实验三 植物组织RNA的提取与分析
木本植物组织总rna提取的要点与原理
木本植物组织总rna提取的要点与原理木本植物组织总RNA提取是研究植物生物学非常重要的一项技术。
通过总RNA提取，我们能够了解植物的基因表达情况，揭示其分子机制，并且可以用于后续的转录组学和蛋白质组学研究。
以下是木本植物组织总RNA提取的要点和原理。
一、要点：1.样品的选择：首先要选择新鲜且健康的植物组织作为样品，如嫩茎、叶片等。
避免使用受感染、受损或者老化的组织。
2.样品的处理：样品应尽快处理，避免长时间保存。
在处理之前，应该用无菌水清洗样品，并用无菌酒精消毒。
同时，还需要将工作台、仪器和试剂消毒，保持无菌状态。
3.细胞破碎方法：根据木本植物的组织特点，常用的细胞破碎方法包括机械破碎、液氮破碎和酶解破碎。
机械破碎可以利用研钵、搅拌器或者高压细胞破碎机，液氮破碎是将样品冷冻在液氮中后用研钵研磨，酶解破碎则利用酶的作用溶解细胞壁。
4. RNA保护剂的添加：为了保护RNA免受RNase酶的降解，常常在提取过程中加入RNA保护剂，如二硫磷酸二丙酯(DTT)、碟加硫磺酰亚胺(DMSO)等。
5. RNA提取试剂盒的选择：提取总RNA的常用试剂盒有Trizol试剂盒、RNeasy试剂盒和Column试剂盒等。
根据实验需求和样品特点选择适合的试剂盒。
6.RNA的纯化和浓缩：通常会通过反转录酶链反应合成cDNA，去除DNA质粒和RNA小分子杂质，然后利用酒精沉淀或硅胶柱层析等方法将总RNA纯化和浓缩。
二、原理：总RNA提取的原理主要包括样品细胞壁破碎、蛋白质和DNA去除以及RNA的纯化和浓缩。
1.细胞壁破碎：首先需要将植物组织破碎，破碎的方法可以选择机械、酶解和液氮等方法。
机械破碎是利用机械力使细胞壁破裂，液氮破碎则通过冷冻-解冻的过程来破裂细胞壁，酶解破裂则是利用酶的作用降解细胞壁。
2.蛋白质和DNA去除：接下来需要去除蛋白质和DNA，以便提取纯净的RNA。
常用的方法有酚/氯仿提取法和磁珠分离法。
酚/氯仿提取法是利用酚提取混合溶液中的蛋白质和DNA，而磁珠分离法则是通过特定的磁珠来吸附蛋白质和DNA，然后用磁力将磁珠分离。
植物rna提取实验报告
植物rna提取实验报告植物RNA提取实验报告植物RNA提取是生物学研究中常用的实验技术之一。
通过提取植物细胞中的RNA分子，可以进一步研究植物基因的表达和调控机制。
本实验旨在探究RNA提取的方法和步骤，并对提取得到的RNA进行分析。
一、实验材料和方法1. 实验材料：- 植物样本：可以选择自然生长的植物或实验室培养的植物。
- RNA提取试剂盒：常用的试剂盒有Trizol、RNAiso Plus等。
- 高速离心机：用于离心植物组织和提取液。
- 1.5 mL离心管和离心管架：用于混合试剂和样本。
- 离心管摇床：用于混合试剂和样本。
- 离心管架：用于离心植物组织和提取液。
2. 实验方法：- 准备植物样本：选择新鲜的植物叶片或其他组织，尽量避免使用老化或受损的植物材料。
- 细胞破碎：将植物样本放入1.5 mL离心管中，加入适量的RNA提取试剂。
使用离心管摇床将样本和试剂充分混合，破碎细胞壁释放RNA。
- 提取RNA：离心混合物，将上清液转移到新的离心管中。
加入适量的异丙醇，使RNA沉淀。
再次离心，将上清液倒掉，留下RNA沉淀。
- 洗涤RNA：加入75%乙醇洗涤RNA沉淀，离心后将乙醇倒掉。
重复洗涤步骤，以去除污染物。
- 干燥RNA：将离心管开盖，放置在通风处晾干RNA沉淀。
- 溶解RNA：加入适量的RNase-free水或稀释缓冲液，使RNA溶解。
二、实验结果和分析通过上述步骤，我们成功地提取到了植物样本中的RNA。
为了验证RNA的纯度和完整性，我们使用紫外-可见光分光光度计检测了提取得到的RNA溶液的吸光度。
结果显示，RNA溶液的吸光度比例A260/A280在1.8-2.0之间，符合纯RNA的标准。
这表明我们成功地去除了蛋白质和其他污染物，得到了纯净的RNA样本。
为了进一步确认RNA的完整性，我们进行了琼脂糖凝胶电泳分析。
将提取得到的RNA样本与RNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶上，经过电泳后，用紫外灯照射，可以观察到RNA分子的带状图谱。
植物总RNA提取
植物总RNA提取实验方法原理通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free H2O将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
实验材料新鲜植物组织试剂、试剂盒β-巯基乙醇乙醇蛋白液RW1 漂洗液RW 蒸馏水无菌水仪器、耗材研钵离心管离心机移液枪移液管收集管吸附柱水浴锅实验步骤一、新鲜植物组织称重后取100 mg迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100 mg放入研钵），加入10体积（1 ml）RLT(请确定已加入β-巯基乙醇)和1体积（100 ul）PLANTaid 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RLT立刻充分接触以抑制RNA酶活性。
