利用食用菌菌渣进行饲料发酵的研究
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粗蛋白
常压干燥法
凯氏定氮法 索氏抽提法 酸碱洗涤法 高温灼烧 无氮浸出物(%)=1- (粗蛋白%+ 粗脂 肪%+粗纤维%+粗灰分%)
主 要 成 分 的 检 测
粗脂肪
粗纤维 粗灰分 无氮浸出物
钙 磷
EDTA 络合滴定法
定磷试剂法
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
纤维素降解菌的筛选及酶活力测定
1
纤维素降解菌的富集、分离及纯化
Results
木屑香菇菌渣纤维素降解菌的筛选结果 4株菌对滤纸片的降解率如图所示：细菌和放线菌 通过富集、分离、纯化、初筛和复筛，最终筛选出4株 的滤纸降解率较低分别为6.43%和8.04%，两株真菌的滤 对纤维素分解能力较强的菌株，其中包括1株细菌、1株放 纸降解率较高，其中真菌a对滤纸的降解率为19.79%、 线菌和2株真菌，其中真菌b在初筛时形成较大的水解圈 真菌b对滤纸的降解率高达24.12%，由此可见真菌b应该 （见下图） 是一株理想的纤维素降解菌。
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
纤维素降解菌的筛选及酶活力测定
4
纤维素酶活性的测定
纤维素粗酶液 的制备
纤维素酶活 性测定
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
木质素降解真菌的筛选及酶活力测定
1
富集
木质素降解菌的筛选
分离
纯化
复筛
有学者研究发现，微生物若能够在 含愈创木酚的培养基上产生红棕色的变 色圈，则说明该微生物具有降解木质素 的能力。将上述获得的纯种接种于培养 基2上，28 ℃培养7 d，观察其菌落直 径（d1）、变色圈直径（d2），并计算 菌落直径与变色圈直径的比值（d1/ d2 ）。选出对木质素有较强降解作用的菌 种。
降解率 = YX 100% Y
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
纤维素降解菌的筛选及酶活力测定
3
木屑香菇菌渣固体发酵
称取50 g粉碎的木屑香菇菌菌渣装入250mL的三角 瓶中，121℃灭菌半小时，待其冷却至室温时，将筛 选出来的细菌、放线菌、霉菌菌液分别接入三角瓶中， 细菌组置于37±1℃ 140 r/min培养；放线菌和霉菌 组置于28 ℃ 140 r/min培养 7d；细菌组每隔4 h取 一次样，放线菌和霉菌组从第24 h开始每隔4 h取一 次样称取1 g，4 ℃保存备用。
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
Lip
MnP
2
木质素降解菌酶活性的测定
漆酶活性的测定
取0.5 mM 的ABTS溶液（2,2-联氮二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸溶液) 2 mL，再加入 2 mL粗酶液，室温下反应， 在420 nm的波长下测定前3 min内的吸 光值的增加量。酶活力单位的定义：每 克样品中每分钟吸光值增加0.001 所需 要的酶量，定义为 1 个活力单位（U）。
Results
wk.baidu.com木屑香菇菌渣纤维素降解菌酶活力的测定
细菌
Results
木屑香菇菌渣木质素降解菌的筛选及酶活力
菌落直径和变色圈直径的比值测定结果(dl/d2)
由图可以看出，4号菌株菌丝生长速度较快，那么在相同时 间内，菌丝的生长量较多，那么分解木质素的速度也应该更快
Results
木屑香菇菌渣纤维素降解菌酶活力的测定
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
木质素降解真菌的筛选及酶活力测定
2
木屑香菇菌渣固体发酵 称取50 g粉碎的木屑香菇菌菌渣装入250mL的三角 瓶中，121 ℃灭菌半小时，待其冷却至室温时，将筛 选出来的对木质素降解能力最强的仪株真菌接入三角 瓶中，保持适合的含水量，置于28 ℃ 140 r/min培 养。每隔3天取样，连续取样30 d，4 ℃保存备用。
富集 分离 纯化
