RNA提取试剂盒步骤
RNA试剂盒提取步骤
常规植物样品总RNA小量抽提1. 植物样品的研磨。
�收集植物样品并尽快浸泡到液氮中以防止RNA 的降解。
使用研钵、研磨棒和液氮将植物样品研磨成尽量细小的粉末。
RNA 的产量取决于样品类型和研磨效果。
注：研磨后的植物粉末可直接保持于-70°C。
�快速称取50-100mg 的研磨好的植物样品至1.5ml 预冷的离心管中。
注：在加入裂解液之前，不要让样品解冻。
初次使用时，推荐先使用50mg，待取得理想结果后，再酌情提高用量。
2. 立即加入500µlBuffer RL/β-ME混合液至样品中。
立即于最高速度涡旋30-60 秒充分打散样品，室温静置3-5 分钟让样品充分裂解。
注：使用前分装适量的Buffer RL，每1ml Buffer RL 加入20µl β-疏基乙醇(β-ME)或2M DTT。
若植物用量增加超过100mg，按比例增加Buffer RL/2-ME 的用量。
3. 室温下，14,000 x g 离心5 分钟。
4. 把gDNA 过滤柱装在2ml 收集管中。
把第三步的上清液转移至gDNA过滤柱中。
14,000 x g 离心1 分钟。
5. 弃去gDNA 过滤柱。
加入0.5倍体积无水乙醇(~250µl)至滤液中。
用移液枪吸打3-5次混匀。
6. 把HiPure RNA Mini Column 装在2ml 收集管中。
转移第5 步的混合液至RNA柱子中。
10,000 x g 离心30-60 秒。
7. (可选)这一步可插入DNase 进行膜上消化。
(请另外订购DNase On Column Kit 进化膜上DNase 消化)。
8. 倒弃滤液，把柱子装在收集管中。
加入500µl Buffer RW1 至柱子中。
10,000 x g离心30-60 秒。
9. 倒弃滤液，把柱子装回收集管中。
加入600µl Buffer RW2 (已用乙醇稀释)至柱子中。
10,000 ×g 离心30-60 秒。
RNA的提取
RNA的提取
一、试剂
1、depc处理水：在1000ml的去离子水中加入1ml depc ，充分摇匀，并用磁力搅拌
器搅拌2h，过夜，第二天高温灭菌（121℃、30min）。
2、0.1％depc水：在1000ml水中加入1ml depc ,用磁力搅拌器搅拌2h以上。
3、5xTBE缓冲液(1000ml)
Tris 54g
硼酸27.5g
EDTA-2Na 3.2g
加depc处理水至1000ml，搅拌至溶解
4、GenGree(荧光染料RNA专用)
5、Biowest Agarose
6、总RNA提取试剂盒
7、Marker
8、DEPC
二、耗材
1、枪头（10ul、200ul、1000ul）:应用未开封过的枪头，应用0.1％depc水处理过的枪
头盒装。
2、EP管（1.5ml、200ul）:用未开封的EP管，应用0.1％depc水处理过的容器装。
3、电泳槽：用0.1％depc水浸泡至过夜，后让其自然晾干。
4、制胶槽和梳子：用0.1％depc水浸泡至过夜，后让其自然晾干。
三、步骤
1、Rna的提取步骤为天根公司总RNA提取试剂盒
2、1％琼脂糖凝胶：
Biowest Agarose 0.2g
0.5xTBE 20ml
微波炉中加热至溶解，待其温度不烫手时，加入GenGree(荧光染料RNA专用)，轻
轻摇匀倒入已放好梳子的制胶槽中，待其冷却备用。
3、将配好的胶放入电泳槽加入depc水至将其淹没，取Rna样品5ul加1ul 6 x loading bulf
(RNA双染料)混匀加入到胶孔中，取6ul Marker加入孔中，200V 10min。
rna提取试剂盒的提取流程及注意事项
rna提取试剂盒的提取流程及注意事项下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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天漠科技 总RNA提取试剂盒说明书
总RNA提取试剂盒(配合TRIZOL使用)Catalog No. TR205-50 (50次反应含DNaseI)TR205-200 (200次反应含DNaseI)TR205-50N (50次反应无DNaseI)TR205-200N (200次反应无DNaseI)Highlights∙适用于从细胞，组织，酵母菌，植物，细菌或生物液体（任何TRIZOL或类似产品可以裂解的样品）中提取到总RNA（含microRNA）。
∙无需进行相分离，无需使用氯仿，无需沉淀过程。
∙提取到的RNA不含DNA,并可应用于Q-PCR，高通量测序等实验。
∙整个过程仅需10分钟。
Ver.1.0.9产品组成:50200RNA洗涤液1 室温40 ml 160 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNA洗涤液2室温12 ml 48 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇DNase I -20℃ 300μl x 1管（5U/μl） 300μl x 4管（5U/μl）DNA消化液室温 4 ml 16 mlRNase-free H2O 室温 6 ml 30 ml2号柱室温50个200个收集管（2ml）室温50个200个特性:1.样品来源：TRIZOL等类似试剂裂解的样品。
2.样品范围：≥17核苷酸。
3.RNA纯度：高质量的RNA可应用于高通量测序等敏感的下游实验。
4.RNA结合量：每个柱子可最多结合50μg的RNA。
试剂制备RNA洗涤液在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！！！添加10ml或40ml的无水乙醇（95-100%）到40ml或160ml的RNA洗涤液1中。
添加48ml100%的乙醇（或52 ml95%的乙醇）到12ml的RNA洗涤液2添加192ml100%的乙醇（或208 ml95%的乙醇）到48ml的RNA洗涤液2操作步骤:整个操作步骤是由2个步骤组成：（I）样品裂解匀浆（I I）样品纯化（I）样品裂解匀浆此步骤主要参考TRIZOL等类似裂解试剂说明书的裂解液用量，以下给出我公司提供的可完美替换TRIZOL的TRIcom试剂用量作为参考。
rna提取试剂盒
RNA提取试剂盒1. 简介RNA提取试剂盒是一种用于从生物样品中提取RNA的试剂盒。
RNA提取是分子生物学和遗传学研究中的一个重要步骤，它可以从细胞中提取出RNA，并用于进一步的RNA分析，如逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、实时定量PCR（qRT-PCR）、Northern印迹、原位杂交等实验。
2. 原理RNA提取试剂盒的原理通常基于以下步骤：2.1 细胞破碎首先，样品中的细胞需要被破碎，以释放细胞内的RNA。
常用的方法有机械破碎、化学破碎和酶解法等。
机械破碎是利用高速旋转的珠子等破碎细胞膜，而化学破碎通常使用细胞裂解液来破坏细胞膜。
酶解法则是利用特定酶来降解细胞膜。
2.2 RNA结合破碎的细胞后，RNA需要与试剂盒中的特定试剂结合。
这些试剂通常包括抗RNA酶和助剂，可以保护RNA不被降解，同时也可与其他细胞成分如DNA和蛋白质区分开来。
2.3 吸附和洗脱结合的RNA会通过离心等操作与试剂盒中的吸附材料结合，并且其他杂质如DNA、蛋白质等被洗脱。
