辅助生殖.ppt2

常用的精子优选技术



上游法 Percoll密度梯度离心法 玻璃纤维过滤法 血清白蛋白过滤法
二.X和Y精子的分离

概述：目前已知约400多种遗传病是伴随 X染色体的遗传病，通过X和Y精子分离 技术及IVF—ET，可获得健康后代。
例如：X连锁显性遗传病

常见病种：抗维生素D佝偻病、遗传性肾炎、先天性眼 球震颤、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症等。 指导原则： （1）病残儿一、二级亲属无病时，可能是基因突变所 致，再发风险低，可考虑再生育。 （2）病残儿母亲患病时，每胎子女各有50%机会患病， 再发风险高，不宜生育。 （3）病残儿的父亲患病时，每胎女性均患病，男性则 全部正常。经产前诊断可考虑生育男性胎 儿。 ——《病残儿鉴定指南》
人类胚胎的冷冻

人类胚胎的冷冻（human embryo cryopreservation）指采用特殊的技术将受 精卵（zygote）或囊胚（blastocyst）冷冻 保存，需要时解冻后可进行胚胎植入。
应用指征

1.在IVF治疗中除去用于新鲜胚胎植入外， 仍有质量良好的剩余胚胎的患者。 2.由于某些原因无法接受新鲜胚胎植入者。 3.由于某些非医学原因不能及时接受新鲜 胚胎植入者。

设备和器才 人工授精技术： （1）经阴道授精（intravaginal insemination ，IVI） （2）经宫颈授精（intracervical insemination，ICI） （3）经子宫授精（intrauterine insemination，IUI） （4）经输卵管授精（intratubal insemination，ITI） （5）经腹腔授精（intraperitoneal insemination，IPI） （6）直接卵泡内授精（direct intrafollicular insemination，DIFI）
改良上游法

原理：Y精子在培养液（Ham,s F-10）中 比X精子泳动快，密度低。
白蛋白柱分离法

原理:X和Y精子在白蛋白中泳动速度不 等，Y精子速度快，穿透粘稠的白蛋白溶 液能力强，在较高浓度的白蛋白溶液层 中可获得更多的Y精子。
电泳法

原理：精子膜表面因含大量的唾液酸而 使精子带负电荷，X和Y精子表面负电荷 量不等，在电场中可将其分离。

X和Y精子的差异：精子膜表面电荷，核 及形态学差异，PH敏感性， Y精子的乳 酸脱氢酶，H-Y抗原，精子密度，泳动速 度，运动性，DNA含量差异，奎丫因荧 光染色，流式细胞仪，PCR，荧光原位 杂交。
常用方法



上游法 白蛋白柱分离法 电泳法 Sephadex G50法 密度梯度离心法 流式细胞仪分选法
贮存方法


1.安培法 2.细管法 3.颗粒法
冷冻保护剂


渗透性保护剂（permeation agents ）能穿入细胞，减低 细胞内的电解质，减轻冷冻、复温过程中细胞渗透性 肿胀，减少冰晶形成。 如：甘油、二甲亚砜、丙二醇、甲醇、葡萄糖。 非渗透性保护剂（non-permeating agents）不能进入细 胞内，提高细胞外渗透压，冷冻过程中使细胞内的水 分外渗，使细胞脱水皱缩减少冰晶形成，避免细胞破 坏。 如：蔗糖、卵黄等。
男性科医师在辅助生殖技术 （ART）中的作用



1.不育症是一个症状预示。 2.男性不育症的可复性因素。 3.ART不一定都有效。 4.男科医师应掌握的ART技术。
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AIH适应证： 男性 （1）正常性交时精子不能进入女性生殖道的病症 （2）精液质量异常 （3）某些免疫性不育 （4）生殖保险 女性 （1）生殖道解剖结构异常 （2）生殖道生理功能异常 （3）免疫因素



AID适应证 （1）无精子症 （2）严重的少、弱精子症 （3）男方患有某些不便生育的遗传性疾 病 （4）免疫因素
辅助生殖技术 无精子症 基础体温 生物冷冻仪 囊胚 获能 计算机辅助精子分析 冷冻保护剂 玻璃纤维过滤 人类胚胎冷冻



Human sperm bank 人类精子库 human spermatozoa selection technology 人类精子优选技术 intracytoplasmic sperm injection，ICSI 精子卵浆内注射 in vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET 体外受精胚胎移植 male infertility syndrome 男性不育综合征 oocyte-corona-cumulus complexes，OCCCs 卵-冠-丘复合体 partial zona dissection，PZD 部分透明带切割法 post-coital test，PCT 性交后试验 swim-up 上游法 zona drilling 透明带钻孔法 zygote 受精卵 zygotene 偶线期
人工授精时间选择

时间：女方围产卵期（排卵前日，当日，后日） 常用检测指标： 1.基础体温（basal body temperature BBT）； 2.宫颈黏液检测，（1）宫颈黏液拉丝实验。（2）宫颈 黏液结晶实验。 3.激素测定，（1）雌激素E2（2）孕酮（3）FSH、LH 4.超声检查
人工授精的实施
Sephadex G50法

原理：X精子头部长，宽径大于Y精子； 采用Sephadex G50滤过，分子筛作用可 将其分离。
密度梯度离心法

原理：X、Y精子在分离介质中的沉降速 度不等。
流式细胞仪分选法

原理：单个细胞悬液，经特异的活体细 胞染色后放入样品管中，流经流动室时， 仪器可对符合分选特性的细胞充电，再 经高压静电场时发生偏转，进入指定的 收集器。
影响精子贮存的因素



1.细胞内冰晶形成对精子的机械损伤 2.细胞外冰晶形成，电解质浓度增高而损伤细 胞—溶液效应。 3.冷冻损伤的脂质化物致广泛生物膜受损 4.精子膜受损，细胞内酶外漏 5.细胞膜上Na+、K+-ATP酶功能丧失 6.线粒体结构功能遭到破坏，ATP生成障碍 7.ATP从精子内漏入到精浆中
辅助生殖技术
Assisted reproductive technology

成都市计划生育技术指所男性科 高坪
常用专业术语



Assisted reproductive technology ，ART azoospermia basal body temperature ，BBT biological freezer blastocyst capacitation computer-assisted sperm analysis，CASA cryoprotectant glass wool filtration human embryo cryopreservation
方法

成熟卵细胞的收集： 1.刺激卵泡生长的方法， 2.卵泡收集的时间， 3.获取卵泡的方法， 4.卵泡的识别与培养。

体外授精： 1.精子体外获能与处理， 2.影响授精率的因素， 3.体外授精程序， 4.分离颗粒细胞及换液， 5.精子穿卵
胚胎体外培养
1.胚胎的裂变 2.胚胎分级 受精卵 两细胞 四细胞 6~8细胞 桑葚胚 囊胚 致密囊胚 破壳
适应证