影响细胞ELISA结果的主要因素
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文章编号： （9118） 8111L6<1< 1:L13:8L19
经验交流
影响细胞 !"#$% 结果的主要因素 &’( )*+,- .*/0,-1 23.45(3/236 0’( -(1540 ,. /(44 !"#$%
李蓉芬， 陈 敏， 康运生， 钟小林， 何凤田
（第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室， 重庆 <111;3） 温） ， 1 2 964 的戊二醛较 <4 的多聚甲醛的固定效果好。
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细胞内源性过氧化物酶的检测和去除
对固定过的细胞， 直接加入邻苯二胺 （/C[） 底物显色， 观察 内源性过氧化物酶的情况。对内源性过氧化物酶水平很低的 细胞无需进行内源性过氧化物酶的处理， 而对内源性过氧化物 酶水平较高的细胞则需用甲醇配制的 1 2 ;4 双氧水于室温下作 用 ;1 .$- 予以去除。
作者简介： 李蓉芬 （8?7; @ ） ， 女， 安徽省宿州市人， 硕士， 实验师， 主要从事蛋 白酶体的结构与功能方面的研究， 发表论文 3 篇。电 话： （ 19; ） 73:69978 万方数据 收稿日期： 修回日期： 9111L89L16； 9118L19L83
我们使用 C=0 配制的 814 小牛血清、 94 牛血清白蛋白、 结 64 绵羊血清、 64 市售脱脂奶粉等几种不同试剂进行封闭， 果以 64 脱脂奶粉的封闭效果最好。
参考文献：
［!］ -2345 . 6，7489: 7 1，;2<=> ? @， !" #$ " .:A4B9C4=> A9 :=DE9B32>A9F2 ［ L］ G=33> 4: E5=DF2A94C 2EA5E4A4>： 2 H9A=:A423 F2EI=E J9E :=DE9H2A5K " M34: *8H （!） ： (###， !N (O ’ O# " /5=DF2A93， ［(］ +4D P，QDE39 @，R9:SQE2J=:>A=4: T" M=33S*+,-. D>4:U B=A2SU232GA9>4C2>= ［ L］ （! ’ (） ： G9:VDU2A=C 2:A4B9C4=> " L ,FFD:93 6=A59C>， (###， (O) !&O ’ !0W " ［O］ +== L M，M=R2339> . 6，72==F .，!" #$ " ;=A=GA49: 9J 2:A4SG939: 2:A4B9C4=> ［ L］ 4: 4:J32FF2A9EK B9<=3 C4>=2>= D>4:U 5DF2: GD3ADE=C G939:4G G=33> " QDA， （(） ： !XXX， )) !X0 ’ (#( "
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应设多孔重复
尽管采取了上述措施， 但有时无法确保每孔的细胞数完全 一致， 也不能保证细胞 !##$ 均匀铺于孔底， 故无论是对照孔， 还是实验孔， 都应设 ) % & 个复孔， 取其结果平均值， 从而最大 限度消除系统误差。 影响因素较多， 综上所述， 细胞 *+,-. 与常规 *+,-. 相比， 操作过程中应多加注意。 关键词：细胞； 酶联免疫吸附试验； 影响因素 万方数据 文献标识码：1 中图法分类号：/))0 " 0!