这一步骤通常是通过向细胞裂解液中加入酒精或其他特定试剂来实现。
2.4 最后的RNA洗脱和纯化最后，从吸附材料上洗脱RNA，并通过离心等方式纯化RNA。
这样可以得到纯度较高的RNA样品，并且可以进一步用于RNA分析。
3. 使用RNA提取试剂盒的优势使用RNA提取试剂盒进行RNA提取的主要优势如下：3.1 高纯度RNA提取试剂盒可以通过洗脱和纯化步骤，获得高纯度的RNA，可以减少其他杂质对实验的干扰，提高实验结果的可靠性。
3.2 方便快捷相对于传统的RNA提取方法，使用RNA提取试剂盒可以更快速、更方便地提取RNA。
通常只需要几个步骤即可完成RNA提取，节省了实验人员的时间和精力。
3.3 可重复性好由于使用RNA提取试剂盒的步骤相对标准化，因此可以获得较好的重复性。
这对于需要进行大量实验或进行样本比较分析的研究非常有价值。
3.4 更适合高通量实验随着高通量实验技术的发展，需要处理大量样本的实验也越来越常见。
TransZol法rna提取试剂盒说明
TransZol法rna提取试剂盒说明TransZol法RNA提取步骤准备试剂：氯仿、无水乙醇。
1.菌体处理(1)将发酵后的菌体小心地转入1.5ml离心管中，用纯水冲洗菌体，12000rpm离心2min，仔细去除培养基上清。
(2)加入TransZol TM Up (每≤2×109个细菌中加入1ml TransZol TM Up)。
(3)用移液枪反复吸吹直至裂解液中无明显沉淀。
(4)室温静置5min。
2. 每使用1ml TransZol TM Up，加入0.2ml氯仿或50ul 4-Bromoanisole(间溴茴香醚)，剧烈震荡30s，室温孵育3min。
3. 10000×g 4℃离心15min。
此时溶液分成三层，无色的水相（上层）、中间层，粉红色有机相（下层）。
RNA分布在水相中，水相体积约为所用TransZol TM Up 试剂的50%-60%（为了避免吸到中间层导致DNA污染，可以适当留下一部分水相）。
4. 转移无色的水相于新的RNase-free离心管中，加入等体积的无水乙醇（此时可能会出现沉淀），轻轻颠倒混匀。
5. 将得到的溶液和沉淀一起加入离心柱中，12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液（如果体积大于离心柱容量，可以分几次完成）。
6. 加入500ul CB9，12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液。
7. 重复步骤6一次。
8. 加入500ul WB9（使用前请先检查是否加入无水乙醇），12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液。
9. 重复步骤8一次。
10．12,000×g 室温离心2min，彻底去除残留的乙醇，在室温静置数分钟彻底晾干离心柱。
11.将离心柱放入RNase-free Tube（试剂盒已配）中，加50-200ul RNase-free Water 在离心管的中央，室温静置1min。
12. 12,000×g 室温离心1min，洗脱RNA。
RNA提取实验操作步骤注意事项及问题指南
RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南准备试剂：氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或℅SDS溶液均需用DEPC处理过的水配制.操作步骤：1. 匀浆处理a. 植物组织:以叶片RNA提取为例.取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在Trizol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1min.,大约100mg 叶片使用1 ml Trizol.b. 动物组织:以鼠肝脏RNA提取为例.取新鲜或-70℃冻存组织,每50-100mg组织加1ml Trizol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积一般不要超过Trizol体积的10%.c. 单层培养细胞.直接在培养板中加入Trizol裂解细胞,每10cm2面积加1ml Trizol.用取样器吹打几次.注意:Trizol加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定.如果Trizol加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染.d.细胞悬液:离心取细胞,每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol.加Trizol前不要洗涤细胞,以免降解mRNA.一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理.e.血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10min,10 000rpm 离心1min.弃上清,收集白细胞沉淀.每1ml血液收集的白细胞沉淀中加入1ml Trizol.2. 将匀浆样品在15-30℃放置5mim,使得核酸蛋白复合物完全分离.3. 可选步骤:4 ℃ 10 000rpm离心10min,取上清.如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等,可离心去除.离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA,上清中含有RNA.处理脂肪组织样品时,上层是大量油脂,应除去.取澄清的匀浆溶液进行下一步操作.4. 每使用1ml Trizol加氯仿,盖好管盖,剧烈震荡15s,室温放置3min.如不能涡旋混匀,可手动颠倒混匀2min代替.5. 4 ℃ 10 000rpm离心10-15min,样品会分成三层：红色的有机相,中间层和上层无色的水相,RNA主要在水相中,把水相约600ul,约为所用Trizol试剂的60%转移到新管中.如要分离蛋白质和DNA,可保留黄色的有机相6. 在得到的水相溶液中加入等体积的异丙醇,混匀,-20℃放置20-30min.植物或动物组织RNA提取中,容易沉淀出大量的蛋白等污染物,导致电泳检测时看不到RNA.可以按以下步骤操作减轻污染：在上清中加入1/2体积的异丙醇,1/2体积的RNA助沉剂,然后进行以下操作.7. 4 ℃ 10 000rpm离心10min,去上清.离心前RNA沉淀经常是看不见的,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀.8. 加入1ml 75%乙醇DEPC水处理过的水配制洗涤沉淀.每使用1ml Trizol至少加1ml乙醇.9. 4 ℃ 10 000rpm离心2min,弃上清；短暂快速离心,用移液器小心吸弃上清,注意不要吸弃沉淀.10. 室温放置晾干不要晾得过干,RNA完全干燥后会很难溶解,大约晾干2-3min左右即可.加入适量DEPC水根据实验需要,可加30-100ul水或%SDS,用枪头吸打几次,充分溶解RNA.