基本过程有变性、退火（杂交)和延伸.DNA 双螺旋的氢键断裂是在变性步骤中.13、基因重组中用来识别和切割双链DNA分子中特定核苷酸序列的酶是限制性内切酶，若产生的缺口错开突出，称为粘末端.若产生的缺口不错开，称为平末端。

14、国家级的蛋白质数据库有蛋白质序列数据库、蛋白质结构数据库、蛋白质直系同源簇数据库和DIP数据库。

15、转位的遗传效应是基因重排、引起突变和引人新的基因。

16、根据杂交核酸分子的种类，可以将核酸分子杂交分为DNA与DNA杂交，DNA与RNA 杂交和RNA与RNA杂交。

17、常用的DNA重组载体有：质粒载体、噬菌体载体、穿梭载体和人工染色体。

18、基因工程中，平末端连接法主要有平接法、同聚体加尾法和人工接头法三种方法.19、聚合酶链反应条件主要是温度、时间和循环次数.20、在生物芯片技术中，依据芯片上固定的探针类型分为DNA芯片、蛋白质芯片、细胞芯片和组织芯片等。

分子生物学实验基础知识

分子生物学实验基础知识分子生物学是在生物化学基础上发展起来的，以研究核酸和蛋白质结构、功能等生命本质的学科，在核酸、蛋白质分子水平研究发病、诊断、治疗和预后的机制。

其中基因工程（基因技术，基因重组）是目前分子生物学研究热点，这些技术可以改造或扩增基因和基因产物，使微量的研究对象达到分析水平，是研究基因调控和表达的方法，也是分子水平研究疾病发生机制、基因诊断和基因治疗的方法。

转化（trans formation）、转染、转导、转位等是自然界基因重组存在的方式，也是人工基因重组常采用的手段。

基因重组的目的之一是基因克隆（gene clone），基因克隆可理解为以一分子基因为模板扩增得到的与模板分子结构完全相同的基因。

使需要分析研究的微量、混杂的目的基因易于纯化，得以增量，便于分析。

外来基因引起细胞生物性状改变的过程叫转化（transformation），以噬菌体把外源基因导入细菌的过程叫转染（transfection）。

利用载体（噬菌体或病毒）把遗传物质从一种宿主传给另一种宿主的过程叫转导（transduction）。

一个或一组基因从一处转移到基因组另一处的过程叫转位（transposition），这些游动的基因叫转位子。

一、基因工程的常用工具（一）载体载体（Vector）是把外源DNA（目的基因）导入宿主细胞，使之传代、扩增、表达的工具。

载体有质粒（plasmid）、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒（粘粒）、病毒等。

载体具有能自我复制；有可选择的，便于筛选、鉴定的遗传标记；有供外源DNA插入的位点；本身体积小等特征。

质粒存在于多种细菌，是染色体（核）以外的独立遗传因子，由双链环状DNA组成，几乎完全裸露，很少有蛋白质结合。

质粒有严紧型和松弛型之分。

严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制，一个细胞可复制1-5个质粒。

而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制，一个细胞可复制30-50个质粒，如果用氯霉素可阻止蛋白质合成，使质粒有效利用原料，复制更多的质粒。

分子生物学检验完整版

1病原生物基因组在医学上有何应用?详见书P3a菌种鉴定b确定病毒感染和病毒载量c病毒分析d细菌耐药监测和分子流行病学调查2什么是原癌基因,原癌基因有什么特性,原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见的激活机制有哪些?原癌基因是指人类或其他动物细胞(以及致癌病毒)固有的一类基因,能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称。

特性:进化上高度保守,负责调控正常细胞生命活动,可以转化为癌基因。

功能分类:生长因子,生长因子受体,信号转导蛋白,核调节蛋白,细胞周期调节蛋白,抑制凋亡蛋白激活机制:插入激活,基因重排,基因点突变,基因扩增,基因转录改变3试述Down综合征(21三体综合征)的主要临床特征及核型。

临床特征:生长发育障碍,智力低。

呆滞面容,又称伸舌样痴呆。

40%患者有先天性心脏畸形。

肌张力低,50%患者有贯通手,男患者无生育能力,女患者少数有生育能力,遗传风险高。

核型:92.5%患者游离型:核型为47,XX(XY),+212.5%患者为嵌合型:46,XX(XY)/47,XX(XY),+215%患者为易位型:46,XX(XY),-14,+t(14q21q)4简述淋球菌感染的主要传统实验室诊断方法及其主要特点,对比分析分子生物学方法的优势1直接涂片染镜检:敏感度和特异性差,不能用于确诊。

2分离培养法:诊断NG感染的金标准,但是其对标本和培养及营养要求高,培养周期长,出报告慢,难以满足临床要求。

3免疫学法:分泌物标本中的非特异性反应严重以及抗体法间的稳定性和条件限制,推广受限。

分子生物学的优点:敏感,特异,可直接从了临床标本中检出含量很低的病原菌,适应于快速检测5、在单基因遗传病的分子生物学检验中,点突变检测常用方法有哪些?1异源双链分析法(HA)2突变体富集PCR法3变性梯度凝胶电泳法4化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法9RNA酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术6、简述白假丝酵母菌的分子生物学检验方法白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸(DNA RNA)的检测、基因分型和耐药基因分析等。

