志贺氏菌检测

生化特性
能分解葡萄糖，产酸不产气（福氏6型和鲍 氏13、14型的部分菌株会产生少量气体）。 大多不发酵乳糖，仅宋内氏菌迟缓发酵乳糖。 靛基质产生不定，甲基红阳性，氧化酶、VP 试验均阴性，不产生H2S和尿素酶。根据生 化反应可进行初步分类。
常以甘露醇和乳糖发酵特性来区分志贺菌的生化群
常以甘露醇和乳糖发酵特性来区分志贺菌的生化群
从37℃培养16～24h的分离培养基上，观察 挑选可疑菌落，接种TSI或KAI培养基，先 穿刺后划线，做好标记，取出后直接接种 动力-靛基质-尿素（MIU）培养基，放37℃ 培养16h以上，观察结果。
志贺菌属在TSI上的生化反应为：斜面红色， 底层产酸黄色，不产气。 在KAI上斜面红色，底层产酸黄色，不产气 或有少量气体，不产生H2S。 MIU：无动力、尿素酶阴性、靛基质阴性或 阳性。
A群：痢疾志贺菌，甘露醇、乳糖、棉子糖及鸟氨 酸脱羧酶均阴性。 B群：福氏志贺菌，棉子糖和甘露醇阳性（其 中4、 6型常见甘露醇阴性的变种），乳糖及鸟氨酸 脱羧酶阴性。 C群：鲍氏志贺菌，甘露醇阳性，乳糖、棉子糖及 鸟氨酸脱羧酶（除13型）均阴性。 D群：宋内氏菌，甘露醇和乳糖（迟缓）阳性，鸟 氨酸脱羧酶阳性。
主要内容
生物学性状 标本采集和运送 分离培养 初步鉴定 血清凝集 系统生化鉴定
生物学性状
形态与染色 为革兰氏阴性杆菌，长约2-3μ m ,宽0.50.7μ m 。不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛， 有菌毛。
培养特性
需氧或兼性厌氧。营养要求不高，能在普 通培养基上生长，最适温度为37℃，最适 pH为6.4-7.8。37℃培养18-24小时后菌落 呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、 边缘整齐，直径约2nm，宋内氏菌菌落一般 较大，较不透明，并常出现扁平的粗糙型 菌落。在液体培养基中呈均匀浑浊生长， 无菌膜形成。
食品
固体：于广口瓶或无菌塑料袋中，实验室无菌称
取25g样品，剪碎后加入225ml GN增菌肉汤中， 37℃增菌6～8h。 液体：采取食品50～100ml，实验室无菌称（量） 取25g（ml）样品加入225ml GN增菌肉汤中， 37℃增菌6～8h。 乳粉类应以无菌操作取25g放入装有225ml灭菌盐 水的三角瓶中，摇匀，37℃增菌6～8h。
增菌分离 水、食品及其他标本于GN增菌肉汤中 37℃增菌6~8h后，直接划线分离MAC及 HE琼脂平板各一块，37℃培养18~24h。
志贺氏菌在不同平板上的菌落形态
在HE上为透明、白色或浅绿色菌落 。 在MAC上为无色（乳糖阴性） ，圆形，半 透明，湿润、光滑、突起，大小为1～2mm 的菌落。
初步生化反应
志贺氏菌检测技术
河北省疾病预防控制中心 甄素娟
志贺氏菌是引起人类细菌性痢疾的病原 菌，仅引起人类的肠道内感染，对其他动物 均无致病力，可随患者的粪便污染外环境。 细菌性痢疾至今仍然是我国城乡最为常 见的肠道传染病,病人和带菌者是本病的传染 源，尤以非典型病例、慢性患者和带菌者在 流行病学上的意义更为重要。
下列培养物可排除志贺菌： KIA斜面和底部均呈黄色或红色 有动力者 产硫化氢者 尿素酶阳性者 产生气体者（福氏志贺菌6型有时产少量气体） 在18～48小时发酵乳糖的培养物（宋内菌 3～5天迟缓分解乳糖）
血清分型
系统生化鉴定
谢 谢
血液: 当怀疑为菌血症时，静脉采集5~10ml血液， 按1:10比例加入血增菌培养液中进行培养。
其他标本:
疑似痢疾爆发疫情病原学检测时 外环境样本可采集患者的污染衣物、剩饭菜、可 疑食品、抹布、污水、井水等，采集的标本应立 即按1：10的比例接种GN增菌肉汤，置37℃增菌 6～8h。 媒介昆虫如苍蝇类，用消毒蝇拍拍打10~15只/份, 装入9mlGN增菌肉汤中，尽快送实验室，置37℃ 增菌4～6h。
水标本
直接增菌法:直接采集可疑水样450ml，加入50ml
10倍浓缩的GN增菌肉汤，37℃增菌6～8h。 过滤集菌法：采集水样500～1000ml用无菌滤膜 （ 0.45～0.65µ m）过滤，取下菌膜直接贴种于选 择性平板培养过夜或无菌条件下剪碎后放入9mlGN 增菌肉汤，37℃增菌6～8h后转种平板 。 吸附沉淀法
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志贺菌属抗原分类
血清分类 生化特性 亚型 甘露醇 — 鸟氨酸 脱羧酶 —
菌名
志贺菌
群 A
型 1～12
福氏菌 鲍氏菌 宋内菌
B 1～6,X、y 变种 C D 1～18 1
1a,1b,1c,2a,2b,3a,3b, 3c,4,4a,4b,4c,5a,5b
+ + +
— — +
标本采集
粪便标本 应尽量在抗生素应用前采集，采集新鲜粪便 标本中的脓血、黏液部分1g～5g（水样便 1ml～5ml）。 肛拭子或采便管 将标本立即保存于Cary-Blair运送培养基内送检
标本运送
现场采集的粪便标本若在2小时内不能送达 实验室，应置冷藏包中送检（内置冰排， 可保存1~3天）。 水、食品等外环境标本若在2小时内不能送 达实验室，应保存于带有冰排的采样箱内 送检。
分离培养
直接分离 采用接种环多点蘸取粪便标本中可疑部分 或用采样拭子直接涂种，接种于麦康凯 （MAC）及海克顿（HE）肠道琼脂平板各 一块。也可选XLD、SS、DHL或DCA，但 应慎用SS琼脂，其可抑制Ⅰ型志贺菌生长。 分离平板置37℃培养18~24h。