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液.RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存.注意事项：1. 从少量样品中提取RNA1-10mg组织或102-104细胞：加800ul Trizol,样品裂解后加氯仿,分层,沉淀RNA前,加5-10ug RNase-free糖原,糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml时不会影响反转录cDNA第一链的合成,也不影响PCR反应.2. 匀浆后,加氯仿前,样品可在-70 ℃放置一个月以上：RNA沉淀可以保存在75%酒精中,2-8 ℃一个星期或-20 ℃一年以上.如果要长期保存,RNA可以溶解于100%去离子甲酰胺中,-70 ℃长期保存.预防RNase污染,应注意以下几个方面：1. 经常更换新手套.因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染.2. 使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染.3. RNA在Trizol试剂中不会被RNase降解.但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿.玻璃器皿可在150 ℃烘烤4h,塑料器皿可在 NaOH中浸泡10min,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase.4. 配制溶液应使用无RNase的水将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至中浓度%v/v,放置过夜,高压灭菌.注：DEPC 有致癌之嫌,需小心操作.不同组织或细胞RNA提取预期得率植物叶片 100-200ug/g叶片动物组织 200-400ug/g肝脏组织动植物培养细胞 5-10ug/106细胞大肠杆菌 2-10ug/mlDH5α过夜菌血液 3-5ug/ml人全血问题指南：低得率A. 样品裂解或匀浆处理不彻底B. 最后得到的RNA沉淀未完全溶解A260/A280<A. 检测吸光度时,RNA样品不是溶于TE,而是溶于水.低离子浓度和低pH条件下A280会较高.B. 样品匀浆时加的试剂量太少.C. 匀浆后样品未在室温放置5min.D. 水相中混有有机相.E. 最后得到的RNA沉淀未完全溶解.RNA降解A. 组织取出后没有马上处理或冷冻.B. 样品或提取的RNA沉淀保存于-5~-20℃,未在-60~-70℃保存.C. 细胞在胰蛋白酶处理时被破坏.D. 溶液或离心管未经RNase去除处理.E. 电泳时使用的甲酰胺pH低于.DNA污染A. 样品匀浆时加的试剂体积太少.B. 样品中含有组织溶剂如乙醇,DMSO等,强缓冲液或碱性溶液.蛋白和多糖污染A. 样品中蛋白、多糖含量高.B. 样品量太大.C. 水相中混有有机相.D. 第6步中加入RNA助沉剂可以帮助去除这些污染.RNA提取一般步骤总结RNA提取原理：通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,最后溶解.但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃.RNA提取的一般步骤所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的有效抑制；有效地将RNA从DNA 和蛋白混合物中分离；对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去.但其中最关键的是抑制ＲＮＡ酶活性.RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径:提取总核酸,再用氯化锂将RNA沉淀出来；直接在酸性条件下抽提,酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA 留在水相.第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失,目前该方法的使用频率已很低.实验步骤：破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA.1、破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行,可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织,加入β-ME可以抑制RNA酶活性.2、分离RNA一般用酚、氯仿等有机溶剂,加入少量异戊醇,经过此步,离心,RNA一般分布于上层,与蛋白层分开.3、沉淀RNA一般用乙醇、3M NaAc或异丙醇.4、洗涤RNA使用70％乙醇洗涤,有时,为避免RNA被洗掉,此步可以省掉,洗涤之后可以晾干或者烤干乙醇,但是不能过于干燥,否则不易溶解.5、融解RNA一般使用TE.6、保存RNA应该尽量低温.为了防止痕量RNase的污染,从富含RNase的样品如胰脏、肝脏中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的 RNA,对于长期贮存更是如此.从大鼠肝脏中提取的RNA,在水中贮存一个星期就基本降解了,而从大鼠脾脏中提取的RNA,在水中保存3年仍保持稳定.另外,长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感.为了增加贮存RNA样品的稳定性,可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中,存于- 70℃.用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物.来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年.当准备使用RNA时,可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至,12,000×g离心5分钟.氯化锂法提取总RNA：本方法用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA酶,用氯化锂选择沉淀RNA,其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA,具有快速简洁的长处,但也存在少量DNA的污染及RNA 得率不高,小RNA丢失的缺陷.试验试剂：1、氯化锂/尿素溶液氯化锂126g3M 尿素、360g6M 加水至1L,过滤灭菌2、悬浮液10mM Tris-HCL ,1mM EDTA pH8,0 ,%SDS试验步骤：1、对于大量组织或细胞,则每克组织或细胞加入5－10ml 氯化锂－尿素溶液,匀桨器高速匀桨2分钟；对于少量细胞107个细胞/ml,则每克组织或细胞加入氯化锂－尿素溶液手工匀桨,并转移至Eppendof管中.2、匀桨液在0－4℃放置4小时后,12000g离心30分钟.3、取沉淀,加入原匀桨液1/2体积的氯化锂－尿素溶液,重复步骤2.4、沉淀用原匀桨液1/2体积的氯化锂－尿素溶液复溶后,加入等体积酚/氯仿/异戊醇在室温放置15－30分钟并不时摇动混匀,4000g离心5分钟.5、取上层水相,加1/10倍体积的3M乙酸钠及2倍体积的乙醇,－20℃放置1小时,5000g离心.6、 70％乙醇洗沉淀一次.