二、将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡15秒，13 000 rpm离心5-10分钟,沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid，取450 ul 裂解物上清转到一个新离心管。
三、加入上清体积一半的无水乙醇(0.5体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
四、将混合物(每次小于700 ul，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13 000 rpm离心60秒，弃掉废液。
五、加700 μl 去蛋白液RW1，室温放置30秒，12 000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
如果DNA残留明显，可在加入RW1后室温放置5分钟后再离心。
六、加入500 ul漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇），12 000 rpm 离心30秒，弃掉废液。
加入500 ul漂洗液RW，重复一遍。
七、将吸附柱RA放回空收集管中，13 000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
植物组织RNA提取的要点与技巧从植物组织中提取RNA
植物组织RNA提取的要点与技巧从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。
要进行Northern杂交分析，纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR 及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA 。
因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。
从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA ，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。
一般认为在这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase的活性较高。
在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的，但当组织被研磨，细胞破碎后，这些物质就会与RNA 相互作用。
酚类化合物被氧化后会与RNA 不可逆地结合，导致RNA 活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA 的丢失，或形成不溶性复合物；而多糖会形成难溶的胶状物，与RNA 共沉淀下来；萜类化合物和RNase会分别造成RNA 的化学降解和酶解。
对于这些植物材料，用常规的RNA 提取方法（如胍法、苯酚法和十六烷基三甲基溴化胺法等）难以提取出其RNA 。
如Lбpez-Gбmez等在用常规的方法提取芒果果实的RNA 时未能成功，他们的结果分为三种情况：提出的RNA 已被降解；RNA 的得率很低；得到的RNA 不能进行体外翻译。
他们认为在果实成熟时各种酶的活性增强，其中也包含RNase，不溶性的淀粉转化为可溶性的多糖，芒果果实细胞壁中特殊的成份，以及果实中高含量的多酚化合物都是干扰RNA 提取的因素。
Tesniere等在用苯酚法和胍法提取葡萄果实的RNA 时，发现RNA 与某种未知化合物凝聚成不溶性的复合物，并且这种未知化合物在230nm和270nm处有强的光吸收，从而干扰了RNA 紫外吸收的测定。
因此能否有效地去除多糖、酚类化合物、RNase和干扰RNA 提取的其它代谢产物是提取高质量植物RNA 成败的关键。
植物总rna的提取实验报告(共4篇)
植物总rna的提取实验报告(共4篇)实验一：植物总RNA的提取摘要：本实验采用常见的RNA提取方法，结合了Trizol试剂和琼脂糖柱纯化法，成功地获得了木瓜叶片、玫瑰花瓣、菜花花瓣和绿萝叶片的总RNA。
通过比较各样品的RNA浓度和纯度，得出提取的总RNA具有较好的质量和量，适合后续实验应用。
关键词：植物总RNA提取；Trizol试剂；琼脂糖柱纯化法；RNA浓度和纯度测定。
引言：RNA是生物体内最为丰富的生物大分子之一，植物细胞内涵盖了大量的RNA。
然而，总RNA是包括所有RNA种类的总和，因此其含量比其他类型的RNA更为丰富。
提取植物总RNA 是分子生物学和遗传学中的一项基本技术，在众多的实验过程中都需要应用。
各种提取方法都存在优缺点，根据实验需要选择不同的方法。
实验目的：实验材料：1.四种植物组织：木瓜叶片、玫瑰花瓣、菜花花瓣和绿萝叶片；2.Trizol试剂；3.乙醇和0.1M氯化钠；4.琼脂糖柱纯化试剂盒；5.常规实验室用品。
实验方法：1.测定植物组织的重量，并用液氮研磨器将其研磨成粉末状；2.加入10ml Trizol试剂，1ml的粉末，颠倒瓶子多次，使其彻底混合。
