还原糖的测定方法_国标
还原糖含量的测定—直接滴定法
还原糖含量的测定—直接滴定法实验六乳粉中还原糖含量的测定—直接滴定法（GB/T5009.7—2003第⼀法）教学⽬的要求：基本知识点1、掌握直接滴定测定还原糖的原理、基本过程和操作关键。
2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。
重点：1、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术2、直接滴定测定还原糖的原理、基本过程和操作关键。
难点：直接滴定测定还原糖的原理和控制要点课时教学⽅案：复习与提问：1、检查实验准备情况，（1）实验内容；（2）实验仪器与试剂有哪些？（3）直接滴定测定还原糖的步骤。
2、直接滴定测定还原糖的注意事项和控制要点【引⼊新课】乳糖是半乳糖经β-1，4糖苷键与葡萄糖结合的还原性⼆糖，称为4-O-β- d吡喃半乳糖-d-吡喃葡萄糖，还原基在葡萄糖单位上。
乳糖有两种异构体，即α-乳糖和β-乳糖。
乳糖是唯⼀没有在植物中发现的糖，因⾸次在⽜乳中发现，故称为乳糖。
乳糖是哺乳动物乳汁的主要成分，如⼈乳中约含6%～7%，⽜乳中约含5%。
乳糖是婴⼉主要⾷⽤的糖类物质。
初⽣婴⼉仅能消化乳糖、蔗糖、葡萄糖、果糖，对淀粉不易消化，故⽶、⾯淀粉⾷物应在3～4个⽉后才开始添加。
乳糖对婴⼉的重要意义还在于它能够保持肠道中最合适的肠菌种数，并能促进钙的吸收。
随着年龄的增⼤，肠道中将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖的乳糖酶活性急剧下降，甚⾄在某些个体中⼏乎降到0，因⽽成年⼈⾷⽤⼤量的乳糖，不易消化，⾷物中乳糖含量⾼于15%时可导致渗透性腹泻。
⼀、⽬的要求1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点；2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。
⼆、实验原理试样经除去蛋⽩质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指⽰剂，滴定标定过的碱性酒⽯酸铜溶液（⽤还原糖标准溶液标定碱性酒⽯酸铜溶液），还原糖将溶液中的⼆价铜还原成氧化亚铜。
以后稍过量的还原糖使次甲蓝指⽰剂褪⾊，表⽰终点到达。
根据试样溶液消耗体积，计算还原糖量。
反应⽅程式如下：CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4COONa COONa︱∣CHOH CHO╲∣+Cu(OH)2= ∣Cu +2H2OCHOH CHO╱∣∣COOK COOKCOONa COONa∣CHO ∣CHOHCHO╲∣CHOH ∣2∣Cu +(CHOH)4 +2H2O=2 ∣+ (CHOH)4+Cu2O↓CHO╱∣CHOH ∣∣CH2HO ∣CH2OHCOOK COOK亚甲蓝氧化型+还原糖——→亚甲蓝还原型(蓝⾊) （⽆⾊）三、实验试剂（GB/T5009.7-2003⾷品中还原糖的测定）1、盐酸。
还原糖的测定方法_国标.pdf
食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
碱性酒石酸铜甲液：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
L高锰酸钾标准溶液。
1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
5. 操作方法样品处理：乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约～ 2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。
商品粮食中还原糖和非还原糖含量的测定
GB 5513—85本标准适用于商品粮食中还原糖和非还原糖含量的测定。
其中铁氰化钾法主要适用于小麦粉。
1 还原糖测定1.1 铁氰化钾法1.1.1 仪器和用具1.1.1.1 磨口带塞锥形瓶：100 ml；1.1.1.2 量筒：50 ml、25 ml；1.1.1.3 移液管：5 ml；1.1.1.4 玻璃漏斗；1.1.1.5 试管：直径1.8～2.0 cm，高约18 cm；1.1.1.6 铝锅：作沸水浴用；1.1.1.7 电炉：2000 W；1.1.1.8 铁丝笼：放置试管用；1.1.1.9 试管架；1.1.1.10 锥形瓶：100 ml；1.1.1.11 微量滴定管：5 ml或10 ml（刻度0.02 ml）；1.1.1.12 分析天平：感量0.0001 g。
