2.小吞噬实分析课件
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2020/5/11
实验方法
(1)仔细消毒后，每个班取4～ 5ml静脉血于肝素抗 凝管内（轻轻摇匀）。
(2) 取2ml抗凝血于EP管内，再加入1ml备好的白色 葡萄球菌菌液，充分混匀后，置37℃水浴20min，中 途混匀1次。
(3)取出EP管，用吸管吹打混匀后，取半滴“全血-白 色葡萄球菌混合液”置于洁净载玻片上，用另一载玻 片“推”成薄血涂片。
2020/5/11
计算吞噬百分率和吞噬指数
1. 吞噬百分率＝
100个细胞中吞噬有细菌的细胞数 × 100%
100 人吞噬百分率正常参考值：62%~76%
2. 吞噬指数＝
100个中性粒细胞吞噬的细菌总数 100
人吞噬指数正常参考值：1.32~1.72
2020/5/11
实 验 结 果
2020/5/11
实验二 中性粒细胞吞噬功能测定 ——细菌计数法
2020/5/11
实验内容
1. 细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 (小组做)
2. 录相《免疫反击战》
2020/5/11
目的与要求
1.了解中性粒细胞生物学特性及其意义。 2.熟悉“细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功 能”试验的原理、方法及用途。
2020/5/11
(4)取“细菌－全血”涂片时，要吹匀后再取；血涂片 要求推出尾部，不宜太厚或过薄，否则不宜观察。
2020/5/11
Байду номын сангаас
• Neutrophil & lymphocyte
2020/5/11
2020/5/11
2020/5/11
注意事项
(1)人类白细胞的吞噬活性在37℃时最好，温度过高 过低均会使其吞噬能力减低。
(2)个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力 亦不同。
(3)掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。
中性粒细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞噬5min 时吞噬率达45%，10min时接近80%，20min 即达平台。
(4)待血涂片自然凉干后，用瑞 氏染液染色。
2020/5/11
瑞氏染色
瑞氏染液数滴覆盖血膜——染1min——再加等量的 PH6.8 PBS与染液混合，染5~15min （注意勿使染液 干涸）——用蒸馏水冲洗（平持玻片，在一端加水， 使染料“漂走”）——空气中自然干燥（也可用洗 耳球吹干）
结果观察
先寻找中性粒细胞——观察胞质中有无吞噬的细菌。 如染色正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色， 而中性粒细胞胞浆染成淡红色。
monocyte
• Neutrophil
2020/5/11
吞 • 大吞噬细胞（单核巨噬细胞） 噬 细 胞 • 小吞噬细胞（中性粒细胞）
分 类
2020/5/11
实验原理
• 中性粒细胞来源于骨髓造血干细胞；占白细胞总 数的60% ～ 70%； • 胞核呈多叶状；胞质内分布着不能被苏木紫、伊 红等染色的颗粒；
2020/5/11
实验材料
(1)显微镜、香柏油、小试管、EP管、载玻片、酒精 棉球、吸管、水浴箱等。 (2)肝素抗凝试管、瑞氏染液、双蒸水。 (3)菌液制备：白色葡萄球菌18～24小时内汤培养物 ，经Mc Farland比浊法调整浓度至6～9×109/mL， 加热100℃ 15分钟杀死细菌，置4℃保存备用。
内含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、组织蛋 白酶、乳铁蛋白、碱性磷酸酶等。
• 血液中的中性粒细胞(即小吞噬细胞)具有吞噬病原 微生物等异物微粒的能力。
2020/5/11
2020/5/11
吞噬过程
2020/5/11
将新鲜血液和细菌混合，经合适时间后涂片染 色，在油镜下即能观察到中性粒细胞吞噬细菌 的情况，计算吞噬率（%）和吞噬指数，辅助判 断机体非特异性免疫力。
实验方法
(1)仔细消毒后，每个班取4～ 5ml静脉血于肝素抗 凝管内（轻轻摇匀）。
(2) 取2ml抗凝血于EP管内，再加入1ml备好的白色 葡萄球菌菌液，充分混匀后，置37℃水浴20min，中 途混匀1次。
(3)取出EP管，用吸管吹打混匀后，取半滴“全血-白 色葡萄球菌混合液”置于洁净载玻片上，用另一载玻 片“推”成薄血涂片。
2020/5/11
计算吞噬百分率和吞噬指数
1. 吞噬百分率＝
100个细胞中吞噬有细菌的细胞数 × 100%
100 人吞噬百分率正常参考值：62%~76%
2. 吞噬指数＝
100个中性粒细胞吞噬的细菌总数 100
人吞噬指数正常参考值：1.32~1.72
2020/5/11
实 验 结 果
2020/5/11
实验二 中性粒细胞吞噬功能测定 ——细菌计数法
2020/5/11
实验内容
1. 细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 (小组做)
2. 录相《免疫反击战》
2020/5/11
目的与要求
1.了解中性粒细胞生物学特性及其意义。 2.熟悉“细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功 能”试验的原理、方法及用途。
2020/5/11
(4)取“细菌－全血”涂片时，要吹匀后再取；血涂片 要求推出尾部，不宜太厚或过薄，否则不宜观察。
2020/5/11
Байду номын сангаас
• Neutrophil & lymphocyte
2020/5/11
2020/5/11
2020/5/11
注意事项
(1)人类白细胞的吞噬活性在37℃时最好，温度过高 过低均会使其吞噬能力减低。
(2)个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力 亦不同。
(3)掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。
中性粒细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞噬5min 时吞噬率达45%，10min时接近80%，20min 即达平台。
(4)待血涂片自然凉干后，用瑞 氏染液染色。
2020/5/11
瑞氏染色
瑞氏染液数滴覆盖血膜——染1min——再加等量的 PH6.8 PBS与染液混合，染5~15min （注意勿使染液 干涸）——用蒸馏水冲洗（平持玻片，在一端加水， 使染料“漂走”）——空气中自然干燥（也可用洗 耳球吹干）
结果观察
先寻找中性粒细胞——观察胞质中有无吞噬的细菌。 如染色正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色， 而中性粒细胞胞浆染成淡红色。
monocyte
• Neutrophil
2020/5/11
吞 • 大吞噬细胞（单核巨噬细胞） 噬 细 胞 • 小吞噬细胞（中性粒细胞）
分 类
2020/5/11
实验原理
• 中性粒细胞来源于骨髓造血干细胞；占白细胞总 数的60% ～ 70%； • 胞核呈多叶状；胞质内分布着不能被苏木紫、伊 红等染色的颗粒；
2020/5/11
实验材料
(1)显微镜、香柏油、小试管、EP管、载玻片、酒精 棉球、吸管、水浴箱等。 (2)肝素抗凝试管、瑞氏染液、双蒸水。 (3)菌液制备：白色葡萄球菌18～24小时内汤培养物 ，经Mc Farland比浊法调整浓度至6～9×109/mL， 加热100℃ 15分钟杀死细菌，置4℃保存备用。
内含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、组织蛋 白酶、乳铁蛋白、碱性磷酸酶等。
• 血液中的中性粒细胞(即小吞噬细胞)具有吞噬病原 微生物等异物微粒的能力。
2020/5/11
2020/5/11
吞噬过程
2020/5/11
将新鲜血液和细菌混合，经合适时间后涂片染 色，在油镜下即能观察到中性粒细胞吞噬细菌 的情况，计算吞噬率（%）和吞噬指数，辅助判 断机体非特异性免疫力。