放置室温下5min，加入1ml氯仿混合，轻轻地混合进行离心分离。
将上层的非水相转移到新的离心管中，并加入1ml的高度纯化乙醇；3.离心15s，将上清转移到新的离心管中。
加入0.5ml的75%热硫酸β-丙酮，颠动瓶子，将混合物混匀，放置于室温下5min，并进行离心3min。
取出上清并加入等体积的异丙醇混合离心，并重复两次。
4.最后我们使用琼脂糖柱纯化试剂盒进行纯化。
按照说明书的操作步骤进行操作，得到纯化后的RNA样本。
5.测定RNA的浓度和纯度。
实验结果：我们成功地从四种植物组织中提取到了总RNA，并通过琼脂糖柱纯化法进行了纯化。
样品的RNA浓度和纯度如下表所示。
| 样品 | OD260/280 | RNA浓度（ng/μl） ||------|-----------|--------------------|| 木瓜叶片 | 2.08 | 363.7 |该实验成功地提取了四种植物组织中的总RNA，并经过琼脂糖柱纯化制备出了高质量和高纯度的RNA样本。
RNA提取方法及原理
操作步骤
（一）动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、 动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫 克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。 RNA可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交， Poly(A)+ 分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆
实验流程图
细胞
氯仿 水相
细胞选择
纯化 RNA 基因组DNA
离心
贴壁细胞 悬浮细胞
加入裂解液 (TRNzol-A+)
有机相
pH5.7
2.4.2 苯酚法
细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白 的形式存在。因此，提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并 除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧 裂振荡，然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水 相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面 处形成凝胶层。
谢 谢
异硫氰酸胍—酚法提取植物组织总RNA
1） 取2g左右植物组织放入研钵中，反复加入液氮充分研磨至 粉末状。加4－5mL异硫氰酸胍溶液。转移到小离心管中，每 管0.5mL。 2） 置于冰上，顺序加入：50μl 2mol/L NaAc , 混匀，0.5mL水 饱和酚， 170μl CI，混匀。置冰上15min。 3） 各管平衡后，4℃,12 000g离心20-30min。转移上清到另一 管中，加入等体积的异丙醇，混匀，－20℃沉淀30min-1hr或 －80℃沉淀10min。4℃,12 000g离心20min回收RNA。 4） 用70％乙醇洗一次，4℃，12 000g离心5min。吸去乙醇， 空气中吹干RNA沉淀。用150μl 异硫氰酸胍溶液，65℃吹打 RNA沉淀溶解。
实验三 植物组织RNA的提取与分析
二、实验原理
Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速 抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、 降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。在氯仿抽提、 离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀 RNA。 用这种方法得到的总 RNA 中蛋白质和 DNA 污染很少， 可以用来做 Northern ，RT-PCR，分离mRNA，体外翻译和分 子克隆等。
实验三 植物组织RNA的提取与鉴定
1
一、实验目的
（1）通过本实验，了解RNA的结构和特点。
（2）学会使用Trizol法提取植物总RNA。
（3）学习和掌握总RNA的检测实验技术和实验
原理。
2
二、实验原理
RNA的提取是进行分子克隆和基因表达分析等研究的基 础。但 RNA 很容易被内源及外源的 RNase 降解，所以要得到 未被降解的、不含DNA与其它杂质的RNA是进行分子生物学 研究的前提。 目前较为成熟的分离RNA的方法有许多，用于植物细胞 总RNA的提取主要有苯酚法、异硫氰酸胍法、氯化锂沉淀法、 SDS/酚抽提法，或应用商品化的Trizol试剂和Qiagen等各类试 剂盒进行提取。但由于植物细胞具有坚硬的细胞壁，内含较 多的多糖、脂质、多酚等次生代谢物，同种植物的不同组织 和不同植物的同种组织材料，其RNA的提取方法也会有很大 差异。适宜的RNA提取材料处理方法也不尽相同。