3.学位论文 荆结线 卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的测定以及与细胞因子关系的研究 2007
目的：探讨卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞在CD4+T细胞的分布，分析CD4+CD25+调节性T细胞、CD44与卵巢癌患者临床病理学特征的关系；研究 CD4+CD25+调节性T细胞与Th1、Th2类细胞因子、CD44、CA199、CA125的相关性。 方法：流式细胞仪测定53例卵巢癌患者、44例卵巢良性疾患、45例健康人外周血CD4+CD25+调节性T细胞、CD44的比例；Th1类细胞因子白介素-2(IL-2)、 γ-干扰素(INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)；Th2类细胞因子白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)的水平；采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)法检测卵巢癌患者血清中的CA199、CA125的水平。 结果：(一)：卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(21.95±6.80)％、CD44的比例(128.45±34.72)％明显高于卵巢良性疾患(12.57±5.12)％、 (83.75±19.49)％和健康对照组(10.77±3.02)％、(79.92±21.83)％，(均P<0.001)良性疾患与健康对照组无差异；手术前的卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细 胞(21.95±6.80)％、CD44比例(128.45±34.72)％明显高于手术后的患者(16.41±5.84)％、(103.41±37.25)％，(均P<0.001)。 (二)：CD4+CD25+调节性T细胞、CD44与患者的年龄、职业没有关系；卵巢浆液性腺癌CD4+CD25+调节性T细胞为(23.58±7.08)％，明显高于混合性 (18.30±5.46)％，有统计学意义(P<0.05)；与黏液性腺癌(22.06±6.08)％无差异；Ⅳ期卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞比值(28.79±4.26)％、CD44比值 (157.24±33.57)％明显高于Ⅲ期(20.01±6.27)％、(124.31±29.46)％和Ⅰ-Ⅱ期患者(17.97±4.50)％、(116.08±30.93)％，(均P<0.001)；Ⅲ期与Ⅰ-Ⅱ期 之间无差异；CD4+CD25+调节性T细胞、CD44与肿瘤的浸润(23.61±6.52)％、(143.38+35.11)％；淋巴结转移(24.05±6.74)％、(146.32±35.87)％；腹水的形 成(24.06±6.73)％、(146.52±35.86)％有关，(P<0.05～P<0.001)；低分化的卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞(25.05±5.96)％、CD44(152.50±32.49)％与 高分化患者(16.03±0.80)％、(105.95±15.43)％比较，有统计学意义，(P<0.05)，而与中分化(21.82±6.53)％、(126.26±36.00)％比较无差异。 (三)：卵巢癌患者Th1类细胞因子IL-2、TNF-a、IFN-r的水平(0.87±0.25)pg/ml、(1.09±0.34)pg/ml、(7.56±2.25)pg/ml明显低于健康对照 (2.38±1.09)pg/ml、(3.28±1.36)pg/ml、(19.04±4.59)pg/ml，(均P>0.001)。而Th2类细胞因子IL-6的水平(86.28±55.92)pg/ml与对照组 (5.04±2.69)pg/ml比较显著升高，(P<0.001)，IL-4(4.86±2.94)pg/ml、IL-10(1.07±2.30)pg/ml与健康人(5.62±3.59)pg/ml、(4.46±2.31)pg/ml之间无差 异。通过nonparametric相关分析，卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞与IL-2、TNF-a、IFN-r存在负相关，相关系数分别为r=-0.658，P<0.05：r=0.591，P<0.05;r=-0.695，P<0.05。与Th2类细胞因子IL-6存在正相关，相关系数r=0.784，P<0.001。 (四)：卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞与CD44、CA125之间存在着正相关，分别r=0.406，P<0.05； r=0.563，P<0.001；而与CA199之间没有相关性 ，r=0.036，P>0.05。 结论：(一)：卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞、Th2类细胞因子增高、Th1类细胞因子降低，这可能是卵巢癌患者免疫功能下降的一个重要原因。 (二)：CD4+CD25+调节性T细胞、CD44比例与肿瘤的分期、组织学类型、分化程度、浸润、淋巴结转移、腹水的形成有关。 (三)：卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞与Th1类细胞因子之间存在着负相关，而与Th2类细胞因子之间存在正相关。CD4+CD25+调节性T细胞可能通 过Th1、Th2类细胞因子的调节发挥对效应性T细胞的抑制作用。 (四)：同步检测卵巢癌患者血清CA125及细胞黏附因子CD44以及与卵巢癌和细胞免疫功能有关的细胞因子水平，这不仅从肿瘤细胞产生癌蛋白水平上可以判 断肿瘤的恶性程度及发展特征，还可以从机体的免疫状态上了解肿瘤的发展状况。对疾病的控制，治疗方案的制定有重要的意义。
相似文献(10条) 1.期刊论文 朱晴晖 细胞-酶联免疫吸附试验及其应用 -检验医学2006,21(z1)
酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)问世数十年来,广泛应用于检测各种体液中的可溶性抗原或抗体.在传统的ELISA中,微孔板 上包被的是可溶性的抗体或抗原,然而在免疫学研究和临床检测时,需要了解免疫活性细胞表面表达的特定分子以对细胞特性进行认定和分类,亦需测定抗某种细 胞的抗体或评价某种细胞的功能,因而传统的ELISA中的包被物或受检物就要被替代,检测模式有所改变.1971年,Avrameas等[1]首次用酶标记抗体定量测定细胞 表面的免疫球蛋白,又经数年的发展,形成了以细胞包被酶标板测定细胞表面特定分子的细胞-ELISA.近年来细胞-ELISA衍生出多种模式(方法),并筛选出适合细 胞-ELISA的标记酶.目前已有多种成熟的细胞-ELISA的模式,并在检验医学中得到应用.
