全自动化学发光免疫分析仪课件
化学发光免疫分析PPT幻灯片课件
AP H3PO4 +
4-MU
360nm
激发光
荧 光
11
2.直接化学发光剂
特点：不需催化剂，只需改变溶液的pH等条件 就能发光的物质。反应迅速、背景低、 信比高，发光量与AE浓度呈线性关系。
常用试剂：吖啶酯（acridinium，AE）
CH 3
N+
- HO 2
CO
O
CH 3 N
O CO O
2.分离技术 在电磁场中进行2-3次洗涤后，很快 地将未结合的多余Ag和标记Ab洗去。
3.化学发光反应 经洗涤的磁珠中，加入H2O2和 pH纠正液NaOH，这时AE不需要催化剂即分解并 发光，由集光器接收，经光电倍增管放大，记 录1S内所产生的光子能，其积分与被测物含量
成正比，按标准曲线，仪器可计算出被测物含21 量。
2.化学发光免疫测定技术(CLIA)
chemiluminescence immunoassay
3.电化学发光免疫测定技术(ECLI)
electrochemiluminescence immunoassay
• 按分离方法不同分
1.微粒子化学发光免疫测定
2.磁颗粒化学发光免疫测定
3
第一节 发光与化学发光剂
2.分离技术 将复合物转移到玻璃纤维上，用缓 冲液洗涤，没结合的抗原被洗脱，酶标抗体-抗 原-胶乳微粒抗体复合物则被保留在纤维膜上。
3.酶促发光反应 加入4-MUP，酶标抗体上AP将 4-MUP分解，形成4-MU，它在360nm激发光的照 射下，发出448nm的荧光，经荧光仪记录，放大， 根据标准曲线由电脑计算出所测物质的含量18
E
E 洗涤
E
E弃上清
《化学发光分析》课件
本课程将介绍化学发光分析的工作原理、分类、常用试剂和仪器、典型实验 操作步骤以及优点和应用。让我们一起探索这一极具活力和创新性的化学分 析技术。
化学发光分析概述
什么是化学发光分析？
化学发光分析是指利用发光剂 （luminophore）与感光器 （photodetector）在光激发条件下 发生发光反应进行分析的技术。
发光机制和原理
发光反应主要包括螯合发光、化学 发光、电化学发光和生物发光，其 基本原理为激发能量从分析物传递 到发光剂。
化学发光分析的分类
化学发光分析主要分为储能法、电 化学发光法、免疫分析法、分子印 迹技术法和气相化学发光分析 （GPCA）等。
优点和应用
快速、敏感、高效
化学发光法具有灵敏度高、特异性强、检测时间短和快速分析等优势，被广泛应用于临床、 食品、环境、药学、安全等领域。
数据统计和分析
4
利用计算机等工具进行数据的整理、计算与 分析，得出结果，并进行结果的验证和确认。
取样
用适当的方法取得样品，并得到有效的样品。
发光检测
激发分析样品使其产生发光，并利用仪器对 其进行检测。
案例分析和总结
CRO公司使用化学发光分析技术加 快药代动力学评估
合同研究组织（CRO）将计划100名志愿者的药代动力 学模拟研究里程碑提前了八个月，其采用了高通量类 似物筛选、高通量药代动力学测定和新一代大规模并 行化药代动力学建模等技术。这些技术包括，化学发 光法作为测定细胞器的特异性标记的方法。
电化学发光分析
电化学发光分析仪（ECL）是用于 电化学发光分析的专用设备，适用 于光谱分析和光度测定等分பைடு நூலகம்。
酶标仪
酶标仪是一种测量酶反应的光度仪 器，通常用于免疫学、生化学等领 域的分析。
化学发光免疫分析技术ppt课件
电化学发光免疫分析示意图
电化学发光免疫测定示意图
标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
目前我院最新引进的迈瑞CL-2000i 全自动化学发光免疫分析系统 主要以化学发光酶免疫分析为主。拥有国内完全自主知识产权，它的 酶促化学发光是目前免疫诊断中最灵敏的化学发光体系之一，其核心 性能达到了国际同类产品先进水平。
分配样品, 磁颗粒 和试剂
孵育 使反应物
结合
在磁场中 清洗去除 未结合物质
加入 底物 产生 信号
孵育, 促使信号 的产生
信号 检测
3.3 电化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记 抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体， 在电场中因电子转移而发生特异性化学发光 反应，它包括电化学和化学发光两个过程。
• 安全性好及使用期长
• 免除了使用放射性物质。到目前为止，还未发现其危害性；试剂稳定，保存期可达一 年。
二、化学发光免疫分析基本原理
化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学 发光分析系统。免疫反应系统是将标记物质标记在抗原或 抗体上, 经过特异性免疫反应后,形成抗原2抗体复合物。 然后进行对标记物进行检测, 来测定待检物。化学发光分 析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧 化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到 稳定的基态时, 同时发射出光子, 利用发光信号测量仪器 光量子产率。
