10 ELISA结果影响因素
elisa方法开发成功的标准
elisa方法开发成功的标准成功开发elisa方法的标准可以从多个方面来考量。
以下是一些相关参考内容，以帮助确定方法是否达到了成功开发的标准。
1. 基准和质量控制：- 说明了方法的基线和可接受的结果范围。
- 确定了正负对照样本，并根据对照样本进行标准化和校准。
- 设定了可接受的误差范围，并在实验过程中确定了误差控制的步骤。
- 使用适当的控制样本检验方法的准确性和精确性。
2. 灵敏度和特异性：- 评估方法对目标分子的检测能力，即灵敏度。
- 确定方法对其他相关分子的特异性。
- 确定方法的检测限制，如最小可检测浓度。
3. 稳定性和可重复性：- 评估方法在不同时间、不同条件下的稳定性，例如重复性和恢复率。
- 确定方法在不同实验者之间的一致性。
- 评估方法在不同批次、不同设备或实验室之间的一致性。
4. 抗干扰性：- 检查方法是否受其他生物分子、化学物质或环境条件的影响。
- 确定方法对干扰物质的选择性和排除措施。
5. 结果解读和分析：- 提供了可靠的结果解读指南，以便正确理解实验数据。
- 确定方法的结果与其他相关检测方法的一致性，例如PCR和Western blot。
- 将结果与临床数据或其他实验数据相联系。
6. 具有危害和风险的控制：- 评估方法使用中可能存在的安全风险，并采取相应的措施来最小化风险。
- 提供了适当的安全操作指南，确保使用方法时不会造成伤害。
7. 文档和记录：- 提供了详细的实验步骤和操作指南，以便其他实验者复现方法。
- 记录了所有实验数据和结果，以便核查和审查。
- 提供了良好的实验记录以支持方法的稳定性和准确性。
8. 简化和高效性：- 提供了简化的实验步骤，降低了操作复杂性。
- 评估方法的快速性，包括操作时间、检测时间和结果分析时间。
总体而言，成功开发elisa方法应该能够准确、可靠地测量目标分子，具有良好的灵敏度、特异性和稳定性，并能够被他人复现并得到一致的结果。
同时，方法应该具有较低的干扰风险，并采取适当的控制措施保证实验者的安全。
影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法
影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法摘要】酶联免疫吸附试验是免疫酶技术中固相酶免疫测定的一种技术。
ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但是操作中的各个环节对试验的检测结果影响较大，如不注意排除干扰因素，有可能导致显色不全、花板等现象。
现将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。
【关键词】酶联吸附试验影响因素【中图分类号】R392 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）09-0369-021 试剂的因素1.1 试剂的选择试剂的选择是保证血液检测质量的关键要素。
虽然国家采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关，但不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别，要选购知名度相对高、具有“三证”的试剂，不要用无批号的试剂，最好选用与仪器配套的试剂。
更不要使用过期的试剂和混用不同批号的试剂。
使用质劣的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。
因此。
选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。
1.2 试剂的准备在临床实验室，对试剂的准备一般不太注意，通常的做法是在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
因此，在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20～30 min后，再进行测定，使试剂盒在使用前与室温平衡，这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度，以满足后面的测定需求。
2 样本的因素2.1 标本严溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性，严重溶血标本禁用。
2.2 标本的污染菌体可能含有内源性辣根过氧化物酶，可使实验出现非特异性显色。
因此，ELISA检测宜采集新鲜标本，如不能当时测定，5 d之内应4℃保存，1周后检测应低温冻存；同时，收集标本采用无菌试管，可防止标本的污染。
ELISA法检测HIV抗体影响因素分析
ELISA法检测HIV抗体影响因素分析作者：李志明来源：《中外医疗》 2011年第5期李志明(滨州市中心血站山东滨州 256600)【摘要】目的探讨ELISA法在检测HIV抗体中的影响因素,提高实验结果准确性。
方法从试剂的准备、样品的采集和储存以及仪器和操作等方面分析每一环节的质量控制对检验结果的准确性所起到的影响。