分子生物学检验技术

1、分子生物学检验技术:就是以核酸或蛋白质为分析材料,通过分析基因得结构、表达得变化与由此而导致得基因功能得改变,为疾病得研究与诊断提供更准确、更科学得信息与依据得一门学科。

2、请说明分子生物学检验技术在临床试验诊断中得应用。

(1)感染性微生物得检测。

如:用PCR技术进行甲型肝炎病毒得检测、乙型肝炎病毒得检测与解脲脲原体得检测等。

(2)基因突变得检测。

如:用PCR一限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测地中海贫血基因突变。

(3)法医学检测。

如:用PCR微卫星检测技术进行亲子关系得鉴定与个体识别。

(4)基因异常表达得检测。

如:用cDNA表达得芯片技术进行基因异常表达得检测。

(5)基因定位。

如:用原位杂交技术进行组织与细胞中基因表达得定位。

3、基因组:就是一个细胞或一种生物体得整套遗传物质。

4、基因:就是基因组中一个功能单位,就是贮存有功能得蛋白质多肽链信息或RNA序列信息及表达这些信息所必需得全部核苷酸序列。

5、原核生物:就是细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌与蓝绿藻等原始生物得总称,就是最简单得细胞生物体。

6、操纵子结构:就是原核生物基因组得功能单位。

7、质粒:就是指细菌细胞染色体外,能独立复制并稳定遗传得共价闭合环状分子。

8、转座因子:又称为转座元件,就是一类在细菌染色体、质粒与噬菌体之间自行移动并具有转位特性得独立得DNA序列。

9、原核生物基因组得结构特征:(1)原核生物基因组通常仅由一个DNA分子构成,基因组中只有一个复制起点,具有类核结构。

(2)具有操纵子结构,模板mRNA为多顺反子mRNA。

编码区远远大于真核生物基因组,但又远远小于病毒基因组。

在基因组中存在多功能得识别区域,如复制起始区、转录启动区与终止区等,这些区域常常含有反向重复序列。

(3)结构基因通常为单拷贝基因,编码顺序一般不重叠。

(4)具有编码同工酶得基因。

(5)含有可移动得DNA序列。

10、病毒基因组得结构特点:(1)与细菌与真核生物基因组相比,病毒基因组结构简单,基因数少,所含信息量也少。

分子生物学的基础知识与实验技术

技术进展：随着科技的发展，基因克隆和测序技术不断进步，提高了实验效率和准确性
基因克隆：将目的基因从原基因组中分离出来，插入到载体中，形成重组DNA分子
测序技术：通过分析DNA分子的碱基序列，确定基因的遗传信息
基因表达分析技术
基因表达分析技术的应用：研究基因表达调控、疾病诊断和治疗等
基因表达分析技术的发展趋势和挑战
环境保护：利用分子生物学技术，处理环境污染问题
食品工业：利用分子生物学技术，改进食品生产工艺和品质
在基础科学研究中的应用
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分子生物学实验技术在蛋白质结构研究中的应用
分子生物学实验技术在基因编辑中的应用
分子生物学实验技术在细胞信号传导研究中的应用
分子生物学实验技术在药物研发中的应用
基因表达分析技术的定义和目的
基因表达分析技术的主要方法：RT-PCR、Western Blot、Northern Blot等
蛋白质分离和鉴定技术
蛋白质的分离技术：包括盐析、沉淀法、层析法等
蛋白质的鉴定技术：包括质谱分析、免疫印迹法、电泳法等
蛋白质的分离和鉴定在分子生物学实验中的应用：如蛋白质相互作用研究、蛋白质结构分析等
基因诊断：通过分子生物学实验技术，可以检测出基因突变、基因缺失等疾病
基因治疗：利用分子生物学实验技术，可以将正常的基因导入到患者体内，治疗基因缺陷引起的疾病
药物研发：分子生物学实验技术可以帮助研究人员发现新的药物靶点，加速药物研发进程
个性化医疗：分子生物学实验技术可以分析患者的基因信息，为患者提供个性化的治疗方案
分子生物学实验技术的挑战与展望
PART 05
当前面临的主要挑战
实验成本的高昂：分子生物学实验需要昂贵的仪器设备和试剂，增加了实验成本。

