细胞工程细胞工程实验室组成及无菌操作技术精选文档
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主要内容： 第一节 细胞工程实验室组成 第二节 无菌操作技术 第三节 培养基组成及其配制
学习的目标与要求： 了解细胞工程实验室的组成及所需的各种
实验仪器，掌握细胞工程中各种实验仪器的操 作及无菌操作技术，了解细胞工程所用培养基 的组成成分及配制。
第一节 细胞工程实验室组成
准备室（通用实验室）
实验室 组成
④烘箱：用于干燥洗净后的玻 璃器皿，还可用80℃的温度烘 干组织培养植物材料以测定干 物质。
⑥ 纯 水 机 与 蒸 馏 水 发 生 器
⑦天平：天平包括分析天平，电 子天平，药物天平等，用于制备 母液时培养基组成成分的称取。 如一些需要量少的激素和微生素 类物质，天平的精确度要到 0.0001g，这就要求精确度更高的 分析天平。
（4）培养室：
培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需 要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和 节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要求有绝热防火的性 能。
培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般设4-5层， 最低一层离地高约l0cm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1.7m左右。 培养架长度都是根据日光灯的长度而设计， 如采用40W日光灯，则长1.3m， 30W的长lm，宽度一般为60cm。
（2）洗涤、灭菌室：
完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培 养基的灭菌等。
主要设备：水池、操作台、高压灭菌锅、 干燥灭菌器（如烘箱）等。
（3）无菌操作室（接种室）：
主要用于动植物材料的消毒、接种、培 养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制 备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。
主要设备：紫外光源、超净工作台、消 毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、 解剖刀、接种针）等。
②恒温箱：又称培养箱，可用于原生质体和酶 制剂的保温，也可用于组织培养材料的保存及 暗培养。
③摇床与转床：在液体培养基中，可改善培养 基中的培养材料的通气状况。如从疏松的愈伤 组织中获得单个细胞。但注意要设定适合的温 度及转速。
光 恒照 温培 振养 荡箱 培 养 箱
6、细胞培养设备
摇床
7、细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实 体显微镜、倒置显微 镜
③高压灭菌前后的培养基，其pH值下降0.2-0.3单
位。因此，调PH值时，可适当调高0.1－0.3个单 位。
④接通电源前一定要加入足量的水。
3、相关仪器
电炉
推车
酒精灯wenku.baidu.com
封口膜
接种器具
灭菌器
培养瓶
4、接种工具
酒精灯 接种针 镊子 解剖刀
5、培养设备
①带日光灯的培养架，主要用于接种后材料的培 养。
(3)注意事项： ①对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、
接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要 严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中 的成分变质或效力降低，不能随意延长时间；
②对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。
洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20-30min；
70%—75%的酒精或0.5%过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面 。 3、操作区不允许放置不必要的物品，保持洁净、气流通畅。整个
实验过程中，实验人员应按照无菌操作规程操作。 4、使用完毕，应擦净工作台面。
2、高压蒸气灭菌锅
用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。
(1)高压蒸气灭菌锅工作原理： 在密闭的蒸锅内，0.1MPa的压力下，
培养室最重要的因子是温度，一般保持在20-27℃左右，具备产热装置，并安 装窗式或立式空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度， 最好不同种类有不同的培养室。 室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70%～80%为好，可安装加湿器。控 制光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10-16h，也有的需要连续 照明。短日照植物需要短日照条件，长日照植物需要长日照条件。现代组培 实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源， 而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。
主要设备：培养架（控温控光控湿）、摇床、培养箱、紫外光源 等。
二、基本设备及使用
1、接种设备：无菌超净工作台 用于培养材料的消毒及接种。使用前，
将超净工作台上面的排风和杀菌按钮开启， 灭菌15min后，关闭杀菌按钮，打开照明 按钮，即可在上面进行操作。
超净工作台
超净工作台使用注意事项
1、使用超净工作台前，应提前开机并开启紫外灭菌灯30分钟以上。 2、使用超净工作台时，关闭紫外灭菌灯，开启日光灯，并用
基本实验室 辅助实验室
缓冲室 无菌操作室 培养室 细胞生物学实验室 温室
生化分析实验室
一、实验室组成
1、组成
化学实验室、洗涤室、无菌操作室 （接种室）、培养室、细胞学实验室和温室 或大棚等。
（1）化学实验室（准备室）：
完成所使用的各种药品的贮备、称量、 溶解、配制、培养基分装等。
主要设备： 药品柜、防尘橱（放置培养容 器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常 用的培养基配制用玻璃仪器。
锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快 杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
(2)使用方法：首先检查灭菌锅内是否有水，而且水
刚好淹住加热器，然后放入灭菌材料，对称拧紧灭菌锅 上的螺丝，关闭放气阀通电。待压力上升到0.05MPa时， 打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭 放气阀。三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0.10.15Mpa时，维持20min后，断电，待压力降至零时，打 开入气阀，取出灭菌材料。
⑧酸度计： 用于校正培养基和酶制剂的PH。
⑨温室（大棚）：
第二节 无菌操作技术 一、实验仪器及洗涤 二、常用灭菌和消毒方法
一、实验仪器及洗涤 1、 玻璃器皿的选择与清洗
光 学 显 微 镜
倒置显微镜
分注器
血球计数器
磁力搅拌器
移液器
8、其它辅助设备
①培养基灌装机及洗瓶机
②空调机：用于接种 室和培养室温度的控 制。