待菌落长出后，根据各个菌落的形态特征点 称取1g经富集的木屑香菇菌渣倒入含玻璃珠的 接至相应的常规培养基斜面上（牛肉膏-蛋白胨 称取50g木屑香菇菌渣加入250mL的三角瓶中， 99mL无菌水中，28℃下震荡均匀并浸泡1h，按照 培养基、高氏一号培养基、PDA培养基），28～ 加入适量自来水，使其含水量达到60%左右， 30℃恒温倒置培养，每个处理三个重复，进行多 28～30℃培养20d。 常规稀释分离方法，均匀涂布在羧甲基纤维素 （CMC）培养基上，28～30℃恒温倒置培养，每 次转接，直到获得纯种。 个处理三个重复。
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
Lip
MnP
Lac
2
木质素降解菌酶活性的测定
木质素过氧化物酶活性的测定
反应体系为：酒石酸钠缓冲溶液、 藜芦醇、粗酶液， H2O2室温启动反应， 在310nm的波长下测定前3min内的吸光 值的增加量。酶活力单位的定义：每克 样品中每分钟吸光值增加0.001 所需要 的酶量，定义为 1 个活力单位（U）。
Results
欢迎各位老师和同学提出 宝贵的意见和建议
食用菌菌渣进行饲料发酵 的研究
报告人 指导老师
研究目的和意义
据中国食用菌协会不完全，像河南、山东 等7省，年产量超过万吨，占全国总产的 63%；像江西、湖北等9省年产为50~100万 吨，由此可见我国食用菌栽培面积广泛。
研究目的和意义 那么每年产生的食用菌 菌渣又将如何处理呢？
研究目的和意义
研究目的和意义
3
组别
对照组
实验组
23.11±0.97
23.01±1.02
693.30±3.71
690.30±4.27
Results
结论与展望
本研究筛选出来两株分别用于降解纤维素和木质素的菌株，然 后再将这两株菌株和已有的啤酒酵母等比例混合用于混菌发酵， 结果发现，经过混菌发酵，木屑香菇菌渣中粗蛋白的含量由原来 的6.56%增加到了 17.41%；木屑香菇菌渣中粗纤维的含量由原 来的20.91%降为9.24%。此外，由于啤酒酵母的作用，经发酵后 的木屑香菇菌渣还散发出淡淡的香味。如此以来经过混菌发酵不 但提高了木屑香菇菌渣的营养价值，还改善了其风味，提高了适 口感。 利用发酵后的菌渣进行畜禽饲喂试验以确定其安全性、毒性以及 应用效果，试验证明，发酵物中不含黄曲霉毒素B1，对小白鼠没 有毒害作用；再通过对肉牛育肥、奶牛产奶、大耳兔增重等试验 证明了，经发酵后的木屑香菇菌渣完全可以用来代替粗粮或者部 分精量，应用于生产实践。
Results
木屑香菇菌渣经混菌发酵后在畜禽中的应用效果
1
2
黄曲霉素B1检测为阴性 毒性的初步判断结果——无毒
Results
木屑香菇菌渣经混菌发酵后在畜禽中的应用效果
1 2
发酵菌渣对肉牛育肥效果的影响 发酵菌渣对奶牛产奶量的影响 发酵菌渣对大耳兔增重效果的影响
每头日均产奶量 (kg/d· 头) 每头总产奶量 (kg/头)
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
Lip
2
木质素降解菌酶活性的测定
锰过氧化物酶活性的测定
MnP
Lac
反应体系为：乳酸钠缓冲溶液、 MnSO4 水溶液、粗酶液， H2O2室温启 动反应，在240 nm的波长下测定前3 min内的吸光值的增加量。酶活力单位 的定义：每克样品中每分钟吸光值增加 0.001 所需要的酶量，定义为 1 个活 力单位（U）。
Results
木屑香菇菌渣经混菌发酵后营养成分的变化
经过混菌发酵，木屑香菇菌渣中粗蛋白的含量由原来的6.56%增加到 了 17.41%；木屑香菇菌渣中粗纤维的含量由原来的20.91%降为9.24%； 木屑香菇菌渣中粗脂肪和粗灰分的含量变化不大；木屑香菇菌渣中无氮浸 出物的含量由原来的34.21%增加到了50.98%。此外，由于啤酒酵母的作 用，经发酵后的木屑香菇菌渣还散发出淡淡的香味。
然而，以上6种处理方法，在农村还未真 正使用；目前所使用的处理方法为： (1) 当作垃圾丢弃于农村的路旁、河流； (2) 作为燃料燃烧。 开发菌渣发酵饲料的意义
保护环 境、提 高资源 利用率
降低畜 牧养殖 成本
维持农业、畜牧 业和食用菌产业 的可持续发展
技术路线
食用菌菌渣的主要成分及营养价值
含水量
称取50g木屑 香菇菌渣加入 250mL的三角瓶 中，加入适量自 来水，使其含水 量达到60%左右 ，28～30℃培养 20d。
