血清中可能出现的沉淀物是什么
细胞培养的四个步骤
细胞培养的四个步骤细胞是组成生物体的基本单位，生物体由各种类型的细胞组成。
在显微镜下不同的细胞有不同的形态。
利用免疫荧光、流式荧光标记、免疫组化都能进行细胞观察。
培养细胞的最终目的：拿到细胞进行后续的下游实验WB、ELISA等蛋白检测DNA、RNA等分子检测凋亡、增殖、周期等功能检测原代细胞培养、冻存等细胞实验细胞培养几乎是所有细胞生物学实验的基础，细胞养得好，实验没烦恼！原代细胞培养，细胞的传代，冻存、复苏，细胞污染的防与治，我们的经验都在这篇文章里！一、细胞培养相关设备和试剂1、细胞培养的相关设备生物安全柜的安全保护等级>超净工作台，当涉及到病毒，需要使用生物安全柜。
生物安全柜：对柜内外的安全保护超净工作台：对工作台内部的安全保护超净工作台/生物安全柜的工作流程：2、细胞培养用相关试剂①培养基作用：人工模拟细胞体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质，提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。
不完全培养基：直接购买或者配置的培养基。
完全培养基：不完全培养基+血清（提供营养物质）+双抗（保证无菌环境）+其他。
由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞培养基也不同，在动物细胞培养中最常用基础细胞培养基有6～7种，如BME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640、199等。
②血清血清的功能：生长、分化必须的物质：生长因子、激素、基础培养基中没有的微量物质、小分子营养物转运维生素、脂类、金属离子和微量元素等；促进细胞贴壁、铺展；毒素灭活，蛋白质与有毒金属和热源物质结合；提供蛋白酶抑制剂；起酸碱度缓冲液作用。
血清的分类最常用的是胎牛血清。
胎牛还未接触外界，免疫系统激活最少，血清中所含的抗体、补体等对外来物质排斥最小，对细胞有害的成分最少。
③胰酶常用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA胰酶：胰脏中分离，选择性的水解蛋白质中有赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，最佳作用温度37℃，PH=8.0，常用浓度0.1%—0.25%，一般用不含Ca2+、Mg2+的平衡盐缓冲液配制（PBS或Hanks），可用含有血清培养基终止胰酶对细胞的作用（观察细胞的剥离状态确定终止时间）。
13(1).细胞培养中出现小颗粒的原因1
细胞培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，已成为很多细胞培养初学者的困扰，这种情况是怎么引起的呢？该如何避免呢？产生原因：1.细胞状态：细胞自身具有分泌功能，或细胞营养不良，生长状态欠佳，细胞老化都有可能在培养过程中出现小黑点。
2.血清沉淀：通常经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多。
有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”，常会误认为血清遭受污染，而将血清放在37℃中欲培养此“微生物“，但在37℃环境下，又会使此沈淀物增多，更会误认为微生物之增殖。
一般而言，此小黑点应不会影响细胞的生长，但若经过平行试验怀疑此血清的品质，应立即停用，更换另一批号的血清。
3：黑胶虫污染黑胶虫概况：在细胞培养的时候,有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动,小黑点有时呈点状,有时呈小的片状,运动形式为在原地振动（类似布朗运动）,这种小黑点既不是细菌、霉菌,也不是支原体（我们曾经请周守长用血平板培养过,没有菌落出现）,目前业内人士称其为“黑胶虫”.黑胶虫到底是否为生物?这个一直是业内人士的疑惑.黑胶虫一般是存在血清里的,而血清通常是经过0.1μm 滤膜过滤的,所以血清里不可能存在细菌、霉菌及支原体等微生物.如果说黑胶虫不是生物,它会不断增多,达到一定数量时会与细胞竞争性生长,与细胞竞争培养基中的营养,从而使得细胞营养不足而死亡.不管对于黑胶虫的争论如何,但有几个是目前大家公认的：①与细胞竞争性生长,对细胞生长有不利影响.②“黑胶虫”会增殖,增殖多时,视野下一大片都为“黑胶虫”.③“黑胶虫”与血清有关,与血清质量有一定关系.4：支原体污染：如果细胞表面出现许多小黑点，细胞生长缓慢，培养液很黄，那么支原体污染的可能性就很大。
5：细胞受各种霉菌、细菌等生物污染。
此种原因大多为环境原因造成。
解决办法：1.如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；如果确定是支原体解决办法很多：a 抗生素(antibiotic)除菌法：用抗生素抑制支原体。
沉淀反应,补体C3.C4测定。
临床免疫学实验指导
海南医学院 检验学院
吴荣泉
实验 沉淀反应 （Precipitation） 【定义】 是指可溶性抗原与相应抗体特异性结合,在电解质
溶液中，经一定时间出现肉眼可见沉淀现象称为沉淀反应。
可溶性抗原：血清、细胞裂解液，组织浸出液，生物大分子 如：蛋白质、多糖、补体、脂类等 根据反应介质不同分 液相沉淀反应：如 浊度，絮状，环状 凝胶内沉淀反应：免疫扩散，免疫电泳
参考值
C4：0.20-0.40g/L
补体C3测定加样方法
取试管3支，标记 每人一只测定管 空白管 全班一管 标准管 全班一管 测定管 每人一管
蒸馏水 C3标准血清（1:11稀释） 待检血清（1:11稀释）
C3. R1 (缓冲液，PEG，防腐剂
表面活性剂等)混匀37℃5min
32μl -
32μl -
样品管吸光度
标准管吸光度
× C3 标准浓度(g/L)
补体单体成份C4 (g/L)= 样品管吸光度 标准管吸光度
×C4 标准浓度(g/L)
将各管混匀放37℃恒温箱孵育 5min 后取出， 在分光光度计上，调波长为340nm，以空白管调零 分别测出标准管、样品管的吸光度A（终浊度） 带入计算公式