化学发光免疫分析
陈仓医院检验科：
一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望
一、化学发光免疫技术的概念
免疫检验自动化仪器分析PPT(共95页)【95页】
定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入待测抗原，此时反应立即开始，在反应的第一阶段，溶液中产生的散射光信号波动较大，所获取的信号计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射光信号在开始反应7.5s～2min内的第一次读数，专门在抗原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误差降到最低。
速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续测定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅1～2min即可完成。
(三)速率散射比浊法（rate nephelometry）
(二)定时散射比浊法（fixed time nephelometry）
1. 仪器测定技术要点
(1) 抗原抗体预反应阶段 (2) 反应阶段(3) 信号检测
2. 抗原过量检测
(1) 抗体适当过量 (2) 对抗原过量进行阈值限定
定时散射比浊法测定原理示意图
BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪
二、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
（二）方法评价
本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng/L水平，操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子(RF)可与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F(ab′)2片段代替IgG既可消除此干扰，又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重影响结果。
第一节 自动化免疫浊度分析系统
免疫浊度分析的基本原理是：抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG、NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（>19S），使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
检验技术化学发光和荧光免疫技术及仪器授课PPT
PART 03
荧光免疫技术详解
荧光免疫技术原理
或抗体结合，形成荧光标记 的抗原或抗体。
激发与发射荧光
在特定波长的光激发下，荧光标记物发出特定波长的荧光，通过检 测荧光信号实现对抗原或抗体的定量或定性分析。
信号放大
荧光免疫技术常采用信号放大方法，以提高检测灵敏度。常见的信 号放大方法包括酶标记、化学发光标记和量子点等。
对化学发光与荧光免疫技术进行比较，分 析各自的优缺点，并展望未来发展趋势和 挑战。
PART 02
化学发光技术基础
化学发光原理
化学发光是指物质在化学反应过程中吸收反应释放的能量，并以光子的形式释放出 来。这个过程不需要外部光源激发，因此被称为化学发光。
化学发光反应通常可以分为两类：一类是直接化学发光，反应过程中直接产生光子 ；另一类是能量转移化学发光，涉及两个或多个反应物之间的能量转移。
，为临床诊断和治疗提供有力支持。
荧光免疫技术在病毒与细菌检测中的应用
总结词
高分辨率、可视化结果、快速检测
详细描述
荧光免疫技术利用荧光物质标记抗体或抗原 ，通过荧光信号的强弱判断目标物质的含量 。该技术具有高分辨率和可视化结果的特点 ，能够快速检测病毒和细菌等微生物，为感 染性疾病的诊断和治疗提供重要依据。
课程内容概述
化学发光技术及其仪器
荧光免疫技术及其仪器
介绍化学发光技术的基本原理、发光标记 物、发光反应体系以及常见的化学发光分 析仪器。
探讨荧光免疫技术的基本原理、荧光标记 物、荧光反应体系以及常见的荧光免疫分 析仪器。
临床应用实例
技术比较与展望
通过实际案例分析，介绍化学发光与荧光 免疫技术在临床检验中的应用，包括传染 病检测、肿瘤标志物检测、激素检测等。
化学发光法技术概要ppt课件
样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－ 30分钟；