待菌落长出后，观察 菌落形态特征，挑选出能 够在平板上生长并产生变 称取1 g经富集的木屑香菇菌渣 色圈的菌株。将其接种于 倒入含玻璃珠的99mL无菌水中，28 PDA培养基上，28～30℃ ℃下震荡均匀并浸泡1h，按照常规 恒温倒置培养，每个处理 稀释分离方法，均匀涂布在培养基1 三个重复，进行多次转接 上，28～30℃恒温倒置培养，每个 ，直到获得纯种。将纯菌 处理三个重复。 株分别接种PDA培养基斜 面上，28℃培养7d后备用
2 3
发酵菌渣对肉牛育肥效果的影响
发酵菌渣对奶牛产奶量的影响 发酵菌渣对大耳兔增重效果的影响
Results
食用菌菌渣的主要成分分析表
• • • • • • • • 由此可见，食用菌菌渣中水分的含量大约在8.4724.14%之间 粗蛋白的含量大约在6.56—12.17%之间 粗纤维的含量大约在2.7—29.07%之间 粗脂肪的含量大约在0.91—3.18%之间 粗灰分的含量大约在2.77—36.01%之间 无氮浸出物的含量大约在34.21—74.01%之间 钙的含量大约在0.23 ～ 4.33%之间 磷的含量大约在0.05 ～ 0.81%之间
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
纤维素降解菌的筛选及酶活力测定
2
纤维素降解菌的筛选
初筛
将纯化后的但 菌落分别接种到纤 维素刚果红培养基 上28℃恒温倒置培 养。
复筛
采用滤纸降解率法：待菌落长出后， 挑选生长快、红色浓郁且水解圈大的菌 落分别接种于细菌滤纸培养液、放线菌 滤纸培养液、霉菌滤纸培养液中。细菌 滤纸培养液置于37±1℃ 培养 2d；放线 菌滤纸培养液和霉菌滤纸培养液中置于 28℃ 培养 7d；然后将培养物连三角瓶 一起烘干，每个处理三个重复，称取滤 纸片的重量。滤纸降解率的计算公式如 下：
Lac
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
复合菌株混合发酵木屑香菇菌渣
纤维素 降解菌 木质素 降解菌 啤酒 酵母
1
：
1
：
1
混菌发酵
木屑香菇菌渣经混菌发酵后在畜禽 中的应用效果
菌渣发酵饲料的安全性检测
1
黄曲霉素B1的检测
2
毒性的初步判断
木屑香菇菌渣经混菌发酵后在畜禽 中的应用效果
在畜禽中的应用效果
1
常压干燥法
凯氏定氮法 索氏抽提法 酸碱洗涤法 高温灼烧 无氮浸出物(%)=1- (粗蛋白%+ 粗脂 肪%+粗纤维%+粗灰分%)
主 要 成 分 的 检 测
粗脂肪
粗纤维 粗灰分 无氮浸出物
钙 磷
EDTA 络合滴定法
定磷试剂法
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
纤维素降解菌的筛选及酶活力测定
1
纤维素降解菌的富集、分离及纯化
Results
木屑香菇菌渣纤维素降解菌的筛选结果 4株菌对滤纸片的降解率如图所示：细菌和放线菌 通过富集、分离、纯化、初筛和复筛，最终筛选出4株 的滤纸降解率较低分别为6.43%和8.04%，两株真菌的滤 对纤维素分解能力较强的菌株，其中包括1株细菌、1株放 纸降解率较高，其中真菌a对滤纸的降解率为19.79%、 线菌和2株真菌，其中真菌b在初筛时形成较大的水解圈 真菌b对滤纸的降解率高达24.12%，由此可见真菌b应该 （见下图） 是一株理想的纤维素降解菌。
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
纤维素降解菌的筛选及酶活力测定
4
纤维素酶活性的测定
纤维素粗酶液 的制备
纤维素酶活 性测定
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
木质素降解真菌的筛选及酶活力测定
1
富集
木质素降解菌的筛选
分离
纯化
复筛
有学者研究发现，微生物若能够在 含愈创木酚的培养基上产生红棕色的变 色圈，则说明该微生物具有降解木质素 的能力。将上述获得的纯种接种于培养 基2上，28 ℃培养7 d，观察其菌落直 径（d1）、变色圈直径（d2），并计算 菌落直径与变色圈直径的比值（d1/ d2 ）。选出对木质素有较强降解作用的菌 种。
降解率 = YX 100% Y
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
纤维素降解菌的筛选及酶活力测定
3
木屑香菇菌渣固体发酵