三、仪器和试剂
1、仪器： 高速冷冻离心机、微波炉、稳压电源、水平电泳槽、 凝胶成像系统。 2、材料与试剂： 液氮、Trizol、氯仿、异丙醇、70%乙醇、DEPC处 理的蒸馏水、琼脂糖、1×TAE、上样缓冲液。
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四、实验步骤
1、RNA的提取 （1）称取0.1g新鲜植物叶片（小麦、烟草、吊兰等均可）置 于研钵中，加入液氮，迅速研磨成均匀的粉末，快速将全部 粉末转入1.5mL的无RNA酶的离心管中。 （2 ）向离心管中快速加入 1mLTrizol ，充分混匀后室温下放 置5min。 （3）4℃，12000r/min离心10min。 （4）吸取上清液置于一个新的1.5mL的无RNA酶的离心管中， 加入200uL氯仿，剧烈震荡1min，室温放置3min。
提植物总RNA及去DNA和反转录标准方法(会给实验室一大笔提取试剂盒的经费)
Trizol法提取植物总的RNA及反转录可用于RT-PCR【中文版】一、植物总RNA 的提取抽提RNA 所用的研钵酒精灼烧5-10min或灭菌.，器皿均高温高压灭菌，以去除RNA 酶，所有试剂都保证没有RNA 酶污染。
1) 1.5ml 离心管,取0.1g 组织在液氮中研磨至粉末, 立即加入1ml Trizol，涡旋充分混匀后放置2min。
2) 加0.2体积（氯仿Chloroform），剧烈振荡15s（vortex），室温放置3min（或不放置，直接离心）。
3) 4℃，12000rpm 离心5min，样品会分成3 层，取上层水相，取上清。
4) 加等体积的异丙醇，混匀，4℃放置10min以上。
或可以-80℃过夜。
5) 4℃，12000rpm 离心20min，4℃弃上清，管底管侧形成胶状沉淀（可看到白色沉淀）。
6) 加1ml 75%乙醇，充分溶解沉淀。
4℃，12000rpm 离心5min。
倒掉上清，用移液器吸干。
7) 晾干约10 min。
(不要晾太长时间，看不到水就可以加灭菌水)8) 加50μl灭菌的超纯水，65℃溶解，-20℃（最好-80℃）保存。
（注：要是处理DNase就不能加这么多水。
可以加5μl）整个提取步骤最好咋在4℃或冰上完成二、DNase I 处理消化植物总RNA 中的基因组DNA1) 将上述全部提取的植物总RNA 5μl，然后顺序加入1μl 10×缓冲液，1μl DNase，3μl RNase-free水，总体积10μl，充分混匀后，37℃温育30 min。
2）加入300ul 灭菌水提高体积，然后加入300ul PCI，vortex；4℃，12000rpm 离心5min；3) 加入1/10 体积3M 醋酸钠(autoclaved) pH 5.2, 和2倍体积的100% EtOH；（-20℃，10-30min或可以-80℃过夜）4) 4℃，12000rpm 离心15min，6)75% EtOH, 300ul, 12000 rpm 5min7) dry （10-15min）and add 30-50 ul of ddH2O三、反转录cDNA1) 在上述总体积为11μl 反应液中加入1μl Oligo(dT)18 引物4μl 5×缓冲液，2 μl dNTP，1μl 反转录酶，1μl RNase 抑制剂，总体积20μl，充分混匀后，42℃温育1-1.5hr。
植物组织RNA提取的难点及对策
植物组织RNA提取的难点及对策植物组织RNA提取是分子生物学实验的关键步骤之一，它的准确性和高质量对于后续的研究非常重要。
然而，植物组织RNA提取也存在一些难点，如RNA的完整性、污染物的干扰和样品数量的限制等。
本文将对这些难点进行详细讨论，并提出相应的对策。
首先，植物组织RNA提取的难点之一是RNA的完整性。
RNA易于降解，在提取过程中容易受到外界因素的影响而失去完整性。
为了解决这个问题，可以在提取过程中采取一系列的措施。
首先，应在低温环境下进行样品处理和提取操作，以减缓RNA的降解速度。
其次，应使用含有RNase抑制剂的试剂，如Trizol试剂或RNA保护剂，以防止RNA在提取过程中受到RNase的降解。
此外，还可以尽量缩短提取过程的时间，避免反复冻融和机械破碎等操作，以保持RNA的完整性。
其次，污染物的干扰也是植物组织RNA提取的难点之一、植物组织中含有丰富的多酚类物质、多糖和多样的宿主RNA，它们可能会干扰RNA的提取和纯化。
为了减少这些污染物的干扰，可以采取一些对策。
首先，可以在提取过程中添加含有高浓度盐的试剂，如高盐缓冲液，以帮助沉淀多酚类物质和多糖。
其次，可以使用热酚酸法，将RNA溶液与酚酸混合，使RNA与多样的宿主RNA形成沉淀，并将混合物中的杂质去除。
此外，还可以使用DNA消化酶或RNase去除宿主RNA和DNA的污染。
第三，由于植物组织通常具有较高的纤维素含量和丰富的抗氧化物质，样品量的限制也是植物组织RNA提取的难点之一、为了克服这个问题，可以采取一些策略。
首先，可以选择合适的提取试剂和方法，如使用高盐浓缩法或硅胶膜柱纯化法，以增加RNA的提取效率。
其次，可以将不同的组织样品混合提取，以增加RNA的总量。
此外，还可以通过PCR扩增技术，对RNA提取后的样品进行增幅，以获得足够的RNA量进行后续实验。
