微生物学实验8 比浊法测定细菌的生长曲线
微生物学智慧树知到答案章节测试2023年武汉科技大学
第一章测试1.一种新的瘟疫正在全球蔓延，它是由病毒引起的（）。
A:艾滋病B:鼠疫C:霍乱D:天花答案:A2.柯赫提出了证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则（）。
A:菌种原则B:柯赫原则C:免疫原理D:巴斯德原则答案:B3.国际通用的细菌命名法是（）。
A:古英文命名法B:德文双名法C:拉丁文双名法D:中文命名法答案:C4.微生物在整个生物界的分类地位，无论是五界系统，还是三域系统，微生物都占据了（）的“席位”。
A:少数B:不太多C:绝大多数D:非常少数答案:C5.细菌分类中，模式菌株是（）的模式。
A:属B:种C:目D:科答案:B6.在微生物分类中Amoeba属于（）。
A:原生生物界B:真菌界C:病毒界D:原核生物界答案:A7.可以产生青霉素的微生物学名是（）。
A:Aspergillus nigerB:Saccharomyces cerevisiaeC:Bacillus subtilisD:Penicillium chrysogenum答案:D8.产生伴孢晶体的微生物学名是（）。
A:Escherichia coliB:Bacillus thuringiensisC:Pseudomonas aeruginosaD:Saccharomyces cerevisiae答案:B9.我国学者汤飞凡教授的（）分离和确证的研究成果，是一项具有国际领先水平的开创性成果。
A:鼠疫杆菌B:天花病毒C:沙眼病原体D:结核杆菌答案:C10.微生物基因组序列分析表明，在某些微生物中存在一些与人类某些遗传疾病相类似的基因好，因此可以利用这些微生物作为（）来研究这些基因的功能，为认识庞大的人类基因组及其功能做出重要贡献。
A:模式生物B:供体C:突变材料D:受体答案:A11.巴斯德不仅用曲颈瓶实验证明微生物非自然发生，推翻了争论已久的“自生说”，而且做了许多其他重大贡献，例如证明乳酸发酵是由为何物引起的，首次制成狂犬疫苗，建立了巴氏消毒法等。
大肠杆菌生长曲线实验报告
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简单。
测量时要等数字变化不大时再读取，可以读三次，最后取平均值，这样能保证实验结果更加准确。
721型分光光度计要先预热，实验过程中最好使用同一台仪器，同一个比色皿，这样可以减少仪器误差，分光光度计的使用操作要规范。比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。比色皿用擦镜纸擦干净，上面不要残留有纸纤维和水珠等。
延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。
对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。
改进措施:在试验过程中应严格按照标准的操作要求，在上述步骤时更加应该规范操作。
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2.营养肉汤培养基灭菌:将步骤一包好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌30min.
微生物实验报告：测定细菌生长曲线
测定细菌生长曲线一、实验目的1．了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2．学习液体培养基的配制以及接种方法；3．反复练习无菌操作技术；4．了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5．掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；二、实验原理将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。
单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。
本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
三、实验器材大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基；取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计；四、实验步骤1．活化菌种将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块；2．接种6人大组分为3个小组，按表1接种。