【报告结果】
32μl
2.0ml 2.0ml 37℃5 min 37℃5 min
680μl 37℃5min 680μl 37℃5min
2.0ml 37℃5 min
680μl 37℃5min
C3.R2（羊抗人C3 ,稳定剂） 混匀 37℃ 5min
混匀，空白调零点，340nm波长比色，测出标准管，测定管 吸光度OD值，代入公式，计算出C3含量 （用小比色杯） （空白管，C3标准管。C4标准管，全班只作1-2管，按仪器）
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细胞培养基本介绍• 血清 Nhomakorabea 培养基 • 其他产品
体外培养细胞的分型
• 贴壁细胞：细胞贴附在 支持物表面生长，只 有依赖贴附才能生长 的细胞叫做贴附型细 胞 • 悬浮细胞：培养时不 贴附于底物而成悬浮 状态生长，主要来自 血，脾或骨髓
• 如想去除这些絮状沉淀物，可将血清分装 到无菌离心管中，以400g离心，上清液即 可直接加入到培养液内 • 不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物， 因为这可能阻塞滤膜
血清选择？
a. 尽量使用同批次的血清；如果需要更 换血清批次，则需事先验证3代以上，因此 建议客户单次购买大量血清； b.原代细胞或ES细胞，提供澳洲或新西 兰的FBS不同批次进行试用，选择使用效果 好的批次；
体外培养细胞
• 原代培养：直接从体内取出的细胞进行第 一次培养，其优点是组织细胞刚脱离机体， 生物性状尚未发生较大变化，在一定程度 上能够反应体内的状态；缺点是细胞生长 较为缓慢，生长条件要求高 • 传代培养：将细胞从一个培养瓶按照一定 比例转移到另外的培养瓶即为传代培养， 其目的是将高密度的细胞进行稀释扩大培 养，以避免营养枯竭，影响细胞生长
如何避免血清出现严重沉淀？
血清有轻微絮状物，但产品比较澄清或略显浑浊 是正常现象，但下属操作会致使血清出现严重沉 淀，应尽量避免 a.储存不当：反复冻融；长期储存在2-8℃；在 室温下放置时间过长 b.不正确地解冻操作，融化时没有混匀。 c.热灭活血清 d.37℃培养血清 e.γ射线辐照
血清常见问题
常见问题处理
1. 如果细胞培养基偶然被冻，应该融化培养基并观察是否有沉淀产生。 如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃 这些培养基。 2. 当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使 用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条 件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。 3.大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白 的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。 4. 在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶 在4℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不 稳定。 5. 产品说明在超过指定的贮存期的一段时间内，产品仍然在可接受的范 围内，但是由于在超过指定的效期后，产品的性能和稳定性没有检测， 我们不推荐使用过了效期的产品。
简述血浆和血清的区别是什么
简述血浆和血清的区别是什么血浆是离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，那么你知道血浆和血清两者间有什么区别吗？下面由店铺为你介绍血浆和血清的区别，希望对大家有所帮助。
血浆与血清的区别1、成分血浆：正常人从血管抽出血液加抗凝剂，经离心沉淀，下面部分为血细胞，上面淡黄色部分就叫血浆，里面有第5、第8凝血因子及纤维蛋白原。
血浆的化学成分中，水分占90-92%，其他10%以溶质血浆蛋白为主，并含有电解质、营养素、酶类、激素类、胆固醇和其他重要组成部分。
血浆蛋白是多种蛋白质的总称，用盐析法可将其分为白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原三类。
血清：正常人从血管抽出的血液不加抗凝剂，自然凝固，经离心沉淀，下面红色部分为血细胞部分，上面淡黄色部分就叫血清，里面没有第5、第8凝血因子及纤维蛋白原。
2、作用血浆的主要作用是供给血细胞，运输维持人体生命活动所需的物质和体内产生的废物等。
血浆相当于结缔组织的细胞间质。
血浆是血液的重要组成部分。
因为纤维蛋白原能转换成纤维蛋白，具有凝血作用，所以血浆一般是大面积烧伤的病人使用。
血清的作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。
血清还可以用来检验血型。
3、凝血反应在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。
这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。
这些也都是与血浆区别之处。
但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。
为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。
血浆和血清的鉴别方法血清的鉴别方法血液凝固析出的淡黄色透明液体。
如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。
凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。
血清使用及保存注意事项
血清使用及保存注意事项血清是细胞培养中最重要的元素之一。
因此，我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题，供大家参考：1. 保存血清最好的方法?我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。