洗涤3-5次，加入试剂3（或试剂3+试剂4）， 37℃孵育5－30分钟；
洗涤3-5次； 加入发光底物， 5-15分钟检测。
16
全自动仪器其他要求
样品加量10µl~200 µl，试剂加量50µl~200 µl， 随检测项目不同而有所增减。
化学发光法技术概要 及自动化免疫分析仪 技术要点
科华生物研发中心光免小组 李基
2010.7.14
1
化学发光法反应基本原理
➢ 抗原-抗体反应
抗体能够特异性识别相对应的抗原，并与之结合，这种反 应称之为抗原抗体反应。 抗原-抗体反应具有特异性、敏感性、可逆性等特点。
➢ 酶促底物发光
将检测试剂中的抗原或抗体用碱性磷酸酶（AP）加以标 记，通过发光底物测定相对光子数（RLUs值），来检测 目标抗体或抗原的浓度。
2
化学发光法反应模式
一步法 （15min反应+15min显色）
➢ 夹心法 ➢ 竞争法
两步法 （15min+15min反应+15min显色）
➢ 间接法 ➢ 捕获法
3
一步法：夹心法
4
一步法：竞争法
5
两步法：间接法
6
两步法：捕获法
7化学发光法ຫໍສະໝຸດ 应介质✓ 固相介质：磁珠 ✓ 酶标记物：碱性磷酸酶（AP） ✓ 发光底物：AMPPD
第一个结果报告时间（min ）
检测通量（T/hour）
10
68-120
15.6
200
<15.6
1200
18
240
15
化学发光免疫分析PPT幻灯片课件
+N2 + H2O +光
8
对-羟基苯乙酸（HPA）
• HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体（荧光 物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长 的荧光，可用荧光光度计测量。
1.2 HPA
H2O2 HRP
HO
CH2 COOH +荧
光
HO
CH 2 COOH
氧化二聚体
9
AMPPD
化学发光免疫技术
第一节 发光与化学发光剂 第二节 发光酶免疫测定（CLEIA） （chemiluminescence enzyme immunoasssay） 第三节 化学发光免疫测定技术(CLIA) （chemiluminescence immunoassay） 第四节 电化学发光免疫测定技术(ECLI) (electrochemiluminescence immunoassay)
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一
步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应
发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为： 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术
根据免疫学反应模式分
1.双抗体夹心法和双抗原夹心法
3.固相抗原竞争法：
14
荧光酶免疫测定技术反应原理图
R R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
12
3.电化学发光剂
• 是指通过在电极表面进行电化学反应而发出 光的物质。
特点：①反应在电极进行； ②电子供体为：三丙胺（TPA） ③化学发光剂：三联毗啶钌
三联毗啶钌 分子结构图
N
N
N
新产业全自动化学发光ppt课件
化学发光主要技术
包被技术：
板式化学发光 固液相 5%参加反应 磁颗粒化学发光 准均相 95%参加反应
化学发光主要技术
发光原理
直接化学发光
标记物在碱性（酸性）条件下，加强氧化剂，瞬间发光
厂家由12个点做成标准曲线，用户只要高低两点 定标修正曲线即可，节省试剂，结果稳定、准确
酶促化学发光
标记物在酶催化下，缓慢发光
肿瘤标志物
糖类抗原153 糖类抗原199 糖类抗原50 糖类抗原242 糖类抗原724 细胞角蛋白十九片段 神经元特异性烯醇化酶 Stangec-100蛋白质 鳞状细胞癌相关抗原 胃蛋白酶Ⅰ 胃蛋白酶Ⅱ
CA153 CA199 CA50 CA242 CA724 CYFRA211 NSE Stangtec-100 SCCA Pepsinogen Ⅰ Pepsinogen Ⅱ
新产业全自动化学发光
深圳新产业
国家高新技术企业 国家高科技企业示范工程单位 国际最大的红杉资本看中并投资的企业
公司计划两年内上市
新产业化学发光优点
多
试剂项目多，68个已注册项目，rT3、TRab、肝纤、 CA50、CA242、CA724、211、NSE、S-100 IAA、GAD65、 IGF-1、醛固酮、血管紧张素、PCT等等。另外37个项目正 在注册中，即将批准
快 180个测试/小时，第一个测试17分钟 好 故障率低，不停机 可连续装载反应杯、样本、试剂盒 省 试剂价格低、标准品免费
免疫标记技术发展历程
检测对象： 血液（尿液）中有很多含量非常低 （ng/ml 、 mg/ml），但非常灵敏，其浓度 变化能准确反应人体疾病的发生、发展状况。 如： T3、T4、AFP、肌钙等等 检测要求：准确、定量