真空干燥.7、 RNA溶解液溶解沉淀,得RNA,分装,于－70℃保存.蛋白酶－热酚法－本方法适合于病毒RNA的提取试验试剂：1、蛋白酶K终浓度50ug/ml2、 2×缓冲液：1%SDS 20mMTris-HCL pH试验步骤：1、提纯病毒液中加入等体积缓冲液、蛋白酶K,37℃40-50分钟.2、加入等体积65℃预热的酚溶液,轻徭,在65℃保温5分钟后再轻徭.3、离心,取上清,氯仿抽提一次.4、取上层水相,加1/10倍体积的3M乙酸钠及2倍体积的乙醇,－20℃放置1小时,5000g离心10000g,10min.5、 70％乙醇洗沉淀一次.真空干燥.6、 RNA溶解液溶解沉淀,得RNA,分装,于－70℃保存.RNA提取实验经验心得总结一：实验的准备实验之前必须先准备好相关的试剂和实验用品．试剂：１.TRIZOL,一步法提取ＲＮＡ用的,最好是INVITROGENE的,１００ml850RMB,不过也有国产的,便宜些．这个试剂是非常关键的,也是不能省的,经常有很多朋友不想买这个,嫌贵,个人感觉是非买不可,不然用其他办法自己配的话也不便宜,而且配的过程中很毒．2.异丙醇,无水乙醇,三氯甲烷氯仿,ＤＥＰＣ３.逆转录酶等．一般如果做的次数不是很多的话可以买试剂盒的,里面什么都有,ＰＲＯＭＥＧＡ的也不是很贵,记得是３０次的６００多．但是如果实验室做得比较多的话,还是自己分开买的比较好．Ｍ－ＭＬＶ逆转录酶个人觉得ＰＲＯＭＥＧＡ的最好,而且不贵,其他公司我用得也不多,反正一直用ＰＲＯＭＥＧＡ,还有ＤＮＴＰ,oligodTn,RNA酶抑制剂,除了逆转录酶买ＰＲＯＭＥＧＡ的,其他的几样我都是买的ＴＡＫＡＲＡ的,因为promega的其他几样都很贵,这样配起来用一点也不比原装的差．当然实验室比较富裕的也可以买好的,不过话说回来,咱们花的经费大多数还是民脂民膏,这些不太关键的地方省着点比较好我是不是太罗嗦了４.用具．各种大小的枪头和ＥＰ管.由于RNA提取过程中对于RNA 酶是非常敏感的,所以枪头和管子都要做灭酶处理.灭酶的正常程序是用加入DEPC 的水泡枪头和管子,过夜.DEPC的浓度是%.DEPC是强致癌物,做的时候要戴手套口罩,作好防护措施.泡好后再高压,烘干.灭酶除了用DEPC处理外,还可以用氯仿泡枪头和管子,不用泡过夜,1-2小时就行,也没有DEPC那么恐怖,泡后也是高压烘干.5. 水.实验用的水也是很关键的,必须用DEPC处理灭过酶的水才可以.具体做法是将去离子水中加入%DEPC,摇过夜,之后再高压.高压这步是不能省的,因为必须用高压把残留的DEPC分解掉,不然会影响后续的反应.二．实验步骤TRIZOL提取RNA的原理就是利用变性剂将细胞裂解,释放出蛋白质,DNA,RNA,之后根据它们在不同PH值和不同极性溶剂中溶解度不一样.而把RNA提取出来.详细的原理可以自己查一查,在这里不做赘述.1. 样品处理对于组织样品,书上说的办法是匀浆后加TRIZOL,但是我的经验是用匀浆器匀浆的话很多组织都是沾在匀浆器的壁上了,所以我一般都是用小剪刀剪,剪的时候要耐心,剪得很碎才行.一般样品其始量大概黄豆那么大一坨就行了,加1mlTRIZOL,然后在EP管中剪碎.样品尽量用新鲜的,不是新鲜的泡在PBS中一段时间也行.样品泡在TRIZOL里面后RNA 就基本不会降解,这一步可以放在冰箱里面冻起来,可以保存一段时间2. RNA提取.往第一步中的剪碎的样品和TRIZOL中加入的氯仿,之后剧烈摇晃.震荡,此时整个液体的颜色应该变成一种粉红色的.之后静置10分钟,静置后可以看到液体分层了.12000转4度离心10分钟,可以看见液体分层很明显,最上面的是无色的水相,RNA就溶解在里面,中间一层是白色的固体,这层是蛋白质和DNA形成的复合体,下面是红色的酚相.把上层水相吸到另外一个管子里面,注意不要把下面的两层吸出来了,宁愿少一下没关系.往水相液体中加入500ul的无水乙醇或者是异丙醇,上下颠倒混匀,此时如果RNA量多的话可以看见一些油一样的东西,反正就是感觉怪怪的那种,不过一般都不会出现明显的沉淀的.之后12000转离心10分钟,离心之后就可以看见管底有点半透明的东西了,那就是我们要RNA.倒掉无水乙醇或者异丙醇,加入500ul用DEPC处理水配制的70%乙醇,以洗涤RNA,加入后把管子敲一敲,尽量使RNA 沉淀飘起来.之后在7500转离心8分钟,到掉乙醇,倒扣在干净的吸水纸上面,空气室温干燥,时间可以稍长点,40分钟到1小时,以看不见明显的液滴为准.干后用20ul或者30ulDEPC水溶解RNA,50度保温1小时.之后得到的RNA就可以泡个电泳或者测个浓度什么的,就看大家的需要了,具体方法可以自己查一查,因为我一般是用RNA做RT-PCR,或者是扩基因全长,所以我一般都不用电泳或者测浓度,都是等到逆转录完成之后,用beta-actin或者其他内参做个PCR检测RNA的质量.补充一点：上述实验和下面的逆转录都要在超净台里面完成.3. 逆转录总RNA提取之后,往往我们要的是mRNA,并且由于RNA不好保存,所以要把RNA经逆转录变成cDNA,就可以方便的保存和操作了.逆转录过程就是照着说明书一步步做了,所以就简单说一下.取8-10ulRNA,加上1ul的oligodT,用水补足13ul,这一步RNA的量是可以调节的.70度变性10分钟,然后迅速放在冰上,这一步是为了让oligodT结合到mRNA上.当然,有的实验需要用随机引物做,大家自己把握.变性后加如5buffer ,dntp,RNA酶抑制剂,逆转录酶,42度保温60分钟,这一步最好是在PCR仪上做.保温后再94度变性5分钟,冰上放置.好了,cdna得到了,下面就是要检验一下质量了,也就是拿beta-actin引物为内参做个PCR了.看看扩出来的亮度怎么样了具体的引物设计和PCR的优化有时间我会发到PCR版上去.好了,如果内参扩出来比较好的话,那你就成功了,可以做下面的试验了.总的来说,RNA提取过程中最应该注意的就是RNA酶的防止,所有操作在超净台完成,然后一定要带一次性手套,而且一直要换.其他器具的处理就象前面说的那样了.。
EASYspin 植物RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://EASYspin Plant RNA KitEASYspin植物RNA快速提取试剂盒目录号：RN09试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(RN0902)裂解液RLT 室温50 ml去蛋白液RW1 室温40 ml漂洗液RW 室温10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 室温10 mlPLANTaid 室温 5 mlRNase-free吸附柱RA和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项：1.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机。
2.需要自备乙醇，研钵(可选)。
3.裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。