然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。
若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。
2. 如何解冻血清才不会使产品质量受损?我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。
但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。
3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。
但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。
若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。
我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。
4. 为什么要热灭活血清?加热可以灭活补体系统。
激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。
在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
5. 有必要做热灭活吗?实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。
经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。
而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热处理这一步。
如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保血清的质量!6. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?胎牛血清没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。
13(1).细胞培养中出现小颗粒的原因1
细胞培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，已成为很多细胞培养初学者的困扰，这种情况是怎么引起的呢？该如何避免呢？产生原因：1.细胞状态：细胞自身具有分泌功能，或细胞营养不良，生长状态欠佳，细胞老化都有可能在培养过程中出现小黑点。
2.血清沉淀：通常经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多。
有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”，常会误认为血清遭受污染，而将血清放在37℃中欲培养此“微生物“，但在37℃环境下，又会使此沈淀物增多，更会误认为微生物之增殖。
一般而言，此小黑点应不会影响细胞的生长，但若经过平行试验怀疑此血清的品质，应立即停用，更换另一批号的血清。
3：黑胶虫污染黑胶虫概况：在细胞培养的时候,有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动,小黑点有时呈点状,有时呈小的片状,运动形式为在原地振动（类似布朗运动）,这种小黑点既不是细菌、霉菌,也不是支原体（我们曾经请周守长用血平板培养过,没有菌落出现）,目前业内人士称其为“黑胶虫”.黑胶虫到底是否为生物?这个一直是业内人士的疑惑.黑胶虫一般是存在血清里的,而血清通常是经过0.1μm 滤膜过滤的,所以血清里不可能存在细菌、霉菌及支原体等微生物.如果说黑胶虫不是生物,它会不断增多,达到一定数量时会与细胞竞争性生长,与细胞竞争培养基中的营养,从而使得细胞营养不足而死亡.不管对于黑胶虫的争论如何,但有几个是目前大家公认的：①与细胞竞争性生长,对细胞生长有不利影响.②“黑胶虫”会增殖,增殖多时,视野下一大片都为“黑胶虫”.③“黑胶虫”与血清有关,与血清质量有一定关系.4：支原体污染：如果细胞表面出现许多小黑点，细胞生长缓慢，培养液很黄，那么支原体污染的可能性就很大。
5：细胞受各种霉菌、细菌等生物污染。
此种原因大多为环境原因造成。
解决办法：1.如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；如果确定是支原体解决办法很多：a 抗生素(antibiotic)除菌法：用抗生素抑制支原体。
医学免疫学沉淀反应
医学免疫学沉淀反应在医学免疫学的广阔领域中，沉淀反应是一项重要且应用广泛的实验技术。
它不仅在基础研究中发挥着关键作用，还在临床诊断和疾病监测等方面具有不可替代的价值。
沉淀反应的基本原理其实并不复杂。
简单来说，就是当可溶性抗原与相应抗体在特定条件下相遇时，二者会发生特异性结合，形成肉眼可见的沉淀物。
这个过程就像是钥匙和锁的精准匹配，只有特定的抗原和抗体才能相互结合，从而产生沉淀。
为了更直观地理解沉淀反应，我们可以想象这样一个场景：抗原就像是一个个带有特定标记的小球，而抗体则是专门为这些小球设计的“抓手”。
当“小球”和“抓手”在合适的环境中相遇，“抓手”就会紧紧抓住“小球”，并且多个“小球”与“抓手”的结合体逐渐聚集，最终形成能够被我们观察到的沉淀。
沉淀反应的类型多种多样，其中最常见的包括环状沉淀反应、絮状沉淀反应以及免疫比浊法等。
环状沉淀反应是一种比较经典的方法。
在这种反应中，将抗原溶液小心地叠加在抗体溶液之上，由于二者的比重不同，在界面处就会形成一个清晰的白色沉淀环。
这种方法虽然操作简单，但相对来说灵敏度较低，只能用于检测抗原抗体反应的大致情况。
絮状沉淀反应则是将抗原和抗体溶液在试管中混合，通过观察溶液中出现的絮状沉淀来判断反应的结果。
与环状沉淀反应相比，絮状沉淀反应的灵敏度有所提高，但仍然存在一定的局限性。
而免疫比浊法则是一种更为精确和定量的沉淀反应方法。
它利用抗原抗体结合后形成的复合物会导致溶液浊度发生变化的原理，通过测量浊度的变化来确定抗原或抗体的含量。