化学发光免疫分析技术 ppt课件
思考题
1．什么是发光免疫分析？什么是化学发光免疫分析？ 2．化学发光与荧光的区别？化学发光反应的条件？ 3．什么叫化学发光剂？化学发光剂必须具备那些条件？ 4．吖啶酯化学发光的原理和特点是什么？ 5．酶促反应的发光剂有哪些？其发光原理和特点是？
6．三联吡啶钌发光的原理和特点是什么？
ppt课件
3
发光免疫分析:是将发光分析和免疫反 应相结合而建立起来的一种新的检测
微量抗原或抗体的新型标记免疫分析
技术。
ppt课件
4
第一节 概 述
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5
三大经典标记技术
放 射 免 疫 技 术 酶 免 疫 技 术 发 光 免 疫 技 术
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6
发光:是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态
34
辣根过氧化物酶标记化学发光免疫分析示意图
ppt课件 35
㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，
在与反应体系中的待测标本和固相载体发生
免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶
标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，
碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。
化学发光免疫分析技术
ppt课件
1
第十章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述
一、化学发光
二、化学发光效率 第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
ppt课件 2
第三节 化学发光免疫分析的类型 一、直接化学发光免疫分析 二、化学发光酶免疫分析 三、电化学发光免疫分析 四、临床应用 思考题 小结
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ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记
电化学发光分析项目及临床意义 ppt课件
全自动电化学发光免疫分析 临床意义
HCG+β 妊娠后一周HCG浓度就可以判定妊 娠。现妊娠无关的HCG浓度升高见于其 它疾病患者，如生殖细胞肿瘤、卵巢肿 瘤、膀胱肿瘤、胰腺肿瘤、胃肿瘤、肺 肿瘤和肝肿瘤。
ppt课件
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全自动电化学发光免疫分析 临床意义
• • • • • 促甲状腺素（TSH） 三碘甲状腺原氨酸（T3） 游离三碘甲状腺原氨酸（FT3） 甲状腺素（T4） 游离甲状腺素（FT4）
ppt课件 26
全自动电化学发光免疫分析 临床意义
三碘甲状腺原氨酸（T3） T3是甲状腺激素对各种靶器官作 用的重要激素，主要在甲状腺以外，大 部分在肝脏由T经脱碘生成。因此，T3 浓度反应甲状腺对周边组织的功能甚于 反映甲状腺的分泌状态。T3是查明早 期甲亢、监控复发性甲亢的重要依据。
ppt课件 27
ppt课件
ห้องสมุดไป่ตู้
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全自动电化学发光免疫分析 临床意义
促甲状腺素（TSH）： TSH在垂体前叶的特异性嗜碱性细胞内 生成，垂体释放TSH是机体发挥甲状腺素生 理作用的中枢调节机制，可剌激甲状腺素的 生成和分泌，并有增生效应。TSH检测是查 明甲状腺功能的初筛试验，游离甲状腺激素 的微小变化就会带来TSH浓度向反方向的显 著调整。因此，TSH是检测甲状腺功能非常 敏感的特异性指标，特别适合于早期检测或 排除下丘脑-垂体-甲状腺调节系统功能紊乱。
ppt课件
非小细胞肺癌相关抗原 21-1 （Cyfra21-1） 神经元特异性烯醇化酶 （NSE） 总前列腺特异性抗原 （Total PSA） 游离前列腺特异性抗原 （Free PSA） S100蛋白 人绒毛膜促性腺激素+β 亚单位（HCG+β ）
全自动化学发光免疫分析仪课件
全自动化学发光免疫分析仪技术审查指导原则（第一次征求意见稿）一、前言本指导原则旨在指导注册申请人对全自动化学发光免疫分析仪注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本指导原则是对全自动化学发光免疫分析仪的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