结果做好试剂的选择和准备,规范操作,做好每一环节的质量控制,在ELISA法检测HIV抗体中非常重要。
结论选择灵敏度高、特异性好的试剂,严格按照试剂说明书要求,注意操作中的诸多影响因素,能有效保证检测结果的准确性。
【关键词】 ELISA法 HIV抗体影响因素【中图分类号】 R187 【文献标识码】 A 【文章编号】 1674-0742(2011)02(b)-0191-02随着艾滋病流行形势的日趋严峻,新发现的感染者数量不断增加,艾滋病检测也显得越来越重要。
目前国内艾滋病初筛试验室检测HIV抗体的方法主要是酶联免疫法(ELISA)。
ELISA法是敏感性高、特异性强、重复性好的试验诊断方法,其试剂具有稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素,既适用于大规模筛查试验,又可以使用于少量标本的检测等优点。
但ELISA法的实验过程中有很多影响因素,如何消除诸多影响因素,保证检测结果的准确性,笔者在实际工作中经长期观察总结,对ELISA法检测HIV抗体影响因素分析如下。
1 试剂的准备《全国艾滋病检测技术规范》(2009版)规定,HIV抗体检测试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准,在有效期内的试剂,其中酶联免疫试剂应批批检合格,推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。
ELISA多为单纯HIV抗体检测试剂,HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。
HIV抗原或抗体被包于固相载体,加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体,加底物显色,用酶标仪测定结果。
ELISA检测方法
ELISA检测方法ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学检测方法，广泛应用于医学、生物科学及环境科学等领域。
该方法利用抗体和酶的相互作用，能够检测和测定特定抗原或抗体的存在和浓度。
下面将详细介绍ELISA的原理、步骤、应用以及优缺点。
ELISA的原理主要基于抗原-抗体结合的原理。
首先，在固体表面（晶髓酶标板等）上吸附或共价结合抗原，形成抗原固相。
然后，将待测样品加入酶标板孔中与固定的抗原发生反应，形成抗原-抗体复合物。
随后加入特异性的酶标记抗体，使其与复合物形成二抗三重复合物。
最后，通过添加底物，酶催化底物产生可检测的色变反应，测定抗原或抗体的浓度。
1.抗原固定：将已知浓度的抗原加入酶标板中，并使其吸附在固体表面，形成抗原固相。
固相吸附通常通过物理吸附或共价结合实现。
2.试样加入：将待测样品加入酶标板中与固定抗原发生反应，形成抗原-抗体复合物。
通常需要对样品进行初步处理，如稀释、加入染色剂等。
3.二抗加入：将特异性酶标记的二抗加入酶标板中，与复合物发生特异性反应，形成二抗三重复合物。
4.清洗：通过洗涤剂将非特异性结合物洗去，以减少干扰。
5.基质加入：加入特定底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯二胺）或ABTS（2,2'-联氨基二（2-甲基丙酰氧）乙烷磺酸铵），酶催化产生彩色反应。
6.反应停止：用酸、碱或金属离子等停止反应，阻断底物的氧化反应，维持产色稳定。
7.反应测定：使用光度计测定产生的色素的吸光度或荧光。
ELISA具有广泛的应用。
在医学领域，ELISA常用于检测血液中的抗体和抗原，从而诊断传染病、自身免疫疾病等。
在生物科学研究中，ELISA可用于测定细胞因子、蛋白质等生物大分子的浓度。
此外，ELISA也可以用于检测环境样品中的污染物，如重金属、农药等。
1.灵敏度高：ELISA可以检测到较低浓度的抗原或抗体，常常超过其他方法的敏感度。
2.特异性强：ELISA利用特异性抗体进行识别，可准确检测特定的抗原或抗体。
ELISA试验中常出现的问题及解决方法
ELISA试验中常出现的问题及解决方法作者：吴召坤，巩雪英，刘粉红来源：《兽医导刊》 2016年第8期吴召坤巩雪英刘粉红/陕西省丹凤县畜牧兽医中心ELISA试验，即酶联免疫吸附试验，具有敏感性高的特点，兽医实验实常用ELISA试验检测样品的抗原或抗体，ELISA试验中很多因素都会影响试验的结果，试验中常出现的有显色淡，灵敏度偏低、样品重复试验差异大、假阳性和假阴性等。
这些都会使我们对样品的真实结果做出误判，现就ELISA试验中非正常检测结果产生的原因进行分析，寻讨其解决的办法，以提高检测的准确性。
一、显色淡，灵敏度低1.查看试剂盒是否在有效期内，是否按照保存温度保存。
试剂盒过期或保存温度过高（正常保存温度2℃～8℃）都会影响显色。
2.试剂盒从2℃～8℃冰箱取出后在室温平衡至少20～30min。
3.温育时间不足或培养箱温度不足37℃，在ELISA试验中一定要注意温育时间和温度的重要性，在温育的过程中尽量不要打开温箱，僻免温度忽上忽下。
温育时间不足，温度过低都会影响显色。