这种方法在临床检验中应用非常广泛，例如用于检测血清中的免疫球蛋白、补体等成分的含量。
在实际应用中，沉淀反应具有诸多重要意义。
在临床诊断方面，它可以帮助医生检测患者体内是否存在特定的病原体抗原或抗体，从而为疾病的诊断提供有力依据。
比如，通过检测乙肝表面抗原（HBsAg），可以判断患者是否感染了乙型肝炎病毒；检测类风湿因子，可以辅助诊断类风湿性关节炎等自身免疫性疾病。
血清使用的注意事项
一、关于血清使用的几点建议：1、血清必须贮存-20℃，如存放于4℃，请勿超过两周，对于某些单位一次无法用完一瓶，可在无菌条件下将其40-45ml分装于无菌50ml离心管中(或血清瓶中)，由于血清解冻时体积会增加10％，必须预留此膨胀体积的空间，否则易发生污染或容器冻裂的情形。
2、一般公司所提供的血清一般为100ml和500ml装量，因此建议在使用中宜采取逐步解冻的方法解冻血清：-20℃→4℃冰箱或冷库溶解24小时→室温下全溶后再分装，一般以50 ml无菌离心管中分装40-45ml。
使用过程中要特别注意，必须规则地将血清摇晃均匀，小心勿造成气泡，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。
勿直接由-20℃放置至37℃环境下解冻，因为温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而产生沉淀。
3、血清的灭活(heat-inactivation)一般是指56℃，30分钟水浴加热已完全解冻的血清，加热过程中必须规则地摇晃均匀。
此处理的目的是使血清中的补体成分(complement)去活化。
但是，经过灭活处理的血清会因而造成沉淀的显著增多，且会影响血清的品质。
所以，有的公司所生的细胞培养用牛血清不做灭活处理，由客户自行选择。
而诊断试剂用血清在除菌过滤前进行过灭活处理。
4、在使用血清的时候，勿将血清留置于37℃太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分会因而受到破坏，影响血清的品质。
5、一般我们在使用过程中是先过滤培养基，再加血清，勿直接过滤血清。
6、血清的沉淀物：(1)凝絮物：其产生的原因有多种，但普遍的原因是血清中的脂蛋白(lipoprotein)变形及解冻后血清中存在的纤维蛋白(fibrin)造成，这些凝絮沉淀物不会影响血清本身的品质。
除非必须，如果您想减少这些沉淀物，建议可用离心3000rpm，5min去除，或离心后取上清液加入培养基中一起除菌过滤。
(2)显微镜下观察“小黑点”，通常经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著增多。
血清学反应-沉淀反应
二 凝胶内沉淀实验
（一）免疫琼脂实验(Immunodiffusion test）
原理：抗原抗体在电解质存在的条件下，再合适的比例 处形成白色沉淀线，并且一种抗原抗体系统形成一种沉淀 线，另一种形成另一种沉淀线，互相不影响。 优点：能将复合的抗原成分加以区分，根据沉淀线的数 目，位置，以及相邻两条沉淀线之间的融交分支等情况即 可了解该复合抗原的组成。并且可以将沉淀线用特殊染色 法（蛋白质、多糖、之类的鉴定染色），生物活性(酶活 性)和同位素标记法鉴定抗原的成分。 实验类型：
（3） 对流免疫电泳 对流免疫电泳是双向扩散与 电泳技术相结合的一种方法。在PH8~8.6的缓冲溶 8-21火箭免疫电泳 液中，蛋白质抗原带负电，向阳极移动。抗体虽然 也是蛋白质，但等电点比抗原高，所带阴离子少且 分子质量大，移动缓慢，同电渗反而向阴极移动。 实验时，将免疫血清置琼脂板正极孔内。通电后， 在电场作用下，抗原向正极移动，抗体向负极移动， 在最适比例处相遇时即形成白色沉淀。由于电场作 用，既限制了抗原抗体向多方向扩散，有加速了泳 动速度，缩短了时间。 优点：时间短，灵敏度高。 缺点：特异性不如双扩散高。如图8-20 8-20对流免疫电泳
抗原
抗体
单向单扩散
2.单向双扩散 用内径8mm的试管，现将含有阳 性血清的琼脂加于管底，高约6mm， 中间加一层同样浓度的琼脂，先凝固 后加待测0.25ml抗原，37°或室温扩 散数日。抗原抗体在中间琼脂层相向 扩散，在平衡点上形成沉淀线。
单向双扩散
3. 双向双扩散
试验在玻璃板或平皿上进行,用1.6％~2.0％琼脂加一定 浓度的等量抗体浇成凝胶板厚度为2~3mm在其上打孔直 径为2mm，孔内滴加抗原液。抗原在孔内向四周辐射扩 散，在与凝胶中的抗体接触形成白环。此环随扩散时间 而增大。因此可用已知浓度的抗原制成标准曲线，即可 用以测定抗原的量。 此法在兽医临床已用于传染病的诊断：如马立克氏病的 诊断。将马立克氏病高免血清制成血琼脂平板，拔取病 鸡新换的有髓质的羽毛数根，将毛根剪下，插于血琼脂 平板，阳性者毛囊中病毒向四周扩散，形成白色沉淀环。
血清使用问题的总结
拜力生物编辑整理：
一、血清灭活问题。
1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？
答：不是必须的，看做什么实验了。
2、问：四季青胎牛血清灭活是56℃30分钟吗？
答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是
3、问：4℃冰箱内保存3个月的胎牛血清，能否继续使用？相关细胞和其它试剂的代价比较高，不敢轻易尝试。
答：需要长期保存的胎牛血清必须要保存在-20至-70℃的低温冰箱中，4℃冰箱中保存时间不要超过1个月。
五、FBS可否代替人AB型血清？
问：我现在在做人的外周血b淋巴细胞的培养，文献上要求用人的AB型血清，但是我觉得很多代理商都没有。我想FBS代替，但不知道可否，我先是担心免疫排斥之类，但是我查了些资料后，应该不会(我觉得)。但是我又不能够TRY。因为细胞因子确实太贵了，所以咨询一下。谢谢！