分子生物学

第七篇分子生物学检验技术第一章绪论记忆要点：1. 基因与疾病的关系：病毒感染，单基因病，多基因病，肿瘤2. 分子生物学检验技术主要研究病原微生物基因，基因变异及基因多态性模拟题1.下列哪项属于单基因遗传病（）A.冠心病B.糖尿病C.精神于神经疾病D.原发性高血压E.α-地中海贫血2. 下列哪项属于多基因遗传病（）A.糖尿病B.血友病C.Duchenne肌营养不良D.脆性X综合征E.血红蛋白病3．癌基因激活机制包括（）A. 点突变B.甲基化程度降低C.反转录酶活性增高D.基因扩增E.DNA连接酶活性降低4．病毒容易发生变异是由于下列哪些酶缺乏校正功能（）A.DNA聚合酶B. DNA连接酶C. RNA聚合酶D.蛋白酶E.反转录酶5. 病毒感染宿主的方式主要表现为（）A. 病毒感染宿主细胞后，病毒DNA直接在细胞内复制B.病毒基因与宿主细胞染色体发生整合而使宿主染色体基因结构发生改变C. 病毒基因与宿主细胞染色体结合，形成复合物D.病毒感染宿主细胞后，病毒吞噬细胞核E. 病毒感染宿主细胞后，病毒颗粒被宿主细胞吞噬6．分子生物学检验技术在临床上的应用有（）A.检测病原微生物基因B.检测基因变异C.器官移植配型D.亲自鉴定E.遗传性疾病的诊断第二章基因组与基因组学记忆要点：1. 原核生物基因组中基因数目少，并且只有一个复制起始位点，是一条环状双链DNA，形成类核，没有核膜。

结构基因（无内含子）连同上游的调控区以及下游的转录中止信号共同组成操纵子。

其mRNA为多顺反子mRNA，5’端无帽子结构，3’端无多聚A尾。

质粒：共价闭合环状DNA分子(酵母杀伤质粒为RNA)2．病毒：基因重叠，基因组为单倍体。

HBV、HCV、HIV基因组的特点3．真核生物基因组；二倍体，单顺反子，重复序列多，非编码序列多，基因不连续（有内含子），基本上没有操纵子结构。

模拟题7. 下列叙述哪项是错误的（）A.原核生物基因组具有操纵子结构B. 原核生物结构基因是断裂基因C. 原核生物基因组中含有插入序列D. 原核生物基因组中含有重复顺序E. 原核生物结构基因的转录产物为多顺反子8. 质粒的主要成分是（）A.多糖B.蛋白质C.氨基酸衍生物D.DNA分子E.脂类9. 原核生物类核结构的组成是（）A.双链DNAB. RNAC.蛋白质+DNAD.支架蛋白E. RNA+支架蛋白+双链DNA10. 操纵子不存在于（）A.细菌基因组B.病毒基因组C. 真核生物基因组D.大肠杆菌基因组E.原核生物基因组11. 病毒生物学性状及感染的致病性主要取决于（）A.病毒早期蛋白B.病毒表面糖蛋白C.病毒核酸D.病毒晚期蛋白E.病毒衣壳蛋白12. 有关于微卫星重复序列的描述正确的是（）A.在群体的个体间重复簇的大小不发生变化B.每一簇含的重复序列的数目比小卫星重复序列多C.有一个10~15个核苷酸的核心重复序列D.在DNA重组时不具有活性E.以上都不对13. 细胞器基因组是（）A.环状的B.不编码蛋白质产物C.分为多个染色体D.线状的E.含有大量的短重复DNA序列14. 真核生物重指导蛋白质合成的结构基因大多数为（）A.单拷贝序列B.中度重复序列C.高度重复序列D.回文序列E.其它15. 有关人类基因组的特点描述不正确的是（）A.功能相关的基因常散在分布于不同的染色体上B.含有大量的重复序列C.基因组中各个基因的大小和内部组织差异不大D.含有大量的非编码序列E.每个结构基因都有单独的调控序列16. 有关于多基因家族的描述，错误的是（）A.由某一祖先基因经过重复合变异所产生的一组基因B.通常由于突变而失活C.假基因和有功能的基因是同源的D.所有成员均产生有功能的基因产物E.以上都正确17. 临床上用PCR方法检测HCV，常用的扩增靶序列为（）A.5’端非编码区B. 3’端非编码区C.结构蛋白区D. 非结构蛋白区E. 以上都不是18. 原核生物基因组的特征包括（）A.具有类核结构B.具有多个DNA复制起始位点C.有大量的基因重叠现象D.存在可移动基因成分E.有大量重复序列存在19. 质粒的结构特点有（）A.所有质粒都是超螺旋结构的DNAB.大多数质粒为环状双链DNAC.以环状单链DNA分子存在D.质粒DNA有半开环结构E. 以环状双链RNA分子存在20 . 有关R质粒叙述正确的是（）A. R质粒带有抗性转移因子B. R质粒又称耐药性质粒C. R质粒带有抗性决定因子D. R质粒能决定细菌的性别E. R质粒能决定细菌的大小21. 有关病毒基因组的结构特点正确的是（）A.多数为多倍体B.编码区在基因组中的比例很少C.含有大量的基因重叠现象D.含有一种核酸E.有操纵子结构22-24 题共用下列选项A. F质粒B. R质粒C. Col质粒D.严密型质粒E.松弛型质粒22.带有耐药性基因的质粒是（）23.可以产生大肠杆菌素的质粒是（）24.在细胞中含量较多，且复制不受宿主严格控制的质粒是（）第三章蛋白质组与蛋白质组学记忆要点：蛋白质组：一种基因组所表达的全套蛋白质。