细菌生长曲线的测定实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除细菌生长曲线的测定实验报告篇一：细菌生长曲线实验九测定细菌生长曲线[实验目的]1．了解细菌生长曲线特征：2．学习液体培养基的配制以及注意事项。
3．学习液体种子和固体种子的不同接种方法和注意事项。
4．利用细菌悬液浑浊度间接测定细菌生长。
[仪器和材料]1．实验材料(1)大肠杆曲，枯草杆曲培养液及大肠杆菌平板。
(2)牛肉膏蛋门胨葡萄糖培养基(150ml／250ml三角瓶x4瓶／大组)，配方：牛肉膏5g，蛋白胨10g，nacl5g，葡萄糖10g，加水至1000ml，ph7．5。
2．实验仪器取液器(5000μl，1000μl，200tμl各一支)；培养箱．摇床，722s分光光度汁；1000μl无菌吸头100个；5000μl 无菌吸头2(:细菌生长曲线的测定实验报告)个；1ml或4ml 玻璃或塑料比色皿4个，共用参比杯一个。
[实验原理]将一定量的细菌接种在液体培养基内．在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线(图91)。
单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的．测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值(测oD550或oD620或oD600或oD420，可任选一波长)与对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
实验6-2酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定
实验酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定1 目的要求（1）了解酵母菌、细菌等单细胞微生物生长曲线的特点及测定原理；（2）学习用血球计数板计数法和比浊法分别测定酵母和细菌的生长曲线。
2 基本原理生长曲线是单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。
测定时一般将一定数量的微生物纯菌种接种到一定体积的已灭菌的适宜的新鲜培养液中，在适温条件下培养，定时取样测定培养液中菌的数量，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，绘制得到生长曲线。
不同的微生物其生长曲线不同，同一微生物在不同培养条件下其生长曲线亦不同。
但单细胞微生物的生长曲线规律基本相同，生长曲线一般分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。
测定一定培养条件下的微生物的生长曲线对科研和实际生产有一定的指导意义。
测定生长曲线时需要对生长的单细胞微生物定时取样计数，对于酵母细胞和比较大的细菌细胞可采用血球计数板计数法计数，亦可采用比浊法计数，但对于小的细菌细胞一般采用比浊法。
比浊法是根据培养液中菌细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比的关系，利用光电比色计测定菌悬液的光密度值（OD值），以OD值来代表培养液中的浊度即微生物量，然后以培养时间为横坐标，以菌悬液的OD值为纵坐标绘出生长曲线。
此方法所需设备简单，操作简便、迅速。
血球计数板法是利用一块血球计数板来进行计数的。
血球计数板是一块特制的厚玻璃片，中央平台比两边平台低0.1mm，上有两个被精细刻化为400个小方格的格网，面积为1mm2，加盖盖玻片后即构成0.1 mm3体积的计数室。
血球计数板有两种规格：一种是将1 mm2面积的网格划分为25个大格，每个大格再分成16个小格，既25´16；另一种为16´25。
计数时只需无菌操作将稀释到适宜浓度的菌悬液取一滴从盖玻片一侧渗入到计数室，待静置平衡后于显微镜高倍镜下计数，用下面公式算出菌液中细胞数。
单细胞微生物细胞数/mL=5个中格内细胞数¸5´25（或16）´104´菌液稀释倍数3 实验材料3．1 菌种酵母菌和大肠杆菌。
微生物生长与控制习题及答案
第七章微生物的生长及其控制习题一、名词解释1．微生物连续培养2．抗微生物剂3．抗生素4．抗代谢物5．微生物的抗药性6．灭菌7．消毒8．生长曲线9.深层液体培养：二、填空题1．一条典型的生长曲线至少可分为、、和4个生长时期。
2．测定微生物的生长量常用的方法有、、和。
