反相高效液相色谱法同时分离测定杜仲雄花及其产品中的 京尼平苷酸和绿原酸
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收稿日期： !""( +") +!& 第一作者： 董娟娥， 女， 博士研究生， 副教授， ,+-".( ： /01""*+ &!( ) $’-) 通讯联系人： 马希汉， 男， 教授， ,+-".( ： -" , 2. , %"3 + 4"%’’) $’-) $3) 基金项目： 中国科学院 “ 西部之光” （ !""% ） 人才培养计划 （ !""% 56"! ） 和西北农林科技大学青年专项基金资助 )
测液。 & & 取待测液 " ! & ， 在选定的色谱条件下注入高效 液相色谱仪 （! 0 #） ， 积 分 求 色 谱 峰 面 积， 以标准曲 线计算样品中 "$# 和 !"# 的含量。
!" 实验部分
! ! !" 仪器、 试剂和材料 ! ! ! ! !" 材料 & & 杜 仲 雄 花 和 杜 仲 叶 于 !$$" 年 采 自 西 北 农 林 科 技大学林学院杜仲优树汇集圃。杜仲雄花于盛花期 采集后立即杀青， 阴 干， 封 袋 保 存； 杜仲叶于 ’ 月中 旬采集后立即杀青， 阴干， 封袋保存。杜仲雄花茶来 自陕 西 杨 凌、 陕 西 略 阳、 河 南 汝 阳、 河 南 灵 宝 等 地。 杜仲叶绿茶为市售。 & & 使用前将上述各样品粉碎过 + 号筛， 在 ’$ ’ 真 空干燥箱中烘至恒重， 备用。 ! ! ! ! #" 仪器与试剂 & & (!&)+$ #*+ 型 %$&! 系 统 （ (,-./012 ） ， 包括 ($3)+$ #*+ 紫 外 检 测 器、&!)+$ #4*+ 输 液 泵 和 ((!" - 手动进 样 器。 56)+($$ 型 $,/7./ (+89 紫 外 分光光 度 计 （ (,-./012 ） ； :;02<8+$ 型 超 声 波 提 取 机 （ 天津科贝 尔 公 司 ） ； 超纯水发生器 （ 陕西超达公 司） 。 !"# 标 准 品 （ 德 国 =/7<>72,8 公 司 ） ； "$# 标 准品 （ 日本和 光 纯 药 业 株 式 会 社 ） ； 色谱纯甲醇 （美 国 ?->,87 公司） ； 水 为 双 重 蒸 馏 水； 乙 酸、 乙醇为国 产分析纯。
提出 “ 以叶代皮” 的观点， 因而杜仲叶 被列 入 了 !$$" 版 《 中华人民共和国药典》 ， 并以绿原酸作为其指标 成分
［%］
& & 准 确 称 取 "$# 标 准 品 +$, $ .@ 、 !"# 标 准 品 #$, $ .@ ， 分 别 用 甲 醇 溶 解 并 定 容 至 +$ .& ， 得到 +, $$$ @ A & 的 "$# 和 #, $$$ @ A & 的 !"# 标 准 品 贮 备液， 保存于 % ’ 冰箱中， 待分析时可按需要稀释成 不同的浓度。 & & 取上述 "$# 和 !"# 标准品贮备液各 % .& ， 置 于 +$ .& 容量 瓶 中 混 合， 用 甲 醇 定 容 到 刻 度， 即得 $, %$$ @ A & 的 "$# 和 +, !$$ @ A & 的 !"# 混 合 储 备 液， 于 % ’ 冰箱中冷藏保存备用。 ! ! # ! #" 色谱条件 & & 色 谱 柱： (,-.)+/9B 6$)C3( （ +"$ .. - %, ’ .. ， " !.） ； 流动相： 甲醇 ) 水 ) 乙酸 （ 体积比为 !%. (" . +） ； 流速： + .& A .-D ； 进 样 量： " !&； 检 测 波 长： !%$ D. ； 柱温： #$ ’ 。 ! ! # ! $" 样品处理和含量检测 & & 分别称取经 ’$ ’ 真 空 干 燥 的 样 品 $, "$$ @ ， 加 入 / 倍量的 水， 在 超 声 波 提 取 器 中 提 取 #$ .-D ， 定