分子生物学检验技术

分子生物学检验技术临床学教案首页授课具体内容:第二章基因与基因组本章教学要求：掌握:基因及基因组的概念熟悉:原核、病毒及真核生物基因组结构两个重要概念：基因组（genome）：一个细胞或一种生物体的整套遗传物质。

基因（gene）：基因组中一个功能性遗传单位，是贮存有功能的蛋白质多肽链信息或RNA 序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。

第一节原核生物基因组原核生物基因组特征什么是原核生物（prokaryote）？细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、放线菌和蓝绿藻等原始生物的总称，是最简单的细胞生物体。

一、原核生物基因组特征☆1.原核生物的类核结构原核生物没有典型的细胞核结构，基因组DNA位于细胞中央的核区，无核膜将其与细胞质隔开，但能在蛋白质的协助下，以一定的组织形式盘曲、折叠包装，形成类核（nucleoid），也称拟核。

2.原核生物的操纵子结构操纵子结构是原核生物基因组的功能单位原核生物的结构基因大多数按功能相关性成簇地串联排列于染色体上。

操纵子（operon）结构:结构基因连同其上游的调控区（包括调节基因、启动基因和操纵基因）以及下游的转录终止信号，共同组成了一个基因表达单位。

操纵子operon:多个功能相关的结构基因成簇串联排列，与上游共同的调控区和下游转录终止信号组成的基因表达单位。

结构基因大多组成操纵子启动子promoter ?-galactosidase半乳糖苷酶z终止子terminator ?-galactoside permease透酶y操纵元件operator ?-galactoside transacetylase半乳糖苷乙酰转移酶 a乳糖操纵子lac operon原核生物的mRNA是多顺反子mRNADNA Promoter Gene 1 Gene 2 Gene 3 Terminator多顺反子mRNA (polycistronic mRNA):原核生物的一个mRNA分子带有几个结构基因的遗传信息，利用共同的启动子及终止信号，组成操纵子的基因表达调控单元。

分子生物学检验技术—绪论

二、生物芯片
1.生物芯片特点：高通量、微型化和自动化，能将生命科学研究中的许多不连续过程集成于一体。
2.生物芯片必将在基因功能研究、基因诊断、药物筛选和个体化药物治疗等方面扮演重要角色，具有重大的应用潜力。
三、蛋白质组学
• 当今的研究重点已经开始从揭示生命的遗传信息过渡到对生命活动的直接执行者——蛋白质进行整体水平的研究，蛋白质组学正成为目前揭示生命规律的新的重大热点领域。
检验医学的发展方向
（1）分子诊断的内容从传统的DNA诊断发展到核酸及其表达产物（mRNA、蛋白质）的全面诊断；
（2）分子诊断的策略从利用分子杂交、PCR等单一技术的诊断发展到有机组合多项技术的联合诊断；
（3）分子诊断的方法从定性诊断发展到半定量和定量诊断，核酸标记技术，特别是荧光标记技术的发展，荧光定量PCR技术等方法日益成熟；
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第二章基因组的结构与特征
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第五章核酸的分离与纯化
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第六章 DNA重组技术
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第八章核酸分子杂交技术
•章生物芯片技术
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第十一章分子生物学检验技术的临床应用
第一章绪论
目的与要求：
1.掌握分子生物学检验技术的概念、主要分析对象； 2.了解分子生物学检验技术在相关疾病研究和诊断中的应用；（第十一章） 3.了解分子生物学的发展趋势。
致。
亲子鉴定应用的遗传标记
• 1. 常染色体上的基因座或遗传标记 • 2. 线粒体DNA非编码区的多态性 • 3. Y-染色体上的基因座或遗传标记 • 4. X-染色体上的基因座或遗传标记
• 目前常用的基因座就是STR基因座。
• 单亲案亲子鉴定的判断标准： • 缺少父或母其中一方，必须增加检测位点，一般增

临床医学检验：分子生物学检验技术题库考点三

临床医学检验：分子生物学检验技术题库考点三1、单选关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确()A．溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体B．溶液Ⅱ的作用是使DNA变性C．溶液Ⅲ的作用是使DNA复性D．质粒DNA（江南博哥）分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性E．该方法简单，重复性好，在实验中经常使用正确答案：A2、判断题pMT2表达载体有两个复制起始位点，故复制时速度很快()正确答案：错3、判断题人及哺乳动物是真核细胞生物体()正确答案：对4、填空题致病微生物基因DNA提取方法有________________，RNA提取法有________________。

正确答案：酚提取乙醇沉淀法；氧化钒核糖核苷复合物酚提取法5、单选下列有关YAC描述，错误的是()A．为线状DNA分子B．由着丝粒、端粒、复制子和外源DNA构成C．培养方便D．可表达真核细胞基因E．装载容量少是它的缺点正确答案：E6、名词解释DNA重组正确答案：不同来源的DNA分子，通过磷酸二酯键连接而重新组合的过程。