除了上述难点外，植物组织RNA提取还存在其他一些问题，如低RNA 浓度、RNA的质量不佳或存在一些强烈的抑制剂等。
植物总rna的提取实验报告（共4篇）
植物总rna的提取实验报告(共4篇) 植物总RNA的提取实验植物总RNA 的提取RNA 的制备与分析对于了解基因在转录水平上的表达与调节和cDNA 的合成都是必须的，RNA 的纯度和完整性对于Northern blot，RT-PCR 和cDNA 文库的构建等分子生物学实验都至关重要。
RNA 分离的方法很多，最关键的因素是尽量减少RNA 酶的污染。
本实验采用异硫氰酸胍(GTC)和β-巯基乙醇等抑制RNA 酶利用GTC 和N-十二烷基肌氨酸钠将促使核蛋白复合体解离，使RNA 与蛋白质分离,并将RNA 释放到溶液中, 用乙醇沉淀方法分离RNA。
本实验从番茄幼苗中提取总RNA 的提取，掌握Trizol 提取的方法和步骤。
一材料与方法1. 植物组织设备番茄（Lycopersiconesculentum）幼苗为材料，利用移液器，冷冻高速离心机，低温冰箱，台式高速离心机，液氮罐，陶瓷研钵，1.5ml 离心管等设备。
2. 试剂本实验中所有试剂均用无RNA 酶灭菌水，用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2 小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌而得到。
75%乙醇，氯仿:异戊醇(24 : 1 by volume) 或氯仿，异丙醇、无水乙醇、70％乙醇，Trizol 试剂等试剂由分子生物学实验室提供。
3. 实验方法1. 50-100mg 组织在液N 中磨成粉末后，加入1ml Trizol 液，注意样品总体积不能超过所用Trizol 体积的10%。
2. 研磨液室温放置5 分钟，然后以每1mlTrizol 液加入0.2ml 的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15 秒。
3. 取上层水相于一新的离心管，加入等体积异丙醇，室温放置10 分钟，10000r/min 离心10 分钟。
4.弃去上清液，按每ml Trizol 液加入至少1ml 的比例加入70%乙醇，涡旋混匀，4℃下10000r/min 离心5 分钟。
提取rna的实验报告
提取rna的实验报告1. 引言RNA（核糖核酸）是一种重要的生物分子，具有多种功能，如转录、翻译和调控基因表达等。
提取RNA是进行RNA研究的基础和关键步骤之一。
本实验旨在演示提取RNA的方法和步骤，并分析实验结果。
2. 材料与方法2.1 实验材料- 细胞样品：选取适当数量的细胞样品，如细菌、植物或动物细胞。
- 细胞裂解缓冲液：用于破坏细胞膜和核膜，释放RNA。
- 高盐溶液：用于沉淀细胞核和细胞膜碎片。
- 异硫氰酸酯/Lysis Buffer：用于裂解细胞，并保护RNA不被降解。
- 高盐洗涤缓冲液：用于去除DNA、蛋白质和其他污染物。
- 乙酰酚/醇：用于沉淀RNA。
- 乙醇：用于洗涤和纯化RNA。
- RNA稳定性缓冲液：用于保护RNA不被降解。
- RNase-free水：用于溶解和稀释实验材料。
2.2 实验步骤1. 收集细胞样品并转移到离心管中。
2. 加入适量的细胞裂解缓冲液，并进行充分混合。
3. 用离心机在高速旋转下离心细胞样品，使细胞膜和核膜碎片沉淀到底部。
4. 将上清液转移到新的离心管中。
5. 加入异硫氰酸酯/Lysis Buffer并进行充分混合，裂解细胞，并保护RNA不受降解。
6. 用离心机在高速旋转下离心样品，使细胞核和细胞膜碎片沉淀到底部。
7. 将上清液转移到新的离心管中，并加入高盐洗涤缓冲液。
8. 用离心机在高速旋转下离心样品，使杂质沉淀到底部。
9. 转移上清液至新的离心管中，并加入乙酸酚/醇，使RNA沉淀。
10. 用离心机在高速旋转下离心样品，将RNA沉淀到底部。
11. 弃去上清液，加入乙醇洗涤和纯化RNA。
12. 将RNA溶解于RNase-free水中，并在-80C储存RNA。
3. 结果与分析3.1 RNA浓度的测定使用分光光度计测定提取到的RNA的浓度，并计算所提取到的RNA的总量。
在本实验中，我们得到了细胞样品中的RNA浓度为50 ng/μl，总体提取量为200 μg。
3.2 RNA质量的评估通过琼脂糖凝胶电泳分析RNA样品的完整性和纯度。
提取植物rna的步骤及原理
提取植物rna的步骤及原理答案：一、实验目的通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法二、实验原理RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA，必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。
高浓度强变性剂异硫氰酸胍，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，失活RNA酶，所以RNA从细胞中释放出来时不被降解。
细胞裂解后，除了RNA，还有DNA、蛋白质和细胞碎片，通过酚、氯仿等有机溶剂处理得到纯化、均一的总RNA。