③ 除湿机：使培 养室的湿度保持在
定的范围内。
⑤冰箱：用于在常温下易变 性或失效的试剂和母液的储 藏，细胞组织和试验材料的 冷冻保藏，以及某些材料的 预处理。
学习的目标与要求： 了解细胞工程实验室的组成及所需的各种
实验仪器，掌握细胞工程中各种实验仪器的操 作及无菌操作技术，了解细胞工程所用培养基 的组成成分及配制。
第一节 细胞工程实验室组成
准备室（通用实验室）
实验室 组成
④烘箱：用于干燥洗净后的玻 璃器皿，还可用80℃的温度烘 干组织培养植物材料以测定干 物质。
⑥ 纯 水 机 与 蒸 馏 水 发 生 器
⑦天平：天平包括分析天平，电 子天平，药物天平等，用于制备 母液时培养基组成成分的称取。 如一些需要量少的激素和微生素 类物质，天平的精确度要到 0.0001g，这就要求精确度更高的 分析天平。
（4）培养室：
培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需 要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和 节省能源为原则。高度比培养架略高为宜，周围墙壁要求有绝热防火的性 能。
培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般设4-5层， 最低一层离地高约l0cm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1.7m左右。 培养架长度都是根据日光灯的长度而设计， 如采用40W日光灯，则长1.3m， 30W的长lm，宽度一般为60cm。
（2）洗涤、灭菌室：
完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培 养基的灭菌等。
主要设备：水池、操作台、高压灭菌锅、 干燥灭菌器（如烘箱）等。
（3）无菌操作室（接种室）：
主要用于动植物材料的消毒、接种、培 养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制 备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。
主要设备：紫外光源、超净工作台、消 毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、 解剖刀、接种针）等。
②恒温箱：又称培养箱，可用于原生质体和酶 制剂的保温，也可用于组织培养材料的保存及 暗培养。
③摇床与转床：在液体培养基中，可改善培养 基中的培养材料的通气状况。如从疏松的愈伤 组织中获得单个细胞。但注意要设定适合的温 度及转速。
光 恒照 温培 振养 荡箱 培 养 箱
6、细胞培养设备
摇床
7、细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实 体显微镜、倒置显微 镜
③高压灭菌前后的培养基，其pH值下降0.2-0.3单
位。因此，调PH值时，可适当调高0.1－0.3个单 位。
④接通电源前一定要加入足量的水。
3、相关仪器
电炉
推车
酒精灯wenku.baidu.com
封口膜
接种器具
灭菌器
培养瓶
4、接种工具
酒精灯 接种针 镊子 解剖刀
5、培养设备
①带日光灯的培养架，主要用于接种后材料的培 养。
(3)注意事项： ①对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、
接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要 严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中 的成分变质或效力降低，不能随意延长时间；
②对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。
洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20-30min；
70%—75%的酒精或0.5%过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面 。 3、操作区不允许放置不必要的物品，保持洁净、气流通畅。整个
实验过程中，实验人员应按照无菌操作规程操作。 4、使用完毕，应擦净工作台面。
2、高压蒸气灭菌锅
用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。
(1)高压蒸气灭菌锅工作原理： 在密闭的蒸锅内，0.1MPa的压力下，
培养室最重要的因子是温度，一般保持在20-27℃左右，具备产热装置，并安 装窗式或立式空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度， 最好不同种类有不同的培养室。 室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70%～80%为好，可安装加湿器。控 制光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10-16h，也有的需要连续 照明。短日照植物需要短日照条件，长日照植物需要长日照条件。现代组培 实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源， 而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。
主要设备：培养架（控温控光控湿）、摇床、培养箱、紫外光源 等。
二、基本设备及使用
1、接种设备：无菌超净工作台 用于培养材料的消毒及接种。使用前，
将超净工作台上面的排风和杀菌按钮开启， 灭菌15min后，关闭杀菌按钮，打开照明 按钮，即可在上面进行操作。
超净工作台
超净工作台使用注意事项
1、使用超净工作台前，应提前开机并开启紫外灭菌灯30分钟以上。 2、使用超净工作台时，关闭紫外灭菌灯，开启日光灯，并用
基本实验室 辅助实验室
缓冲室 无菌操作室 培养室 细胞生物学实验室 温室
生化分析实验室
一、实验室组成
1、组成
化学实验室、洗涤室、无菌操作室 （接种室）、培养室、细胞学实验室和温室 或大棚等。
（1）化学实验室（准备室）：
完成所使用的各种药品的贮备、称量、 溶解、配制、培养基分装等。
主要设备： 药品柜、防尘橱（放置培养容 器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常 用的培养基配制用玻璃仪器。
锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快 杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
(2)使用方法：首先检查灭菌锅内是否有水，而且水
刚好淹住加热器，然后放入灭菌材料，对称拧紧灭菌锅 上的螺丝，关闭放气阀通电。待压力上升到0.05MPa时， 打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭 放气阀。三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0.10.15Mpa时，维持20min后，断电，待压力降至零时，打 开入气阀，取出灭菌材料。
⑧酸度计： 用于校正培养基和酶制剂的PH。
⑨温室（大棚）：
第二节 无菌操作技术 一、实验仪器及洗涤 二、常用灭菌和消毒方法
一、实验仪器及洗涤 1、 玻璃器皿的选择与清洗
光 学 显 微 镜
倒置显微镜
分注器
血球计数器
磁力搅拌器
移液器
8、其它辅助设备
①培养基灌装机及洗瓶机
②空调机：用于接种 室和培养室温度的控 制。
③ 除湿机：使培 养室的湿度保持在
定的范围内。
⑤冰箱：用于在常温下易变 性或失效的试剂和母液的储 藏，细胞组织和试验材料的 冷冻保藏，以及某些材料的 预处理。