二、适用范围化学发光免疫分析根据化学发光物质的类型和发光特点，可分为电化学发光免疫分析和化学发光免疫分析，其中化学发光免疫分析根据发光剂的不同，可分为直接化学发光免疫分析、酶促化学发光免疫分析和鲁米诺氧途径免疫分析。
目前，各类型化学发光免疫分析的常见发光剂包括：电化学发光剂为三联吡啶钌[RU（bpy）3]2+，直接化学发光剂为吖啶酯（AE），酶促化学发光剂为辣根过氧化物酶（HRP）催化鲁米诺（3-氨基苯二甲酰肼，luminol）及其衍生物或者碱性磷酸酶催化3-（2′-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3″-磷酰氧基）苯-1,2-二氧杂环丁烷（AMPPD），鲁米诺氧途径发光剂为酞箐、二甲基噻吩衍生物及Eu螯合物。
化学发光免疫技术根据反应过程中标记物是否需要分离可分为均相反应和非均相反应。
均相反应主要应用于鲁米诺氧途径免疫分析中，而非均相反应则应用于其他类型化学发光免疫分析中，通过采用固相分离、过滤分离、珠式分离、顺磁性颗粒分离等方式实现游离标记物和免疫复合物标记物的分离，其中顺磁性颗粒分离较其他分离方式更为常用。
化学发光免疫技术医学课件
碳二亚胺（EDC）缩合法、过碘酸钠氧化法、重氮盐偶联法
间接偶联：用功能交联剂在标记物和被标记物之间 插入一条链或一个基团，使之连接成结合物
琥珀酰亚胺活化法
1. 碳二亚胺（EDC）缩合法
经缩合反应，蛋白质分子中的游离羧基与发光剂中的氨基形成稳定的酰胺键 用于结构中有羧基或氨基的标记物
内容
第一节 概述 一、发光的分类 二、化学发光产生的条件 三、化学发光效率 四、化学发光免疫技术的分类 五、化学发光免疫分析的非均相分离方式
第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
第三节 化学发光免疫分析的类型 一、直接化学发光免疫分析 二、化学发光酶免疫分析 三、电化学发光免疫分析 四、鲁米诺氧途径免疫分析
•直接化学发光剂 •间接化学发光剂
直接化学发光剂
------可直接标记抗原或抗体
1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波 长为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发态产 物 N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。
2．三联吡啶钌
三联吡啶钌 [RU(bpy)3]2+是电化学发光剂，它和电 子供体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一 个电子而发生氧化反应。
由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为 电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统， 计算出测定物的浓度。
化学发光酶免疫分析的特点
• 标记物：酶（HRP、ALP) • 底物(发光剂）：HRP--鲁米诺
ALP--AMPPD • 固相载体：磁性微粒、塑料珠、塑料锥形小管 • 分离：磁场、高速离心
荧光素酶 ATP；O2；Mg2+
光 + AMP+ O2 + CO2 +
全自动化学发光免疫分析仪运行原理
❖ 8. At positions 73 - 86 the reaction mixture incubates for 4 minutes.
a
23
Assay processing for Two step 18-4 (i System)
❖ 9. At positions 87 - 90 the wash zone 2 manifold washes the reaction mixture in the RV, and then removes unbound materials.
stations (SW
a
and STW1)3:
1. Reagent carousel
2. 2. Reagent bar code reader
3. 3. Reagent pipettors
4. 4. Reagent syringes
a
5. 5. Reagent was1h4
stations
1. Load diverter 2. RV access door 3. RV loader and hopper assembly 4. STAT
a
24
Assay processing for Two step 18-4 (i System)
❖ 10. At position 94 the pre-trigger nozzle dispenses Pre-Trigger Solution to the reaction mixture, and then mixes using the vortexer.