若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.关于DNA 的微量残留：一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留，本公司的EASYspin系列RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜已经清除了绝大部分的DNA残留，在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留影响不是很大，如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：1)选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3)将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。
本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup)，请联系我们索取具体操作说明书。
RNA提取步骤
RNA提取：用TaKaRa RNAiso Reagent试剂提取RNA步骤(1).试剂盒之外所需准备试剂：◆氯仿◆异丙醇◆ 75%乙醇（DEPC 处理水配制）◆ RNase-free 水（制备方法：使用 RNase-free 的玻璃瓶，向超纯水中加入DEPC 至终浓度 0.01%（v/v），过夜搅拌后，高温高压灭菌。
(2).尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。
a）用 0.1% DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃下处理 12 小时。
b）然后在120℃下高压灭菌 30 分钟以除去残留的 DEPC。
RNA 实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。
(3) 用于 RNA 实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60 分钟）或使用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可以使用 RNA 实验用的一次性塑料容器），使用的无菌水须用 0.1%的 DEPC 处理后再进行高温高压灭菌。
RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。
实验操作1. RNAiso Reagent 的使用量情况如下。
2. 实验样品的研磨和匀浆。
A. 贴壁培养细胞①倒出培养液，用1×PBS 清洗一次。
②每10 cm2生长的培养细胞中加入 2 ml的RNAiso Reagent，水平放置片刻，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落（对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥离细胞）。
③将内含细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。
④室温静置 5 分钟。
B. 悬浮培养细胞①将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000 g 4℃离心 2 分钟，弃上清。
②向每5×106个细胞中加入l ml的RNAiso Reagent。
③用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。
④室温静置 5 分钟。
C. 动物组织、植物材料样品①将超低温冻结的 RNA 提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（无明显的可见颗粒，如果没有研磨彻底会影响 RNA 的收率和质量）。
提取RNA步骤
实验目的：提取动物组织RNA，备后续实验使用。
实验试剂：研钵、镊子、刮勺、冰盒、试管架、微量移液器、RNA无酶管、低温离心机、酒精、液氮、Takara RNA提取试剂盒、去除DNA试剂盒冰袋实验步骤：1、实验准备:研钵中加入少量酒精，点燃，灭菌后，超净台灭菌30min（包括研钵、镊子、刮勺、试管架、微量移液器、RNA无酶管）。
2、取液氮、冰袋备、冰盒备用3、将研钵预冷，其中大研钵的可以放在冰袋上，然后再倒入液氮，小研钵直接倒入少量液氮预冷。
4、将超低温冻结的RNA 提取样品，剪取绿豆到黄豆大小组织(不能太大,不要大于黄豆大小），迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状(无明显的可见颗粒，如果没有研磨彻底会影响RNA 的收率和质量)。
可用刮勺将其刮到一团。
5、可以向4的研钵中加入适量的含有裂解液的Buffer RL,(大约700ul)，确保研磨成粉末状的样品完全覆盖，然后室温静置（研钵倾斜放置），直至样品完全融化后用枪头吹打混匀,只至液体中无明显沉淀。
这期间可以研磨下一组织.6、将步骤5中的匀浆液转移至1。
5mlRNA无酶管中，12,000 rpm，4℃离心5 分钟。
期间配置70％乙醇(7份无水乙醇+3份水（为试剂盒中的RNA无酶水)）7、小心吸取6步骤上清液（吸取400ul即可），移入1。
5ml的RNase Free collection（切勿吸取沉淀，否则会阻塞后面的膜）。
然后向其中加入等体积的70％乙醇，此时可见沉淀，立即摇匀。
8、将7中的混合液，取600ul（要小于600ul)到RNA spin column （含2ml collection Tube）中，12，000 rpm，4℃离心 1 分钟,弃滤液。
将RNA spin column 放到2ml collection Tube 管中。
9、将500ul buffer RWA加入至RNA spin column 12，000 rpm，4℃离心30s，弃滤液。
OMEGA总RNA提取试剂盒说明书_BBH
E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps) 步骤A．真核细胞和组织自备材料：β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管、一次性乳胶手套。
细胞的步骤1．在离心管中用TRK裂解缓冲液裂解细胞，使细胞团松散，轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。
吸净培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。
加600ul的TRK到T35细颈瓶或10cm的培养皿中，更小的培养器则加350ul的TRK。
用移液管吸取buffer布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。
将裂解产物转移至干净的1.5mlEP管中，然后进行第2步。
如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK）裂解液，漩涡振荡混匀（具体略，见说明书）。