三、仪器、药品与试剂配方(一) 仪器1．低温离心机2．分光光度计3．琼脂糖胶电泳系统，用前先用1% Na OH溶液浸泡过夜，之后再用DEPC水浸泡冲洗。
4．高压灭菌锅5．研钵、剪刀、一次性手套等(二) 药品1.焦碳酸二乙酯(DEPC)2.吗啉代丙烷磺酸(MOPS)3.异硫氰酸胍4.醋酸钠(NaAc)5.氯仿6.苯酚7.甲醛8.乙醇9.乙二胺四乙酸(EDTA)10.琼脂糖11.异丙醇(三) 试剂配方1．0.1% DEPC水0.1 ml DEPC 加入100 ml三蒸水中，振摇过夜，再湿热灭菌。
2.2 mol/L NaAc、0.5 mol/L EDTA、4 mol/L异硫氰酸胍、4 mol/L LiCl等均用DEPC 水配制。
3.5ΧMOPS 电泳缓冲液(pH 7.0)MOPS 0.1 mol/LNaAc 40 mmol/LEDTA 5 mmol/L四、实验步骤（一）总RNA的提取（方案一）1.实验前10天左右播种水稻种子，在3-4叶期，剪取1.2 g幼叶。
放入研钵，在液氮中研磨成粉末状，移入10 mL离心管。
加入4 mol/L异硫氰酸胍4 mL苯酚3 mL2 mol/L NaAc (pH 4.8) 0.3 mL氯仿0.6 mL混匀，冰浴放置30 min。
2.4℃，8000 r/min，离心13 min。
3.弃沉淀，取上清至另一干净无菌离心管中。
4.加入2倍体积无水乙醇，-70℃，0.5 h。
植物总RNA的提取实验报告
植物总RNA的提取实验报告实验方法原理在液氮中研磨植物材料,使部分细胞破碎,进一步使植物细胞在裂解液中裂解,用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质,异丙醇沉淀核酸,溶解后经氯化锂沉淀总RNA,洗涤后得到高质量的RNA。
本实验旨在了解和掌握植物总RNA的分离和纯化方法。
实验材料植物RNA试剂、试剂盒尿素Tris-HClNa2 EDTANaClTris饱和酚醋酸钠氯仿-异戊醇异丙醇TE缓冲液LiCl仪器、耗材研钵烧杯离心机实验步骤取5～10 g材料放入研钵中,加入过量液氮,迅速研磨成均匀的粉末(在研磨过程中,保证材料始终浸在液氮中,研磨约30 min)。
待液氮自然挥发干净后,将材料转入100 ml的离心管中,加入6～8倍体积的裂解液1,轻轻搅拌后,0℃冰浴20 min。
12000 r/min,4℃离心15 min。
取上清,加入1/3体积的3 mol/L醋酸钠,1/5的氯仿异戊醇,轻轻摇匀,0℃冰浴20 min。
2000 r/min,4℃离心15 min(加5倍体积裂解液2溶解沉淀以提取DNA)。
取上清,加入等体积冰浴冷却的异丙醇,混匀且冰浴10 min。
5000 r/min,4℃离心10 min,将沉淀溶于5 ml含有0.1%SDS的TE 缓冲液中,加入8 mol/L LiCl使终浓度至2.5 mol/L,冰浴3 h或4℃过夜。
12000 r/min,4℃离心10 min。
70%乙醇洗涤沉淀两次,空气干燥10 min,溶于无菌水(DEPC焦碳酸二乙酯,处理),加入1/10体积10%的SDS,重复第4～6步骤,进一步除去蛋白质,70%乙醇20℃长期保存。
植物总RNA提取步骤
植物总RNA提取步骤1.实验前准备：-准备适当的植物材料，如叶片、茎等。
- 准备含有RNA酶抑制剂（RNase inhibitor）的提取缓冲液。
-将所有实验用具消毒。
-预先将磨杯、琼脂糖凝胶和RNA电泳仪等设备进行灭菌处理。
2.材料粉碎：-将植物组织用液氮快速冷冻并粉碎。
-将粉碎好的材料转移到预先冷却的磨杯中。
3.细胞破碎：-加入足量的提取缓冲液。
-使用磨杵快速研磨，以破碎细胞壁。
4.除去DNA和蛋白质：-将细胞破碎液转移到离心管中。
-加入等体积与细胞破碎液的冷背离心缓冲液。
-室温下离心10分钟，以去除碎屑和细胞核。
5.总RNA沉淀：-将上清液转移到新的离心管中。
-加入等体积的1:1异丙醇：丙酮的混合液，并轻轻颠倒混匀。
-室温下沉淀10分钟，使RNA沉淀到底部。
-以1万×g离心10分钟，以沉淀RNA。
6.RNA洗涤：-弃上清液，加入70%的乙醇进行洗涤。
-轻轻颠倒离心管，使沉淀的RNA与乙醇充分接触。
-以1万×g离心5分钟，将洗脱的RNA沉淀到底部。
-弃乙醇，将离心管倒置在纸巾上，使其自然风干。
7.RNA溶解：-加入适量的DEPC水（二甲基亚砜）或没食子酸钠进行RNA的溶解。
-使用微量离心把沉淀的RNA溶解均匀。
8.RNA质量检测：-使用紫外光谱仪检测RNA的浓度和纯度。
-使用琼脂糖凝胶电泳检查RNA的完整性。
总结起来，植物总RNA提取的步骤包括材料粉碎、细胞破碎、除去DNA和蛋白质、总RNA沉淀、RNA洗涤、RNA溶解和RNA质量检测。
这些步骤需要仔细操作，以保证提取到高质量的总RNA样品。
提取到的总RNA 可用于后续的RT-PCR、实时荧光定量PCR、Northern blot等分子生物学实验。
植物总RNA的提取和电泳
⑨ 加入500μl RPE到离心柱内，最大转速 离心2min，干燥离心柱，弃去搜集管；
植物细胞内旳RNA主要是 rRNA（占80～85 ％）、tRNA及小分子RNA（占10～15％）和 mRNA（占1～5％）。rRNA含量最丰富，由 25S、18S和5S几类构成。mRNA种类繁多，分
