电泳银染色法
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电泳银染色法
酸性染色法(5-10ng)
1固定液:(100ml)
50%乙醇
10% 乙酸
40% 蒸馏水
固定凝胶至少两小时或者过夜
2敏化液:(105ml)
醋酸钠 4.1g
无水硫代硫酸钠0.25g
乙醇25ml
戊二醛2ml (25%)1ml (50%)
双蒸馏水:75ml
敏化两小时, 然后洗涤2次,每次20分钟
3染色液:(100ml)
硝酸银0.1g
甲醛(分析纯) 0.1ml
洗涤几秒钟,然后浸泡30分钟,用水冲洗一下
4孵育液:(100ml)
无水碳酸钠 2.5g
孵育一分钟,时间要严格执行.用水冲一下。
5显影液:(100ml)
无水碳酸钠 2.5g
甲醛0.1ml
碳酸氢钠0.05g
显影5-20分钟显影明显时,立即倒入终止液,终止反应6终止液:(100ml)
EDTA 钠盐 1.86g
摇匀约15分钟终止反应,用蒸馏水冲洗.
7.保存液:1%冰醋酸于4℃条件下保存。
注意严格控制水温,常温即可。
保证所有染色器皿绝对的干净;水的纯度对染色结果好坏影响很大;染色过程避免用手去接触凝胶,必须戴上一次性手套或无粉乳胶手套;所用化学试剂一定是人分析纯(AR)。