第3章 氨基酸分离分析

+ 原点 酚 甲 酚 水 氨基酸的双向纸层析图谱 -
丁醇-醋酸
三 、 纸 层 析
纸层析中的Rf值（相对迁移率） 溶剂前沿 氨基酸显色点
滤纸
原点 X Rf= Y
四、薄层层析——纤维素粉、硅胶和氧化铝粉 分辨率高、所需样品量微
盖子
层析缸 层析板
溶剂
五、离子交换柱层析
离子交换树脂（支持剂）。含酸性基团或碱性基团，解离出H+ 或OH-与被分离物中相应的离子交换而“挂”在树脂上。
第四节 氨基酸混合物的分析分离 p148
一、分配层析的一般原理
层析即色层分析又称色谱(chromatograph)。所 有层析系统均有两相组成： 固定相(stationary phase) 流动相(mobile phase) 混合物在层析系统中的分离决定于各组分在两相中 的分配。 1891年Nerst提出分配定律：当一种溶质在两种互 不相溶的溶剂中分配时，在一定温度下达到平衡后， 溶质在两相中的浓度比为一常数称为分配系数(Kd)。
磺酸型阳离子交换树脂（支持剂）
离子交换柱层析——自动化 泵 样品注 入口
洗脱液
离子交换——自动分析仪
流出液/ml 洗脱的先后顺序取决于氨基酸的所带电荷 与离子交换树脂的静电吸引和疏水相互 作用两者的综合作用的结果
气相色谱
连接记 录仪
氨基酸与异硫氰酸苯酯反应生成PTH-氨基 酸，然后经三甲基硅烷基化，得到易于气 化的氨基酸衍生物。
储 液 缸
高效液相色谱(high performance liquid chromatograph，简称HPLC) 又称高压液相色谱
过滤器 进样室
恒温装置
压力泵
层析柱 检测器
收集器
记录仪
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
设想的板层：固+流
• 柱层析：层析柱中的填充物（支持剂）都是一些 具有亲水性的不溶物质：纤维素、淀粉、硅胶等。 它们吸附一层不流动的结合水，可以看作固定相， 流过的互不溶的溶剂是流动相。 • 纸层析：滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层 用的溶剂是流动相。混合氨基酸在这两相中不断 分配而被分布在滤纸的不同位置上。只要实验条 件确定，每种氨基酸的相对迁移率恒定。分离、 鉴定氨基酸的常用技术。
Keff =
Keff = Kd×Rv(A,B两相的体积比)
某一物质分配不直接决定于它的分配系数(Kd)， 而取决于它的有效分配系数Keff 。 Keff差异越 大的物质越容易分开。
二、 分配柱层析装置 连接保持恒压力的 洗脱液池（溶器）
洗脱液 圆形滤纸，以 免扰乱表面 填充物 固 尼龙网格、烧 结玻片或其他 支持物 尽可能小的 死体积 分部收集管
物质不仅在互不相溶的两液相间分配，也可 以在固相-液相间或在气相-液相间分配。 层析系统中的固定相可以是固相、液相或固 -液相混合相（半液体）；流动相可以是液 相或气相，它充满于静相的空隙中，并能 流过静相。
Keff =
某一物质在动相中的总量 某一物质在静相中的总量 CA x VA CB x VB