实验八_凯氏定氮法
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样品的总氮含量(%)=(A B) 0.1×14×5/1000× 样品的总氮含量(%)=(A—B)×0.1×14×5/1000×C (%)=(A B)× 若测定的样品含氮部分只是蛋白质(如血清)，则： 若测定的样品含氮部分只是蛋白质(如血清) 样品中的蛋白质含量(%)=(A B)×0.1×14×6.25×5/1000× (%)=(A－ 样品中的蛋白质含量(%)=(A－B)×0.1×14×6.25×5/1000×C 滴定样品用去的盐酸体积(ml) (ml)； A－滴定样品用去的盐酸体积(ml)； 滴定空白用去的盐酸体积(ml) (ml)； B－滴定空白用去的盐酸体积(ml)； 称量样品的量(g) (g)； C－称量样品的量(g)； 0.1－盐酸的摩尔浓度(mol/L) (mol/L)； 0.1－盐酸的摩尔浓度(mol/L)； 14－氮原子量； 14－氮原子量； 6.25－ 6.25－系数
三、实验器材
1、豆浆粉 、 2、浓硫酸 、 3、混合催化剂：CuSO4/K2SO4=0.4/6 、混合催化剂： 4、混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液 甲基红乙醇溶液200ml与0.1%甲 、混合指示剂： 甲基红乙醇溶液 与 甲 烯蓝乙醇溶液50ml混合 烯蓝乙醇溶液 混合 5、 NaOH:40% 、 6、 2%硼酸溶液 、 硼酸溶液 7、0.01N标准盐酸溶液 、 标准盐酸溶液
四、实验步骤
④从定氮球发烫开始计时，连续蒸煮5min，停止加热。 从定氮球发烫开始计时，连续蒸煮5min，停止加热。 5min ⑤冲洗完毕，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接硅胶 冲洗完毕， 由于气体冷却压力降低， 管，由于气体冷却压力降低，反应室内废液自动抽到 蒸汽收集器中，打开废液排出口夹子放出废液。 蒸汽收集器中，打开废液排出口夹子放出废液。
四、实验步骤
（三）滴定 用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接 用少量水冲洗冷凝管下端外部。 收瓶， 收瓶，以0.01N盐酸标准溶液滴定至淡紫红色 盐酸标准溶液滴定至淡紫红色 为滴定终点。 为滴定终点。 (四)洗涤凯氏定氮仪（按照上述方法） 四 洗涤凯氏定氮仪 按照上述方法） 洗涤凯氏定氮仪（
五、实验结果
二、实 验 原 理
3.滴定:用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI 3.滴定:用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI 滴定 HCI标准溶液滴定 消耗的量计算出氮的含量， 消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算 因子，既得蛋白质的含量。 因子，既得蛋白质的含量。 (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3 ＝
四、实验步骤
（一）消化 精密称取豆浆粉1.0 g，移入干燥消化管中， 精密称取豆浆粉1.0 g，移入干燥消化管中，加入 混合催化剂6.4g 摇匀后再加入15ml 6.4g， 15ml浓硫酸和两颗玻 混合催化剂6.4g，摇匀后再加入15ml浓硫酸和两颗玻 璃珠，放入消化炉中消化。起始电压150V 消化1h 150V， 1h后 璃珠，放入消化炉中消化。起始电压150V，消化1h后， 观察消化管内泡沫变化，泡沫消失后， 观察消化管内泡沫变化，泡沫消失后，加强火力到 220V，继续消化，至液体呈蓝绿色澄清透明后， 220V，继续消化，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继 续加热0.5h 0.5h。 续加热0.5h。 取下消化管放冷，小心加蒸馏水至50ml 取下消化管放冷，小心加蒸馏水至50ml ，混匀 备用。 备用。取与处理样品相同量的混合催化剂按同一方法 做试剂空白试验。 做试剂空白试验。
实验八 凯氏定氮法测定样品中粗蛋 白的含量
Baidu Nhomakorabea
一、实验目的
1.掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理 1.掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理 和方法。 和方法。 2.学会使用凯氏定氮仪。 2.学会使用凯氏定氮仪。 学会使用凯氏定氮仪
二、实 验 原 理
1.消化：有机物中的胺根在强热和CuSO4/K2SO4，浓H2SO4 消化：有机物中的胺根在强热和 消化 作用下，消化生成（ 作用下，消化生成（NH4）2SO4； ；
四、实验步骤
