唾液淀粉酶实验

唾液淀粉酶最适pH值的测定实验

实验目的

1．掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。

2．掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。

3．熟悉影响酶促反应速度的因素。

实验原理

1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。

2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。

实验器材

仪器材料：方盘，试管架，中试管，毛刷，吸耳球，玻璃铅笔，小烧杯，白瓷板，坐标纸，漱口杯。0.1ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml刻度吸管，胶头滴管，37 C恒温水浴箱，分光光度计，电磁炉。

试剂药品：0.02％淀粉溶液. 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液碘液；称取碘1g,碘酸钾2g，溶于300ml蒸馏水中。

实验步骤：

1、缓冲液的配置

pH 0.2mol/L 0.2mol/L

NaH2PO4(ml) Na2HPO4(ml)

5.7 93.5

6.5

5.8 92.0 8.0

5.9 90.0 10.0

6.0 8

7.7 12.3

6.1 85.0 15.0

6.2 81.5 18.5

6.3 7

7.5 22.5

6.4 73.5 26.5

6.5 68.5 31.5

6.6 62.5 3

7.5

6.7 56.5 43.5

6.8 51.0 49.0

6.9 45.0 55.0

7.0 39.0 61.0

7.1 33.0 67.0

7.2 28.0 72.0

7.3 23.0 67.0

7.4 19.0 81.0

7.5 16.0 84.0

7.6 13.0 87.0

7.7 10.5 89.5

7.8 8.5 91.5

7.9 7.0 93.0

8.0 5.3 94.7

2、唾液的取法：

（1）先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉，再将一块消毒脱脂棉球用镊子放在备取者的舌下，过大约半分钟至一分钟，备取者感觉棉球湿透，用镊子将棉球取出，置于烧杯中，倒入蒸馏水，用玻璃棒充分搅拌，将棉球取出，即制成唾液实验备

用液。

（2）让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。

（3）准备一个干净的杯子，用手扯住嘴角，等待大约2分钟后，就可以获得唾液。

实验方案

（1）唾液的稀释：取10支试管，分别编上号00～09

编号0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 唾液0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 蒸馏水 4.9 9.9 14.9 19.9 24.9 29.9 34.9 39.9 44.9 49.9 (2)最适唾液稀释倍数的选取

取上述稀释的唾液各1ml，分别加入另取的10支试管中，分别编上A~J号的试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴几分钟后取出，滴加1～2滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变为淡黄色最快的一支，记录其稀释倍数，作为下面实验的最适唾液稀释倍数。（3）最适PH的测定

编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9

PH

颜色

A660

A660

PH

实验结果

最适PH=

实验分析

思考题

1）本实验为什么要寻找较合适的唾液稀释倍数？

答：为了跟好的找到唾液淀粉酶的合适浓度，是的最后测定的最适PH精确。

2）在研究PH对酶促反应速度的影响是，前提条件是什么？答：温度，底物浓度，酶浓度保持恒定。

3）所测吸光度中，吸光度值最小溶液所对应的PH一定是唾液淀粉酶的最适PH吗？

答：不一定，最适PH值应当是根据A-PH的图来确定，图的最低点为最适PH，不一定就是所测最小的吸光度值。

4）总结本实验的注意事项

①使用分光光度计时要调零

②反应时必须是在37℃的水浴中。

参考文献

常东胜，潘洪明医学化学实验科学出版社