组织病理学制片技术精品PPT课件

固定就是用物理或化学方法，阻止组织细胞离体 或培养细胞脱离生存环境后发生形态学变化。
(一)固定的目的
1. 迅速阻断组织细胞离体后的自溶性变化，防止 腐败，尽量保持组织细胞生活状态下的形态结构。
2. 使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变 成不溶性物质，并保持原有的空间位置。
3. 固定剂有硬化作用,增加组织的硬度,便于制片。 4. 组织中的各种物质经固பைடு நூலகம்后产生对染料的亲和
2、组织切片的观察：取正常或病变组织进行切 片、染色(HE染色最常用)在显微镜下进行观察。
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病理学标本的种类
Types of pathologic samples
1、活体组织检查(Biopsy)：简称活检，从患者 活体局部切取、钳咬、细针吸取和摘取等手术 方法获取病变组织进行病理检查。
2、脱落细胞学检查(Exfoliative cytological exam)：对患者痰液、胸腹水、尿液以及阴道刮 片、食管拉网、纤维胃/支气管镜所取得的材料 进行涂片，以检查脱落细胞，是早期发现和诊 断肿瘤的好方法。
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3、尸体解剖(Autopsy)：通过尸检可查出病因和病 变，及时发现和确诊某些传染病、新发现的疾病， 积累经验，提高诊疗水平。
4、动物实验(Animal experiment)：根据研究需要， 在动物身上复制人类某些疾病的模型、进行观察研 究，了解疾病的病因、发病机制及药物疗效等。
5、组织/细胞培养(Tissue and Cell culture)：将某 种组织或单细胞在适宜的培养基中体外培养，来研 究各种病因作用下组织、细胞的病理变化及治疗效 果。
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三、脱水(Dehydration)
组织经固定和水洗后含大量水分，水与石蜡 不能混溶。因此在浸蜡和包埋前，必须进行 脱水。
常见的脱水剂有乙醇、正丁醇、丙酮等。 为防止水份丢失过快，造成组织变形，一般
采用梯度脱水法。也就是使脱水剂的浓度逐 渐升高，脱水过程尽量缓和，减少组织变形。
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四、透明(Transparentizing)
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2. 混合固定液 (1) Bouin液 ：用于结缔组织及脂肪染色； (2) Zenker液：常用于三色染色； (3) 4%多聚甲醛-磷酸二氢钠-氢氧化钠液；
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（四）固定后的处理
1. 一般固定液(甲醛等)固定组织后，用流水冲洗以清除组 织内的固定液终止固定。
2. 含有乙醇、乙酸及苦味酸的固定液，组织固定后不需 要或不能用水冲洗。
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一、取材(Samples collection)
1. 人为因素 2. 标本大小 3. 取材时间 4. 包埋方向 5. 边缘标记
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6. 小标本的处理方法 7. 特殊情况取材 8. 取材数量 9. 清除多余成分 10. 重复取材 11. 核对取材 12. 剩余组织存放
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二、固定(Fixation)
3. 含有铬酸、重铬酸钾和锇酸的固定液，组织固定后应 充分水洗，一般为12~24h。
4. 用含汞的固定液固定组织后，要进行脱汞处理，可在 组织脱水前或切片染色前进行，一般多在染色前脱汞。其 方法为切片脱蜡入水后，入0.5%碘乙醇5~10min，水洗 后再入3%~5%硫代硫酸钠或95%乙醇1~2min，再充分水 洗，蒸馏水洗后进行染色。
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（五）固定时的注意事项
1. 标本 应新鲜并及时取材，快速放入固定液中。 特殊标本应单独固定和存放。
2. 固定液的用量 一般固定液用量为组织块体积的 10~20倍，贵重的固定液不少于3~5倍。避免组织紧 贴容器底部，影响固定效果。对于特殊染色的组织 (如神经染色及酶组织化学染色等)固定时应考虑组 织块的大小、固定液种类、固定时间和温度等。酶 组织化学染色组织的固定应置于冰箱4℃固定。
常用的透明剂有二甲苯、苯、甲苯、氯仿、环己 酮、苯甲酸甲酯、香柏油、冬青油和苯胺油等。
目前也有用环己酮作为透明剂，环己酮为无色无 毒液体，可与苯、二甲苯和酒精等相混合，也可 溶解石蜡。而且脱水时组织不收缩变硬，用于快 速石蜡切片效果较好。
力，利于染色和观察。
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（二）常用的固定方法
1. 浸泡固定法 2. 灌注固定法 3. 细胞涂片的固定方法 4. 微波固定法 5. 蒸气固定法
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（三）常用的固定液
1. 单纯固定液 (1) 甲醛(formaldehyde) (2) 酒精(alcohol) (3) 苦味酸(picric acid) (4) 丙酮(acetone) (5) 醋酸(acetic acid)
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目的和要求
Aims and Requirements
了解生物组织的特点及取材的注意事项； 熟悉切片的原理、一般要求及注意事项； 掌握石蜡切片制作技术；
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病理学常用的观察手段
The common survey means in pathology
1、大体标本观察：主要用肉眼、量尺及各种衡 器等辅助工具，对所检标本的大小、形状、色泽、 重量、表面及切面、病灶特点进行观察及测量。
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病理技术的应用
Application of pathologic technique
• 帮助临床查明死因(尸检); • 手术后病变标本，明确诊断(临床活检); • 为教学、科研提供资料;
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第一节 组织处理
Tissue processing
取材(Sample collection)→固定(Fixation)→ 脱水(Dehydration)→透明(Transparentizing) →浸蜡(Paraffin soaking)→包埋(Embedding)
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3. 防止组织变形 柔软或较薄的组织先平铺在吸水 纸上，再投入固定剂中；含气或脂肪多的组织易浮 于液面，可在组织表面覆盖棉花以达到充分固定。 4. 固定液的穿透性 一般固定液在24h内不能穿透 厚度大于2~3mm的实体组织或5mm的多孔疏松组织， 故取材组织块的厚度原则上不应超过3~4mm。 5. 固定时间 固定的时间与固定液的种类、组织类 型、块大小、温度等有关。一般1.5cm×1.5cm×0.2 ~0.3cm大小的组织块, 固定时间为12~24h。 6. 固定温度 大多数可在室温(25℃)固定，在低温 (如4℃)固定时，固定时间要相应延长。