（3）蒸馏样品 向接收瓶内加入20ml2%硼酸溶液及混合指示液2 20ml2%硼酸溶液及混合指示液 ①向接收瓶内加入20ml2%硼酸溶液及混合指示液2滴， 并使冷凝管的下端插入液面下 吸取10.0ml样品消化稀释液由小漏斗流入反应室， 10.0ml样品消化稀释液由小漏斗流入反应室 ②吸取10.0ml样品消化稀释液由小漏斗流入反应室，并 5ml水洗涤小烧杯使流入反应室内 水洗涤小烧杯使流入反应室内。 以5ml水洗涤小烧杯使流入反应室内。 10ml40%氢氧化钠溶液经小漏斗缓缓流入反应室 氢氧化钠溶液经小漏斗缓缓流入反应室， ③将10ml40%氢氧化钠溶液经小漏斗缓缓流入反应室， 立即加半漏斗水水封以防漏气，开始蒸馏。 立即加半漏斗水水封以防漏气，开始蒸馏。 蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内， ④蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，从 指示剂开始变色时计时，蒸馏5min 5min。 指示剂开始变色时计时，蒸馏5min。 移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min 1min。 ⑤移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min。
四、实验步骤
（二）蒸馏 （1）装好蒸馏装置，如图：
四、实验步骤
（2）洗涤蒸馏装置 ） ①在蒸气发生烧瓶中加约 颗玻璃珠，2/3体积的蒸馏水， 在蒸气发生烧瓶中加约70颗玻璃珠 体积的蒸馏水， 在蒸气发生烧瓶中加约 颗玻璃珠， 体积的蒸馏水 加入4~5滴浓硫酸及 滴浓硫酸及4~5滴混合指示剂。 滴混合指示剂。 加入 滴浓硫酸及 滴混合指示剂 到反应室， ②沿小漏斗加入蒸馏水约20mL到反应室，留半漏斗水， 沿小漏斗加入蒸馏水约 到反应室 留半漏斗水， 保持水封，防止漏气。 保持水封，防止漏气。 ③加热产生蒸气后，立即关闭废液排放管上的开关，蒸 加热产生蒸气后，立即关闭废液排放管上的开关， 气进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾， 气进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾，蒸出蒸 气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却， 气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却，在冷 凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。 凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。
2NH3+H2S04+2H+
(NH4)2S04
2.蒸馏：在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集 蒸馏：在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出 蒸馏 溶液中； 于H3BO3 溶液中； (NH4)2SO4+2NaOH 2NH3+4H3BO3 2NH3+2H2O+Na2SO4 (NH4)2B4O7+5H2O
三、实验器材
1、豆浆粉 、 2、浓硫酸 、 3、混合催化剂：CuSO4/K2SO4=0.4/6 、混合催化剂： 4、混合指示剂：0.1%甲基红乙醇溶液 甲基红乙醇溶液200ml与0.1%甲 、混合指示剂： 甲基红乙醇溶液 与 甲 烯蓝乙醇溶液50ml混合 烯蓝乙醇溶液 混合 5、 NaOH:40% 、 6、 2%硼酸溶液 、 硼酸溶液 7、0.01N标准盐酸溶液 、 标准盐酸溶液
四、实验步骤
④从定氮球发烫开始计时，连续蒸煮5min，停止加热。 从定氮球发烫开始计时，连续蒸煮5min，停止加热。 5min ⑤冲洗完毕，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接硅胶 冲洗完毕， 由于气体冷却压力降低， 管，由于气体冷却压力降低，反应室内废液自动抽到 蒸汽收集器中，打开废液排出口夹子放出废液。 蒸汽收集器中，打开废液排出口夹子放出废液。
四、实验步骤
（三）滴定 用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接 用少量水冲洗冷凝管下端外部。 收瓶， 收瓶，以0.01N盐酸标准溶液滴定至淡紫红色 盐酸标准溶液滴定至淡紫红色 为滴定终点。 为滴定终点。 (四)洗涤凯氏定氮仪（按照上述方法） 四 洗涤凯氏定氮仪 按照上述方法） 洗涤凯氏定氮仪（
五、实验结果
二、实 验 原 理
3.滴定:用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI 3.滴定:用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI 滴定 HCI标准溶液滴定 消耗的量计算出氮的含量， 消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算 因子，既得蛋白质的含量。 因子，既得蛋白质的含量。 (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3 ＝