答：常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间，而时间则从15分钟到60分钟不等，其中最常用的手法是56℃热处理30分钟。看看你养的细胞是什么，一般的话估计问题不大，要是很珍贵的细胞还是慎重一点啊。热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质， 在对补体灭活以外，热处理同时也对血清中可能存在的支原体具有灭活作用。现在好像不主张热灭活，热灭活经常给血清产品带来负面影响，对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生，此外，有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用。
答：血清一定要灭活，可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主结合过程的干扰，一般是2-6小时，根据细胞的状态决定。血清不一定需要灭活，灭活的目的是将血清中的补体灭活！这要根据实际情况而定，如果没有把握那就灭活吧，也不麻烦56度半个小时。
医学免疫学沉淀反应
医学免疫学沉淀反应在医学免疫学的广袤领域中，沉淀反应是一项重要的实验技术，它在疾病的诊断、免疫机制的研究以及生物制品的质量控制等方面发挥着不可或缺的作用。
让我们先来了解一下什么是沉淀反应。
简单来说，沉淀反应是指在溶液中，可溶性抗原与相应抗体特异性结合，形成肉眼可见的沉淀物的现象。
这种反应基于抗原与抗体的结合特性，当它们相遇并结合达到一定比例时，就会形成不溶性的复合物，从而沉淀下来。
沉淀反应有着多种类型，其中比较常见的有环状沉淀反应、絮状沉淀反应以及免疫比浊法等。
环状沉淀反应是一种较为古老但直观的方法。
在这种反应中，将抗原溶液小心地叠加在抗体溶液上，在两液的交界处，如果存在对应的抗原抗体反应，就会形成白色的沉淀环。
这个方法虽然操作简单，但相对来说灵敏度不高，如今在实际应用中已经较少单独使用。
絮状沉淀反应则是将抗原与抗体在试管中混合，通过观察溶液中出现的絮状沉淀来判断反应的结果。
这种方法比环状沉淀反应的灵敏度有所提高，但仍然存在一定的局限性。
而免疫比浊法则是一种更为精确和灵敏的定量检测方法。
它利用抗原抗体结合后形成的复合物会导致溶液浊度的变化，通过仪器测量浊度的变化来确定抗原或抗体的含量。
这种方法在临床检测中应用广泛，比如对血清中免疫球蛋白、补体等成分的定量测定。
那么，沉淀反应在医学领域中具体有哪些应用呢？首先，在疾病诊断方面，沉淀反应具有重要的价值。
例如，对于某些传染病的诊断，通过检测患者血清中特定病原体的抗体，可以判断患者是否曾经感染过该病原体。
比如，梅毒的诊断就可以利用沉淀反应检测患者血清中的梅毒螺旋体抗体。
其次，在自身免疫性疾病的诊断中，沉淀反应也发挥着关键作用。
像系统性红斑狼疮等疾病，通过检测患者血清中的自身抗体，如抗核抗体等，可以为疾病的诊断提供重要依据。
此外，沉淀反应还用于监测疾病的进展和治疗效果。
例如，在肿瘤治疗中，通过定期检测患者血清中肿瘤标志物的含量变化，可以评估治疗方案的有效性。
细胞培养的基本概念
细胞培养基本概念细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞群。
细胞培养目的与用途1、科学研究：药物研究开发与基础研究药物研究与开发(1) 新药筛选：如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定等。
(2) 疫苗研究与开发：如病毒性疫苗的研究与开发（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
(3) 基因工程药物研究与开发：如干扰素研究与开发，细胞生长因子研究与开发等。
(4) 细胞工程药物研究与开发：生物活性多肽研究与开发，人参皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究与开发。
(5) 单克隆抗体制备：包括诊断用单克隆抗体，治疗用单克隆抗体。
基础研究(1) 药物作用机理(2) 基因功能(3) 疾病发生机理2、生物制药(1) 疫苗生产：如病毒性疫苗（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
(2) 基因工程药物生产：如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素、粒细胞生长因子、胸腺肽等(3) 诊断用和药用单克隆抗体生产(4) 细胞工程药物生产：生物细胞内的一些生物活性多肽，生物活性物质等细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
抗原抗体反应的种类
抗原抗体反应的种类抗原抗体反应是生物学中重要的一种免疫反应，在维护机体免疫稳态和抵御病原微生物入侵方面起着重要的作用。
根据免疫学的研究，抗原抗体反应可以分为以下几种类型。
一、沉淀反应沉淀反应是抗原与抗体相互作用后形成可见的沉淀物。
它主要发生在液相中，如血清、尿液等。
沉淀反应可用于检测抗体的含量和抗原的特异性。
常见的沉淀反应有双向免疫扩散和免疫电泳。
双向免疫扩散是将抗原和抗体分别加入两个对应的凹陷孔中，经过一段时间后，如果有沉淀带出现，则说明抗原与抗体相互作用形成了可见的沉淀物。
免疫电泳则是利用电场将抗原和抗体分离，形成特定的沉淀带。
二、凝集反应凝集反应是指抗原与抗体相互作用后，形成可见的凝集物。
凝集反应适用于检测血清中的抗体和病原微生物。
常见的凝集反应有血凝反应和乳凝反应。
血凝反应是将抗原溶液加入含有抗体的血清中，如果抗原与抗体相互作用，则会形成凝集物。
乳凝反应是将抗原溶液加入含有抗体的乳液中，如果抗原与抗体相互作用，则会发生乳凝。
三、中和反应中和反应是指抗原与抗体相互作用后，使病原微生物失去致病性或抑制病毒复制。
中和反应是一种重要的体内免疫反应，可用于疫苗研制和治疗病毒感染等。
中和反应主要发生在体外，通过混合抗原和抗体，观察是否能够中和病原微生物的活性。
常见的中和反应有补体中和反应和病毒中和反应。
四、荧光反应荧光反应是指利用荧光染料标记的抗体与抗原结合后发生荧光现象。
荧光反应可用于检测细胞表面分子、组织中的抗原以及细菌和病毒的定位。
常见的荧光反应有免疫荧光染色和荧光免疫分析。
免疫荧光染色是将荧光染料标记的抗体与待检测标本接触，通过荧光显微镜观察是否有荧光信号。
荧光免疫分析是利用荧光标记的抗体与待检测物相互作用后，通过荧光检测仪器检测荧光强度。
