凯氏定氮法

观察浓硫酸刚加入 牛奶中的颜色？
2、将下列物质加入消化瓶：
牛奶1ml、浓硫酸5ml、催化剂（ K2SO4，
CuSO4 ）、玻璃珠
作用？
3、将消化瓶放入智能数控消化炉进行消化，至 液体变为无色或淡蓝色
① 250℃ 1h左右
② 350℃ 40min左右
③ 450℃ 2.5h左右
（二）蒸馏、吸收
微量凯氏定氮蒸馏装置
的铵盐分解产生氨，影响结果。 4、硫酸铜起催化剂作用并可指示消化终点。 5、注意标记。 6、取消化瓶时防止烫伤。 7、吸收前确保管口插入液面，吸收结束后使冷凝管下端离开液 面，
并用去离子水将管口冲洗干净并回收至接收瓶。 8、规范滴定操作，且终点判定要一致。
定氮法优缺点
• 优点：灵敏（0.2mg-1mg）、稳定、
蒸馏 E0 E1 E2 E3
时间 4min 2min 0min 4min
（三）滴定：
至灰色或蓝紫色 终点
至灰色或蓝紫色
五、结果计算:
X (V1 V 2) C 0.014 F 100 m
• X：样品蛋白质含量 （g/100g 或g/100mL） • V1、V2：测定用样、试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积
滴定
反应方程式
三、试剂：
1、消化液：硫酸 2、催化剂：硫酸铜、硫酸钾 3、碱溶液：40%氢氧化钠 4、吸收液：2%硼酸 5、混合指示剂：
0.1%甲基红乙醇溶液：0.1%甲基蓝乙醇溶液=（1：1） 6、标准滴定液：0.2MLeabharlann BaiduHCL
四．实验步骤
步骤一
步骤二
步骤三
消化
蒸馏、吸收
滴定
（一）消化
1、标记消化瓶
传统装置
1：电炉 2：水蒸气发生器 3：螺旋夹 4：小玻杯及棒状玻塞 5：反应室 6：反应室外层 7：橡皮管及螺旋夹 8：冷凝管 9：蒸馏液接收瓶
半自动凯氏定氮仪
1、确保仪器运行正常、管道内 部干净、管道及其连接口密 封性好
2、准备好吸收液（200ml 2%硼 酸 + 2ml 混合指示剂）并做 好标记
蛋白质含量的测定方法:
1. 定氮法 2. 双缩尿法（Biuret法） 3. Folin－酚试剂法（Lowry法） 4. 紫外吸收法 5. 考马斯亮蓝法（Bradford法） 6. 红外线检测
蛋白质测定方法的比较：
在选择方法时应考虑：
•实验对测定所要求 的灵敏度和精确度
•检测条件
•测定所要花 费的时间等
成本低廉
凯氏定氮法被定为食品中蛋白质含量测定的现行国家 标准及国际通行的测定方法
• 缺点：耗时长、特异性差
三聚氰胺
化学式： C3N6H6 分子量：126 含氮量：66.6%
鲜牛奶的151倍，是奶粉的 23倍。每100g牛奶中添加 0.1克三聚氰胺，理论上就 能提高0.625%蛋白质
牛奶和奶粉添加三聚 氰胺，就是因为它能 冒充蛋白质
1.实验完成后记得清理台面。每组的小组长负责。
2.实验报告：
• 实验题目 • 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果 （空白滴定的结果可以共享） • 实验讨论 （操作中现象的出现原因；结果的影响因素；与商标
上显示的结果对比等。）
结果每个小组可以相同，但是讨论不能相同！
在选择方法时应考虑
•溶液中存在 的干扰物质
•蛋白质特点
微量凯氏定氮法
一、实验目的：
1、掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理 和方法。
2、学会使用凯氏定氮仪。
二、实验原理：
1. 氮元素： ➢ 蛋白质区别于糖和脂肪的特征， ➢ 绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一
般恒定在15～17%，平均值为16%左右。
蛋白质含量的测定
—微量凯氏定氮法
蛋白质的理论知识：
蛋白质组成：
必需AA，条件必需AA，非必需AA,限制AA,AA模式
蛋白质功能：
蛋白质来源：
蛋白质的评价：
食物蛋白质的营养评价：
一 蛋白质的含量 二蛋白质消化率 三蛋白质利用率
1.真消化率 2.表观消化率
1.生物价 2.蛋白质净利用率 3.蛋白质功效比值 4.氨基酸评分
只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以相 应的蛋白质换算系数（均值为6.25、乳制品为 6.38），就可以计算出样品中的蛋白质含量。
• 2. 含氮量的测定
先高温条件下强酸(浓H2SO4)把 样品中的蛋白质的有机氮全部
消化
消化为无机氮形式
再强碱高温水蒸气蒸馏出氨气 蒸馏
用硼酸吸收氨气
吸收
用标准盐酸进行滴定
（mL） • C：盐酸标准液的摩尔浓度 （mol/L） • 0.014：1mol/L盐酸标准液1mL相当于氮的克数 • m：样品质量（g）或体积（mL） • F：蛋白质换算系数6.25
六、注意事项:
1、严禁酸碱污染吸收液、所用去离子水及管道等。 2、固体样品消化时防止挂壁且注意梯度升温。 3、硫酸钾提高反应温度，但不可过多，否则温度过多，引起生成
3、将碱溶液及去离子水桶与仪 器连接好，放入盛装消化好 样品的消化瓶，放入盛装吸 收液的锥形瓶并保证管口插 入液面下。
4、设置并启动程序
程序设置：
步骤
加碱或加水 时间
C0（样品检测)
E0（加碱） 5s
C1（样品间清洗）
E1
0s
C2（试验结束后第一次清洗） E2（加水） 20s
C3（试验结束后第二次清洗） E3（加水） 10s