4.严格按照试剂说明书要求的洗涤方法洗涤，洗涤时加洗涤液不能冲击过大，浸泡时间过长，要按照说明书上要求的洗涤次数洗涤。
5.加样不足，加样时要按照加样量调整好移液器的刻度，使用配套，内壁光滑清洁的吸头，吸头不能交叉使用，同时要对移液器进行校准，僻免加样不足使显色不足。
6.配制洗涤液的水要用纯水机过滤的水，水质应清洁无异常，不能用酸性过大或碱性过大的水，最好用新鲜合格的蒸馏水。
二、样品重复试验差异较大在检测过程中有时同一样品两次检测结果不一样，差异较大，这种情况可能存在以下几种原因。
1.两次检测样品数量可能不同，加样时间长短不一，反应时间长短不一，所以重复检测某一样品时，尽量与第一次加样时间一致。
2.加样量不一致，样品稀释倍数要准确，充分混匀，两次加样要使用同一个移液器。
3.温育时间和温度不一致，洗涤及操作人员不一致。
重复检测样品，操作条件，人员等检测过程应与上次保持一致。
影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施
影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施酶联免疫（EliSA）是检验科目前常用的免疫学检测方法之一，其操作方便、简单，不须要特殊设备，使其在各级医院都可应用。
但如果忽视了影响其结果的因素，难免会造成假阴性或假阳性的结果。
因此了解影响结果的因素，是减少差错事故发生很必要的。
1实验室操作人员的基本素质因素实验室人员的素质主要包括五个方面：思想素质、文化素质、技术素质、心理素质、身体素质。
因为我们是为人服务的，所以我们的职业道德水平直接关系到人们的生命健康和生命安全。
如果在工作中出现了张冠李戴，就有可能造成严重后果。
其次文化素质和技术素质很重要，我们必须熟练掌握本专业的基本理论和操作技术。
还要不断努力学习新的理论知识，努力提高业务水平。
有良好的心理素质勇于面对工作中的挫折，在繁忙工作中有条不紊。
所以人员素质问题对检验结果有重要的影响因素。
2标本处理因素实验室人员收到标本后应：“三查七对”，对不符合要求的标本和申请单拒收，合格标本及时分离血清，避免溶血。
提取血清时不能混有大量纤维蛋白或细胞成分，对不能及时检测的标本要妥善保存于4℃冰箱，做好原始记录。
从冰箱取出的标本要预温至室温，对冰冻的样品要融化好，充分混匀再用。
3操作过程的影响因素3.1 操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度（保持在18～25℃），反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，各种条件必须符合要求。
3.2 正确使用加样器，加样器应垂直加入标本或试剂，避免摩擦包被板底部。
加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要一次性使用，加样次序要与说明书一致，否则易发生错误，造成实验重复性差。
3.3 手工洗板加洗液时冲击力不能太大，洗涤次数不超过说明推荐的次数，洗涤液在反应孔内滞留的时间不宜太长。
不要让洗液造成孔间污染，导致假阴性和假阳性。
3.4 要保证加液量一致，我们在使用时感觉加样器比滴瓶加样准确，滴瓶加液量不准造成显色不一，造成判断错误。
临床医学检验：十免疫检测的质量控制测试题真题
临床医学检验：十免疫检测的质量控制测试题真题1、多选下述关于质控品和标准品的论述均正确的是()A．质控品具有含量已知或特性(阴、阳性)明确的特点B．质控品和标准品的基质最好与实际标本相同C．室内质控物的定（江南博哥）值不必溯源至标准品D．标准品可以分为一级标准，二级标准和三级标准E．理想的标准品应该是纯的正确答案：A, B, D, E2、判断题室内质控时，质控点的选择以需要设置质控的点设置质控物进行质控为原则。
()正确答案：对3、单选病毒性肝炎酶免疫检验中，下列质控物最重要的是()A．高值B．中值C．低值D．阴性值E．空白值正确答案：C4、单选关于免疫学测定的质量控制，正确的是()A．定性检测做阴、阳性对照就可以了，不用做室内质控B．参加室间质评的项目就不必再做室内质控了C．免疫学测定质量控制的目的是保证检测结果的重复性、准确性和各实验室结果具有可比性D．室间质评成绩合格就不用再做室内质控了E．室间质评的样本要有专人采用特殊试剂来做正确答案：C5、名词解释质量保证(quality assurance，QA)正确答案：为一产品或服务满足特定的质量要求提供充分可信性所要求的有计划的和系统的措施。
6、判断题在本实验室同一条件下做0CV及RCV室内质控时，所用的临界值质控血清及检测试剂盒必须是同一含量。
()正确答案：错7、单选室间质评定性测定的靶值应为()A．明确的阴性或阳性B．强阳性C．弱阳性D．参考方法值E．参考实验室均值±2S正确答案：A8、问答题标准品和质控品的不同点是什么?理想的标准品和质控品应具备什么特征?正确答案：标准品即含量确定的处于一定基质中其特性明确的物质，这种物质通常是纯品，可分为第一、第二和第三等三个等级。
一级标准品数量有限，可使用10至20年，其为冻干品，内含载体蛋白。
