志贺氏菌检验

三、微生物检验
（一）检验步骤（程序） 检验步骤（程序） 检样→ 样品处理 增菌培养→ 、 处理→ 检样 → 样品 处理 → 增菌培养 → SS、 EMB平板分离培养→初步生化鉴定→最 平板分离培养→ 平板分离培养 初步生化鉴定→ 后血清学鉴定→ 后血清学鉴定→报告
（二）检验操作要点
志贺氏菌在常温中生存的时间较短， 志贺氏菌在常温中生存的时间较短，应尽快进 行试验。 行试验。 • 如24h内不能检验，样品应在冰箱内 内不能检验， 内不能检验 • 长时间不能检验，放在低温冰箱内。 长时间不能检验，放在低温冰箱内。
发酵乳糖的某种肠杆菌
HE平板原理及反应 平板原理及反应
不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生 硫化氢，可能是沙门氏菌
不发酵乳糖的肠道菌，可能就是志 贺氏菌
SS平板原理及反应 平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar)
是沙门氏菌。有黑色中心。 如果没有黑色中心，就很可能 是志贺氏菌了 大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌
2－志贺氏菌 3－沙门氏菌 4－大肠杆菌 － － －
Organism Test Result 1. Pseudomonas aeruginosa（铜绿假 单胞菌）：Motile 2. Staphylococcus aureus：Non-motile 3. Bacillus subtilis：Motile
（2）进一步的生化试验 ）
葡萄糖铵 西蒙氏柠檬酸盐 赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶 pH7.2尿素 尿素 KCN生长 生长 水杨苷和七叶苷的分解 -
（3）生化分群 ）
五项生化试验： 五项生化试验： 乳糖 甘露醇 棉子糖 甘油发酵 靛基质试验， 靛基质试验
5、结果报告： 、结果报告：
• 综合生化血清学试验结果判定菌群， 菌型，并做出报告。
二、志贺氏菌的致病性与食物中毒
（一）流行病学
传染源
• 食物、病人、粪便、苍蝇等 食物、病人、粪便、
（二）志贺氏菌的致病性 致病因素： 侵袭力、菌体内毒素、 侵袭力、菌体内毒素、外毒素
（二）临床症状
A、急性细菌性痢疾： 、急性细菌性痢疾： • 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： 、慢性细菌性痢疾： • 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。
（三）、生化反应 ）、生化反应
1、 发酵葡萄糖 ， 产酸不产气 ， 除宋氏志贺 、 发酵葡萄糖， 产酸不产气， 氏菌外，均不发酵乳糖。 氏菌外，均不发酵乳糖。 2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生 2S，不分解尿素，V-P试验阴性， 试验阴性， 、不产生H ，不分解尿素， 试验阴性 不能利用柠檬酸盐。 不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。 、甲基红阳性。
志贺氏菌在TSI生长的结果（现象）： 生长的结果（现象） 志贺氏菌在 生长的结果 斜面产碱仍为红色或粉红色； （1）斜面产碱仍为红色或粉红色； （2）底层产酸不产气，变黄色； 底层产酸不产气，变黄色； 不产H ，不出现黑色。 （3）不产 2S，不出现黑色。 志贺氏菌在半固体培养基生长：沿线生长， 志贺氏菌在半固体培养基生长：沿线生长，无 半固体培养基生长 动力。 动力。
1、增菌培养 、 培养基： 增菌液 培养基：GN增菌液 在 36±1℃ 6—8h ， 当培养液出 ± 8 现轻微混浊即中止培养。 现轻微混浊即中止培养。
2、分离培养
• 强选择性平板：SS或HE、WS 强选择性平板：SS或HE、 • 弱选择性平板：EMB或麦康数 弱选择性平板： 或麦康数 在工作中36 36± 18—24 24h 在工作中36±1℃培养 18 24h， 菌落特征：无色透明，中等大小，光滑圆形菌落。 菌落特征：无色透明，中等大小，光滑圆形菌落。
志贺氏菌的检验
一、生物学特性 ）、形态与染色 （一）、形态与染色 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞， 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛 2~3um*0.5~0.7um
（二）、培养特性 ）、培养特性