❖ 即：磁性微粒子包被的捕捉分子（抗原，抗体或病毒颗粒） 特异的与被分析物中抗原、抗体结合形成抗原抗体复合物， 再与吖啶酯标记的连接物反应形成双抗体夹心抗原抗体复合 物。吖啶酯在过氧化氢的稀碱溶液中发生氧化还原反应生成 10-甲基吖啶酮，当它恢复到基态时发光，根据发光强度可 计算出分析物的浓度 。
化学发光免疫技术ppt课件
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22
人民卫生出版社
化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图
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23
人民卫生出版社
二、方法类型
1.分离方法 常用磁颗粒分离技术，即用抗原或抗体包被磁颗粒，
与标本中相应抗体或抗原及吖啶酯标记的抗体或 抗原通过一定模式的免疫学反应后,最终通过在磁场 中冲洗将结合到免疫复合物中的标记物和游离标记物 进行分离的技术。
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31
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电化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图
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32
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电化学发光免疫测定示意图
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33
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二、方法类型
1.分离方法 常用磁颗粒分离技术 2.免疫学反应模式 其反应模式同发光免疫分析，
主要有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原 竞争法三种主要模式，所不同只是相应抗原或抗 体上标记的是三联吡啶钌。
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11
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二.化学发光剂
• 在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光 子的形式释放能量的化合物称为化学发光剂或发 光底物。
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12
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• 作为化学发光免疫技术的化学发光剂应符合以下 几个条件：
发光的量子产率高 物理-化学特性要与被标记或测定的物质相匹配 能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物 其化学发光常是氧化反应的结果
由集光器和光电倍增管接收记录单位时间内所产生的光子能可从标准曲线上计算出待测抗原的含量第二节化学发光免疫分析人民卫生出版社化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图分离方法常用磁颗粒分离技术即用抗原或抗体包被磁颗粒与标本中相应抗体或抗原及吖啶酯标记的抗体或抗原通过一定模式的免疫学反应后最终通过在磁场中冲洗将结合到免疫复合物中的标记物和游离标记物进行分离的技术
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全自动化学发光免疫分析仪技术审查指导原则（第一次征求意见稿）一、前言本指导原则旨在指导注册申请人对全自动化学发光免疫分析仪注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本指导原则是对全自动化学发光免疫分析仪的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
二、适用范围化学发光免疫分析根据化学发光物质的类型和发光特点，可分为电化学发光免疫分析和化学发光免疫分析，其中化学发光免疫分析根据发光剂的不同，可分为直接化学发光免疫分析、酶促化学发光免疫分析和鲁米诺氧途径免疫分析。