通常国际标准品(international standard，IS)为一级标准品，国家标准品则为二级标准，可溯源至一级标准，二级标准可用来维持校准。
ELISA常见问题
1、ELISA试验的稳定性问题做ELISA实验时，结果老是重复性不上，相同的材料和相同的操作方法做出的结果就截然不同，上午做时其OD在1.5，下午做时就是0.9了，所以都没有办法下结论，为什么会差异这么大呀？（1）多设平行空孔，请别人代劳，以判断究竟是否操作问题（2）对于活性非常高的包被物和酶标记物，如果第一次选择的范围恰好在其平台位置边缘，那么在重复的时候，每次取样带来的微量误差就很容易导致大的偏差了，特别是线性比较好的原料试剂，这个就很正常了。
建议每次取样的时候只使枪尖一点点位于液面下，以免吸嘴外面沾有少量抗原or抗体or酶而使结果重复不上。
2、酶不稳定，有何高招？（1）保存浓度尽量高些，（2）另外可以添加牛血清白蛋白等蛋白保护剂，以避免其被吸附或沉降以及被蛋白酶所降解。
（3）加入50%甘油-20度保存、避免反复冻融。
（4）还可以加入防腐剂防止长菌（注意不能用叠氮钠，其对HRP活性有很大影响）（5）现在一些公司也有商品化的酶标保护剂供应，可以考虑一下酶类的稳定性与保存方法的很大关系。
干燥的制品一般比较稳定，在低温情况下其活性可在数日甚至数年无明显变化，贮藏要求简单，只要将干燥的样品置于干燥器内（内装有干燥剂）密封，保持0－4度冰箱即可。
液态稳定性较差，贮藏时应注意以下几点：1、样品不能太稀，必须浓缩到一定浓度才能封装贮藏，样品太稀易降解、变性。
2、一般需加入防腐剂和稳定剂，酶常用的稳定剂有硫酸铵糊、蔗糖、甘油等，也可加入底物和辅酶以提高其稳定性。
此外，钙、锌、硼酸等溶液对某些酶也有一定保护作用。
3、贮藏温度要求低，避免反复冻融。
3、ELISA试验中不加标本的OD值反而高于加人的阴性标本的OD值，是什么原因呀？做夹心法ELISA试验中不加标本的OD值反而高于加人的阴性标本的OD值，是什么原因呀？最大的原因是封闭的效果不好，应该调整封闭液；可以尝试不同的封闭剂（BSA、胶脂奶粉、明胶等）、不同的封闭浓度、时间，试试哪个效果好阴性的里面的其他蛋白起到了封闭的效果4、边缘的阴性OD值老是比中间的偏高，什么原因呢？我做ELISA时，有一段时间在板的最后一条板孔的阴性的OD值经常比在中间的高，有时候高出0.1个OD，导致实验经常重复，但原因也找不到在哪里？这可能是由于ELISA的边缘效应造成的。
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已开封试剂盒抗体包被板条未用完的板条放回带拉链铝箔袋，封好口。
4℃条件下可储存1个月左右。
标准品冻干粉-20℃可储存6个月左右。
稀释后的标准品使用后请丢弃。
浓缩生物素化抗体浓缩液4℃可储存1个月左右，稀释后即用即弃。
《elisa检测技术》ppt课件(2024)
拓展ELISA检测技术在生物医学、环境监测 、食品安全等领域的应用，推动相关产业的 发展。
2024/1/28
22
06 ELISA实验操作技巧与注 意事项
2024/1/28
23
实验前准备工作建议
01
仔细阅读试剂盒说明书 ，了解实验原理、操作 步骤和注意事项。
2024/1/28
02
准备好所需的试剂、耗 材和仪器，确保它们的 质量和性能符合要求。
去除异常值、缺失值等， 保证数据质量。
2024/1/28
数据转换
对数据进行对数转换、归 一化等处理，以满足后续 分析需求。
统计分析
采用t检验、方差分析等统 计方法，对实验组和对照 组数据进行比较，评估差 异显著性。
13
结果解读与报告撰写
结果解读
根据统计分析结果，结合专业知 识对实验数据进行解读，如判断 样品中目标物质的含量是否超标
《elisa检测技术》ppt课件
2024/1/28
1
目 录
2024/1/28
• ELISA检测技术概述 • ELISA实验方法与步骤 • ELISA实验数据分析与解读 • ELISA技术在生物医学领域应用 • ELISA技术挑战与发展趋势 • ELISA实验操作技巧与注意事项
2
01 ELISA检测技术概述
发展多重ELISA检测技术，实现对多个目标物的同时检测，提高检 测效率。
20
新型ELISA技术发展趋势
数字化ELISA
利用微流控、微阵列等技术，实现ELISA检测的数字化、自 动化和智能化。
免疫荧光ELISA
结合免疫荧光技术，提高ELISA检测的灵敏度和特异性。
化学发光ELISA
酶联免疫吸附试验的影响因素
酶联免疫吸附试验的影响因素酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的实验技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物研发等领域。
它的原理是通过特异性抗体与抗原结合，再利用酶标记的二抗介导的颜色反应，来定量分析和检测目标物质。
在进行ELISA实验时，有多个因素会对实验结果产生影响，下面将详细介绍其中的几个主要影响因素。
1.试剂的质量ELISA实验的试剂质量对实验结果至关重要。
这包括酶标记抗体和底物酶的纯度、活性，抗原或抗体的纯度和浓度，以及稀释缓冲液的组成和pH值等。