而测定微生物数量变化常用的方法有、、和；以生物量为指标来测定微生物生长的方法有、和。
3．获得细菌同步生长的方法主要有（1）和（2），其中（1）中常用的有、和。
4．控制连续培养的方法有和。
5．影响微生物生长的主要因素有、、、和等。
6．对玻璃器皿、金属用具等物品可用或进行灭菌；而对牛奶或其他液态食品一般采用灭菌，其温度为，时间为。
7．通常，细菌最适pH的范围为，酵母菌的最适pH范围为，霉菌的最适pH值范围是。
8．杀灭或抑制微生物的物理因素有、、、、和等。
9．抗生素的作用机制有、、和。
10．抗代谢药物中的磺胺类是由于与相似，从而竞争性地与二氢叶酸合成酶结合，使其不能合成。
三、选择题1．以下哪个特征表示二分裂？（）A、产生子细胞大小不规则B、隔膜形成后染后体才复制C、子细胞含有基本等量的细胞成分D、新细胞的细胞壁都是新合成的。
2．代时为0.5h的细菌由103个增加到109个时需要多长时间？（）A、40hB、20hC、10hD、3h3．如果将处于对数期的细菌移至相同组分的新鲜培养基中，该批培养物将处于哪个生长期？（）A、死亡期B、稳定期C、延迟期D、对数期4．细菌细胞进入稳定期是由于：①细胞已为快速生长作好了准备；②代谢产生的毒性物质发生了积累；③能源已耗尽；④细胞已衰老且衰老细胞停止分裂；⑤在重新开始生长前需要合成新的蛋白质（）。
A、1，4B、2，3C、2，4D、1，55．对生活的微生物进行计数的最准确的方法是（）。
A、比浊法B、显微镜直接计数C、干细胞重量测定D、平板菌落记数6．下列哪咱保存方法全降低食物的水活度？（）A、腌肉B、巴斯德消毒法C、冷藏D、酸泡菜7．连续培养时培养物的生物量是由（）来决定的。
细菌生长特点及生长曲线的测定
实验原理（分光光度计与比浊法）
朗伯-比尔定律 A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
比浊法虽只能测相对数量，但便捷。某些情况 下，我们重在数量的变化而不在数量本身
三、实验内容
1、分光光度计的使用
2、大肠杆菌生长曲线的测定与绘制
四、实验材料
1. 试剂
蛋白胨、氯化钠、酵母浸粉等。 2. 仪器 托盘天平、高压蒸汽灭菌锅、分光光度计、恒温箱、恒温振荡 器。 3. 玻璃器皿 试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、移液管等。 4. 其它物品
药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、耐高温皮筋、 报纸等。
恒温振荡器（摇床）
五、实验流程
接种→培养→取样→比浊
★实验安排（4人一组） 第一组：LB 培养基，1:100
第二组： LB 培养基，1:50
第三组： LB 培养基，1:20 第四组： LB 培养基，1:100 第五组： LB 培养基，1:10 第六组： LB 培养基，1:5
二、实验原理
理想中生长曲线
1.4 1.2 1 0.8 0.6
0.4
数 量
n y=2
0.2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 时间
理想中生长曲线
1.4 1.2 1 0.8 0.6
0.4 0.2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 时间
八、讨论
1.接种龄如何影响大肠杆菌生长？
2.培养基营养成分/浓度如何影响大肠杆菌生长？ 3.实验为何观察不到稳定期和衰退期？ （请3选1，作答在实验报告上）
★实验安排（4人一组） 第一组：LB 培养基，1:100
第二组： LB 培养基，1:20
微生物学实验思考题
微生物学实验思考题实验1 培养基的配置1、简述配置培养基的基本步骤及注意事项。
步骤：配料-溶解-调PH-加入琼脂-融化-分装-封口（棉花纱布或封口膜）-灭菌注意事项①加热溶化过程中，要不断的搅拌，防止琼脂糊底。
最后，补足所失水分。
② pH值要按照各种不同培养基的要求调整。
③分装时注意不要使培养基沾染在管口或者瓶口上，以免沾污棉塞引起杂菌污染。
④培养基的灭菌时间和温度需要按照各种培养基的规定进行，培养基灭菌后，须放在37℃温箱培养24-48h，以检查灭菌是否彻底。
2、为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口要塞上棉塞才能使用？为了防止外界微生物进入三角瓶或试管，保持三角瓶或试管内部无菌状态或微生物的纯培养状态。
同时又允许空气进入，给内部菌种提供适宜生存环境。
3、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？如果不进行灭菌培养料内的微生物就会发酵生长，从而破坏培养基内的营养成分，并且由于这些微生物的生长过程中分分泌一种或多种毒素从而抑制目的菌的生长。
