兰花组织培养
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兰花组织培养
• 兰花是整个兰科植物( Orchidaceae)的总称，是开花植物
中最大的家族之一，是单子叶植物中最高度演化的一科，
有6个亚科730多属25000余种，广泛分布于全球各地。 • 兰花在中国约有170个属1200余种，分布较为广泛，几乎 全国各省都有分布。 • 兰花具有极高的观赏价值，形成兰花产业。
• 兰花具有药用价值。
兰花主要繁殖方法
• 分株繁殖 • 种子繁殖 • 组织培养
原球茎和类原球茎
• 原球茎(Protocorm)是指兰花种子萌发过程中的一种形态学结构：种 子的幼胚吸水膨胀，中部的胚细胞分裂增殖，突破合点端种皮形成球 形或椭球形 。 • 在兰科植物的组织培养中，根尖、叶片等适宜外植体也可诱导类似原 球茎组织结构，即类原球茎或拟原球茎。
( Dendrobium )、墨兰和建兰等均成功用茎尖诱导出大量类原球茎。
• 对蝴蝶兰( Phalaeanopsis ) 、仙指甲兰( Aerides) 等用茎尖作为外植体 有可能影响开花性状， 因此需要寻找其他外植体。
叶片作为外植体
• 叶片作为外植体既可减少对母株的伤害，取材又不
受季节的限制，且数量多，是比较理想的外植体材 料来源。 • 研究表明虽然叶片具有诱导出类原球茎的能力，但 成熟叶诱导出类原球茎的能力极弱。
• 外植体的选择直接关系到类原球茎的诱导。 • 在组织培养中幼嫩部位一般不容易褐化，因此常选取较幼 嫩且生长旺盛的部位诱导类原球茎。 • 茎尖、叶片和种子是诱导类原球茎的理想外植体来源。 • 花瓣、萼片、子房、休眠芽、侧芽、花梗节间段、根尖等
均可作为外植体诱导出原球茎。
茎尖和侧芽作为外植体
• 茎尖和侧芽是最早也是使用频率最高的兰花外植体。 • 茎尖和侧芽顶端分生区细胞的分裂能力强，容易诱导出类原球茎。 大花蕙兰（Cymbidium） 、卡特丽亚(Cattleya) 、石斛兰
• 植物生长调节剂
• 生长素类：IAA、2, 4-D 和NAA
• 细胞分裂素类：BA、ZT和KT 。 • 不同的兰花、不同的生长发育阶段所需激素的量和种类也不尽相同。
开裂果实种子消毒方法 ——过滤方法2
http://www.kitchenculturekit.com/StiffAffordablePTCorchids.htm
兰花种子离体萌发
花梗节间作为外植体
• 一般较少用花梗节间段作为外植体。 • 但蝴蝶兰组织培养中多采用花梗作为外植体，从花梗节间 段诱导出类原球茎，并且通过研究表明花梗节间段形成类 原球茎的频率明显高于其它外植体（茎尖、根尖）。
兰花的离体开花
组织培养基和添加物
• 培养基 • 兰花组织培养中常用培养基为MS、VW、Knudson C、Kyoto、 White和它们的改良型，应根据不同品种而选择合适的培养基。 • 目前，市场中有很多商业化培养基。
• 大花蕙兰 MS、1/2MS、VW、KC均可应用于原球茎的增殖，但以 KC效果最好。
栽培条件下蝴蝶兰花梗节间分化幼芽
Fra Baidu bibliotek
蝴蝶兰花梗组织培养
根作为外植体
• Stewart等用树兰(Epidendrum )的根首次成功地培养出了
原球茎和从愈伤组织分化出不定芽。
• 之后，根的离体培养相继在不同兰花中获得了成功。 • 由于兰花的根部共生菌根，根作为外植体较难彻底消毒， 在组织培养的过程中较容易污染。
• 类原球茎(Protocorm-like body, PLB)一词是由Morel在1960年提出的， 用来描述兰科植物组培过程中产生的类似种子萌发过渡形态——原球 茎的一种特殊组织结构:在兰花组织培养中，可由茎尖分生组织等 （而不是种子）诱导形成类似其种子原球茎的组织结构。
兰花外植体的选择和类原球茎增殖
• 幼叶诱导出类原球茎能力较成熟叶强，但诱导率也
很低对，于大花蕙兰仅为33%左右
Plant regeneration through direct somatic embryogenesis from leaf explants of Phalaenopsis amabilis:
种子作为外植体
• 在自然条件下兰花种子虽多，但由于其不具有发育完全的胚，
且种皮致密、透性差或种皮中含有抑制物使种子很难萌发。 • 自Noel Bernared在1899年创立了兰花种子共生萌发法后，研究 者们接着发现大部分兰花种子可以通过无菌萌发的方式进行， 即非共生萌发。
• 兰花种子的非共生萌发已在蝴蝶兰、石斛兰、文心兰等兰花中