2．匀浆化裂解产物“裂解和匀浆化样品”－第四页有更详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。
样品匀浆化不完全会显著的减少RNA的产量并容易造成柱子堵塞。
a)用匀浆器（rotor-stator ）30 s，使样品匀浆化，而后进行第3步。
b)使裂解产物通过钝的针头的注射器（0.9mm直径20-gauge），使之匀浆化。
注射器要除RNase。
进行第3步。
c)将裂解物转移入omega homogenizer spin column,10000g离心1分钟。
将流出液移入新的tube中，进行第3步。
组织的步骤：1．TRK裂解缓冲液在离心管中裂解细胞，使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
350ulTRK裂解液最多能有效裂解20mg组织（-3mm3）。
对20mg以上组织用600ul的TRK裂解液。
然而，不要超过30mg组织，这是推荐的最大量。
RNApure高纯总RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://RNApure Total RNA KitRNApure高纯总RNA快速提取试剂盒目录号：RN03试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成50次(RN0302)裂解液RL（4℃避光）50 ml去蛋白液RE 25ml漂洗液RW10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 10 mlRNase-free吸附柱RA 50个收集管（2ml）50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项：1.因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。
裂解液RL可以常温运输，收到后4℃避光可长期保存，常温保存3个月也不影响使用质量。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：改进的异硫氰酸胍/酚一步法（TRIzol法）裂解细胞和灭活RNA 酶，然后总RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
2.结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3.独有的RL裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。
4.多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。
5.有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。
注意事项1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!2.本试剂盒抑制RNA酶效果极佳，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。
3.裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。
RNA提取步骤
RNA提取：用TaKaRa RNAiso Reagent试剂提取RNA步骤(1).试剂盒之外所需准备试剂：◆氯仿：氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取RNA时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。
DNA提取过程有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和DNA脱离，DNA进入水相。
但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离，否则DNA会释放到水相。
不管有酚也好，没有酚也好，氯仿本身也对蛋白有变性作用，剧烈的震荡，很容易使得DNA 的亲水基团，与水相接触。
所以不要剧烈震荡。
氯仿的作用有多个方面，一是作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去，同时也通过变性作用抑制RNase活性；二是RNA提取试剂中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚，很多自己配试剂提的方法也用苯酚，抽提蛋白时也会用到苯酚），苯酚微溶于水，抽提烷之后水相里有痕量的酚，如果不除去会损伤核酸，需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用通常氯仿里面会加少量异戊醇（1/25），减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫，影响后续操作，不过个人经验感觉加不加没什么太大区别，也许是我的样品里蛋白不多吧◆异丙醇：异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，与前面的氯仿不矛盾异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。
只不过用量少一点，0.6V~1V就够了，不像乙醇沉淀需要至少2V，一般需要2.5倍体积。
在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。
不过感觉效果不如乙醇，偶尔会有沉淀不出来东西的时候Trizol法提RNA，加氯仿就是要剧烈手摇才行，这样才能彻底地两相混匀。
而且DNA在水饱和酚的酸性条件下是会被留在有机相的，不会跑水相里头去。
醇沉淀是很经常用的方法，因为RNA和某些杂质不溶于异丙醇，所以可以用来沉淀◆75%乙醇（DEPC 处理水配制）◆RNase-free 水（制备方法：使用RNase-free 的玻璃瓶，向超纯水中加入DEPC 至终浓度0.01%（v/v），过夜搅拌后，高温高压灭菌。
总RNA提取试剂盒操作流程
总RNA提取试剂盒操作流程1.准备工作首先，准备实验室所需的所有试剂和材料。
包括总RNA提取试剂盒，标本样本（细胞培养物或组织样本），RNase去除剂、DNase处理试剂、异硫氰酸盐混合物、洗涤缓冲液、乙醇，10%叠氮化钠溶液，TE缓冲液和脱水酒精。
2.样本预处理对于细胞培养物，将其转移到离心管中，用1×PBS缓冲液洗涤细胞，然后将PBS去除。
对于组织样本，使用刀片将组织切碎，并将其转移到离心管中。
3.细胞裂解和组织裂解使用总RNA提取试剂盒提供的裂解缓冲液，将培养细胞或组织完全裂解。
对于细胞裂解，直接将缓冲液加入细胞，并彻底混匀。
对于组织裂解，将裂解缓冲液加入裂解管中，然后使用离心机将组织完全裂解。
4.清洁RNA将裂解的细胞或组织样本转移到离心管中，添加RNase去除剂，摇动混匀，然后在室温下孵育10分钟。
5.微量RNA精炼将异硫氰酸盐混合物添加到离心管中，摇动混匀，然后孵育10分钟以精炼RNA。