五、酶标记反应酶标记反应是指利用酶标记的抗体与抗原结合后，在适当的底物存在下产生可见的颜色变化。
酶标记反应可用于检测抗原和抗体的含量，广泛应用于生物学研究和临床诊断。
优质血清的标准表现
优质血清的标准表现
优质血清通常具有以下标准表现：
1. 清澈透明：优质血清应该是清澈透明的，没有悬浮物或沉淀物。
如果血清出现混浊或有可见的颗粒物，则可能表示质量较差或污染。
2. 无异味：优质血清应该没有异味，或者只有非常轻微的味道。
有任何异味的血清可能表示被污染或质量不佳。
3. 成分稳定：优质血清的化学成分应该是稳定的，可以长时间保存而不失去其功能。
血清的保质期和稳定性是评估其质量的重要指标。
4. 低内毒素水平：优质血清应该具有较低的内毒素水平。
内毒素是细菌产生的毒素，可以引起炎症反应和细胞损伤。
血清中的内毒素水平应该符合相关的安全标准。
5. 无病原体污染：优质血清应该没有病原体的污染，包括细菌、病毒和真菌等。
对于用于细胞培养或临床诊断的血清来说，消除病原体污染至关重要。
总之，优质血清应该是清澈透明、无异味、成分稳定、低内毒素水平并且无病原体污染的。
这些标准表现是确保血清质量良好且适用于不同应用领域的关键要素。
酸解血清沉淀
酸解血清沉淀全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：酸解血清沉淀是一种生物学实验技术，常用于从血浆或血清中分离出蛋白质。
这种方法利用酸性溶液将血浆或血清中的蛋白质沉淀下来，从而实现分离和纯化的目的。
酸解血清沉淀的原理简单易懂，操作简便，因此在实验室中得到广泛应用。
酸解血清沉淀的原理是基于蛋白质的等电点。
血浆或血清中的蛋白质是一种带有电荷的大分子，其等电点是指其在不带电荷时的pH值。
在酸性环境下，蛋白质的电荷状态会改变，使其变得不稳定并沉淀下来。
通过调节溶液的pH值，可以实现蛋白质的分离和纯化。
酸解血清沉淀的步骤一般包括以下几个过程：首先是准备工作，包括准备所需的试剂和仪器设备；然后是取血浆或血清样本，并将其加入到酸性溶液中进行搅拌混合；接着是调节溶液的pH值，使蛋白质沉淀下来；最后是通过离心或过滤等方法将沉淀物分离出来，得到纯净的蛋白质。
酸解血清沉淀主要用于蛋白质的分离和纯化。
在实验室中，研究人员常常需要从血浆或血清中提取特定的蛋白质，以进行后续的实验研究。
酸解血清沉淀可以快速高效地实现这一目的，不仅可以提高蛋白质的纯度，还可以减少实验时间和成本。
除了在实验室研究中的应用外，酸解血清沉淀还被广泛用于临床诊断。
在临床医学中，检测血浆或血清中特定蛋白质的含量可以帮助医生进行疾病诊断和监测。
通过酸解血清沉淀技术，可以快速准确地分离出目标蛋白质，为临床诊断提供有力支持。
酸解血清沉淀是一种简单有效的生物学实验技术，具有广泛的应用前景。
它不仅可以帮助研究人员从血浆或血清中提取目标蛋白质，还可以在临床诊断中发挥重要作用。
随着科学技术的不断发展，相信酸解血清沉淀技术将会得到更广泛的应用和进一步的改进。
第二篇示例：酸解血清沉淀是一种常用的血液检验方法，主要用于检测血液中的蛋白质含量。
这种方法通过添加酸性试剂使血液中的蛋白质沉淀下来，从而方便对蛋白质进行分析和测量。
酸解血清沉淀的原理简单明了，操作方便，是临床上常用的一种检验方法。
如何处理血清沉淀
如何处理血清沉淀
血清是天然制品，没有经过预老化（反复冻融），放置在2-8℃进行融化时，血清中的蛋白（纤维蛋白等）或脂类有可能凝集析出，出现沉淀或者混浊，这种现象对于多数血清来讲是正常的，并不会影响血清对细胞的促生长作用，更与血清品质无关。
此外，热灭活，冷冻的血清直接放到室温或者37℃水浴锅中融化（错误的血清融化方式），37℃培养，反复冻融，融化过程没有摇匀，gamma辐照，长期存放在2-8℃等操作都会增加血清中的沉淀。
建议客户将血清放置在-20℃，避免反复冻融，如果一次不能用完一瓶，将冷冻的血清放置在2-8℃至完全融化（期间间断摇晃均匀），无菌操作进行分装，分装后的血清-20℃冷冻保存。
Cellmax胎牛血清Max choice, Max cells。
沉淀是什么意思（最新版）
沉淀是什么意思沉淀是什么意思沉淀是什么意思篇一《沉淀》沉淀是什么意思篇二《沉淀》沉淀是什么意思篇三《沉淀反应》沉淀反应沉淀反应特点：沉淀反应是指可溶性抗原和相应抗体在特定的条件下特异性结合所出现的沉淀现象。
沉淀反应中的抗原多为蛋白质、多糖、血清、毒素、核酸等可溶性的小分子物质。
一、概念可溶性抗原与其相应抗体特异结合，出现肉眼可见的免疫复合物，称为沉淀反应。
沉淀反应属于体外抗原抗体反应，其反应也分两个阶段：第一阶段位抗原抗体发生特异性结合，几秒到几十秒即可完成，出现可溶性小复合物，肉眼不可见；第二阶段为形成大的可见免疫复合物，如沉淀线、沉淀环等。
二、液相内的沉淀反应液相内的沉淀反应类型有絮状沉淀反应、环状沉淀反应和免疫浊度试验。
1、絮状沉淀反应在电解质溶液中，可溶性抗原与相应抗体特异性结合，当抗原和抗体分子比例合适的时，可形成絮状或颗粒状的不溶性沉淀物。
直接影响絮状沉淀的试验最重要的因素是抗原和抗体分子比例合适。
①抗原稀释法抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗体反应②抗体稀释法抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应③方阵滴定法方阵滴定法即棋盘滴定法（二维的，既稀释抗原也稀释抗体） 2、环状沉淀反应先将适量已知抗血清价值毛细玻璃管（2~3mm）底部，再沿管壁缓缓加入等体积待测样品溶液，使样品与抗血清分层清晰。
如果样品中有与已知抗体对应的可溶性抗原，会在两种液体的交界面出现白色沉淀环。
3、免疫浊度试验⑴原理：在特殊缓冲液中，分子比例合适的可溶性抗原与相应抗体形成抗原抗体复合物，使反应液出现浑浊，其浊度与免疫复合物的量成正比，利用光学测量仪器结合自动分析检测系统检测，并与一系列的标准品对照，即可计算出被检抗原或抗体的含量。
免疫浊度法按照仪器设计的不同，分为使用透射比浊仪的免疫透射比浊法和使用散射比浊仪的免疫散射法。
免疫浊度法可用于液体中的微量抗原、抗体及小分子半抗原（如药物等）的定量检测。