子量从数百至数千碱基不等，但绝大多数 mRNA在3’端都有一种polyA尾巴，所以，可 根据此特征用寡聚脱氧胸苷(OligodT)层析柱 从总RNA中将 mRNA分离出来。一般情况下， 提取旳总RNA也可用于Northern blot试验。
⑩ ⑩把离心柱接在一种新旳1.5 ml Eppen 管上，加入30～50μl 无RNase水 （0.1%DEPC处理），10000 rpm离心 1min，洗出RNA。若RNA产量在20μg 以上，用30～50 μl无RNase水再洗脱1 次。RNA样品保存于-20℃备用。
琼脂糖凝胶非变性电泳
所需试剂： 10ⅹ凝胶缓冲液
2. 样品制备：在离心管里，将RNA样品与 10×样品缓冲液以9：1百分比混合。65oC 温浴5－10分钟， 迅速在冰上冷浴5分钟 ， 瞬时离心数秒。对于Northern杂交试 验，总RNA上样量可到达10-30g。
3. 上样前凝胶须预电泳5min，随即将样品加 入上样孔。以5V/cm旳电压电泳1.5h-2.0h。
3. 试验材料与试剂
材料： 新鲜植物组织 （水稻） 试剂：Qiagen RNeasy植物试剂盒， 甲醛，琼脂糖电泳系统 ，凝胶成象系 统等。
RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南
RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS （溶液均需用DEPC处理过的水配制）。
操作步骤：1. 匀浆处理a. 植物组织:以叶片RNA提取为例.取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在Trizol中研磨,研磨要迅速,最好不要超过1min.，大约100mg 叶片使用1 ml Trizol.b. 动物组织:以鼠肝脏RNA提取为例.取新鲜或-70℃冻存组织,每50-100mg 组织加1ml Trizol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积一般不要超过Trizol体积的10%.c. 单层培养细胞.直接在培养板中加入Trizol裂解细胞,每10cm2面积加1ml Trizol.用取样器吹打几次.注意:Trizol加量根据培养板面积决定,不是由细胞数决定.如果Trizol加量不足,可能导致提取的RNA中有DNA污染.d.细胞悬液:离心取细胞，每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。
加Trizol 前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。
一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。
e.血液处理:直接取新鲜的血液,加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10min，10 000rpm 离心1min。
弃上清，收集白细胞沉淀。
每1ml 血液收集的白细胞沉淀中加入1ml Trizol。
2. 将匀浆样品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 可选步骤:4 ℃10 000rpm离心10min，取上清。
如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。
离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。
处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。
取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
4. 每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈震荡15s，室温放置3min。
rna提取实验报告
rna提取实验报告RNA提取实验报告引言：RNA（核糖核酸）是生物体内一种重要的核酸分子，具有多种功能，如转录、翻译和调控基因表达等。
在生物学研究中，提取RNA是进行基因表达分析和其他分子生物学实验的重要步骤之一。
本实验旨在通过提取RNA，探究其在基因研究中的应用。
材料与方法：1. 细胞样本：选择适当的细胞样本，如细菌、真菌、植物或动物细胞。
2. 细胞破碎：使用细胞破碎缓冲液将细胞破碎，并释放RNA分子。
3. 酚酸提取：将破碎后的细胞溶液与酚酸混合，形成有机相和水相分离的体系，RNA分子在有机相中富集。
4. 氯仿提取：将有机相与氯仿混合，进一步分离RNA分子。
5. 乙醇沉淀：通过加入乙醇，使RNA分子在乙醇中沉淀下来。
6. 洗涤：用75%的乙醇洗涤RNA沉淀，去除杂质。
7. 干燥：将洗涤后的RNA沉淀在室温下干燥。
结果与讨论：通过上述实验步骤，我们成功地从细胞样本中提取到RNA。
提取得到的RNA样品呈现为无色透明的溶液。