6.RNA沉淀和洗涤根据试剂盒提供的指引，将样品以及裂解缓冲液转移到分离管中。
加入等体积的酒精，然后彻底混匀。
样品将出现白色絮状，代表RNA已经沉淀。
使用离心机将样品离心10分钟，将沉淀收集到离心管底部。
轻轻倒出上清液，并加入预先配制好的洗液进行洗涤。
洗涤过程中，将洗涤缓冲液加入沉淀中，并轻轻混匀。
然后使用离心机将样品离心，去除上清液，并加入新的洗液进行额外的洗涤。
重复上述洗涤步骤2-3次，以确保完全清洁RNA。
最后，去除所有的上清液。
7.去除基因组DNA污染使用DNase处理试剂，按照试剂盒提供的指引，去除所有的基因组DNA污染。
将DNase处理试剂加入裂解液中，并轻轻混匀。
在室温下孵育15分钟。
8.乙醇沉淀RNA加入等体积的乙醇，并轻轻混匀。
样品将再次出现白色絮状，代表RNA再次沉淀。
使用离心机将样品离心10分钟，然后倒出上清液。
9.干燥RNA使用10%叠氮化钠溶液将RNA片段再次洗涤，并轻轻混匀。
rna提取步骤
RNA fast200总RNA 极速抽提试剂盒适用范围：细胞、组织、全血、骨髓、体液、细菌、病毒Catalog no. 220010 50次保存条件：室温，保质期2年。
技术支持：使用中遇到任何问题或建议，请通过E-mail（question@）与我们的技术支持部门联系，部门的资深分子生物学专家将在2个工作日内给予答复。
性能介绍：样本量全血10-1,000μl，培养细胞<1×107，组织<30mg，细菌<1×109，体液（尿液、腹水、胸水、脑积液等）根据具体细胞量试剂3种（提取细胞浆RNA为4种）步骤4步：裂解，吸附，清洗，洗脱耗时7-10min柱容量200μg total RNA洗脱体积25-50μl得率>90%产量1-5μg/ml全血，100-300μg/1×107细胞，1-6μg/ mg组织，50-200μg/1×109细菌纯度OD260/OD280: 1.9－2.1特点 1.可能是目前国际上速度最快、步骤最少的总RNA提取方法2.获得的RNA质量与Trizol提取相同，但操作更稳定，RNA不易丢失，不同提取批次间变异小，较少发生DNA和蛋白质污染3.获得的RNA完整性好，纯度高，得率高，可以满足目前所有的后继实验要求4.适用性广，可同时适用于动物组织、细胞、细菌、植物组织等的总RNA提取5.可直接处理血清、血浆及其它体液6.非常适于临床标本病毒RNA抽提用于RT-PCR检测7.生产全线除RNase处理及防护，所有容器及试剂除RNase处理用途普通RT-PCR，定量RT-PCR，NASBA，表达芯片分析，cDNA合成，构建cDNA 文库，RPA，Northern Blot，mRNA筛选等试剂盒组成：( Catalog no. 220010 50 次)RA1 10ml（仅提取细胞浆RNA时使用）RA2 30ml洗液60ml（已加有15ml）洗脱液10ml内套柱，外套柱50套钢网，平皿，研磨棒需要时另配（提取组织RNA时用）说明书1份操作流程：实验操作前请先认真阅读“注意事项”1．样本预处理a．抗凝全血：离心管中先加入3ml淋巴细胞分离液，在上层小心加上2-3ml抗凝全血，1,500rpm 室温离心15min，吸取中间层细胞至1.5ml eppendorf管，加入生理盐水1ml，4,000rpm离心2min，倒去上清，加入生理盐水100μl，充分振荡形成细胞悬液，直至没有细胞团块（重要）；b．组织块：剪切成小块后放入平皿（置冰袋上预冷）中的钢网上，加入DEPC处理的PBS或生理盐水（约1ml/30mg组织），用研磨棒将组织研磨挤压过钢网，收集过网悬液，取100μl放入eppendorf管中（也可采用液氮中捣碎或冰浴中匀浆的方法）；c．培养细胞：悬浮细胞离心后留下细胞团块和适量上清（100μl/2×106细胞），充分震荡直至没有细胞团块（重要）。
rna提取试剂盒原理
RNA提取试剂盒的基本原理RNA提取试剂盒是一种用于从生物样品中提取RNA的化学试剂盒。
它可以将细胞或组织中的RNA分离出来，以便后续的分子生物学研究，如逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、实时定量PCR、Northern blotting等。
下面将详细解释RNA提取试剂盒的基本原理。
1. 细胞破碎和裂解RNA提取试剂盒首先要对细胞或组织进行破碎和裂解，以释放内部的RNA。
这一步通常使用离心和化学方法来实现。
首先，通过离心将样品离心下来，去除上清液中的培养基或缓冲液。
然后，加入裂解缓冲液和蛋白酶K等蛋白酶来破坏细胞膜和核膜，并降解RNA酶。
裂解缓冲液中通常含有高浓度的盐和洗涤剂，以破坏细胞膜结构。
蛋白酶K能够降解核酸结合蛋白和核酸酶，从而保护RNA不被降解。
2. RNA的结合与纯化在细胞裂解后，RNA提取试剂盒通过添加特定的试剂和离心步骤来使RNA与其他杂质分离。
首先，加入乙酸酚/氯仿溶液，这种溶液可以使DNA和蛋白质沉淀到有机相中，而RNA则存在于水相中。
然后，通过离心将两个相分离开来。
DNA和蛋白质会沉淀到底部形成有机相，而RNA会存在于上层的水相中。
接下来，将水相转移到新的离心管中，并加入异丙醇。
异丙醇能够使RNA与水分子结合起来形成复合物，并沉淀下来。
然后再次进行离心分离，并去除上清液。
3. RNA的洗涤和去除污染物为了得到纯净的RNA样品，需要对沉淀下来的RNA进行洗涤和去除污染物。
首先，在沉淀下来的RNA上加入75%乙醇溶液进行洗涤。
乙醇能够使RNase失活，并帮助去除污染物。
然后通过离心将RNA沉淀下来，去除上清液。
接下来，重复洗涤步骤一次或两次，以进一步去除污染物。
4. RNA的溶解和保存最后一步是将纯化的RNA溶解在适当的缓冲液中，并保存起来以便后续实验。
通常使用无RNase的缓冲液（如DEPC水）来溶解RNA。
然后通过离心去除任何可能残留的杂质。
为了保护RNA不被降解，在提取过程中需要使用RNase抑制剂和无RNase的试剂。
rneasy kit法提取rna原理
rneasy kit法提取rna原理一、简介rneasykit是一种常用的用于从组织样品或病毒中提取总RNA的试剂盒。
它是根据酚/氯仿抽提和有机溶剂沉淀等方法，结合一系列试剂和酶，能够有效且稳定地提取高质量的RNA。
这种提取方法广泛应用于生物学研究中的基因组研究、转录组学研究、逆转录病毒研究等。
二、提取原理1.组织样品处理：首先，试剂盒中的裂解液能够溶解组织细胞。
裂解液中含有蛋白酶K，它可以分解组织中的蛋白质，同时不会对RNA 产生破坏。
2.细胞碎片和核酸分离：通过离心，将组织中的细胞碎片和上清液分离。
沉淀中包含了大部分的总RNA，因为它与蛋白质等杂质不同，RNA更重，会下沉。
3.RNA沉淀洗涤：在洗涤步骤中，试剂盒中的洗涤液可以去除可能残留的蛋白等杂质，进一步提高RNA的质量。
4.酚/氯仿抽提：这是RNA提取的关键步骤。
酚和氯仿的混合物能够将RNA从其他杂质中分离出来。
通过离心，可以将有机相和上清液去除，留下含RNA的沉淀。
5.异戊烷相的分离：通过异戊烷相的分离，得到纯化的RNA更加容易。
同时，异戊烷相中的RNA可以被收集起来。
6.乙醇洗涤：通过70%的乙醇洗涤，可以进一步去除可能残留的酚和氯仿，并回收RNA。
这一步骤可以减少RNA被降解的风险。
7.RNA定量和纯度检测：通过紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度，以确保其可用于后续实验。