检查无菌的方法：将灭菌的培养基放入37℃温室中培养24~48小时，若无杂菌生长，即可证明为无菌的。
4、配置培养基为什么要调节pH？因为不同微生物所需环境的PH不同,同时在微生物的生长过程中由于营养物质的分解、代谢产物的积累,培养基的PH也会发生改变,故培养基在配置时以及在微生物培养过程中都需要调节PH。
5、什么是选择培养基？它在微生物工作中有何重要性？选择性培养基是指根据某种微生物的特殊要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。
利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。
实验2 高压蒸汽灭菌1、如何检查培养基灭菌是否彻底？将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24h，若无杂菌生长即已彻底。
2、高压蒸汽灭菌开始之前为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待压力降到0是才能打开排气阀？灭菌主要因素是温度而非压力，排出冷空气后关上排气阀，维持所需压力。
用比浊法测定大肠杆菌浓度生长曲线
用比浊法测定大肠杆菌的生长曲线(一)实验目的了解细菌生长曲线的持点及测定原理，学会用比浊法测定细菌的生长曲线。
(二)实验原理将一定数量的细菌，接种于适宜的液体培养基中，在适温下培养，定时取样测数，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，作出的曲线称为生长曲线。
该曲线表明细菌在一定的环境条件下群体生长与繁殖的规律。
一般分为延缓期、对数期、稳定期及衰亡期四个时期，各时期的长短同菌种本身特征、培养基成分和培养条件不同而异。
比浊法是根据细菌悬液细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比关系，利用光电比色计测定细胞悬液的光密度(即OD值)，用于表示该菌在本实验条件下的相对生长量。
实验设正常生长、加酸抑制和加富培养等三种处理，以了解细菌在不同生长条件下的生长情况。
（三）实验器材(1)活材料：大肠杆菌(E.coli)。
(2)培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基14支(每支10mL)，浓缩5 倍的牛肉膏蛋白胨培养基1支。
无菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。
(3)器材：1mL无菌吸管、摇床、冰箱、光电比色计、标签等。
（四）实验方法方法(1)1)接种：取13支装有牛肉膏蛋白胨培养液的试管，贴上标签(注明菌名、培养处理、培养时间、组号)。
按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2mL的大肠杆菌培养液，接种后，轻轻摇荡，使菌体混匀。
另一支不接种的培养管注明CK(对照)。
2)培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下振荡培养。
其中9支培养管分别于培养的0、1．5、3、4、6、8、10、12和14h后取出，放冰箱中贮存，待测定。
加酸处理。
取出经4h培养的另二支培养管，按无菌操作法加入lmL无菌酸溶液，摇匀后放回摇床上，继续振荡培养，于培养8h和14h后取出放冰箱中贮存，待测定。
加富营养物处理。
余下的二支培养管于培养6h后取出，按无菌操作法加入浓缩5倍的牛肉膏蛋白胨培养液1mL，摇匀后，继续进行振荡培养，于培养8h和14h后取出，放入冰箱中贮存，待测定。
细菌生长曲线的测定的实验步骤
细菌生长曲线的测定的实验步骤一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；3. 反复练习无菌操作技术；4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。
图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。
不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。
其计算公式为：2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间；W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。