称取50 g粉碎的木屑香菇菌菌渣装入250mL的三角 瓶中，121℃灭菌半小时，待其冷却至室温时，将筛 选出来的细菌、放线菌、霉菌菌液分别接入三角瓶中， 细菌组置于37±1℃ 140 r/min培养；放线菌和霉菌 组置于28 ℃ 140 r/min培养 7d；细菌组每隔4 h取 一次样，放线菌和霉菌组从第24 h开始每隔4 h取一 次样称取1 g，4 ℃保存备用。
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
Lip
MnP
2
木质素降解菌酶活性的测定
漆酶活性的测定
取0.5 mM 的ABTS溶液（2,2-联氮二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸溶液) 2 mL，再加入 2 mL粗酶液，室温下反应， 在420 nm的波长下测定前3 min内的吸 光值的增加量。酶活力单位的定义：每 克样品中每分钟吸光值增加0.001 所需 要的酶量，定义为 1 个活力单位（U）。
Results
wk.baidu.com木屑香菇菌渣纤维素降解菌酶活力的测定
细菌
Results
木屑香菇菌渣木质素降解菌的筛选及酶活力
菌落直径和变色圈直径的比值测定结果(dl/d2)
由图可以看出，4号菌株菌丝生长速度较快，那么在相同时 间内，菌丝的生长量较多，那么分解木质素的速度也应该更快
Results
木屑香菇菌渣纤维素降解菌酶活力的测定
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
木质素降解真菌的筛选及酶活力测定
2
木屑香菇菌渣固体发酵 称取50 g粉碎的木屑香菇菌菌渣装入250mL的三角 瓶中，121 ℃灭菌半小时，待其冷却至室温时，将筛 选出来的对木质素降解能力最强的仪株真菌接入三角 瓶中，保持适合的含水量，置于28 ℃ 140 r/min培 养。每隔3天取样，连续取样30 d，4 ℃保存备用。
富集 分离 纯化
待菌落长出后，根据各个菌落的形态特征点 称取1g经富集的木屑香菇菌渣倒入含玻璃珠的 接至相应的常规培养基斜面上（牛肉膏-蛋白胨 称取50g木屑香菇菌渣加入250mL的三角瓶中， 99mL无菌水中，28℃下震荡均匀并浸泡1h，按照 培养基、高氏一号培养基、PDA培养基），28～ 加入适量自来水，使其含水量达到60%左右， 30℃恒温倒置培养，每个处理三个重复，进行多 28～30℃培养20d。 常规稀释分离方法，均匀涂布在羧甲基纤维素 （CMC）培养基上，28～30℃恒温倒置培养，每 次转接，直到获得纯种。 个处理三个重复。
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
Lip
MnP
Lac
2
木质素降解菌酶活性的测定
木质素过氧化物酶活性的测定
反应体系为：酒石酸钠缓冲溶液、 藜芦醇、粗酶液， H2O2室温启动反应， 在310nm的波长下测定前3min内的吸光 值的增加量。酶活力单位的定义：每克 样品中每分钟吸光值增加0.001 所需要 的酶量，定义为 1 个活力单位（U）。
Results
欢迎各位老师和同学提出 宝贵的意见和建议
食用菌菌渣进行饲料发酵 的研究
报告人 指导老师
研究目的和意义
据中国食用菌协会不完全，像河南、山东 等7省，年产量超过万吨，占全国总产的 63%；像江西、湖北等9省年产为50~100万 吨，由此可见我国食用菌栽培面积广泛。
研究目的和意义 那么每年产生的食用菌 菌渣又将如何处理呢？
研究目的和意义
研究目的和意义
3
组别
对照组
实验组
23.11±0.97
23.01±1.02
693.30±3.71
690.30±4.27
Results
结论与展望
本研究筛选出来两株分别用于降解纤维素和木质素的菌株，然 后再将这两株菌株和已有的啤酒酵母等比例混合用于混菌发酵， 结果发现，经过混菌发酵，木屑香菇菌渣中粗蛋白的含量由原来 的6.56%增加到了 17.41%；木屑香菇菌渣中粗纤维的含量由原 来的20.91%降为9.24%。此外，由于啤酒酵母的作用，经发酵后 的木屑香菇菌渣还散发出淡淡的香味。如此以来经过混菌发酵不 但提高了木屑香菇菌渣的营养价值，还改善了其风味，提高了适 口感。 利用发酵后的菌渣进行畜禽饲喂试验以确定其安全性、毒性以及 应用效果，试验证明，发酵物中不含黄曲霉毒素B1，对小白鼠没 有毒害作用；再通过对肉牛育肥、奶牛产奶、大耳兔增重等试验 证明了，经发酵后的木屑香菇菌渣完全可以用来代替粗粮或者部 分精量，应用于生产实践。