其优点是自动检测、操作简便快速、适合大批量标本检测、灵敏度高（可达毫微克水平）、且无放射性污染。
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血清中可能出现的沉淀物是什么1. 血清中可能出现的沉淀物是什么？基于多年的实验研究，用于细胞培养的胎牛血清以及其它血清中可能会存在以下种类的沉淀物：：（1）纤维蛋白，它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到1-2mm，可以用肉眼观察到。
因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体）在处理过程中仍然处于溶解状态，当经过最后的过滤分装后，就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。
（2）磷酸钙，它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。
这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。
（3）胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。
他们也是血清中出现沉淀物的常见原因。
2. 血清中的沉淀物对细胞培养有什么影响？（1）细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它血清生产商也证明了这一点。
（2）过滤，如果血清中出现大量的沉淀物，血清将很难过滤。
一般说来，因为在血清生产时最后已经经过100nm或者40nm的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不推荐再过滤用于细胞培养的血清。
在实验室中没有必要再过滤处理血清，在大规模的细胞培养中往往将血清直接加到培养基中一起过滤。
（3）污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起争端。
研究者可能会在血清中观察到一些絮状的沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将血清放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状沉淀，因此就断定血清被污染了。
并且当研究者将血清样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可以运动的小黑点，因此就更加确认是血清被污染了。
于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商确认，但最终确定血清没有被污染而只是沉淀。
为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将血清放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。
另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。
3. 如何避免血清中沉淀物的出现？首先要注意正确的血清解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动血清。
我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：（1）热灭活血清；（2）在37℃下培养血清；（3）反复冻融；（4）γ射线照射；（5）长期储存在2-8℃；（6）在室温下放置时间过长4. 如何去除血清中的沉淀？如想去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装到无菌离心管中，以400g离心，上清液即可直接加入到培养基内一起过滤。
注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。
5. 冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。
另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
6. 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
7. 一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。
如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制。
8. 怎么样确定细胞的质量保障问题，能否开证明？能开什么样的证明？如果细胞出现问题，客户投诉，要求再发一株细胞，价格怎么算？收到细胞48小时内，细胞出现活力状态问题（细胞活力状态用台盼蓝染色法鉴定细胞活力），我们受理投诉；超过48小时不超过一星期，我们收取第一次细胞全款的5折后，重新发放细胞；若实在分不清是哪方的原因，我们收取第一次细胞全款的3折，重发细胞9. 快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞。
10. 细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？（1）客户造成细胞污染，不重发；（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；（7）视具体情况而定。
11. 如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000个/毫升，在0.1毫升的细胞悬液中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。
轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。
活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞12. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。