为了验证RNA的纯度和完整性，我们使用紫外吸收光谱进行检测。
结果显示，RNA样品在260 nm处具有明显的吸光峰，而在280 nm处的吸光较低，表明RNA的纯度较高，没有明显的蛋白质污染。
进一步，我们使用琼脂糖凝胶电泳分析RNA样品的完整性。
通过电泳，我们观察到RNA样品在琼脂糖凝胶上呈现为明亮的带状条带，表明RNA分子完整且没有明显的降解。
此外，我们还与分子量标准进行比较，确定了RNA样品的分子量范围。
RNA提取的成功为后续的实验提供了基础。
通过提取到的RNA，我们可以进行进一步的研究，如基因表达分析、RT-PCR、cDNA合成等。
RNA的提取是基因研究中不可或缺的步骤，其质量和纯度对后续实验结果具有重要影响。
然而，在RNA提取过程中也存在一些挑战和注意事项。
首先，细胞样本的选择和处理对RNA的提取至关重要。
不同细胞类型和处理方法可能会对RNA的产量和质量产生影响。
其次，实验操作中的严格无菌操作和RNA酶的严格防护是确保RNA提取成功的关键。
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四、实验步骤
1、RNA的提取 （5）4℃，12000r/min离心10min。 （6）吸取上清液置于一个新的1.5mL的无RNA酶的离心管中， 加入600uL异丙醇，-20℃放置30min。 （7）4℃，12000r/min离心10min。弃去上清液。 （ 8 ）向离心管中加入 1mL70% 乙醇，漂洗沉淀物。 4 ℃， 5000r/min离心3min。弃去上清液。（此步可省略） （9）待沉淀物自然干燥后，加入20uLDEPC处理的蒸馏水， 充分溶解后，即为RNA溶液。
8
四、实验步骤
2、RNA电泳检测 （3 ）上样电泳：将 5 μL RNA样品溶液和 5μL上样缓冲液混匀 后，上样，100V稳压电泳检查，根据指示剂迁移的位置，判 断是否中止电泳。切断电源后，再取出凝胶。 （4）照胶、拍照：将凝胶泡在EB溶液（注意：EB溶液为剧 毒物，需带上一次性手套拿取凝胶）中5min左右，进入暗室， 使用凝胶成像系统照胶并拍照。
实验三 植物组织RNA的提取与鉴定
1
一、实验目的
（1）通过本实验，了解RNA的结构和特点。
（2）学会使用Trizol法提取植物总RNA。
（3）学习和掌握总RNA的检测实验技术和实验
原理。
2
二、实验原理
RNA的提取是进行分子克隆和基因表达分析等研究的基 础。但 RNA 很容易被内源及外源的 RNase 降解，所以要得到 未被降解的、不含DNA与其它杂质的RNA是进行分子生物学 研究的前提。 目前较为成熟的分离RNA的方法有许多，用于植物细胞 总RNA的提取主要有苯酚法、异硫氰酸胍法、氯化锂沉淀法、 SDS/酚抽提法，或应用商品化的Trizol试剂和Qiagen等各类试 剂盒进行提取。但由于植物细胞具有坚硬的细胞壁，内含较 多的多糖、脂质、多酚等次生代谢物，同种植物的不同组织 和不同植物的同种组织材料，其RNA的提取方法也会有很大 差异。适宜的RNA提取材料处理方法也不尽相同。
二、实验原理
Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速 抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解过程中，能在破碎细胞、 降解细胞其它成分的同时保持RNA的完整性。在氯仿抽提、 离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀 RNA。 用这种方法得到的总 RNA 中蛋白质和 DNA 污染很少， 可以用来做 Northern ，RT-PCR，分离mRNA，体外翻译和分 子克隆等。
三、仪器和试剂
1、仪器： 高速冷冻离心机、微波炉、稳压电源、水平电泳槽、 凝胶成像系统。 2、材料与试剂： 液氮、Trizol、氯仿、异丙醇、70%乙醇、DEPC处 理的蒸馏水、琼脂糖、1×TAE、上样缓冲液。
5
四、实验步骤
1、RNA的提取 （1）称取0.1g新鲜植物叶片（小麦、烟草、吊兰等均可）置 于研钵中，加入液氮，迅速研磨成均匀的粉末，快速将全部 粉末转入1.5mL的无RNA酶的离心管中。 （2 ）向离心管中快速加入 1mLTrizol ，充分混匀后室温下放 置5min。 （3）4℃，12000r/min离心10min。 （4）吸取上清液置于一个新的1.5mL的无RNA酶的离心管中， 加入200uL氯仿，剧烈震荡1min，室温放置3min。
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五、实验结果与分析
1
28S 18S 5S
2
3
4
5
6
10
7
四、实验步骤
2、RNA电泳检测 （1）1%琼脂糖凝胶：称取0.2g琼脂糖，加入20mL 1×TAE缓 冲液，加入20uL甲醛溶液（可省略），在微波炉中加热， 反复加热、振荡2-3次，使琼脂糖充分融化。待凝胶冷却至 60℃左右，倒入插入梳子的凝胶板中（避免产生气泡）， 让凝胶自然凝固。 （ 2 ）待凝胶凝固后，小心拔出梳子，避免前后左右摇晃， 以免破坏胶面及加样孔，小心将凝胶和胶床放入电泳槽中， 加样孔靠近阴极的一端。