1.1.2 试剂1.1.2.1 95％乙醇；1.1.2.2 乙酸缓冲液：3 ml冰乙酸、6.8 g乙酸钠和比重1.84的硫酸4.5 ml，混合后用水稀释至1000 ml；1.1.2.3 12％钨酸钠溶液：12 g钨酸钠Na2WO4·2H2O溶于100 ml水中；1.1.2.4 0.1 N铁氰化钾溶液：32.9 g干燥纯净的铁氰化钾与44.0 g碳酸钠溶于1000 ml水中；1.1.2.5 乙酸盐溶液：70 g纯氯化钾和40 g硫酸锌溶于水中，再加入200 ml 冰乙酸，再用水稀释至1000 ml，混匀；1.1.2.6 10％碘化钾溶液：10 g纯碘化钾溶于100 ml水中，再加一滴饱和氢氧化钠溶液；1.1.2.7 1％淀粉溶液：1 g可溶性淀粉，用少量水润湿调和后，倒入沸水100 ml，继续煮沸，搅拌直至溶液清晰；1.1.2.8 0.1 N硫代硫酸钠溶液（按GB 5490—85《粮食、油料和植物油脂检验一般规则》附录B进行配制和标定）。
1.1.3 操作方法1.1.3.1 提取样品液：精确称取粉样5.675 g于100 ml磨口锥形瓶中，用5 ml 乙醇浸湿全部试样，再加入50 ml乙酸缓冲液，摇匀后再加入2 ml钨酸钠溶液，在振荡器上混合振摇5 min，取出过滤，弃去最初几滴滤液，收集滤液于干净锥形瓶中，此滤液即为样品测定液。
食品中总糖的测定国标的方法
食品中总糖的测定国标的方法一、糕点、糖果中还原糖的测定1、直接滴定法1）原理：样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定经标定的碱性酒石酸铜溶液，还原糖将二价铜还原为氧化亚铜。
以亚甲基蓝为指示剂，在终点稍过量的还原糖将蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝，根据试样所消耗的体积计算还原糖的含量。
直接滴定法已经过多次改进，只要严格遵守实验条件，分析结果的准确度和重现性是能够满足定量分析的要求。
2）试剂①费林氏剂甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g四甲基蓝，溶于水中并稀释至1000ml。
②费林氏剂乙液：称取50g酒石酸钾钠及75gNaOH，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
③乙酸锌溶液：称取乙酸锌结晶21.9g，加3ml冰醋酸，加水溶解至100ml。
④106g/l亚铁氰化钾溶液。
⑤葡萄糖标准溶液：准确称取1.0000g经过96±2℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mlHCl,并以水稀释至1000ml。
此溶液每1ml相当于1.0mg葡萄糖。
3）操作方法①样品处理：准确称取样品（粉碎后的）2.5~5.0g置于250ml容量瓶中，加水50ml，摇匀后慢慢加入5ml乙酸锌溶液，混匀后再慢慢加入5ml亚铁氰化钾溶液，振摇，加水定容并摇匀后静置30min，用干滤纸过滤，弃去初始滤液，过滤液备用。
②标定碱性酒石酸铜溶液：吸取 5.00ml碱性酒石酸铜甲液及5.00ml碱性酒石酸铜乙液，置于250ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠3粒，从滴定管加约9ml标准葡萄糖液，使其在2min内加热至沸。
趁热以0.5滴/s的速度继续滴加糖液，直至溶液颜色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖液的体积。
平行操作3次，得m平均消耗葡萄糖液的体积。
计算每10ml(甲、乙各5ml)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg），即m＝v×c式中m——10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）v——标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积c——葡萄糖标准溶液的浓度（mg/ml）③样品溶液的预测定：吸取费林氏甲、乙液各5ml，置于150ml 三角瓶中，加水10ml、玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中加样液，趁沸以0.5滴/s的速度继续滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗样液的体积。
还原糖的测定方法_国标
还原糖的测定方法（1）食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2）25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g 硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
4.5 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
还原糖的测定方法一
食品中还原糖的测定1 亚铁氰化钾快速法1.1 试剂与溶液1.1.1 费林氏甲液称取分析纯硫酸铜(CuSO4·5H2O)15g，亚甲基蓝(次甲基蓝) 0.05g,用蒸馏水溶解,淀容至1000mL。