选择高质量的试剂可以提高实验结果的准确性和重复性。
2.样本处理和储存条件样本的处理和储存条件也会对ELISA结果产生影响。
样本的收集、保存和处理方法需要标准化，以确保稳定性和一致性。
如血液或组织样本的离心速度、温度和时间等要控制一致。
另外，样本的冻结和解冻过程也需要避免反复，以防止损坏细胞结构和影响实验结果。
3.特异性抗体的选择ELISA实验需要选择特异性抗体与目标抗原结合。
抗体的选择要考虑其亲和力、特异性和纯度等特性。
如果抗体不够特异性，可能会导致非特异性结合和假阳性结果。
因此，在实验中选择合适的抗体对实验结果至关重要。
4.孵育条件和时间孵育条件和时间对ELISA实验结果也起着重要影响。
这包括孵育温度、时间和摇床的震荡速度等。
不同的试剂和实验需要不同的孵育条件。
孵育温度过高或过低，孵育时间太长或太短，都可能导致结果的偏差。
5.光度计的精度和校准ELISA测量实验结果时需要使用光度计，光度计的精度和校准对结果的准确性和可重复性至关重要。
定期检查和校准光度计以确保其准确性，并遵循使用指南来保持恒定的测量条件。
6.数据分析和计算ELISA实验得到的数据需要进行合理的分析和计算。
如对标准曲线进行拟合和计算待测样品的浓度等。
合理的统计分析和数据处理能够提高实验结果的可靠性。
elisa实验结果的解读方法
elisa实验结果的解读方法引言E L IS A（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学实验技术，用于测定体液或组织中特定分子的含量。
本文主要介绍e li sa实验结果的解读方法，帮助读者理解和分析实验结果。
ELIS A原理E L IS A实验通过将待检物质与已知标准物质或控制物质结合，再加入特异性的抗体进行反应，并通过酶标记的二抗对抗体进行检测。
E LI SA实验有不同的变种，包括直接EL IS A、间接E LI SA、竞争E LIS A和间接竞争EL IS A等。
实验结果解读步骤对于el is a实验的结果，通常需要进行以下步骤的解读。
步骤一：质检与标准曲线在解读实验结果之前，首先需要进行质检和标准曲线的建立。
质检用于检测试剂盒的稳定性和操作的准确性，而标准曲线则是根据已知浓度的标准样品建立的浓度-吸光度曲线，用于根据光密度值计算待测物质的浓度。
步骤二：光密度值的确定将待检样品与试剂混合后，通过酶反应，在指定波长下使用微量板读取吸光度值。
一般测量波长为450n m，也可根据实验要求进行调整。
得到的吸光度值表示待测样品中目标物质的含量，光密度值越高，含量越高。
步骤三：计算浓度利用标准曲线和待测样品的吸光度值，可以通过相关的计算公式计算出待测样品中目标物质的浓度。
步骤四：结果的可信度和统计分析在解读实验结果时，需要评估结果的可信度。
可信度的评估可以通过重复实验、标准差、方差分析等统计方法进行。
此外，是否存在显著差异和统计学意义也需要进行判断。
步骤五：结果的解释和讨论根据实验目的和实验结果，对结果进行解释和讨论。
可以从理论和实验角度，探讨结果的可能机制和潜在意义。
实验结果示例与分析为了更好地理解实验结果的解读方法，我们以某种蛋白质测定的e l is a实验为例进行分析。
研究目的：研究某种蛋白质在小鼠肿瘤组织中的表达量。
实验设计：采集小鼠肿瘤组织样本，制备样品，按照e li sa实验操作步骤进行实验。
浅谈影响ELISA结果因素分析
浅谈影响ELISA结果因素分析ELISA法即酶联免疫吸附测定法，该方法的检测原理主要是通过待测物和酶连接，使得抗原与抗体发生特异反应，通过观察底物和酶颜色的变化得出检测结果，ELISA法根据种类和变化能够分成双抗体夹心法、间接法、竞争法以及捕获法，其中双抗体夹心法主要用于抗原的检测，间接法主要用于抗体的检测，竞争法可用于抗原与抗体的检测，捕获法则用于测定血清中某种抗体亚型的成分[1]。
酶联免疫吸附测定法具有灵敏性高以及特异性高的特点，在临床上应用十分广泛，发挥出十分积极的临床价值，然而存在诸多因素诸如试剂、标本、操作方法以及环境等方面会影响检测结果的准确性，本文主要对影响ELISA结果因素进行分析，并给出针对性的解决措施，具体信息如下。
1 试剂方面的因素ELISA法的检测结果直接受到试剂质量优劣的影响，试剂盒的生产厂家和质量、标记物的免疫活性、抗原抗体的纯度、试剂是否有效与试剂的储存方式等方面均会对ELISA法的检测结果有程度不一的影响[2]。
为避免上述情况影响检测结果的准确性，①在检测过程中需要确保ELISA 试剂盒中阴性对照的质量，从而避免假阴性与假阳性的出现；②抗原的中和必须准确滴定，防止由于抗原浓度过低或者过高影响试剂盒的敏感性而导致假阴现象的发生；③重视试剂的质量，给予完善的室内质控与定期开展室间质量评估；④根据试剂盒的开封时间与保存的状况来实施全点定标，进而保障检测结果的准确性；⑤有研究显示ELISA法的检测结果不准确很大程度上是受到试剂质量的影响，因此生产厂家必须重视试剂的质量，有必要时可通过人新鲜标本方法学来评估试剂的质量。
2 标本方面的因素实验标本对ELISA法的检测结果也具有很大的影响[3]，主要包括内源性与外源性物质干扰。