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反相高效液相色谱法同时分离测定杜仲雄花及其产品中的 京尼平苷酸和绿原酸
! 董娟娥 & ， ， - 马希汉 &
（ & ) 西北农林科技大学 陕西省经济植物资源开发利用重点实验室，陕西 杨凌 #&!&"" ； ! ) 中国科学院水利部水土保持研究所，陕西 杨凌 #&!&"" ） 同时测定杜仲雄花及其产品中京尼平苷酸和绿原酸的方法。 所 摘要： 建立了利用反相高效液相色谱法 （ 78+98:; ） 用的色谱柱为 <%.-+="$> &8+?5< （ &%" -- . /0 ( -- ， % !-） ， 流动相组成为甲醇 + 水 + 乙酸 （ 体积比为 !/1 #%1 & ） ， 检 京尼平苷酸的 含 量 在 "0 "!% ’ "0 /"" @ A : 、 绿 原 酸 的 含 量 在 "0 "#% ’ &0 !"" @ A : 测波长为 !/" 3- 。在该色谱条件下， 范围内线性关系良好， 相关系数分别为 "0 *** # 和 "0 *** * ； 加 标 回 收 率 分 别 为 &""0 ! B 和 &""0 % B 。该 法 适 用 于 杜 仲 雄花及其产品中这 ! 种成分的含量分析。 关键词： 反相高效液相色谱法； 京尼平苷酸； 绿原酸； 杜仲； 雄花； 雄花茶 中图分类号： ?(%)- - 文献标识码： C - - 文章编号： &""" +)#&$ （ !""# ） "! +"!&# +"/- - 栏目类别： 研究论文
［ +! ］ 容至 "$ .& 。用 $, %" ! . 微孔滤膜过滤后， 得待
。文献 ［!］ 的 研 究 表 明， 杜仲雄花中也富含
与叶、 皮相类似的 绿 原 酸、 桃 叶 珊 瑚 苷、 黄酮类化合 物等活性物质， 是 亟 待 开 发 的 一 个 新 资 源； 此 后， 开 始了杜仲雄花的开发和利用。 & & 杜仲是雌雄异株， 其中雄株约占一半， 雄花产量 很高， 资 源 非 常 丰 富。 目 前， 花 饮 料 成 为 时 尚， 以杜 仲雄花为原料研制 和 开 发 的 产 品 已 陆 续 投 放 市 场， 随之而来 的 是 质 量 监 控 问 题。 绿 原 酸 （ !"#Hale Waihona Puke Baidu） 具有 抗菌、 利胆和降压等多种功能
［ +$ ， ++ ］
， 同时测定杜
仲颗粒和杜仲皮中 "$# 和 !"# 的方法也有文献报 ， 按文献 ［ +$ ］ 和 ［ ++ ］ 方法完成整个测定工作 需 时 较 长。 为 此，本 文 对 利 用 高 效 液 相 色 谱 （ %$&! ） 同时分离测定 杜 仲 雄 花 中 "$# 和 !"# 含 量的方法进行了研 究， 并对来自不同产地的杜仲雄 花茶中这两种成分 的 含 量 进 行 了 分 析， 为杜仲雄花 及以杜仲雄花为原料的产品的质量控制和质量标准 的制定提供了简便、 可靠的含量分析方法。
区） ， 栽种面 积 有 $( 万 公 顷。 《中华人民共和国药 典》 （ !""" 版 ）规 定 其 药 用 部 位 为 杜 仲 皮［ & ］。 研
・ !+/・
色
谱 ! ! #" 实验方法 ! ! # ! !" 标准品溶液的配制
第 !" 卷
#］ 究［ ! ， 发现， 杜仲叶含 有 与 杜 仲 皮 相 类 似 的 成 分， 并
［"］
；京 尼 平 苷 酸
（ "$# ） 具有消炎利胆 等 功 能， 在临床上降压作用明 显， 日本 健 康 卫 生 部 已 将 它 作 为 一 种 保 健 品 添 加 剂
［’］
。目前， 对 杜 仲 皮 和 叶 中 "$# 和 !"# 单 一 成
［( ) *］
分的含量测定 方 法 已 有 文 献 报 道 道
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