每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
我们的细胞株所使用的培养液都是Gibco公司干粉配制的，均不含HEPES，所以我们建议您准备同样条件的培养液用于细胞培养。
Hyclone的培养液请慎用，尤其是Hyclone液体原装培养液。
13. 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。
来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
14. 何谓FBS,FCS,CS,HS?FBS(fetalbovineserum)和FCS(fetalcalfserum)是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。
CS(calfserum)则是指小牛血清。
HS(horseserum)则是指马血清。
15. L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。
脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。
L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。
L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性16. 培养细胞时应使用5%或10%CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。
当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5CO2培养细胞。
17. 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
18. 培养基中是否须添加抗生素？除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。
19. 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如何处理？一般使用之trypsin-EDTA浓度为0.05%trypsin-0.53mMEDTA.4Na。
第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20°C，避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。
20. 悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。
分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。
21. 欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg(约1000rpm)，5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡。
22. 细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。
细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。
23. 细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethylsulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。
注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。
24. DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissueculturegrade之DMSO(如SigmaD2650)，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。
若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜。
25. 冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C30-0分钟→(-20°C30分钟*)→-80°C16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。
冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vaporphase长期储存。
*-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
26. 细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/mlvial，融合瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜。
27. 应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。
主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。
严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
28. 如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
29. 支原体(mycoplasma)污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？不能。
除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。