目前，各类型化学发光免疫分析的常见发光剂包括：电化学发光剂为三联吡啶钌[RU（bpy）3]2+，直接化学发光剂为吖啶酯（AE），酶促化学发光剂为辣根过氧化物酶（HRP）催化鲁米诺（3-氨基苯二甲酰肼，luminol）及其衍生物或者碱性磷酸酶催化3-（2′-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3″-磷酰氧基）苯-1,2-二氧杂环丁烷（AMPPD），鲁米诺氧途径发光剂为酞箐、二甲基噻吩衍生物及Eu螯合物。
化学发光免疫技术根据反应过程中标记物是否需要分离可分为均相反应和非均相反应。
均相反应主要应用于鲁米诺氧途径免疫分析中，而非均相反应则应用于其他类型化学发光免疫分析中，通过采用固相分离、过滤分离、珠式分离、顺磁性颗粒分离等方式实现游离标记物和免疫复合物标记物的分离，其中顺磁性颗粒分离较其他分离方式更为常用。
目前，基于鲁米诺氧途径免疫分析原理的产品还比较少，临床常用的全自动化学发光免疫分析仪更多地采用非均相反应模式。
本指导原则适用于采用上述化学发光免疫技术和反应原理对人体血清、血浆或者其他体液样本中的被分析物进行定性或定量检测的全自动化学发光免疫分析仪。
对基于其他化学发光免疫技术和反应原理的产品，可参照本指导原则相关适用条款准备注册申报资料。
对临床适用范围广泛，全自动化学发光免疫分析只是其适用范围某一部分的临床分析仪器，亦可参照本指导原则准备全自动化学发光免疫分析部分的注册申报资料。
本指导原则适用于申请产品注册和相关许可事项变更的产品。
三、注册申报资料要求（一）综述资料1.概述（1）申报产品管理类别：III类。
（2）分类编码：6840-3。
（3）产品名称：依据《医疗器械分类目录》，建议统一将产品名称命名为全自动化学发光免疫分析仪，如有特殊情形，可根据医疗器械命名原则，参考修订后的《医疗器械分类目录》中的产品名称举例确定命名，并详细描述确定依据。
2.产品描述（1）结构组成分析仪一般由主机和计算机两部分组成。
其中主机为仪器的运行反应测定部分，主要由材料配备模块、液路模块、机械传动模块、光路检测模块、电路控制模块等组成。
材料配备模块包括反应杯、样品盘、试剂盘、清洗液、废液等在仪器上的贮存和处理装置；液路模块包括过滤器、密封圈、真空泵、管道、样本探针及试剂探针等；机械传动模块包括传感器、运输轨道、机械臂等；光路检测模块包括光电倍增管（Photomultiplier，PMT）；电路控制模块包括电源和线路控制板。
计算机为仪器的核心部分和控制中心，主要包括计算机和随机软件，主要用于仪器的程控操作、检测结果的数据处理和指示判定。
申请人应当根据拟申报产品的具体特征详细描述各组成模块、各模块的具体组成部分以及各主要元器件的名称和生产企业，并详细描述申报产品的主要功能及各组成模块的功能，可以采用照片结合文字描述的形式给予明确说明。
（2）工作原理从结构组成来看，全自动化学发光免疫分析仪与其他全自动检验分析仪器在组成模块上是类似的，在样本和试剂处理、机械传动、电路控制等方面的功能也基本类似，区别于其他产品的最大特点在于免疫反应部分和光检测装置部分。
①免疫反应部分免疫反应部分根据免疫反应的模式不同可分为夹心法、竞争法、捕获法等。
a.夹心法夹心法主要用于测定大分子抗原或抗体物质。
测定抗原物质时通常采用包被特异性抗体的反应载体和发光剂/标记酶标记的特异性抗体，与待测的特异性抗原反应形成“反应载体-抗体-抗原-抗体-发光剂/标记酶”类型的复合物，通过磁场或其他方式吸附反应载体并清洗去除未结合的样本和试剂，仅保留反应形成的复合物，施加化学发光反应条件使复合物发光，使用光检测装置测量发光强度，测得的特异性抗原浓度与发光强度成正比。
有时，特异性抗体是通过桥接的方式连接到反应载体上的，在反应过程中增加了一步特异性抗体与反应载体结合的步骤，其余步骤不变。
测定抗体物质的原理与测定抗原物质相似，只是将反应物质变为发光剂/标记酶标记的特异性抗原和包被特异性抗原的反应载体，最终形成“反应载体-抗原-抗体-抗原-发光剂/标记酶”类型的复合物，其余步骤不变。
b.竞争法竞争法主要用于测定小分子抗原物质。
竞争法一般包括发光剂标记抗原和发光剂标记抗体两种方式。
发光剂标记抗原方式采用发光剂/标记酶标记的特异性抗原和包被抗体的反应载体与样本反应，样本中的特异性抗原与发光剂/标记酶标记的特异性抗原竞争反应载体上包被抗体的结合位点，分别形成“反应载体-抗体-抗原”和“反应载体-抗体-抗原-发光剂/标记酶”两种形式的复合物，通过磁场或其他方式吸附反应载体并清洗去除未结合的样本和试剂，仅保留反应形成的复合物，施加化学发光反应条件使复合物发光，使用光检测装置测量发光强度，测得的特异性抗原浓度与发光强度成反比，即样本中的特异性抗原浓度较低，则抗体上大部分的结合位点与发光剂标记的抗原结合，经化学发光反应后，发光值读数较高。