Results
木屑香菇菌渣经混菌发酵后在畜禽中的应用效果
1
2
黄曲霉素B1检测为阴性 毒性的初步判断结果——无毒
Results
木屑香菇菌渣经混菌发酵后在畜禽中的应用效果
1 2
发酵菌渣对肉牛育肥效果的影响 发酵菌渣对奶牛产奶量的影响 发酵菌渣对大耳兔增重效果的影响
每头日均产奶量 (kg/d· 头) 每头总产奶量 (kg/头)
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
Lip
2
木质素降解菌酶活性的测定
锰过氧化物酶活性的测定
MnP
Lac
反应体系为：乳酸钠缓冲溶液、 MnSO4 水溶液、粗酶液， H2O2室温启 动反应，在240 nm的波长下测定前3 min内的吸光值的增加量。酶活力单位 的定义：每克样品中每分钟吸光值增加 0.001 所需要的酶量，定义为 1 个活 力单位（U）。
Results
木屑香菇菌渣经混菌发酵后营养成分的变化
经过混菌发酵，木屑香菇菌渣中粗蛋白的含量由原来的6.56%增加到 了 17.41%；木屑香菇菌渣中粗纤维的含量由原来的20.91%降为9.24%； 木屑香菇菌渣中粗脂肪和粗灰分的含量变化不大；木屑香菇菌渣中无氮浸 出物的含量由原来的34.21%增加到了50.98%。此外，由于啤酒酵母的作 用，经发酵后的木屑香菇菌渣还散发出淡淡的香味。
然而，以上6种处理方法，在农村还未真 正使用；目前所使用的处理方法为： (1) 当作垃圾丢弃于农村的路旁、河流； (2) 作为燃料燃烧。 开发菌渣发酵饲料的意义
保护环 境、提 高资源 利用率
降低畜 牧养殖 成本
维持农业、畜牧 业和食用菌产业 的可持续发展
技术路线
食用菌菌渣的主要成分及营养价值
含水量
称取50g木屑 香菇菌渣加入 250mL的三角瓶 中，加入适量自 来水，使其含水 量达到60%左右 ，28～30℃培养 20d。
待菌落长出后，观察 菌落形态特征，挑选出能 够在平板上生长并产生变 称取1 g经富集的木屑香菇菌渣 色圈的菌株。将其接种于 倒入含玻璃珠的99mL无菌水中，28 PDA培养基上，28～30℃ ℃下震荡均匀并浸泡1h，按照常规 恒温倒置培养，每个处理 稀释分离方法，均匀涂布在培养基1 三个重复，进行多次转接 上，28～30℃恒温倒置培养，每个 ，直到获得纯种。将纯菌 处理三个重复。 株分别接种PDA培养基斜 面上，28℃培养7d后备用
2 3
发酵菌渣对肉牛育肥效果的影响
发酵菌渣对奶牛产奶量的影响 发酵菌渣对大耳兔增重效果的影响
Results
食用菌菌渣的主要成分分析表
• • • • • • • • 由此可见，食用菌菌渣中水分的含量大约在8.4724.14%之间 粗蛋白的含量大约在6.56—12.17%之间 粗纤维的含量大约在2.7—29.07%之间 粗脂肪的含量大约在0.91—3.18%之间 粗灰分的含量大约在2.77—36.01%之间 无氮浸出物的含量大约在34.21—74.01%之间 钙的含量大约在0.23 ～ 4.33%之间 磷的含量大约在0.05 ～ 0.81%之间
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
纤维素降解菌的筛选及酶活力测定
2
纤维素降解菌的筛选
初筛
将纯化后的但 菌落分别接种到纤 维素刚果红培养基 上28℃恒温倒置培 养。
复筛
采用滤纸降解率法：待菌落长出后， 挑选生长快、红色浓郁且水解圈大的菌 落分别接种于细菌滤纸培养液、放线菌 滤纸培养液、霉菌滤纸培养液中。细菌 滤纸培养液置于37±1℃ 培养 2d；放线 菌滤纸培养液和霉菌滤纸培养液中置于 28℃ 培养 7d；然后将培养物连三角瓶 一起烘干，每个处理三个重复，称取滤 纸片的重量。滤纸降解率的计算公式如 下：
Lac
食用菌菌渣进行饲料发酵的初步研究
复合菌株混合发酵木屑香菇菌渣
纤维素 降解菌 木质素 降解菌 啤酒 酵母
1
：
1
：
1
混菌发酵
木屑香菇菌渣经混菌发酵后在畜禽 中的应用效果
菌渣发酵饲料的安全性检测
1
黄曲霉素B1的检测
2
毒性的初步判断
木屑香菇菌渣经混菌发酵后在畜禽 中的应用效果
在畜禽中的应用效果
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