三、 实验仪器、材料和用具1.实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；2.培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组：第（1）小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm第（2）小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm第（3）小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量：选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。
细菌生长曲线测定实验方法的研究
细菌生长曲线测定实验方法的研究一、本文概述细菌生长曲线测定实验方法的研究对于深入了解细菌的生长规律、生长环境、生长条件以及生长过程中的代谢变化等方面具有重要意义。
本文旨在探讨细菌生长曲线测定的实验方法，包括实验原理、实验步骤、实验条件的选择与优化等方面，以期为提高细菌生长曲线测定的准确性和可靠性提供理论支持和实践指导。
本文将介绍细菌生长曲线测定的基本原理，包括细菌生长曲线的定义、特点以及影响因素等。
在此基础上，本文将详细阐述细菌生长曲线测定的实验步骤，包括实验材料的准备、实验条件的设置、实验过程的操作以及实验结果的记录与分析等。
本文将重点讨论实验条件的选择与优化。
实验条件是影响细菌生长曲线测定结果的关键因素，包括培养基的成分、温度、pH值、接种量等。
本文将通过对比实验和数据分析，探讨不同实验条件对细菌生长曲线的影响，从而确定最佳的实验条件组合。
本文将总结细菌生长曲线测定实验方法的优缺点，并提出改进意见和建议。
通过本文的研究，将为细菌生长曲线测定的实验方法提供更为准确、可靠的理论支持和实践指导，有助于推动细菌学研究的深入发展。
二、细菌生长曲线的理论基础细菌生长曲线测定实验方法的理论基础主要源自微生物生长动力学。
微生物生长动力学描述了微生物在特定环境下的生长规律，其中包括细菌生长曲线的形成机制。
细菌生长曲线是反映细菌群体生长状态的重要指标，通过对细菌生长曲线的分析，可以了解细菌生长的不同阶段，以及影响细菌生长的各种因素。
细菌生长曲线通常可分为四个主要阶段：延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
在延迟期，细菌适应新的生长环境，进行必要的代谢准备，此阶段细菌数量增长缓慢。
进入对数生长期后，细菌以指数方式迅速增长，这是细菌生长最为旺盛的阶段。
稳定期时，由于营养物质的消耗和代谢产物的积累，细菌增长速率逐渐减缓，细菌数量趋于稳定。
进入衰亡期，细菌由于营养物质的耗尽和代谢产物的毒性作用，生长速率急剧下降，细菌大量死亡。
细菌生长曲线的测定
细菌生长曲线的测定细菌生长曲线的测定是研究细菌生长过程中数量的变化规律的重要实验方法。
通过测定不同时间点上细菌的数量，我们可以了解细菌的繁殖速度、生命周期以及适宜生长环境等信息。
本文将介绍细菌生长曲线的测定步骤，并探讨其在科学研究和实际应用中的指导意义。
首先，测定细菌生长曲线的实验需要准备培养基、平板、试管等实验器材，以及待测的细菌样品。
将培养基倒入平板中，使其均匀地附着在平板表面上。
取一定量的细菌样品，接种在试管中的培养基中，然后将试管放入恒温培养箱中。
在不同时间点上，分别取出试管，通过将样品进行稀释后在平板上接种细菌来测定其数量。
通过计数细菌在平板上形成的菌落数，我们可以得到细菌数量随时间的变化规律。
细菌生长曲线通常可以分为四个阶段：潜伏期、指数期、平稳期和衰亡期。
在潜伏期，细菌数量较低，适生环境适宜时，细菌开始繁殖。
进入指数期后，细菌数量呈指数增长，繁殖速度较快。
在平稳期，细菌数量达到平衡，新生细菌数量与死亡细菌数量相等。
最后，在衰亡期中，细菌数量逐渐减少。
细菌生长曲线的测定对于科学研究和实际应用中有着重要意义。
在科学研究中，通过测定细菌生长曲线可以获得细菌的生命周期信息，了解其生长特性和繁殖机制。
这对于研究细菌的生物学特性、药物敏感性以及探索新的治疗方法具有指导意义。
此外，测定细菌生长曲线还可用于评估食品、水源等环境中的细菌污染情况，为公共卫生和食品安全提供重要依据。
在实际应用中，细菌生长曲线的测定可用于制定细菌培养条件和控制措施。
通过了解细菌的繁殖速度和繁殖条件，我们可以优化培养条件以提高细菌产量，或者通过调节环境因素来控制细菌的滋生。
此外，在药物研发和微生物工程中，测定细菌生长曲线可以评估抗生素对细菌的杀菌效果、药物毒性及其机制，为药物设计和微生物工程提供重要参考。