7、单选松弛型质粒()A．在宿主细胞中拷贝数较多B．可用氯霉素扩增C．复制时受宿主染色体的控制D．一般没有选择标记E．上述A、B两项正确正确答案：E8、单选非复制转座()A．复制转座子，即在原位点上留有一个拷贝B．移动元件到一个新的位点，在原位点上不留元件C．要求有转座酶D．涉及保守的复制，在这个过程中转座子序列不发生改变E．要求解离酶正确答案：B9、问答题简述DNA病毒基因组的一般特点。

正确答案：DNA多为双链，少数为单链；可以表现为线形，也可以为环状分子。

(1)在转录中，如是双链则两条链都可以作为转录的模板。

(2)在活宿主细胞核内复制，且能利用宿主细胞的复制、转录和翻译系统。

(3)较大的双链DNA病毒往往具有比较复杂的生活周期；并可侵袭多种脊柱类动物，引起严重疾病。

较小的DNA病毒则会更依赖宿主细胞来完成复制，这些病毒常常能反式激活复制系统，导致病毒和宿主都进行复制，故可能引发肿瘤。

分子生物学实验基本技术

分子生物学实验基本技术
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目录
分子生物学实验技术概述
基因克隆和表达技术
PCR技术和相关技术
分子杂交和印迹技术
基因编辑技术
蛋白质技术和蛋白质组学
分子生物学实验技术概述
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定义：分子生物学实验技术是指在分子水平上研究生物现象和过程的技术，包括基因克隆、基因表达、基因突变、基因重组等。
蛋白质组学在分子生物学实验中的应用：研究蛋白质的功能、调控机制和疾病发生机制等
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PCR技术和相关技术
原理：通过DNA复制技术，将DNA片段扩增步骤：包括模板DNA的制备、引物的设计、反应体系的配置、PCR反应的进行等应用：广泛应用于基因克隆、基因表达分析、基因突变检测等领域相关技术：包括实时荧光定量PCR、多重PCR、巢式PCR等
原理：逆转录-聚合酶链反应技术，将 RNA逆转录为cDNA，再进行PCR扩增
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Northern印迹技术：用于检测RNA序列，通过电泳将RNA片段分离，然后用放射性标记的探针进行杂交，最后通过放射自显影检测杂交信号。
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应用：Southern印迹和Northern印迹技术广泛应用于基因克隆、基因表达分析、基因突变检测等领域。
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
优缺点：Southern印迹技术灵敏度高，但操作复杂，耗时长；Northern印迹技术操作简单，但灵敏度较低。
基因编辑技术
应用：广泛应用于基因功能研究、疾病治疗等领域
原理：利用Cas9蛋白对DNA进行切割，形成双链断裂，从而实现基因编辑
优势：操作简便、高效、精确，可应用于多种生物体
局限性：存在脱靶效应，可能导致非目标基因的突变

分子生物学与检验技术

• 1954年，Gamov提出密码子是三联体。 • 1961年，Crick等证实密码子是非重叠、无标点的三联体。 • 1966年，在Nirenberg、Khorana 等的努力下，完成了全部64个遗传密码子的解码。
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第一章绪论
一、分子生物学发展历程及其主要的里程碑
（三）深入发展阶段
20世纪70年代以后 1.重组DNA技术的建立和发展 2.后继研究和持续发展阶段
• Oswald Avery （1877-1955）
• 1944年证实DNA是遗传信息的载体。
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第一章绪论
一、分子生物学发展历程及其主要的里程碑
（二）建立与发展阶段
20世纪50年代到70年代 Watson和 Crick DNA双螺旋结构模型意义：确立了核酸作为信息分子的结构基础；提出了碱基配对是核酸复制、遗传信息传递的基本方式；最终阐明了遗传的物质基础是核酸。这三点为认识核酸与蛋白质的关系及其在生命中的作用打下了最为重要的基础。
2. 熟悉分子生物学与检验技术的发展及主
要里程碑
3. 了解分子生物学检验技术的临床应用前
景
Introduction
第一节
第二节
第三节
中英文
退出
第一章绪论
绪论
现代分子生物学兴起的标志：20世纪50年代Watson 和 Crick DNA双螺丝结构
分子生物学以揭示生命现象本质为目的，以
研究生物分子的结构与功能为对象，为
分子生物学与检验技术
• 徐美兰
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• 黄金大米（Golden Rice）是一种转基因大米，它通过转基因技术将β-胡萝卜素转化酶系统转入到大米中而获得，外表为金黄色，故称黄金大米。 • 苏黎世瑞士联邦理工学院的 Ingo Potrykus 教授和德国弗赖堡大学的Peter Beyer（分别为育种专家和分子生物学家）是这一大米作用机制的创始人。 • 1999年，研发此大米，并于2004年在美国进行试验。