内源性物质干扰主要包括药物、嗜异性抗体、人抗动物抗体、代谢产物、类风湿因子以及补体等，然而在ELISA法的检测过程中可通过下述方法处理标本来降低内源性物质干扰：①通过将抗原结合片段取代免疫球蛋白（IgG），将结晶片段（即Fc片段）消除，这样能够很大程度降低类风湿因子、嗜异性抗体以及人抗动物抗体对检测结果的干扰；②通过热处理的手段（56℃处理30min，63℃处理10min）与应用乙二胺四乙酸（EDTA）对标本进行稀释与2一巯基乙醇对标本进行稀释，以降低补体与类风湿因子对检测结果的干扰；③在标本中添加阻断剂如10％正常人血清和1％正常动物血清；④若检查发现标本中存在血红蛋白、胆红素以及血脂等成分时，必须重新采血检查[4]。
酶联免疫吸附(ELISA)实验具体步骤及详细说明
酶联免疫吸附（ELISA）实验具体步骤及详细说明酶联免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
（2）研究抗酶抗体的合成。
（3）显现微量的免疫沉淀反应。
（4）定量检测体液中抗原或抗体成份。
本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。
这种方法欲测的抗原必须有两个可以与抗体结合的部位，因为其一端要包被于固相载体上的抗体作用，而另一端则要与酶标记特异性抗体作用。
因此，不能用于分子量小于5000的半抗原之类的抗原测定。
我们用在霍乱肠毒素的测定。
HbSAg及HbS的测定。
具体步骤一、包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度（1～10 ug /ml），每凹孔加0.3 ml，4℃过夜，或37℃水浴3小时，贮存冰箱。
二、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。
三、每凹孔加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37℃作用1～2小时。
四、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。
五、加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液，37℃作用1～2小时或由预试实验确定作用时间。
六、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。
七、加入0.2ml底物溶液于每个凹孔(OPD或OT)，室温作用30分钟（另作一空白对照，0.4 ml底物加0.1 ml终止剂）。
八、加终止剂：每凹孔加2M H2SO4或2 M柠檬酸0.05 ml。
九、观察记录结果：目测或用酶标比色计测定（OPD用492nm）OD值。
注意事项1.可溶性抗原或抗体吸附于固相载体而成为不溶形式，这是进行酶标记测定的基本条件。
ELISA结果影响因素
样本保存不当
01
保存温度
样本保存的温度过高或过低，可能会影响ELISA结果。一些蛋白质成分
可能会因为温度变化而发生变性，导致其与抗原或抗体的结合能力改变。
02
保存时间
样本保存时间过长，可能会导致某些成分降解或发生变化，从而影响
ELISA结果。
03
保存介质
用于保存样本的介质，如某些化学物质或防腐剂，可能会与待检测成分
01
仪器设备故障可能导致ELISA实验 结果不准确，如加样器、洗板机 、酶标仪等出现故障，影响实验 的重复性和准确性。
02
故障可能导致加样不准确、洗板 不彻底或酶标仪读数不稳定等问 题，进而影响实验结果。
仪器设备未校准
仪器设备在使用前需要进行校准，以确保实验结果的准确性 。
未校准的仪器可能导致加样量不准确、吸光度读数偏差等问 题，进而影响ELISA结果的判定。
详细描述
实验室湿度应控制在40%-60%之间，以避免实验材料受潮或过度干燥。如果实验室湿度不稳定，可 能会导致抗体和抗原的变性，从而影响实验结果。因此，实验室应安装湿度计，并定期检查以确保湿 度的稳定性。
实验室清洁度
总结词
实验室清洁度对ELISA结果的影响不容忽视。灰尘、污渍和微生物污染可能影响实验结果，导致假阳性或假阴性。
详细描述
实验室应保持清洁，每天清洁台面、地面和仪器表面，每周进行一次全面清洁。实验操作过程中，应避免交叉污 染，使用一次性手套和实验服。此外，实验室应定期进行微生物检测，以确保环境卫生符合标准。
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加样量不准确
温育时间不足或过长
温育时间对ELISA实验结果影响较大， 温育时间不足或过长均可能导致抗原 抗体反应不充分，降低实验敏感性。
ELISA知识简介PPT课件
总结与展望：ELISA技术发展趋 势预测
2024/1/26
28
新型标记物在ELISA中应用前景探讨
荧光标记物
高灵敏度、宽线性范围，适用于低丰度蛋白检测 。
酶标记物
高催化活性，可放大信号，提高检测灵敏度。
纳米材料标记物
独特的光学、电学性质，可增强信号并降低背景 干扰。
2024/1/26
29
2024/1/26
肿瘤治疗监测
利用ELISA技术监测肿瘤患 者治疗过程中肿瘤标志物 的变化，评估治疗效果和 预后。
肿瘤复发监测