取得成功。
兰花蒴果消毒及果实内部
开裂果实种子消毒方法 ——过滤方法1
• 兰花是整个兰科植物( Orchidaceae)的总称，是开花植物
中最大的家族之一，是单子叶植物中最高度演化的一科，
有6个亚科730多属25000余种，广泛分布于全球各地。 • 兰花在中国约有170个属1200余种，分布较为广泛，几乎 全国各省都有分布。 • 兰花具有极高的观赏价值，形成兰花产业。
• 兰花具有药用价值。
兰花主要繁殖方法
• 分株繁殖 • 种子繁殖 • 组织培养
原球茎和类原球茎
• 原球茎(Protocorm)是指兰花种子萌发过程中的一种形态学结构：种 子的幼胚吸水膨胀，中部的胚细胞分裂增殖，突破合点端种皮形成球 形或椭球形 。 • 在兰科植物的组织培养中，根尖、叶片等适宜外植体也可诱导类似原 球茎组织结构，即类原球茎或拟原球茎。
( Dendrobium )、墨兰和建兰等均成功用茎尖诱导出大量类原球茎。
• 对蝴蝶兰( Phalaeanopsis ) 、仙指甲兰( Aerides) 等用茎尖作为外植体 有可能影响开花性状， 因此需要寻找其他外植体。
叶片作为外植体
• 叶片作为外植体既可减少对母株的伤害，取材又不
受季节的限制，且数量多，是比较理想的外植体材 料来源。 • 研究表明虽然叶片具有诱导出类原球茎的能力，但 成熟叶诱导出类原球茎的能力极弱。
• 外植体的选择直接关系到类原球茎的诱导。 • 在组织培养中幼嫩部位一般不容易褐化，因此常选取较幼 嫩且生长旺盛的部位诱导类原球茎。 • 茎尖、叶片和种子是诱导类原球茎的理想外植体来源。 • 花瓣、萼片、子房、休眠芽、侧芽、花梗节间段、根尖等
均可作为外植体诱导出原球茎。
茎尖和侧芽作为外植体
• 茎尖和侧芽是最早也是使用频率最高的兰花外植体。 • 茎尖和侧芽顶端分生区细胞的分裂能力强，容易诱导出类原球茎。 大花蕙兰（Cymbidium） 、卡特丽亚(Cattleya) 、石斛兰
• 植物生长调节剂
• 生长素类：IAA、2, 4-D 和NAA
• 细胞分裂素类：BA、ZT和KT 。 • 不同的兰花、不同的生长发育阶段所需激素的量和种类也不尽相同。
开裂果实种子消毒方法 ——过滤方法2
http://www.kitchenculturekit.com/StiffAffordablePTCorchids.htm
兰花种子离体萌发
花梗节间作为外植体
• 一般较少用花梗节间段作为外植体。 • 但蝴蝶兰组织培养中多采用花梗作为外植体，从花梗节间 段诱导出类原球茎，并且通过研究表明花梗节间段形成类 原球茎的频率明显高于其它外植体（茎尖、根尖）。
兰花的离体开花
组织培养基和添加物
• 培养基 • 兰花组织培养中常用培养基为MS、VW、Knudson C、Kyoto、 White和它们的改良型，应根据不同品种而选择合适的培养基。 • 目前，市场中有很多商业化培养基。
• 大花蕙兰 MS、1/2MS、VW、KC均可应用于原球茎的增殖，但以 KC效果最好。
栽培条件下蝴蝶兰花梗节间分化幼芽
Fra Baidu bibliotek
蝴蝶兰花梗组织培养
根作为外植体
• Stewart等用树兰(Epidendrum )的根首次成功地培养出了
原球茎和从愈伤组织分化出不定芽。
• 之后，根的离体培养相继在不同兰花中获得了成功。 • 由于兰花的根部共生菌根，根作为外植体较难彻底消毒， 在组织培养的过程中较容易污染。
• 类原球茎(Protocorm-like body, PLB)一词是由Morel在1960年提出的， 用来描述兰科植物组培过程中产生的类似种子萌发过渡形态——原球 茎的一种特殊组织结构:在兰花组织培养中，可由茎尖分生组织等 （而不是种子）诱导形成类似其种子原球茎的组织结构。
兰花外植体的选择和类原球茎增殖
• 幼叶诱导出类原球茎能力较成熟叶强，但诱导率也
很低对，于大花蕙兰仅为33%左右
Plant regeneration through direct somatic embryogenesis from leaf explants of Phalaenopsis amabilis:
种子作为外植体
• 在自然条件下兰花种子虽多，但由于其不具有发育完全的胚，
且种皮致密、透性差或种皮中含有抑制物使种子很难萌发。 • 自Noel Bernared在1899年创立了兰花种子共生萌发法后，研究 者们接着发现大部分兰花种子可以通过无菌萌发的方式进行， 即非共生萌发。
• 兰花种子的非共生萌发已在蝴蝶兰、石斛兰、文心兰等兰花中
取得成功。
兰花蒴果消毒及果实内部
开裂果实种子消毒方法 ——过滤方法1