高中生物必修1 实验：检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质

蛋白质鉴定原理
鉴定生物组织中是否含有蛋白质， 常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。 在碱性溶液中，双缩脲能与Cu2+作用， 形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫双 缩脲反应。 由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结 构相似的肽键，因此蛋白质可与双缩脲试剂 发生颜色反应。
紫色
注意 双缩脲试剂A： 质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液 双缩脲试剂B： 质量浓度为0.01g/mL的CuSO4溶液 使用时，先加入2ml双缩脲试剂A，振 荡摇匀；再加入3—4滴双缩脲试剂B。
斐林试剂与双缩脲试剂的比较
斐 林 试 剂 双 缩 脲 试 剂
鉴定物质 成 分
可溶性还原性糖 甲液
0.1g/ml NaOH溶液
蛋白质或多肽 A液
0.1g/ml NaOH溶液
乙液
0.05g/ml CuSO4溶液
B液
0.01g/ml CuSO4溶液
添加顺序
甲、乙两液等量混合均 匀后再注入 (即现配现用) 水浴加热
实验原理

显色反应
有机物 糖类 淀粉
染色剂 颜色反应 碘液 蓝色
还原糖 斐林试剂 苏丹Ⅲ/Ⅳ 脂肪 双缩脲试剂 蛋白质
砖红色
橘黄色/红色
紫色
实验步骤
1、还原糖的检测
（1）取一支试管1，注入2mL梨匀浆； （2）另取一支试管2，注入1mL斐林试剂甲液和1mL斐林试剂乙液，振荡， 混合均匀，制成斐林试剂； （3）将试管2中刚配制好的斐林试剂注入试管1中，振荡混匀； （4）将试管放入烧杯中水浴加热，观察颜色变化。
先加A液1ml，摇匀； 再加B液3~4滴，摇匀 不需加热，摇匀即可
反应条件
反应现象
砖红色沉淀
紫色
3、蛋白质的检测
取一支试管，加入2mL稀蛋清，再加入双缩脲试剂A1mL，振荡摇匀， 再加入双缩脲试剂B4滴，振荡摇匀，观察颜色变化。
注意 斐林试剂极不稳定，要现配现用， 先混合后一次加入。 甲液：质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液 乙液：质量浓度为0.05g/mL的CuSO4溶液 使用时，将4—5滴乙液滴入2ml甲液中， 配完后立即使用。 用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时， 溶液的颜色变化过程： 浅蓝色→棕色→砖红色沉淀
2、脂肪的检测
（1）取材：取一片花生切片，选择最薄切片放在载玻片中央； （2）染色：滴加2-3滴苏丹Ⅲ染液染色3分钟，用吸水纸吸去染液； （3）去浮色：再滴加1-2滴体积分数50%来自百度文库酒精溶液，洗去浮色； （4）制片与观察：吸去酒精，滴加一滴清水，盖上盖玻片，制成临时装片， 在显微镜下找到子叶最薄处，寻找橘黄色脂肪颗粒