1 、 需 氧 或 兼 氧 性 厌 氧 ， 最 适 温 度 37℃ ， ℃ PH7.2~7.4 2、在普通琼脂和 平板上 ，能形成圆形 、 微凸 、 平板上， 、 在普通琼脂和SS平板上 能形成圆形、微凸、 光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、 光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小 的菌落 3、 宋氏志贺氏菌菌落较大 ， 较不透明 ， 粗糙而扁 、 宋氏志贺氏菌菌落较大， 较不透明， 平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。 平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。 平板上可迟发酵乳糖 4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。 、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
在志贺氏菌检验中可弃去的培养物： 在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：
（1）在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物 ） 表面上呈现蔓延生长的培养物 发酵乳糖、 （2）在18~24h发酵乳糖、蔗糖的培养物 ） 发酵乳糖 （3）不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长 ）不分解葡萄糖， 的培养物。 的培养物。 （4）产气的培养物 ） （5）有动力的培养物 ） （6）产H2S的培养物 ） 的培养物
麦康凯琼脂平板
EMB平板照片及原理 平板照片及原理
来自百度文库
3、初步生化鉴定 、
从平板上挑取3—4个可疑菌落 ， 接种于 个可疑菌落， 接种于TSI 从平板上挑取 个可疑菌落 和 葡 萄 糖 半 固 体 培 养 基 各 一 管 ， 36℃ ， ℃ 18—24h， ，
葡萄糖半固体原理及结果。 葡萄糖半固体原理及结果 三糖铁（ 三糖铁（TSI）琼脂试验的原理 ）
（五）志贺氏菌的抵抗力
• 志贺氏菌属在外界环境中的生存力，以宋内氏最强，福氏 菌次之，志贺氏菌最弱。 • 一般在潮湿土壤中能存活34天，37℃水中存活20天， 在粪便内（室温）存活11天。日光直接照射30分钟，5660℃10分即被杀死，对高温和化学消毒剂很敏感，1%石 炭酸中15-30分钟即被杀死，对氯霉素、磺胺类、链霉素 15-30 敏感，但易产生耐药性。
4、血清学试验和生化鉴定试验 、
（1）血清学分型： ）血清学分型： 凡凝为志贺氏菌，挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试 验。 先用4种志贺氏菌多价血清检查 如果由于K抗原的存在而不 种志贺氏菌多价血清检查， 先用 种志贺氏菌多价血清检查，如果由于 抗原的存在而不 出现凝集，应将菌液煮沸后再检查； 出现凝集，应将菌液煮沸后再检查 如果呈现凝集，则用A1、 、 群多价和 群血清分别试验。 群多价和D群血清分别试验 如果呈现凝集，则用 、A2、B群多价和 群血清分别试验。 如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。 福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因 子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用 型因子血清检查。 4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株 种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分 种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株 别检查，并进一步用1～15各型因子血清检查。如果鲍氏多 价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型 因子血清检查。
（四）、抗原结构 ）、抗原结构
1、抗原构成： 、抗原构成： O抗原： 抗原： 抗原 群特异性抗原： 、 、 、 群特异性抗原：A、B、C、D K抗原：除B群外，一般有 抗原 抗原： 群外， 抗原 群外 一般有K抗原
2、志贺氏菌的分群与血清型 、
志贺氏菌分为四群： 志贺氏菌分为四群： A群（痢疾志贺氏菌）：1~10型 群 痢疾志贺氏菌） 型 B群（福氏志贺氏菌）：1~6型+X、Y两个变种， 两个变种， 群 福氏志贺氏菌） 型 、 两个变种 C群（鲍氏志贺氏菌 ）：1~15型 群 型 D群（宋内氏志贺氏菌） ：1个型 群 宋内氏志贺氏菌） 个型