分子生物学检验

第二章临床分子生物学检验标志物1.分子生物标志物：指可以反映机体生理,病理状态的核酸、蛋白质、代谢产物等生物分子,是生物标志物的一种类型;2.中心法则：指遗传信息从DNA传递给RNA,再从RNA传递给蛋白质,即完成遗传信息的转录和翻译的过程;也可以从DNA传递给DNA,即完成DNA的复制过程;这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则;在某些病毒中的RNA自我复制如烟草花叶病毒等和在某些病毒中能以RNA为模板逆转录成DNA的过程某些致癌病毒是对中心法则的补充;3.基因组：是一个细胞或一种生物体的整套遗传物质,包括基因和非编码DNA;4.原核生物基因组特征：1原核生物基因组较小：大小一般在106—107碱基对之间；2原核生物的类核结构：原核生物基因组DNA位于细胞中央的核区,没有核膜将其与细胞质隔开在蛋白质的协助下,以一定的形式盘曲,折叠包装起来,形成类核；3原核生物的操纵子结构：原核生物的结构基因大多数按功能相关性成簇地串联排列于染色体上;结构基因同其上游的调控区以及下游的转录终止信号,共同组成了一个基因表达单位,即操纵子结构；4原核生物的结构基因：原核生物的结构基因中无内含子成分,多数是单拷贝基因,基因与基因之间有重复序列存在；5具有编码同工酶的基因：这类基因表达产物的功能相同,但基因结构不完全相同；6含有可移动DNA序列：可移动的DNA序列通过不同的转移方式发生基因重组,改变生物体的遗传性状,使生物体更适应环境的变化；5.质粒：指细菌细胞染色体以外,能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子；6.人类基因组包括细胞核内的核基因组3X109bp和细胞质内的线粒体基因组16569bp,人类基因组中存在大量的非编码序列和重复序列；7.小卫星DNA：由10—100bp组成的重复单位重复几十到几百甚至几千次,形成的1—5bp的短DNA,又称可变数目串联重复；8.微卫星DNA：核心序列为1—6bp,可以重复上百次,又称短串联重复；9.多基因家族：指由某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因,在多基因家族中,某些成员并不产生有功能的基因产物,这些基因称为假基因；10.多态性：当某种变异相对常见,在群体中的频率高于1%时,则称为多态性,频率低于1%的变异称为突变；错义突变,无义突变,RNA加工突变；11.多态性类型：限制性片段长度多态性；小卫星和微卫星多态性；单核苷酸多态性主要指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性；拷贝数多态性指基因组中较大的片段200bp—2Mb发生了拷贝数的变化；12.DNA甲基化：1定义：指生物体在DNA甲基转移酶的催化下,以S—腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将甲基转移到特定的碱基上的过程；2作用位点：腺嘌呤的N—6,胞嘌呤的N—4,鸟嘌呤的N—7,胞嘧啶的C—5；3作用机理：13.微小RNA：是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,其大小长约20~25个核苷酸,在细胞内主要发挥基因转录后水平调控作用；14.长链非编码RNA：长度大于200bp的非编码RNA；第四章：核酸杂交技术1.融解温度Tm：DNA的变性会在一个很狭窄的温度范围内发生,这一温度范围的中点被称为融解温度；Tm值的大小取决于核酸分子的G-C含量;G-C碱基含量越高,Tm值越高；2.变性：在一定条件下,双螺旋之间氢键断裂,双螺旋解开,DNA分子成为单链,形成无规则线团的过程；3.复性：变性DNA只要消除变性条件,具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链的过程；4.Southern印迹杂交：过程：1将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物硝酸纤维素膜或尼龙膜上,即印迹；2固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火,即分子杂交过程；原理：利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量；特点：特异性和灵敏度高；5.Northern杂交靶核酸是RNA,Southern杂交靶核酸是DNA；第五章：核酸扩增技术1.聚合酶链反应技术PCR：由美国Cetus公司K.Mullis博士于1983年建立,它是一个能在试管内模仿细胞内核酸复制过程,也就是能在体外特异地扩增一段特定核酸序列的技术；2.PCR的基本原理：根据DNA半保留复制的机理和体外DNA分子于不同温度下可变性,复性的性质,通过人为控制体外合成系统的温度,通过变性、退火、延伸三个步骤扩增目的DNA 片段；3.PCR的基本过程：1变性：将被复制的DNA片段在高于其熔点温度Tm的条件下94~95℃加热,使DNA双螺旋结构的氢键断裂而解螺旋,形成两条单链分子作为扩增反应的模板,以便与引物结合；2退火：将反应体系的温度降低至引物的熔点温度以下<Tm5℃,以便使引物能与模板DNA序列互补结合,形成杂交链；3延伸：将反应体系的温度升至72℃,此时反应体希按照模板链的序列以碱基互补配对的原则依次把dNTP加至引物的3’端,在TaqDNA聚合酶的存在下,杂交链不断延伸,直至形成新的DNA双链；4.当温度升至其熔点温度Tm时荧光量急剧下降而形成熔点曲线,其波峰所在温度即代表被检DNA分子的Tm值;Tm值的大小取决于DNA分子的长度和其序列中G/C碱基含量；第六章：核酸实时定量检测技术1.实时荧光定量PCR技术：指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR反应过程,最后通过相关数据分析方法对目的基因进行定量分析的技术；2.扩增曲线：指在实时荧光PCR扩增过程中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测和连续地分析扩增相关的荧光信号,随着反应时间的进行,检测到的荧光信号的变化可以绘制成一条以循环数为横坐标,以PCR反应过程中实时荧光强度为纵坐标所做的曲线；3.荧光阈值：指在实时荧光定量PCR扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在指数扩增阶段的任意位置上；4.循环数：PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值所经过的循环次数；5.扩增效率：指PCR反应一个循环后的产物增加量与这个循环的模板量的比值,其值在0~1之间；6.7.第七章：核酸序列分析1.双脱氧链终止法测序原理：ddNTP比普通的dNTP在3’位置缺少一个羟基,可以通过其5’三磷酸基因掺入到正在增长的DNA链中,但由于缺少3’-OH,不能同后续的dNTP形成3’,5’-磷酸二酯键;因此,正在增长的DNA链不在延伸,使这条链的延伸终止于这个异常的核苷酸处；2.人类基因组测序的步骤：第八章：蛋白质组学技术1.蛋白质组：包括一个细胞或一个组织或一个机体的基因所表达的全部蛋白质；2.蛋白质组学：以蛋白质为研究对象,从整体水平揭示细胞内动态变化的蛋白质组成、结构、表达水平和修饰状态,研究蛋白质间,蛋白质与生物大分子之间的相互作用,揭示蛋白质的功能与生命活动的规律；3.双向凝胶电泳：第一向电泳是依据蛋白质的等电点不同,通过等电聚焦将带不同净电荷的蛋白质在PH梯度介质中外加电场作用形成分离的蛋白质区带;第一向等电聚焦完成后,将凝胶包埋在SDS—PAGE凝胶板上端,依据蛋白质分子量的不同,在垂直或水平方向进行SDS—PAGE,即第二次分离；4.双向凝胶电泳用于确定差异,质谱法用于鉴别结构；第十三章：单基因遗传病的分子生物学检验1.单基因遗传病分类：常染色体遗传,X连锁遗传,Y连锁遗传；2.在分析基因结构的变化时,通常用DNA作为检测材料；在检测转录水平异常时在,将RNA作为检测材料；当基因较大时,突变区不甚明了时,也可直接从cDNA水平开始进行筛检；3.镰刀细胞贫血的分子机制：患者由于β珠蛋白基因中第6位密码子存在单个碱基的突变,由原来的GAG变为GTG,结果使β珠蛋白链的第6位氨基酸残基由原来的谷氨酸变为缬氨酸,红细胞发生镰状；4.β珠蛋白生成障碍性贫血的分子机制：第十五章：线粒体病的分子生物学检验：1．母系遗传：在一个家系中,有缺陷的遗传性状通过母系成员从亲代连续稳定传递到子代的现象,即母亲可以将有缺陷的遗传性状传递给子代,男性子代个体不再继续传递,而女性子代个体可继续将此有缺陷的遗传性状往下一代传递；2．遗传早发：指越是严重的线粒体功能异常,其个体发病的年龄也将越早；3．遗传瓶颈：线粒体在卵母细胞成熟时数目会出现锐减的现象；4．线粒体基因表达系统及特点：第十六章：肿瘤的分子生物学检验1.原癌基因：指人类或其他动物细胞固有的一类基因,能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征的基因总称；2.原癌基因激活机制：1插入激活,2基因重排/染色体易位；3基因点突变/移码突变；4基因扩增；5基因转录改变；3.抑癌基因：是一类可编码对肿瘤形成起阻抑作用蛋白质的基因,正常情况下负责控制细胞的生长和增殖；4.肿瘤基因表现遗传学异常的分子机制：1基因组印记丢失；2DNA甲基化；3组蛋白修饰与染色质重塑；。