这种方法可以确定RNA的质量和纯度，为后续实验提供基础数据。
8.逆转录反应：如果需要，可以使用试剂盒提供的逆转录酶和引物，将RNA逆转录为cDNA。
这一步骤可以为后续的基因表达分析做准备。
三、注意事项1.在使用过程中，要避免RNA受到RNA酶的破坏，以保持其完整性。
因此，需要在无RNA酶的环境中进行操作。
2.使用无RNase和无DNA酶的试剂盒和耗材，以减少对RNA的污染。
这样可以确保提取出的RNA质量更高，结果更准确。
3.在离心和洗涤过程中，要小心操作，避免对RNA造成物理损害。
细菌RNA提取 omega试剂盒
细菌RNA提取OMEGA E.Z.N.A. Bacterial RNA KitR6950-01Before starting：1.溶菌酶溶液与TE buffer混合至浓度15mg/ml,aliquot into 合适的portioins，储存-20℃2.细菌培养至log-phase3.β-mercaptoethanol（β-ME，巯基乙醇破坏抑制核酸酶）加进buffer BRK（20ul/mlBRK）4.用96-100%的酒精dilute RNA wash buffer II(酒精：buffer2=4:1，降低盐浓度，避免影响下游反应)，储存在室温Spin protocol：实验前准备好：台式离心机，1.5-2ml EP管，70%酒精1.培养细菌至log-phase（勿过夜培养）2.取3ml（<5x108菌体）离心，4000-5000g，4℃，5-10min3.弃上清，用100ul lysozyme/TE buffer resuspend，用涡旋振荡器最大速混合30s（溶菌酶的需求量取决于细菌株系，对于某些细菌，其它酶可能更有效。
细胞壁完整digestion对细胞裂解影响大）4．Incubate 10min at 30℃。
在shaker-incubator中温育或每2min vortex 20s5.在样品中加350ul buffer BRK/2-ME和25-40mg玻璃粉，vigorously vortex 5min，13000g 离心5min6.取400ul supernatant于1.5ml管，加70%酒精于lysate中，pipette混匀7.将样品（可能已形成precipitate）加进mini colume inserted in a 2ml collection tube。
离心30-60s，10000g。
弃去下层液体，重利用collection tube8.加300ul RNA wash buffer I，离心30-60s，10000g，室温。
血清血浆microRNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://Serum/Plasma microRNA Kit血清/血浆microRNA快速提取试剂盒目录号：RN46适用范围：适用于从动物及人体血浆和血清中纯化包括miRNA的无细胞总RNA。
试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(RN4601)Lysis buffer 4°C避光50 mlWash Solution 1 室温12 ml第一次使用前加入28ml无水乙醇Wash Solution 2/3 室温10 ml第一次使用前加入42ml无水乙醇RNase-free H2O 室温10 mlRNase-free吸附柱RA和收集管室温50套本试剂盒在室温储存6个月不影响使用效果。
储存事项：1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。
3.Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体，并不影响使用，直接不吸晶体，吸上清使用就可以。
4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15-30核苷酸左右大小RNA（包括siRNA和miRNA）的试剂盒。
但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收，酚/胍抽提和异丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA，对于血清血浆样本更是由于其自身特点更难提取。
本试剂盒采用独特的裂解液迅速直接裂解血清血浆RNA酶，强烈有机抽提去除蛋白和DNA，RNA包括微小分子RNA在高浓度乙醇下吸附于离心柱内特殊硅基质膜，再通过一系列特殊漂洗液快速的漂洗－离心的步骤，漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质进一步去除，最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
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1．取25mg的斑马鱼肌肉组织，加入GTC Lysis Buffer 700ul, 在匀浆器中充分均质。
注意：GTC Lysis Buffer 在使用前一定要加入2-巯基乙醇（每1ml GTC Lysis Buffer 加20ul 2-巯基乙醇）。
2．转移到1.5ml的离心管中，13000g离心5分钟，小心吸取上清液至HiBind DNA 吸附柱中，再将吸附柱放于2ml的收集管里。
注意切勿吸到脂肪层。
3．在≧13000g的速度下离心1分钟，将DNA吸附柱取出，稍后用作DNA的提取。
注意：离心后确保所有的液体流过吸附柱，可以重复离心。
4．加等体积的70%的乙醇至收集管中，此时会产生沉淀，用枪反复吹打彻底混匀。
如果在均质的过程中，样品有所损失，可适当调整乙醇的加入量，使乙醇和样品量尽可能相等。
5．将收集管中的样品加入HiBind RNA吸附柱中，吸附柱的最大体积是800ul，≧800ul时可分次加入。
室温下在速度≧10000g时离心1分钟。
弃去滤过液，再将吸附柱放入收集管中。
6．加500ul RNA漂洗液Ⅰ至HiBind RNA 吸附柱中，≧10000g离心1分钟，弃去滤过液，将吸附柱重新放入收集管中。
7．加500ul RNA漂洗液Ⅱ至吸附柱中，≧10000g离心1分钟，弃去滤过液和收集管。
8．将吸附柱放入一个新的收集管中，加入500ul的RNA漂洗液Ⅱ至吸附柱中，≧10000g 离心1分钟，弃去滤过液，将吸附柱重新放入收集管中。
9．≧13000g离心2分钟，彻底干燥吸附柱，弃去收集管。
10．将吸附柱放入一个新的1.5ml的离心管中，在吸附柱中加入40-70ul的DEPC处理的无菌水，10000g离心1分钟洗脱RNA。
如果RNA的量大于30ug，可再用DEPC处理的水进行洗脱。
11．将DNA吸附柱放入一个新的2ml的收集管中，在吸附柱中加入500ulHB Buffer，≧10000g离心1分钟，弃去滤过液，将吸附柱重新放入收集管中。
12．在吸附柱中加入700ul的DNA漂洗液，10000g离心30秒。
弃去滤过液，加戏附中重新放入收集管中。
13．打开吸附柱的盖，13000g离心2分钟彻底干燥吸附柱。
14．将吸附柱放入一个新的1.5ml的离心管中，在吸附柱中加入50-100ul的洗脱液，盖上盖13000g离心2分钟洗脱DNA。