1.1.2 费林氏乙液称取分析纯酒石酸钾钠50g,分析纯氢氧化钠75g及分析纯亚铁氰化钾4g,用蒸馏水溶解,定容至1000mL。
1.1.3 0.1%果糖标准溶液精确称取在70℃烘至恒重的果糖1.000g,放入100mL烧杯中,用蒸馏水溶解,定容至1000mL,为防染菌,可加5mL浓盐酸后再定容。
1.2 测定方法1.2.1 样品处理及吸取精确吸取样品10mL,用蒸馏水稀释定容至100mL,摇匀吸取稀释液1mL进行测定。
稀释度及吸取量根据含糖量可予增减。
1.2.2 空白滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL。
再用滴定管加入0.1%果糖标准液9mL。
摇匀在电炉上加热,使其在2min内沸腾,沸腾30s后,匀速滴入0.1%果糖标准液至蓝色消失即为终点。
记录沸腾前后共耗用果糖液毫升数(A)。
1.2.3 预备滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL,再加1mL10%样品稀释液。
根据样品含糖量的高低(估计数),可用糖液滴定管先加入一定量的0.1%果糖液(空白滴定耗用果糖溶液一般在10mL以上),摇匀加热,沸腾30S后,匀速滴入0.1%果糖液,至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%果糖标准液毫升数,作正式滴定时参考用。
1.2.4 正式滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶内,加蒸馏水10mL及1mL10%样品稀释液,再用糖液滴定管加入比预备滴定耗用量少1.0mL左右的0.1%果糖标准液,摇匀后加热,使其在1～2min内沸腾,沸腾30S后匀速滴入0.1%果糖标准液至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%果糖标准液的毫升数(B)。
《还原糖的测定方法国标》
《还原糖的测定方法_国标》还原糖的测定方法_国标一、范围本标准规定了用斐林试剂比色法测定试样中还原糖的含量。
本标准适用于所有食物样品中还原糖的测定。
二、原理还原糖与斐林试剂在加热条件下生成砖红色沉淀，通过与标准曲线对比，可以得出样品中还原糖的含量。
三、试剂和材料斐林试剂：甲液（称取14.3g硫酸铜（CuSO4·5H2O）和0.05g次甲基蓝（C13H16N3OClS）溶于水中，定容至100ml）、乙液（称取173g酒石酸钾钠（C4H4O6NaK·4H2O）和50g氢氧化钠溶于水中，定容至500ml）。
使用时将甲液、乙液等体积混合。
四、仪器和设备1.实验室用粉碎机2.水浴锅3.消煮炉或普通炉灶（能调节温度）4.容量瓶（100ml）5.移液管（10ml）6.比色管（10ml）7.试管（25ml）8.三角瓶（250ml）9.定时钟五、样品制备1.固体样品：取样品适量，用粉碎机粉碎，然后称取约0.2g样品置于试管中。
2.液体样品：直接取适量样品置于试管中。
3.在每个试管中加入4ml斐林试剂，充分混匀后静置10min。
4.将试管中的溶液倒入三角瓶中，加入约80ml水稀释，加热至沸后保持1min。
5.用移液管向每个试管中加入1ml样液，摇匀后置于试管架上。
6.在温度达到要求时将试管放入水浴中加热，同时开启计时器。
当时间达到要求时立即取出试管，用自来水冷却至室温。
7.将冷却后的溶液用移液管倒入比色管中，再加入约1ml的样液摇匀。
8.将比色管置于比色槽中，与标准曲线进行比色，得出样品的含量。
9.将整个测定过程中每个环节的时间、温度等条件记录下来，以便后续分析。
六、结果分析通过与标准曲线对比，可以得出样品中还原糖的含量。
计算公式为：含量=测定管吸光度÷校准管吸光度×标准品浓度。
其中吸光度需要在一定波长下测定。
同时需要注意实验过程中操作条件的控制，以保证结果的准确性。
如果操作条件不稳定或样品复杂性较高，需要进行适当调整或采取其他适合的方法进行测定。
还原糖的测定直接滴定法(GB法)
N (CH3)2Cl
+
-
+
H2O
COOH (CHOH)4 CH2OH
H N
+
N(H3C)2 S
无色
＋ HCl N (CH3)2
+
高锰酸钾滴定法
Cu2+ + 还原糖 MnO4- + Fe2+
高锰酸钾溶液需标定 称取草酸钠（GB1289基准物，105℃干燥2h，存于干燥器中） 0.1g，准确至0.0002g，溶于 50mL水中，再加硫酸溶液 （3.2）10mL，将此溶液加热至75～85℃，用配制好的高锰 酸钾（3.5）滴定,溶液呈现粉红色且1min不褪色为终 点,滴 定结束时,溶液温度在60℃以上, 同时作空白试验。
COOK HC HC
O O
Cu+2H 2O
COONa
COOK HC 2 HC
O O
C Cu+2H2O +
O 2
COOK CHOH CHOH COONa COOH + (CHOH)4 CH 2OH + Cu2 O
H (CHOH)4 + 2H2O CH2 OH
COONa
H (CHOH)4 CH2OH