如果样本中所含的特异性抗原浓度较高，则抗体的大多数结合位点都与样本中的抗原相结合，少部分位点与发光剂标记的抗原结合，经化学发光反应后，发光值读数较低。
有时，特异性抗体是通过桥接的方式连接到反应载体上的，在反应过程中增加了一步特异性抗体与反应载体结合的步骤，其余步骤没有变化。
发光剂标记抗体方式采用发光剂/标记酶标记的抗体和包被抗原的反应载体与样本反应，样本中的特异性抗原与包被抗原的反应载体竞争发光剂/标记酶标记抗体的结合位点，分别形成“反应载体-抗原-抗体-发光剂/标记酶”和“抗原-抗体-发光剂/标记酶”两种形式的复合物，通过磁场或其他方式吸附反应载体并清洗去除未结合的样本、试剂以及“抗原-抗体-发光剂/标记酶”，仅保留“反应载体-抗原-抗体-发光剂/标记酶”这种形式的复合物，施加化学发光反应条件使复合物发光，使用光检测装置测量发光强度，测得的特异性抗原浓度与发光强度成反比，即样本中的特异性抗原浓度较低，则抗体上大部分的结合位点与包被抗原的反应载体结合，经化学发光反应后，发光值读数较高。
如果样本中所含的特异性抗原浓度较高，则抗体的大多数结合位点都与样本中的抗原结合，少部分位点与包被抗原的反应载体结合，经清洗步骤后，剩余的“反应载体-抗原-抗体-发光剂/标记酶”复合物经化学发光反应后，发光值读数较低。
c.捕获法捕获法主要用于测定抗体物质，较为常见的是测定某些抗原的特异性免疫球蛋白M（IgM）抗体。
此方法通常采用包被有抗人特异性IgM抗体的反应载体、发光剂/标记酶标记的抗原与样本反应，形成“反应载体-抗IgM抗体-IgM抗体-抗原-发光剂/标记酶”的免疫复合物，通过磁场或其他方式吸附反应载体并清洗去除未结合的样本和试剂，保留反应形成的复合物，施加化学发光反应条件使复合物发光，使用光检测装置测量发光强度，测得的特异性抗体浓度与发光强度成正比。
基于均相反应模式和鲁米诺氧途径免疫分析原理的全自动化学发光免疫分析仪，由于必须依赖两种微粒互相接近的化学能量传递的均相反应，进而形成夹心免疫复合物拉近两个微粒的距离以产生能量的有效传递并发出光信号，因此这种反应原理产品的主要免疫反应模式为夹心法。
以上仅是对目前常见的化学发光免疫分析仪的常见免疫反应模式进行描述，如有其他免疫反应模式，建议在此以图例加文字的形式分步骤对免疫反应模式进行详细描述。
②光检测装置部分如前文所述，无论基于何种化学发光免疫原理和免疫反应模式，其最终结果均需要通过光检测装置检测反应的光强度，通过随机软件和计算机将发光强度转化为被分析物的浓度。
目前，常见的光检测装置为光电倍增管，随着光电子技术的不断发展，今后可能会有例如CCD的其他光检测装置应用于全自动化学发光免疫分析仪上。
申请人应当根据申报产品的特点按照反应步骤写明工作原理，重点对免疫反应部分及光检测装置部分进行详细描述，免疫反应部分应采用文字加图示的方式对申报产品能够进行的反应类型分别描述，光检测装置部分应结合申报产品采用发光剂的具体情况进行描述，并写明申报产品区别于其他同类产品的特征（可以表格形式逐条进行描述）。
3.注册单元和型号规格（1）注册单元划分原则上同一注册单元全自动化学发光免疫分析仪的技术原理、结构组成、性能指标和适用范围应基本一致，单一功能模块数量不同导致样本处理量存在差异的产品可以作为同一注册单元，符合下列任一情况的产品，不得作为同一注册单元：①不同化学发光反应类型的产品，如基于吖啶酯类直接化学发光反应原理的产品与基于AMPPD和碱性磷酸酶的间接化学发光反应原理的产品，不得作为同一注册单元。
②采用不同的分离游离标记物和免疫复合物标记物方法的产品，不得作为同一注册单元。
③化学发光反应类型相同，游离标记物和免疫复合物标记物分离方法相同，预期用途基本相同，但因组成部件的硬件不同在样本处理速度、样本处理量、分析性能指标上存在差异的产品，不得作为同一注册单元。
④化学发光反应类型相同，游离标记物和免疫复合物标记物分离方法相同，预期用途基本相同，但因内部电路设计不同导致具有不同电气安全性能的产品，不得作为同一注册单元。
⑤采用不同的光检测装置的产品，不得作为同一注册单元。
（2）型号规格对于同一注册单元申报产品存在多种型号规格的，应当明确各型号规格之间的区别，应当采用表格加说明性文字的图片、图表，对各型号规格的结构组成、功能、性能指标等内容进行描述。
4.适用范围（1）适用范围①明确写明申报产品的预期用途，建议采用以下形式描述：“该产品采用××法，与配套的检测试剂共同使用，在临床上用于对来源于人体的×××样本中的被分析物进行定性或定量检测，包括××××项目”。