细胞 WQX0R （酶联免疫吸附试验） 是用细胞代替可溶性抗原 （或细胞培养板） 进行免疫学检测的一种有 包被于 ?7 孔酶联板 效方法， 该方法特别适用于抗原位于细胞膜上而相应抗原的特 ［8 5 ;］ 。我们在实际操 性又不十分清楚或抗原难于纯化等情况 作过程中体会到细胞 WQX0R 的结果理想与否与多种因素有关， 概括起来包括以下几方面。
929
贴壁细胞的固定
7
Байду номын сангаас
细胞状态
应使用对数生长期的细胞。此期细胞的活力最好， 抗原表 达水平最高。对贴壁细胞来讲， 此期细胞贴壁最牢。
将细胞接种于 ?7 孔新细胞培养板中， 培养 ;7 E 左右， 使细 弃培养基， 温 C=0 洗 9 次， 充分干燥 胞达 314 5 ?14 满孔密度， 后， 同上固定 3 .$-， C=0 洗 ; 次。此处应注意的问题有： " 细胞 接种前应计数： 旨在尽量使每孔中的细胞数一致。 # 细胞洗 涤： 应用温 C=0 洗涤， 否则会因骤冷而使细胞脱落。这一点在 同悬浮细胞固定中应 冬天操作时尤为重要。$其它注意事项： 注意的问题 “ % 5 ’” 。
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反应后洗涤
为了避免细胞非特异性吸附抗体， 每步反应后应进行充分 （常规 WQX0R 指包被 洗涤。洗涤次数和时间均应较常规 WQX0R 物为可溶性物质） 增加。 " 洗涤次数和时间： 每步反应后至少 每次洗涤时间不少于 6 .$-。 # 振荡洗涤： 在洗涤过 应洗 6 次， 程中， 使酶联板处于温和振荡状态， 以保证洗涤充分。 $ 在洗
2.期刊论文 刘庆良.仓尧卿.章谷生 细胞酶联免疫吸附试验 -上海医学检验杂志2002,17(1)
免疫细胞表面表达有多种抗原或受体,如各种CD系列分子等,有的可作为临床实验室检定T、B细胞和CD细胞等参与免疫应答反应细胞的特异性标志,或用以研 究细胞分子和粘附分子及其相应受体的变化,或用以探讨诸多表面分子参与免疫应答的机制,等等.
9 8 928 细胞固定 悬浮生长细胞的固定
封闭液的选择
将细胞用 C=0 洗涤后， 重悬于 C=0 计数。按 （ < 5 6） Y 816 Z 孔加于 ?7 孔酶标板中， 弃上清， 充 8 911 +Z.$- 离心 89 5 86 .$-， 配制的 戊二醛作用 分干燥后， 每孔加入 61 ! ( C=0 1 2 964 81 5 弃固定液， C=0 洗 ; 次。此处应注意的问题有： 89 .$-， "细胞洗 涤： 目的是去除培养基中的血清， 利于后续固定。 # 最初每孔 否则会因液体 悬浮细胞用的液体量： 至少应在 911 ! (Z 孔左右， 量少而在后续离心中使细胞不均匀分布， 进而影响酶联检测结 果。 $离心： 速度不能过高 （为 8 911 5 8 311 +Z.$-） ， 离心时间不 ， 否则可能破坏细胞。%镜检： 离心后的 能过长 （为 81 5 83 .$-） 细胞置显微镜下观察， 对细胞分布明显不均的孔进行标记， 在 否则残液可使细 后续实验中弃用。&固定前细胞应充分干燥： 胞固定不牢。 ’ 固定液的选择： 通过比较， 在相同时间内 （室
参考文献(3条) 1.Salih A M.NixonNB.Dawes P T Antibodies to neuroblastoma cells in rheumatoid arthritis:a potential marker for neuropathy 2000(01) 2.Liu Z.GurloT.von-Grafenstein H Cell-ELISA using beta-galactosidase conugated antibodies 2000(1-2) 3.Lee J C.CevallosAM.Naeem A Detection of anti-colon antibodies in inflammatory bowel disease using human cultured colonic cells 1999(02)
第 (O 卷第 W 期
第
三
军
医
大
学
学
报
_93" (O，79" W