综上所述，细菌生长曲线的测定是一项生动、全面且具有指导意义的实验方法。
通过测定细菌数量随时间的变化规律，我们可以了解细菌的生长特性、繁殖机制和生命周期等信息。
大肠杆菌生长曲线的测定
大肠杆菌生长曲线的测定蔡小鹏（南京工业大学生物与制药工程学院制药1104班）【摘要】通过比浊法对大肠杆菌生长曲线进行测定。
因为细菌悬液的浓度与光密度成正比，所以可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌悬液的浓度。
将培养12h的大肠杆菌进行发酵罐培养，在不同时间段取样，用分光光度计对大肠杆菌的生长曲线进行测定，测定结果显示：大肠杆菌生长曲线基本符合迟缓期、对数生长期、稳定生长期和衰亡期4个时期。
【关键字】比浊法；发酵罐培养；生长曲线大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%。
是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。
除某些菌型能引起腹泻外，一般不致病，能合成维生素B和K，对人体有益。
大肠杆菌是肠杆菌科的一员，经常作为细菌的模式生物广泛用于科学研究。
1实验材料与方法1.1实验材料1.1.1菌种大肠杆菌1.1.2培养基1.1.2.1种子培养基蛋白胨1%，酵母粉0.5%，Nacl0.8%，硫酸卡那霉素800µL/L（灭菌后同冻存管一起加入摇瓶）在烧杯中加入1.5g/150mL蛋白胨、0.75g/150mL酵母粉、1.2g/mL Nacl,再加入适量（少于150ml）的蒸馏水，搅拌使之充分溶解，再补充水定容至150ml，保持自然PH。
平均分装3瓶后，121℃灭菌20min[1]1.1.2.2发酵培养基在烧杯中加入6g/L蛋白胨、3g/L酵母粉、1.5g/L无水硫酸镁、0.013g/L无水氯化钙、5g/L硫酸铵、1.5g/L柠檬酸三钠、3g/L磷酸二氢钾、0.075g/L七水合硫酸亚铁，再加入适量的（少于1L）蒸馏水，搅拌使之充分溶解，再补充水定容至1L。
121℃灭菌20min。
1.2器材超净工作台，高压灭菌锅，分光光度计，发酵罐及相应装置，摇床，移液枪，枪头，酒精灯，接种环，三角瓶，玻璃棒，烧杯1.3接种1.3.1种子培养基接种选取单菌落生长明显的平板，用接种环挑取适量的菌落转移到灭过菌的种子培养基三角瓶中。
最新测定细菌生长曲线
实验七 测定细菌生长曲线一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；3. 反复练习无菌操作技术；4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。
图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。
不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。
其计算公式为：2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间；W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。
三、 实验仪器、材料和用具1. 实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组：第（1）小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm第（2）小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm第（3）小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量：选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。
大肠杆菌生长曲线的测定
细菌的生长曲线。不同的细菌在相同的培养条件下其
生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘 制的生长曲线也不相同。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数法、
平板菌落计数法、称重法、比浊法等。本实验采用比
浊法测定，由于细菌悬浮液的浓度与混浊度成正比， 因此，可利用光电比色计测定菌悬液的光密度来推知 菌液的浓度，并将所得的光密度值（OD值）与其对应 的培养时间作图，即可绘出该菌再一定条件下的生录所测定的OD420值数据。 2、以OD420值为纵坐标，培养时间为横坐标，
