电泳银染色法

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电泳银染色法

酸性染色法(5-10ng)

1固定液:(100ml)

50%乙醇

10% 乙酸

40% 蒸馏水

固定凝胶至少两小时或者过夜

2敏化液:(105ml)

醋酸钠 4.1g

无水硫代硫酸钠0.25g

乙醇25ml

戊二醛2ml (25%)1ml (50%)

双蒸馏水:75ml

敏化两小时, 然后洗涤2次,每次20分钟

3染色液:(100ml)

硝酸银0.1g

甲醛(分析纯) 0.1ml

洗涤几秒钟,然后浸泡30分钟,用水冲洗一下

4孵育液:(100ml)

无水碳酸钠 2.5g

孵育一分钟,时间要严格执行.用水冲一下。

5显影液:(100ml)

无水碳酸钠 2.5g

甲醛0.1ml

碳酸氢钠0.05g

显影5-20分钟显影明显时,立即倒入终止液,终止反应6终止液:(100ml)

EDTA 钠盐 1.86g

摇匀约15分钟终止反应,用蒸馏水冲洗.

7.保存液:1%冰醋酸于4℃条件下保存。

注意严格控制水温,常温即可。

保证所有染色器皿绝对的干净;水的纯度对染色结果好坏影响很大;染色过程避免用手去接触凝胶,必须戴上一次性手套或无粉乳胶手套;所用化学试剂一定是人分析纯(AR)

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