(##! 年 W 月 .M@. .M.;*6,.* 6*;,M,7.* 6,+,@./,- @*/@,.* LD3" (##! NW( ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! 涤液中加入终浓度为 ! " #$ % ! " &$ 的吐温 ’ (#， 以降低反应的 非特异性。
（编辑
汪勤俭）
影响细胞ELISA结果的主要因素
作者： 作者单位： 刊名： 英文刊名： 年，卷(期)： 被引用次数： 李蓉芬， 陈敏， 康运生， 钟小林 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室, 第三军医大学学报 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 2001，23(7) 3次
经验交流
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李蓉芬， 陈 敏， 康运生， 钟小林， 何凤田
（第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室， 重庆 <111;3） 温） ， 1 2 964 的戊二醛较 <4 的多聚甲醛的固定效果好。
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细胞内源性过氧化物酶的检测和去除
对固定过的细胞， 直接加入邻苯二胺 （/C[） 底物显色， 观察 内源性过氧化物酶的情况。对内源性过氧化物酶水平很低的 细胞无需进行内源性过氧化物酶的处理， 而对内源性过氧化物 酶水平较高的细胞则需用甲醇配制的 1 2 ;4 双氧水于室温下作 用 ;1 .$- 予以去除。
作者简介： 李蓉芬 （8?7; @ ） ， 女， 安徽省宿州市人， 硕士， 实验师， 主要从事蛋 白酶体的结构与功能方面的研究， 发表论文 3 篇。电 话： （ 19; ） 73:69978 万方数据 收稿日期： 修回日期： 9111L89L16； 9118L19L83
我们使用 C=0 配制的 814 小牛血清、 94 牛血清白蛋白、 结 64 绵羊血清、 64 市售脱脂奶粉等几种不同试剂进行封闭， 果以 64 脱脂奶粉的封闭效果最好。
参考文献：
［!］ -2345 . 6，7489: 7 1，;2<=> ? @， !" #$ " .:A4B9C4=> A9 :=DE9B32>A9F2 ［ L］ G=33> 4: E5=DF2A94C 2EA5E4A4>： 2 H9A=:A423 F2EI=E J9E :=DE9H2A5K " M34: *8H （!） ： (###， !N (O ’ O# " /5=DF2A93， ［(］ +4D P，QDE39 @，R9:SQE2J=:>A=4: T" M=33S*+,-. D>4:U B=A2SU232GA9>4C2>= ［ L］ （! ’ (） ： G9:VDU2A=C 2:A4B9C4=> " L ,FFD:93 6=A59C>， (###， (O) !&O ’ !0W " ［O］ +== L M，M=R2339> . 6，72==F .，!" #$ " ;=A=GA49: 9J 2:A4SG939: 2:A4B9C4=> ［ L］ 4: 4:J32FF2A9EK B9<=3 C4>=2>= D>4:U 5DF2: GD3ADE=C G939:4G G=33> " QDA， （(） ： !XXX， )) !X0 ’ (#( "
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应设多孔重复
尽管采取了上述措施， 但有时无法确保每孔的细胞数完全 一致， 也不能保证细胞 !##$ 均匀铺于孔底， 故无论是对照孔， 还是实验孔， 都应设 ) % & 个复孔， 取其结果平均值， 从而最大 限度消除系统误差。 影响因素较多， 综上所述， 细胞 *+,-. 与常规 *+,-. 相比， 操作过程中应多加注意。 关键词：细胞； 酶联免疫吸附试验； 影响因素 万方数据 文献标识码：1 中图法分类号：/))0 " 0!