定期采用ELISA方法检测肿 瘤患者康复期肿瘤标志物 的水平，及时发现肿瘤复 发迹象。
16
药物滥用检测中ELISA方法应用
毒品滥用检测
采用ELISA技术检测尿液或血液中的毒品代谢物，如吗啡、可卡 因等，用于毒品滥用的筛查和确认。
多重检测技术在提高通量方面优势分析
1 2
多通道检测
同时检测多个样本，提高检测效率。
多重荧光标记
实现多目标蛋白同时检测，减少实验误差。
3
微流控芯片技术
集成化、微型化，降低样本消耗和检测成本。
2024/1/26
30
自动化和智能化设备在ELISA领域应用前景
自动化样本处理
减少人工操作，提高实验可重复性。
等疾病。
2024/1/26
03
其他自身抗体检测
ELISA还可应用于抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）、抗磷脂抗体（
APL）等自身抗体的检测，为自身免疫性疾病的诊断提供依据。
15
肿瘤标志物筛查与监测进展
肿瘤标志物筛查
采用ELISA方法检测肿瘤标 志物，如AFP、CEA、 CA19-9等，实现肿瘤的早 期发现和筛查。
elisa实验报告结果分析
elisa实验报告结果分析Elisa实验报告结果分析Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测生物样本中的特定分子，如蛋白质、抗体、细胞因子等。
在这篇文章中，我们将对一份Elisa实验报告的结果进行分析和解读，以帮助读者更好地理解实验结果。
首先，让我们来看一下实验报告中的基本信息。
实验报告中应包含实验目的、方法、样本信息、实验结果以及数据分析等内容。
在本次实验中，我们的目的是检测血清中特定抗体的浓度。
实验使用了一种特定的抗体试剂盒，按照厂家提供的方法进行操作。
样本来源于一组健康人群，共有100个样本进行了检测。
接下来，我们来看一下实验结果。
实验报告中通常会给出每个样本的测量值，以及相应的阳性对照和阴性对照的测量值。
这些测量值通常以光密度（OD）的形式给出。
在本次实验中，阳性对照的光密度为0.8，阴性对照的光密度为0.1。
根据实验报告，我们可以看到，在100个样本中，有80个样本的光密度超过了阳性对照的光密度，而余下的20个样本的光密度低于阴性对照的光密度。
接下来，我们需要对实验结果进行数据分析。
首先，我们可以计算阳性率和阴性率。
阳性率是阳性样本数除以总样本数的比例，阴性率是阴性样本数除以总样本数的比例。
在本次实验中，阳性率为80%，阴性率为20%。
这意味着在这组健康人群中，大约80%的人体内存在着这种特定抗体。
另外，我们还可以计算阳性样本的平均光密度和标准差。
平均光密度是所有阳性样本的光密度之和除以阳性样本数，标准差是用来衡量数据分散程度的指标。
通过计算，我们可以得到阳性样本的平均光密度为1.2，标准差为0.3。
这表明阳性样本中的抗体浓度存在一定的变异性，标准差越大，说明样本间的差异越大。
此外，我们还可以进行一些统计学分析，如t检验或方差分析，来比较不同组别之间的差异。
比如，我们可以将样本分为不同的年龄组或性别组，然后比较它们之间的抗体浓度是否存在显著差异。
通过这些统计学方法，我们可以更全面地了解抗体浓度与各种因素之间的关系。
医学免疫学检验-讨论问题参考答案
TRUST试验讨论问题参考答案1.TRUST试验中VDRL抗原包含哪些成分？各起什么作用？心磷脂：与反应素结合；卵磷脂：加强心磷脂的抗原性；胆固醇：增强抗原的敏感性。
三者按适当比例配制的乙醇溶液。
EDTA防止抗原变性（半年内），氯化胆碱灭活待检血清中补体。
2.什么是反应素，反应素是如何产生的？其有什么免疫学特性？反应素为抗类脂质（心磷脂）抗原的抗体。
由螺旋体本身释放的脂蛋白样物质和心磷脂或病损细胞释放的类脂诱导产生。
非特异性抗体，具有广泛的交叉反应性，可与200多种抗原反应。
3.TRUST试验阳性，即患者血清中检出反应素就能诊断为梅毒吗？为什么？TRUST试验阳性不能确诊为梅毒。
TRUST试验检测的反应素为梅毒螺旋体非特异性抗体，除梅毒外，自身免疫病（SLE、RA、SS等）、恶性肿瘤、动静脉血栓、心血管病、妊娠、反复流产、疟疾、结核、麻风、HIV感染、其它性传播疾病、其它螺旋体感染、多种皮肤病、发热疾病、多次输血、新近免疫接种、静脉注射毒品者等有一定的阳性率（生物学假阳性），但反应素效价通常＜1:8，生物学假阳性反应中约2/3在6个月或更短时间内消失。
反应素阳性需结合临床综合考虑才能作出诊断。
一期梅毒初发时反应素阳性率70%～90%（很多患者初次测定反应素可能为阴性，间隔2周后再测定）；二期梅毒患者阳性率可达100%；晚期梅毒患者阳性率显著下降，为40%～95%。
4.TRUST试验阳性，为什么还要进一步做TPPA试验？TRUST试验检测的反应素为梅毒螺旋体的非特异性抗体，在低危人群筛查时假阳性率较高，故阳性结果需用密螺旋体抗体实验（如TPPA等）确认。
ELISA检测HBsAg讨论问题参考答案1.请从测定操作方面讨论ELISA试验结果的影响因素。
