红细胞血型抗体效价测定标准操作规程

红细胞血型抗体效价测定标准操作规程

人血清中抗-A、抗-B主要为IgM型，小部分为IgG型。IgM型分子由5个辐射状排列的单体组成，单体间通过μ链倒数第二位的二硫键与J链互相连接，单体间的二硫键比单体内的链间及链内二硫键容易被巯基试剂破坏。IgM型分子经巯基试剂处理后，裂解为6~7s亚单位，仍保持与抗原结合的能力，但已失去其与红细胞凝集的作用。IgG抗体分子则不被巯基试剂灭活，保持与相应红细胞致敏的血清学特性。

1.目的为规范红细胞血型抗体效价测定的技术操作，依据《输血实验室管理程序》的要

求制定本章程。

2.适用范围适用于医疗机构输血科（血库）测定IgG抗-A、IgG抗-B及IgG或IgM类红细胞

不规则抗体效价，用以评估母婴血型不合的新生儿溶血病的风险程度及产前检查等其他临床需要。

3.职责医疗机构输血科(血库)技术人员负责红细胞血型抗体效价测定。

4.原理检测IgM类红细胞血型抗体，将受检血清经连续倍比稀释后与表达检测目标抗体

对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。若检测IgG类红细胞血型抗体，则先用巯基试剂2-Me 裂解其中的IgM型抗体，经巯基试剂2-Me处理后再测定IgG类红细胞血型抗体。5.所需材料和设备

5.1.材料3%～5%的A、B型反定型试剂红细胞、0.2 mol/L二巯基乙醇(2-Me)应用液、抗球

蛋白试剂、待检者血标本、微柱凝胶抗球蛋白卡。

5.2.设备普通离心机、普通显微镜、电热恒温水浴箱、血型血清学专用离心机、微柱凝

胶卡专用孵育器及离心机。

6.检测环境室温应控制在18-27℃，湿度应控制在30%-70%。

7.步骤与方法

7.1.盐水介质法测定IgM类红细胞血型抗体效价：

7.1.1.排试管12支，编号，第2至第12管每管加生理盐水0.1ml，在第1管及第2管加受检者

血清各0.1ml，将第2管混匀后吸出0.1ml，移至第3管内，以此类推，连续倍比稀释至第12管（2048倍）。

7.1.2.在12支试管中，分别加入3%检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞50μl，轻摇试管架。

7.1.3.用血型血清学专用离心机120g离心1min后，观察并记录有无溶血及凝集情况。

7.1.4.结果判读：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数即为检查目标抗体的效价，根

据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。

7.2.2-Me裂解IgM抗体：吸取受检者血清0.2ml，加2-Me应用液0.2ml，混匀，将试管口塞

封，置37℃水浴中孵育30min。

7.3.倍比稀释已裂解IgM抗体的受检血清：排列小试管11支，编号，第2至第11管每管加生

理盐水0.1ml，在第1管及第2管加2-Me处理血清各0.1ml，将第2管混合后吸出0.1ml，移至第3管内，以此类推，作连续倍比稀释至第11管（2-Me处理血清已2倍稀释，第11管为2048倍稀释）。

7.4.抗球蛋白法测定IgG类红细胞血型抗体效价

7.4.1.每管各加入3%检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞50μl，轻摇试管架，置37℃孵育

1h。

7.4.2.结果观察，如在前几管内发现有红细胞凝集者，是由于高效价IgG抗-A（B）所引起，

称为盐水效价。

7.4.3.其余未见凝集的试管，再以生理盐水充分洗涤3次，倾去洗涤液，留取压积红细胞。

7.4.4.每管加最适稀释度抗人球蛋白血清25μl，混合。

7.4.5.1300g离心15s。

7.4.6.轻轻摇动试管，观察并记录各管的凝集情况。

7.4.7.结果判定：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数即为检查目标抗体的效价，根

据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。

7.5.凝聚胺法测定IgG类红细胞血型抗体效价

7.5.1.按7.2.2倍比稀释受检者血清后，在11支试管中各加入3%检测目标抗体对应抗原的试

剂红细胞50μl，轻摇试管架。

7.5.2.执行《凝聚胺试验标准操作规程》做凝聚胺实验。

7.5.3.结果判读：完成凝聚胺试验后，观察并记录各管凝集情况，镜检呈“1+”凝集的最

高稀释倍数的倒数即为检查目标抗体的效价，根据“红细胞凝集强度与评分标准”

评分。

7.6.微柱凝胶抗球蛋白法测定IgG类红细胞血型抗体效价

7.6.1.按7.2.2倍比稀释受检者血清后，在11支试管中各加入1%已知目标抗体对应抗原表型

的试剂红细胞100μl，轻摇试管架。

7.6.2.执行《微柱凝胶试验标准操作规程》红细胞血型抗体效价测定。

7.6.3.结果判读：根据红细胞在微柱凝胶中的滞留情况，以“1+”凝集的最高稀释倍数的

倒数即为检测目标抗体的效价，根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。

8.效价判定及评分标准

红细胞血型抗体效价测定以“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数作为检测目标抗体的效价，并根据稀释血清各管凝集强度进行评分，红细胞凝集强度与评分标准为：4+=12分，3+=10分，2+=8分，1+=5分，±或W+=2分，阴性=0分。以稀释各管评分之和作为积分。

9.注意事项

9.1.连续稀释血清操作时，应先混匀再稀释下一管，以免稀释不均匀。

9.2.盐水介质法测定血型抗体效价离心后，试管上清出现溶血，表明不仅有抗原抗体反应，

而且有补体激活，有重要临床意义。

9.3.稀释液容量越小，可能产生的误差越大，故应适当采用较大容量血清进行倍比稀释。

9.4.报告时应以效价和积分评价血清抗体。

9.5.不同的检测方法对IgG抗体检测敏感性差异较大，通常抗球蛋白法比凝聚胺法高1～2

个稀释倍数，报告时应注明试验方法。

10.相关文件

10.1.《中国输血技术操作规程》（血站部分）天津：天津科学技术出版社，1997

10.2.《输血技术学》（第二版）北京：人民卫生出版社，2002

11.相关记录

11.1.《血型血清学试验报告单》