临床医学检验：分子生物学检验技术

临床医学检验：分子生物学检验技术1、多选对核酸一蛋白质杂交实验的描述，正确的是()A．又称为Southwestern杂交B．可鉴定蛋白质与DNA的特异结合C．可以大概确定结合蛋白质的分子量D．该技术（江南博哥）最先由中国人应用E．蛋白质-DNA复合物经紫外线照射后可分离正确答案：A, B, C2、单选?女，45岁，由于低热、盗汗、感冒、咳嗽并带血丝入院。

实验室检查：痰普通培养无致病菌生长；X片见肺纹理增粗，肺门有发光点状物。

初步考虑为()A．矽肺B．肺结核C．肺出血D．COPDE．肺炎正确答案：B3、单选Southern印迹的DNA探针可与以下何种成分杂交()A．只与完全相同的片段B．可与任何含有相同序列的DNA片段C．可与任何含有互补序列的DNA片段D．可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段E．以上都是正确答案：C4、单选编码蛋白质都能与GTP结合的癌基因家族为()A．mybB．mycC．sisD．rasE．erb正确答案：D5、判断题蛋白质的溶解度随温度的增高表现为增加()正确答案：错6、单选下列哪些基因以典型的串联形式存在于真核生物基因组()A．球蛋白基因B．组蛋白基因C．rRNA基因D．肌动蛋白基因E．线粒体基因正确答案：B7、名词解释核酸分子杂交正确答案：单链的核酸分子在合适的温度和离子强度下，通过碱基互补形成双链杂交体的一类技术。