四、实验步骤
（一）消化 精密称取豆浆粉1.0 g，移入干燥消化管中， 精密称取豆浆粉1.0 g，移入干燥消化管中，加入 混合催化剂6.4g 摇匀后再加入15ml 6.4g， 15ml浓硫酸和两颗玻 混合催化剂6.4g，摇匀后再加入15ml浓硫酸和两颗玻 璃珠，放入消化炉中消化。起始电压150V 消化1h 150V， 1h后 璃珠，放入消化炉中消化。起始电压150V，消化1h后， 观察消化管内泡沫变化，泡沫消失后， 观察消化管内泡沫变化，泡沫消失后，加强火力到 220V，继续消化，至液体呈蓝绿色澄清透明后， 220V，继续消化，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继 续加热0.5h 0.5h。 续加热0.5h。 取下消化管放冷，小心加蒸馏水至50ml 取下消化管放冷，小心加蒸馏水至50ml ，混匀 备用。 备用。取与处理样品相同量的混合催化剂按同一方法 做试剂空白试验。 做试剂空白试验。
实验八 凯氏定氮法测定样品中粗蛋 白的含量
Baidu Nhomakorabea
一、实验目的
1.掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理 1.掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理 和方法。 和方法。 2.学会使用凯氏定氮仪。 2.学会使用凯氏定氮仪。 学会使用凯氏定氮仪
二、实 验 原 理
1.消化：有机物中的胺根在强热和CuSO4/K2SO4，浓H2SO4 消化：有机物中的胺根在强热和 消化 作用下，消化生成（ 作用下，消化生成（NH4）2SO4； ；
四、实验步骤
（3）蒸馏样品 向接收瓶内加入20ml2%硼酸溶液及混合指示液2 20ml2%硼酸溶液及混合指示液 ①向接收瓶内加入20ml2%硼酸溶液及混合指示液2滴， 并使冷凝管的下端插入液面下 吸取10.0ml样品消化稀释液由小漏斗流入反应室， 10.0ml样品消化稀释液由小漏斗流入反应室 ②吸取10.0ml样品消化稀释液由小漏斗流入反应室，并 5ml水洗涤小烧杯使流入反应室内 水洗涤小烧杯使流入反应室内。 以5ml水洗涤小烧杯使流入反应室内。 10ml40%氢氧化钠溶液经小漏斗缓缓流入反应室 氢氧化钠溶液经小漏斗缓缓流入反应室， ③将10ml40%氢氧化钠溶液经小漏斗缓缓流入反应室， 立即加半漏斗水水封以防漏气，开始蒸馏。 立即加半漏斗水水封以防漏气，开始蒸馏。 蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内， ④蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，从 指示剂开始变色时计时，蒸馏5min 5min。 指示剂开始变色时计时，蒸馏5min。 移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min 1min。 ⑤移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min。
四、实验步骤
（二）蒸馏 （1）装好蒸馏装置，如图：
四、实验步骤
（2）洗涤蒸馏装置 ） ①在蒸气发生烧瓶中加约 颗玻璃珠，2/3体积的蒸馏水， 在蒸气发生烧瓶中加约70颗玻璃珠 体积的蒸馏水， 在蒸气发生烧瓶中加约 颗玻璃珠， 体积的蒸馏水 加入4~5滴浓硫酸及 滴浓硫酸及4~5滴混合指示剂。 滴混合指示剂。 加入 滴浓硫酸及 滴混合指示剂 到反应室， ②沿小漏斗加入蒸馏水约20mL到反应室，留半漏斗水， 沿小漏斗加入蒸馏水约 到反应室 留半漏斗水， 保持水封，防止漏气。 保持水封，防止漏气。 ③加热产生蒸气后，立即关闭废液排放管上的开关，蒸 加热产生蒸气后，立即关闭废液排放管上的开关， 气进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾， 气进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾，蒸出蒸 气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却， 气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却，在冷 凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。 凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。
2NH3+H2S04+2H+
(NH4)2S04
2.蒸馏：在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集 蒸馏：在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出 蒸馏 溶液中； 于H3BO3 溶液中； (NH4)2SO4+2NaOH 2NH3+4H3BO3 2NH3+2H2O+Na2SO4 (NH4)2B4O7+5H2O