①标本采集与保存：溶血、长菌、贮存时间过长、血凝固不全、反复冻融等；②试剂准备：用前将试剂盒平衡至室温；③仪器设备：加样枪、酶标仪、洗板机、保温箱和温度计等性能、质量、校准和准确性；④加血清标本及试剂：加到孔底，不可太快、溅出和产生气泡；⑤温育：温度和时间要准确、足够；⑥洗板：用试剂盒内配的洗涤液，洗涤液加满，洗涤次数和每次洗涤的浸泡时间要够，拍干；⑦显色：温度和时间要准确、足够；⑧终止反应：酶标仪比色，必须加终止剂，终止酶促反应和转换吸收峰；⑨结果判断：以试剂盒说明书为准；⑩酶标仪比色：最好用双波长法，并在仪器设定时不设空白。
Elisa影响因素及措施整理
一、①一般检测试剂盒或检测试剂从冷藏或冷冻状态拿到室温使用需先在室温下平衡30 ~60 min，各试剂在使用前充分混匀。
②酶标仪测定结果，准确性决定于ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质量和软件的算法。
二、操作不当导致1、加样多、操作持续时间长，尤其是环境温度高时会导致个板孔间反应进程差异；2、除包被外，都宜采取45°加样，且要避免加到侧壁上；3、加样器不稳定、枪头不均一、试剂溅出、操作习惯不好等造成空间加样量不均一会对结果造成较大影响。
4、孵育时间过长，会导致非特异性反应增强；5、显色和终止加液时应避免气泡产生，以免影响检测读数；6、酶标板不宜叠放以减少受热不均，可采取水浴；7、贴密封膜，防止污物浸入和液体蒸发。
8、Elisa 实验用的各试剂都要妥善配置和保存、避免污染，不合格的蒸馏水都可导致空白值或背景值升高。
三、检测样品处理不当引起溶血或污染1、血清或血浆标本分离不好或发生溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色；2、待检标本污染，菌体中可能含有内源性HRP也会产生假阳性反应；3、在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA 测定中会导致本底过深、造成假阳性；4、标本凝固不完全：血液通常在采集后半小时后开始凝固，18〜24h完全凝固。
如果在血液未凝固时即离心分离血清，则可因纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果。
为了缩短标本处理时间，可以在离心前将血液标本置于温箱中温育或者采用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂以加速血清的分离。
5、标本的反复冻融会因其所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，30使抗体效价跌落从而引起假阴性结果，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冻存。
此外，标本在冻存时会因蛋白质局部浓缩，分布不均，因此重新融解的标本必须混匀，但不要进行剧烈振荡，反复颠倒即可，产生泡沫或样品的过度混合将引起血清蛋白的变性。
elisa结果影响因素
ELISA实验原理
抗原抗体反应的特异性
+
酶高效催化反应的专一性
抗原或抗体在体外结合到某种固相载体表面后， 仍然能保持其免疫学活性并能相互特异性结合。
抗原抗体复合物与酶标二抗结合， 加入合适的底物，在酶的作用下显色， 颜色深浅与特异性抗体成比例关系， 可进行定性和定量分析。
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ELISA检测方法
结果影响因素——试剂因素
试剂的选择
试剂的选择是保证血液检测质量的关键要素。不同厂家的试剂在 使用效果上存在差异。要选购知名度相对高、信誉可靠的试剂。
重视试剂质量同时有效地进行室内质控以及参加室间质量评价。 特别是室间质评可以发现实验本身不易发现的不准确性，了解各实验 室之间结果的差异， 帮助校正使结果具有可比性。
间接法和夹心法ELSIA
竞争法ELISA
（阳性孔呈色深于阴性孔 ) （阳性孔呈色浅于阴性孔）
1.定性结果可以用肉眼判定 1.阳性判定值法
2.阳性判定值
2. 抑制率法
3.标本/阴性对照比值
3.不可用肉眼判断
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结果影响因素
ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体 测定。但测定中影响因素较多，而且其操作中 有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应 外，有时会出现一些错误结果。引起错误结果 的原因主要有：1、标本因素 2、试剂因素 3、 操作因素 4、环境因素。
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结果影响因素——标本因素
标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物 质所致，分为内源性物质和外源性物质两种。
内源性物质
类风湿因子 补体
嗜异性抗体 自身抗体
医源性诱导的抗体
交叉反应物
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外源性物质