3.学位论文 荆结线 卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的测定以及与细胞因子关系的研究 2007
目的：探讨卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞在CD4+T细胞的分布，分析CD4+CD25+调节性T细胞、CD44与卵巢癌患者临床病理学特征的关系；研究 CD4+CD25+调节性T细胞与Th1、Th2类细胞因子、CD44、CA199、CA125的相关性。 方法：流式细胞仪测定53例卵巢癌患者、44例卵巢良性疾患、45例健康人外周血CD4+CD25+调节性T细胞、CD44的比例；Th1类细胞因子白介素-2(IL-2)、 γ-干扰素(INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)；Th2类细胞因子白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)的水平；采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)法检测卵巢癌患者血清中的CA199、CA125的水平。 结果：(一)：卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(21.95±6.80)％、CD44的比例(128.45±34.72)％明显高于卵巢良性疾患(12.57±5.12)％、 (83.75±19.49)％和健康对照组(10.77±3.02)％、(79.92±21.83)％，(均P<0.001)良性疾患与健康对照组无差异；手术前的卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细 胞(21.95±6.80)％、CD44比例(128.45±34.72)％明显高于手术后的患者(16.41±5.84)％、(103.41±37.25)％，(均P<0.001)。 (二)：CD4+CD25+调节性T细胞、CD44与患者的年龄、职业没有关系；卵巢浆液性腺癌CD4+CD25+调节性T细胞为(23.58±7.08)％，明显高于混合性 (18.30±5.46)％，有统计学意义(P<0.05)；与黏液性腺癌(22.06±6.08)％无差异；Ⅳ期卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞比值(28.79±4.26)％、CD44比值 (157.24±33.57)％明显高于Ⅲ期(20.01±6.27)％、(124.31±29.46)％和Ⅰ-Ⅱ期患者(17.97±4.50)％、(116.08±30.93)％，(均P<0.001)；Ⅲ期与Ⅰ-Ⅱ期 之间无差异；CD4+CD25+调节性T细胞、CD44与肿瘤的浸润(23.61±6.52)％、(143.38+35.11)％；淋巴结转移(24.05±6.74)％、(146.32±35.87)％；腹水的形 成(24.06±6.73)％、(146.52±35.86)％有关，(P<0.05～P<0.001)；低分化的卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞(25.05±5.96)％、CD44(152.50±32.49)％与 高分化患者(16.03±0.80)％、(105.95±15.43)％比较，有统计学意义，(P<0.05)，而与中分化(21.82±6.53)％、(126.26±36.00)％比较无差异。 (三)：卵巢癌患者Th1类细胞因子IL-2、TNF-a、IFN-r的水平(0.87±0.25)pg/ml、(1.09±0.34)pg/ml、(7.56±2.25)pg/ml明显低于健康对照 (2.38±1.09)pg/ml、(3.28±1.36)pg/ml、(19.04±4.59)pg/ml，(均P>0.001)。而Th2类细胞因子IL-6的水平(86.28±55.92)pg/ml与对照组 (5.04±2.69)pg/ml比较显著升高，(P<0.001)，IL-4(4.86±2.94)pg/ml、IL-10(1.07±2.30)pg/ml与健康人(5.62±3.59)pg/ml、(4.46±2.31)pg/ml之间无差 异。通过nonparametric相关分析，卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞与IL-2、TNF-a、IFN-r存在负相关，相关系数分别为r=-0.658，P<0.05：r=0.591，P<0.05;r=-0.695，P<0.05。与Th2类细胞因子IL-6存在正相关，相关系数r=0.784，P<0.001。 (四)：卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞与CD44、CA125之间存在着正相关，分别r=0.406，P<0.05； r=0.563，P<0.001；而与CA199之间没有相关性 ，r=0.036，P>0.05。 结论：(一)：卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞、Th2类细胞因子增高、Th1类细胞因子降低，这可能是卵巢癌患者免疫功能下降的一个重要原因。 (二)：CD4+CD25+调节性T细胞、CD44比例与肿瘤的分期、组织学类型、分化程度、浸润、淋巴结转移、腹水的形成有关。 (三)：卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞与Th1类细胞因子之间存在着负相关，而与Th2类细胞因子之间存在正相关。CD4+CD25+调节性T细胞可能通 过Th1、Th2类细胞因子的调节发挥对效应性T细胞的抑制作用。 (四)：同步检测卵巢癌患者血清CA125及细胞黏附因子CD44以及与卵巢癌和细胞免疫功能有关的细胞因子水平，这不仅从肿瘤细胞产生癌蛋白水平上可以判 断肿瘤的恶性程度及发展特征，还可以从机体的免疫状态上了解肿瘤的发展状况。对疾病的控制，治疗方案的制定有重要的意义。
相似文献(10条) 1.期刊论文 朱晴晖 细胞-酶联免疫吸附试验及其应用 -检验医学2006,21(z1)
酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)问世数十年来,广泛应用于检测各种体液中的可溶性抗原或抗体.在传统的ELISA中,微孔板 上包被的是可溶性的抗体或抗原,然而在免疫学研究和临床检测时,需要了解免疫活性细胞表面表达的特定分子以对细胞特性进行认定和分类,亦需测定抗某种细 胞的抗体或评价某种细胞的功能,因而传统的ELISA中的包被物或受检物就要被替代,检测模式有所改变.1971年,Avrameas等[1]首次用酶标记抗体定量测定细胞 表面的免疫球蛋白,又经数年的发展,形成了以细胞包被酶标板测定细胞表面特定分子的细胞-ELISA.近年来细胞-ELISA衍生出多种模式(方法),并筛选出适合细 胞-ELISA的标记酶.目前已有多种成熟的细胞-ELISA的模式,并在检验医学中得到应用.