C
O N ＋ N(H3C)2 S
⒉ 要素产出弹性（Elasticity of Output） ⑴ 要素的产出弹性
某投入要素的产出弹性被定义为，当其他投入 要素不变时，该要素增加1%所引起的产出量的 变化率。 Y K f K EK Y K K Y
Y EL Y L f L L L Y
• 要素产出弹性的数值区间？为什么？
C-D生产函数 C-D生产函数的改 C-D生产函数的改 含体现型技术进步
还原糖的测定
食品安全检验技术（理化部分） 食品中还原糖的测定
ⅲ、酒精性饮料：吸取100.0mL样品置于蒸发皿中，用氢氧 化钠(40g/L)溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积的1/4 后，移入250mL容量瓶中，加水至刻度。 ⅳ、汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取100.0mL样品置于蒸 发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250mL容量瓶中， 并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混匀 后备用。 ②碱性酒石酸铜溶液的标定 准确吸取碱性酒石酸铜甲液 和乙液各5mL，置于250mL锥形瓶中，加水10mL，加玻璃 珠3粒。从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，加热使其在2 分钟内沸腾，准确沸腾30秒，趁热以每2秒一滴的速度滴加 葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗 葡萄糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值。
食品安全检验技术（理化部分） 食品中还原糖的测定
试剂
① 碱 性 酒 石 酸 铜 甲 液 ： 称 取 15g 硫 酸 铜 （ C uSO4·5H2O) 及 0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释到1000 mL ②碱性酒石酸铜乙液：取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶 于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，再用水稀到 1000 mL，储存于橡胶塞玻璃瓶内。 ③乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]，加3 mL冰醋酸 ，加水溶解并稀释1000 mL。 ④106g/L亚铁氰化钾溶液 ： 称 取 106.g 亚 铁 氰 化 钾 [K4Fe(CN)6·3H2O]，溶于水中，稀释至100mL。 ⑤葡萄糖标准液：准确称取1.000 g干燥至恒量的 纯葡萄糖， 加水溶解后加入5 mL 盐酸，并以水稀释至1000 mL。 ⑥ 盐酸。
食品安全检验技术（理化部分） 食品中还原糖的测定
还原糖的含量测定
还原糖的含量测定一、背景介绍糖是人们日常饮食中常见的一种营养物质，但过量摄入糖会导致肥胖、糖尿病等健康问题。
因此，了解食品中糖的含量对于人们合理膳食非常重要。
还原糖是指具有还原性的单糖和部分双糖，如葡萄糖、果糖等，其测定方法较为简便。
二、实验原理还原糖含量测定采用间接法，即先将样品中的多余物质去除，然后将还原糖转化为葡萄糖，并利用酶法或化学法测定葡萄糖含量。
其中，去除多余物质的方法有酸水解法、酶解法和乙醇沉淀法等；将还原糖转化为葡萄糖的方法有硫酸水解法和硝酸钠氧化法等；测定葡萄糖含量的方法有显色滴定法和比色法等。
三、实验步骤1. 样品制备：取适量待测样品，如果汁、奶制品等。
2. 样品预处理：根据样品的特点选择合适的去除多余物质的方法，如果汁可用酸水解法，奶制品可用乙醇沉淀法。
3. 还原糖转化：将经过预处理的样品加入硫酸或硝酸钠溶液中，在加热条件下将还原糖转化为葡萄糖。
4. 葡萄糖含量测定：根据实验需要选择合适的测定方法，如显色滴定法或比色法等。
四、实验注意事项1. 实验过程中要注意安全，避免接触有毒有害物质。
2. 样品预处理和还原糖转化过程要严格控制温度和时间，避免对样品产生影响。
3. 测定葡萄糖含量时要准确称量试剂和标准物质，并按照操作规程进行操作。
4. 实验前应对仪器进行检查和校准，保证实验结果的准确性。
五、实验结果分析通过测定样品中葡萄糖含量可以得到还原糖的含量。
不同食品中还原糖含量不同，其中果汁、甜点等含糖量较高的食品中还原糖含量也相对较高，而蔬菜、豆类等含糖量较低的食品中还原糖含量也相对较低。
通过对不同食品中还原糖含量的测定可以为人们制定合理膳食提供科学依据。
六、实验应用1. 食品生产：测定不同食品中还原糖含量，可以为生产厂家提供产品质量控制和改进方案。
2. 膳食指导：了解不同食品中的还原糖含量，可以帮助人们制定合理的膳食计划，避免过度摄入糖分。