绘出大肠杆菌生长曲线。
大肠杆菌生长曲线的测定
一、实验目的要求
（1）了解细菌生长曲线特点和繁殖规律，并学会绘 制生长曲线。
（2）学习用比浊法测定大肠杆菌的生长曲线
二、实验原理
将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜 的条件下培养细胞要经历延迟期、对数期、稳定期和
衰亡期四个阶段。以培养时间为横坐标，以细菌数目
的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该
三、实验仪器及材料
恒温培养箱、超净工作台、721分光光度计、牛肉膏 蛋白胨培养液、大肠杆菌菌种
四、实验方法步骤 1、预先将大肠杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养液中，37℃振荡
培养18h备用。
2、取7支装有灭菌牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管，编号0、
2、4、6、8、10、CK，分别接入培养18h的大肠杆菌液体培养 液300ul，37℃振荡培养。 3、分别于接种后的0、2、4、6、8、10h，取对应编号的试管， 取培养液在分光光度计上测定并记录420nm处的OD值。 若菌液太浓，可做适当稀释，使OD值在0.0-0.4之间较好。 经稀释后测得OD420值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的 OD420值。
实验九光电比浊法测定大肠埃希菌的生长曲线
实验八光电比浊法测定大肠埃希菌的生长曲线实验目的：1．了解光电比浊计数法的原理。
2．了解细菌生长曲线的特点，掌握光电比浊计数法测定大肠埃希菌生长曲线的方法。
3. 掌握菌种保藏的基本原理和几种菌种保藏的常规方法。
实验材料：1．菌种大肠埃希菌（E.coli）16~18h液体培养物。
待保藏的各种菌种。
2．培养基牛肉膏蛋白胨培养基。
3．其它721型光电比色计、1ml无菌移液管、摇床等。
实验原理：细菌的生长一般指群体的生长，常常具有一定的规律性。
描述细菌在液体培养基中的生长规律的曲线叫做生长曲线（growth curve），即将一定量的细菌接种到一定容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，以培养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标进行作图得到的曲线。
典型的生长曲线可分为延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个时期。
细菌培养物在生长过程中，由于原生质含量的增加，会引起培养物混浊度的增高。
细菌悬液的混浊度和透光度成反比、与光密度成正比，透光度或光密度可借助光电比浊计精确测出，因此可用光电比浊计测定细胞悬液的光密度（OD值），表示该菌在特定实验条件下的细菌相对数目，进而反映出其相对生长量。
菌种保藏是为了把从自然界分离到的野生型、或者经过人工选育得到的变异型纯种，采用多种方法，使菌种存活，不丢失、不污染杂菌，不发生或少发生变异，保持菌种原有的各种优良培养特征和生理活性，有利于生产、科研的正常进行，是一项重要的微生物学基础工作。
微生物菌种保藏的基本原理，是使微生物的生命活动处于半永久性的休眠状态，也就是使微生物的新陈代谢作用限制在最低的范围内。
干燥、低温和隔绝空气是保证获得这种状态的主要措施。
有针对性地创造干燥、低温和隔绝空气的外界条件，是微生物菌种保藏的基本技术。
尽管菌种保藏方法很多，但基本都是根据这三种主要措施设计的。
实验内容：(一)光电比浊法测定大肠埃希菌的生长曲线1．接种、培养取预先编号的17支分别装有10ml牛肉膏蛋白胨液体培养基的大试管中，采用无菌操作技术用移液管向每个试管准确加入大肠埃希菌悬液0.2ml，轻轻振荡混匀，另设一空白对照组（不加大肠埃希菌悬液）。
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南京大学生物技术系实验报告
题目比浊法测定细菌的生长曲线
姓名年04 月26 日
【一、实验目的】
1、了解细菌的生长特点，掌握其生长规律，形成生长曲线的基本原理。
2、掌握用比浊法测定细菌生长的方法。
【二、实验原理】
将少量细菌接种到一定体积的、适合的
新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，
定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作
纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫
生长曲线。
它反映了单细胞微生物在一定环
境条件下于液体培养时所表现出的群体生
长规律。
依据其生长速率的不同，一般可把
生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰
亡期。
这四个时期的长短因菌种的遗传性、
接种量和培养条件的不同而有所改变。
因此
通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的
生长规律，对于科研和生产都具有重要的指
导意义。
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度(OD值)成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD 值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。
【三、实验材料、主要仪器和试剂】
1、材料：大肠杆菌对数期的液体培养物
2、试剂：蒸馏水、草酸铵结晶紫染液、鲁古氏碘液、95%乙醇、0.5%蕃红
水溶液、5%孔雀绿水溶液、黑墨素液、甲醇、苏丹黑、二甲苯3、仪器：装有100ml肉汤培养基的500ml锥形瓶(×1)、酒精灯(×1)、摇瓶
机(×1)、721分光光度计(×1)
【四、操作步骤】
1、把分光光度计的波长调至420nm，开机预热10～15min。
2、取部分未接种的肉汤培养基作校正分光光度计的零点(以后每次测定都要
重新校正零点)。
3、用无菌操作技术接种10ml大肠杆菌培养液于装肉汤培养液的锥形瓶中，
立即在分光光度计上比色读数。
4、将接种的锥形瓶放在摇瓶机上，37℃振荡培养。
5、每隔20min取样，在分光光度计上进行比色，记下光密度的读数。
6、以光密度的对数值作纵坐标，以培养时间作横坐标绘出生长曲线图。
7、清理器皿、实验桌面。
【五、实验结果】
2、根据上述表格中的时间为横坐标，OD420nm为纵坐标，绘制大肠杆菌的生
长曲线图(见下页)。
3、在细菌生长的整个周期，细菌数和培养时间若以线性关系表示，是一条缓
慢上升随后又逐渐下降的曲线，由生长曲线可将细菌的群体生长划分为4个时期：延滞期、对数期、稳定期、衰亡期，具体分析详见实验讨论部分（2）。
但本次实验的结果不是很理想，再加上实验的时间有限，所以绘制的生长曲线图只有延滞期和对数期，如图中1和2所标识。
【六、实验讨论】
1、比浊法的优点是快捷简便、容易操作，缺点是难于区分死活细胞及形状与
微生物类似的杂质。
2、对细菌生长曲线的讨论：
（1）延滞期(适应期)
接种到新鲜培养液中的细菌通常有一个适应的过程，一般不立即开始繁殖，它们往往需要一些时间来进行调整以适应新环境，必须重新调整其小分子和大分子的组成，包括酶和细胞结构成分，准备细胞分裂。
这个时期内的细菌细胞通常表现为个体变长，体积增大和代谢活跃，细胞内的RNA含量增加使细胞质的嗜碱性增强，并由于代谢活性的提高而使贮藏物消失；细胞对外界理化因子(如NaCl、热、紫外线、x－射线等)的抵抗能力减弱。
在延滞期,细菌的增殖率与死亡率相等，均为零；菌数几乎不增加，曲线平稳。
（2）对数期(或称指数期)
经过对新环境的适应阶段后，细菌在这个时期内生长旺盛，代谢活力增强，分裂速度加快，菌数以几何级数增加，代时稳定，其生长曲线表现为一
条上升的直线。
由于此时养分、空间较丰裕，而排出的代谢物还不足以影响生长，故此时期细菌呈高速度地生长，增殖率远大于死亡率，活菌数与总菌数非常接近。
处于对数期的细菌细胞生长迅速，在形态、生理特性和化学组成等方面较为一致，而且菌体大小均匀，单个存在的细胞占多数，且旺盛生长的细胞对环境理化等因子的作用敏感。
（3）稳定期
在对数末期，由于营养物质(包括限制性营养物质)的逐渐消耗,有生理毒性的代谢产物在培养基中的积累及培养环境条件中pH和氧化还原电位Eh等对细菌生长不利的变化，使细菌的生长速度降低，增殖率下降而死亡率上升，当两者趋于平衡时，就转入稳定期。
此时，活菌数基本保持稳定，生长曲线进入平坦阶段。
细菌群体的活菌数在这个时期内最高,并可相对持续一定时间。
此时的细胞个体较小并开始在细胞内累积贮藏物和特殊的次生代谢产物。
（4）衰亡期(衰老期)
细菌在经过稳定期后，由于营养和环境条件进一步恶化，死亡率迅速增加，以致明显超过增殖率，这时尽管群体的总菌数仍然较高，但活菌数急剧下降，其对数与时间呈反比，表现为按几何级数下降，生长曲线直线下垂。
这个时期的细胞常表现为多形态，产生许多大小或形态上变异的畸形或退化型，其革兰氏染色亦不稳定。