细胞 WQX0R （酶联免疫吸附试验） 是用细胞代替可溶性抗原 （或细胞培养板） 进行免疫学检测的一种有 包被于 ?7 孔酶联板 效方法， 该方法特别适用于抗原位于细胞膜上而相应抗原的特 ［8 5 ;］ 。我们在实际操 性又不十分清楚或抗原难于纯化等情况 作过程中体会到细胞 WQX0R 的结果理想与否与多种因素有关， 概括起来包括以下几方面。
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贴壁细胞的固定
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细胞状态
应使用对数生长期的细胞。此期细胞的活力最好， 抗原表 达水平最高。对贴壁细胞来讲， 此期细胞贴壁最牢。
将细胞接种于 ?7 孔新细胞培养板中， 培养 ;7 E 左右， 使细 弃培养基， 温 C=0 洗 9 次， 充分干燥 胞达 314 5 ?14 满孔密度， 后， 同上固定 3 .$-， C=0 洗 ; 次。此处应注意的问题有： " 细胞 接种前应计数： 旨在尽量使每孔中的细胞数一致。 # 细胞洗 涤： 应用温 C=0 洗涤， 否则会因骤冷而使细胞脱落。这一点在 同悬浮细胞固定中应 冬天操作时尤为重要。$其它注意事项： 注意的问题 “ % 5 ’” 。
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反应后洗涤
为了避免细胞非特异性吸附抗体， 每步反应后应进行充分 （常规 WQX0R 指包被 洗涤。洗涤次数和时间均应较常规 WQX0R 物为可溶性物质） 增加。 " 洗涤次数和时间： 每步反应后至少 每次洗涤时间不少于 6 .$-。 # 振荡洗涤： 在洗涤过 应洗 6 次， 程中， 使酶联板处于温和振荡状态， 以保证洗涤充分。 $ 在洗
2.期刊论文 刘庆良.仓尧卿.章谷生 细胞酶联免疫吸附试验 -上海医学检验杂志2002,17(1)
免疫细胞表面表达有多种抗原或受体,如各种CD系列分子等,有的可作为临床实验室检定T、B细胞和CD细胞等参与免疫应答反应细胞的特异性标志,或用以研 究细胞分子和粘附分子及其相应受体的变化,或用以探讨诸多表面分子参与免疫应答的机制,等等.
9 8 928 细胞固定 悬浮生长细胞的固定
封闭液的选择
将细胞用 C=0 洗涤后， 重悬于 C=0 计数。按 （ < 5 6） Y 816 Z 孔加于 ?7 孔酶标板中， 弃上清， 充 8 911 +Z.$- 离心 89 5 86 .$-， 配制的 戊二醛作用 分干燥后， 每孔加入 61 ! ( C=0 1 2 964 81 5 弃固定液， C=0 洗 ; 次。此处应注意的问题有： 89 .$-， "细胞洗 涤： 目的是去除培养基中的血清， 利于后续固定。 # 最初每孔 否则会因液体 悬浮细胞用的液体量： 至少应在 911 ! (Z 孔左右， 量少而在后续离心中使细胞不均匀分布， 进而影响酶联检测结 果。 $离心： 速度不能过高 （为 8 911 5 8 311 +Z.$-） ， 离心时间不 ， 否则可能破坏细胞。%镜检： 离心后的 能过长 （为 81 5 83 .$-） 细胞置显微镜下观察， 对细胞分布明显不均的孔进行标记， 在 否则残液可使细 后续实验中弃用。&固定前细胞应充分干燥： 胞固定不牢。 ’ 固定液的选择： 通过比较， 在相同时间内 （室
参考文献(3条) 1.Salih A M.NixonNB.Dawes P T Antibodies to neuroblastoma cells in rheumatoid arthritis:a potential marker for neuropathy 2000(01) 2.Liu Z.GurloT.von-Grafenstein H Cell-ELISA using beta-galactosidase conugated antibodies 2000(1-2) 3.Lee J C.CevallosAM.Naeem A Detection of anti-colon antibodies in inflammatory bowel disease using human cultured colonic cells 1999(02)
第 (O 卷第 W 期
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（编辑
汪勤俭）
影响细胞ELISA结果的主要因素
作者： 作者单位： 刊名： 英文刊名： 年，卷(期)： 被引用次数： 李蓉芬， 陈敏， 康运生， 钟小林 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室, 第三军医大学学报 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 2001，23(7) 3次