毛细管电泳仪的使用(原创)电泳仪的使用方法

毛细管电泳仪的使用(原创)*电泳仪的使用方法

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概要：准备工作1.毛细管的制备：①剪略长于需要长度的毛细管(使用专用的裁剪纱布)，断端利用镊子小心移除。②烧窗：从毛细管进液端开始到实验者需要长度的位置烧窗，窗口尽量小，过程中可用防护工具对窗口两端.

准备工作

1.毛细管的制备：

①剪略长于需要长度的毛细管(使用专用的裁剪纱布)。

断端利用镊子小心移除。

②烧窗：从毛细管进液端开始到实验者需要长度的位置烧窗，窗口尽量小，过程中可用防护工具对窗口两端的毛细管进行防护。

烧好的窗需用粘有酒精的棉花擦拭。

注：检测的有效长度为从毛细管进液端到检测窗之间的距离，这个距离一般根据实验者的需要自己掌握。

③取出卡槽：打开安放卡槽区域的门。

旋转固定卡槽的杠杆90度，按卡槽中央的释放按钮，握住卡槽的两端向上抽出卡槽。

④安装毛细管：将进液端的毛细管小心的从卡槽的出口插入。

进入时可轻轻旋转。当窗口到达检测点时停止插入，将游离的进液端毛细管从卡槽的入口引出。

并固定好毛细管外端的橡胶管。

注：插入毛细管时小心操作，窗口位置的毛细管非常容易破裂，需格外谨慎。

过程中切忌使用暴力。

⑤安放卡槽：用与取出的步骤相反顺序的操作安放卡槽。

2.添加样品，缓冲液及冲洗液：

①为了减少样品及缓冲液的挥发。

在插入加液管前可在加样管固定器的小孔内加入少量的ddH2O。

②已添加好的加液管，在插入转盘上的固定槽前先离心2min加液时注意加样枪头紧贴管壁，防止气泡的产生。

③为了减少虹吸作用，需要保持入口处和出口处的running buffer量一致，对于500ul体积的加液管，推荐加入500ul的剂量；对1.5ml体积的加液管，推荐1.3ml的剂量。

④推荐加入样品的最小剂量为50ul检测需要的最小剂量为15ul。

⑤在出口处的waste管中加入50ul的ddH2O，可以防止检测端的毛细管被冲洗液的残留污染。

电泳仪的操作

1.插上电源。

检查电泳仪的连接情况。

检查制冷区小槽内水量是否充足，打开电脑，打开电泳仪的开关(两扇门都需要关闭)。

在电脑桌面点开BioFocus的图标。

进入到BioFocus的控制界面。

2.设置程序：

①点击Reagents键，在已有的Reagents Data base中查看是否含有需要使用的配液，有可点击该配液查看。

或使用edit键进行修改；没有则点击add进行编辑添加。添加之后注意命名名称的

唯一性。

②点击Cartridges键，对卡槽的相关参数进行查看，修改。如Cartridges Data base中没有和试验要求匹配的配置参数则点击Add进行添加。注意需要激活相应的或者设置的卡槽。

③点击Configurations→Define：添加需要的信息：configuration ID；Configuration description；select the cartridge→Continue：Regent双击左下角regent data base中需要选择的regent；双击屏幕右边你需要放置该regent的Inlet Carousel Position→Sample：命名。

同样的方式从左下角的Reagents中添加到右侧相应的位置上→点击empty然后点击需要删除的Regent；点击clear清除所有设置的Regent摆放次序→OK。

注：在以上几步中，记得同时设置好中止的清洗程序，及Shutdown程序。

ddH2O清洗5分钟。

氮气吹干。

④点击Methods：选择设置好的程序→Define：填写Method ID Description→Inlet Regent。

选择电泳中需要的Running buffer→Outlet Regent选择电泳中需要的Running buffer →Voltage Mode填写需要的电压，电流，正负极。

设定电泳时毛细管需要的温度，以及电泳时间→Add：添加在电泳前后需要灌注的洗液等。

填写灌注的时间→Injection：选择电压或者气压的进液方式；前者需选择恒压或者恒流。

以及进液时间的长短；后者需选择压力*时间的进液常数→Detector：Detector Parameters：设置波长。

时间。

通道，AU范围；Display parameters：设置波长。

AU范围。

偏移；Options：设置Rise Time Turn off lamp at run end；Designation：该设者存储的位置→OK

⑤点击Auto Seqs：选择需要的程序→Define查看。

编辑需要调整的程序。

如States显示Conflict则需要对相应的设置进行调整。

知道状态显示Pending→Pending。

Ready→OK→Start

停止，存储，查看文件

①等待所有的程序完成后(包括运行程序及情节程序)。

要停止运行的程序。

则可点击屏幕左上角的Stop键→选择需要中止运行的某一步(Abort Current Run Only)，某一组(Abort Current Run Group)或所有编辑的程序(Abort Automation Sequence)→OK →存储在指定盘上(Yes)，自定义盘(NO)→需要取出加液管及转盘(YES)不需要(NO)

注：在所有的对话框消失之前。

以及转盘没有回到初始位置之前，不能打开电泳仪的门。

操作要点：

1.将毛细管电泳仪放置于有空调的房间。

保持室温恒定。同时。

操作中控制毛细管及仪器恒温。

2.缓冲液加压一段时间后。

淌度和电渗流会变化，要经常更换。