8、配伍题断裂基因指()假基因指()A．由不连续的几个编码序列组成的基因B．一个结构基因经过转录和翻译生成一个mRNA和一条多肽链C．编码与生物氧化有关的一些蛋白质和酶的基因D．失去表达活性的基因E．基因家族成簇地分布在某一条染色体上，可同时合成某些蛋白质正确答案：A,D9、单选?男，45岁，发现有动脉硬化症状。

查体：见角膜有老年性色素环。

查血：TC12.00mmol/L，TG2.6mmol/L。

如果需要进一步确诊并明确病因，需要进行()A．VLDL基因检测B．查找家族遗传史C．CETP基因检测D．ApoB基因分型E．LDL基因检测正确答案：D10、名词解释DNA芯片正确答案：DNA芯片技术是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可获得样品的遗传信息。

分子生物学检验技术-基因病的分子诊断

携带视网膜母细胞瘤基因Rb突变的人是视网膜母细胞瘤的高风险人群；
携带p53基因突变的人经常是李-佛美尼综合症的患者； APC基因是与大肠直肠癌发生有关的肿瘤抑制基因； BRCA1和BRCA2基因的突变则和乳癌相关；
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Rb
正常细胞中具有活性的RB蛋白（pRB）在细胞中保持着低磷酸化或无磷酸化的状态，它与细胞周期调节因子E2F结合，抑制E2F的活性从而抑制G1期到S期的进行，也就抑制了转录活性。 RB蛋白的失活途径有以下几种：
RAS家族是信号传递通路G-protein的成份，藉由跨膜蛋白与Gprotein的结合将信号传至核内;
蛋白质-酪胺酸激酶( protein tyrosine kinase) ABL是细胞内信号传递蛋白与信号传递至核内有关;
核内转录因子;
MYC是DNA结合蛋白，而JUN是转录因子；
细胞周期有关的蛋白;
3. 血清胆红素轻～中度增高，溶血危象时显着增高。本病的溶血虽以血管外溶血为主，但也存在着血管内溶血；
4. 血浆结合珠蛋白降低，血浆游离血红蛋白可能增高； 5. 红细胞半衰期测定显示红细胞生存时间明显缩短至5～15 天[正常为(28±5)天]； 6. 血红蛋白电泳显示HbS占80%以上，HbF增多至2%～15%，HbA2正常，而HbA缺如；
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癌症的特点
几乎癌组织都是克隆性增殖; 患者的所有癌细胞都起源于单一
的癌细胞; 大多数癌症不能用单基因遗传方
式解释; 某些类型的癌症，亲属发生同类
肿瘤的风险会增加，但不表现孟德尔遗传; 许多癌症与环境的物理化学因子或生物因子有关;
造成癌症的因素
遗传因素一些特殊的基因突变会造成特定的癌症
斑点杂交结果
βΑ/βΑ

分子生物学检验技术第1章

壹
贰
二、基因变异与单基因病
多基因病的发病机制十分复杂，遗传因素和环境因素共同起作用。
01
这些病的发病有一定遗传基础，常表现出家族倾向，但却又不符合一般的遗传方式。
02
三、基因变异与多基因病
02
多基因病的发生涉及诸多因素，某一因素的变异不足以解释多基因病的发病机制。
01
参与多基因病发生的基因被称为疾病相关基因。
01
生物芯片必将在基因功能研究、基因诊断、药物筛选和个体化药物治疗等方面扮演重要角色，具有重大的应用潜力。
02
二、生物芯片
三、蛋白质组学
当今的研究重点已经开始从揭示生命的遗传信息过渡到对生命活动的直接执行者——蛋白质进行整体水平的研究，蛋白质组学正成为目前揭示生命规律的新的重大热点领域。
三、基因变异与多基因病
线粒体DNA突变使线粒体功能发生障碍，直接影响人体组织和细胞的各种生物学功能，导致线粒体遗传病。
01
它具有母系遗传、基因突变具阈值效应以及多系统受累等遗传学特征。
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四、线粒体基因变异与线粒体遗传病
肿瘤的发生是由多种致癌因素综合作用的结果。
癌基因包括病毒癌基因和细胞癌基因,它们具有潜在诱导细胞恶性转化的特征。
编者（以姓氏笔画为序）
卫生部“十一五”规划教材全国高等医药教材建设研究会规划教材
唐冬生（佛山科学技术学院）钱晖（江苏大学）倪培华（上海交通大学）黄迪南（广东医学院）彭颖（温州医学院）樊绮诗（上海交通大学）
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编者（以姓氏笔画为序）
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卫生部“十一五”规划教材全国高等医药教材建设研究会规划教材
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