3. 学术研究：测定不同食品中的还原糖含量，可以为相关学科领域提供数据支持。
还原糖的测定
1 还原糖的测定(DNS 法)DNS 试剂的配制:称取10g3，5-二硝基水杨酸（DNS ）溶于水中，全部溶解后，加入20gNaOH 、200g 酒石酸钾钠，加入蒸馏水，使总体积至500mL 左右，加热溶解后，加2g 苯酚、0.5g 无水亚硫酸氢钠，加热搅拌至全部溶解，冷却，用水稀释至1000mL ，储于棕色瓶中。
⑴反应原理利用糖的还原性质，将3,5-二硝基水杨酸（DNS ）与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，还原糖的量和棕红色物质颜色的深浅程度成一定的比例关系，可以用分光光度计进行测定。
⑵测定方法①葡萄糖标准曲线的绘制取洁净试管6支进行编号，分别按下表2-3加入各试剂。
表2-3试剂项目表管号 单位 0 1 2 3 4 5 含糖量 mg — 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 标准葡萄糖溶液mL — 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水 mL 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 3,5-二硝基水杨酸mL0.50.50.50.50.50.5沸水浴5min ，然后冷水冷却各加蒸馏水8mL 540nm 测吸光度值将上述各管混匀，然后在540nm 波长下以0号管为对照，测定各管分光光度值。
以葡萄糖含量（mg ）为横坐标，分光光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
②还原糖含量的测定将样品液经适当稀释后，取0.5mL 稀释液加入0.5mLDNS 试剂，煮沸5min 显色，然后冷水冷却至室温，加8mL 蒸馏水，同时以蒸馏水代替稀释液做空白对照试验，540nm 测定吸光值，根据标准曲线计算还原糖含量。
③计算公式（2-1）：公式（2-1）DNS 测还原糖含量2 总酸的测定(指示剂法)总酸的测定 采用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.05mol/L]以酚酞(10g/L)作指示剂直接滴 定。
吸取样品2ml —5ml[液温20℃；取样量可根据酒的颜色深浅而增减]，置于250ml 三角瓶中，加入50ml 水，同时加入2滴酚酞指示液，摇匀后，立即用氢氧化钠标准溶液滴定至终点，并保持30s 内不变色，记下消耗氢氧化钠标准溶液的体积(V1)。
27食品中还原糖的测定
＞100 g/L（甜黄酒）
浓缩橙汁
蔗糖（复原后）≤50g/kg
还原糖
• 还原糖：葡萄糖、果糖、乳糖和麦芽糖 • 在糖类中,分子中含有游离醛基或酮基的单糖和含有游离
半缩醛羟基的双糖都具有还原性
原理
• 将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成 天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反 应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。
石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀 继续滴定，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液
由蓝色变为无色，即为滴定终点 根据样液的消耗量可以算出还原糖的含量。 滴定过程中颜色的变化
蓝色 红色 蓝色 无色
试验流程
1、费林试剂的标定 2、样品溶液的预测定 3、样品溶液测定
样品预处理
注意事项
• （1）热源强度应控制在使反应液在2min内沸腾，滴定 速度为每1d/2s,总沸腾时间为3min。
• （2）滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热 源上拿下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。
• （3）为了提高测定的准确度，要求用哪种还原糖表示结 果就用相应的还原糖标定碱性酒石酸铜溶液，如用葡萄 糖表示结果就用葡萄糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液。
镇江香醋（4.5%， 5.0%，5.5%， 6.0%）
还原糖（以葡萄糖计）≥2.00，≥2.20， ≥2.30，≥2.50 g/100mL
蜂蜜
葡萄糖和果糖≥60 g/100g； 蔗糖≤10g/100g（野桂花蜜），
≤10g/100g（其他蜂蜜）
黄酒
总糖含量≤15.0g/L（干黄酒）， 15.1g/L～40.0 g/L（半干黄酒）， 40.1 g/L～100 g/L（半甜黄酒），
《还原糖的测定方法_国标》
《还原糖的测定方法_国标》还原糖是利用还原性固体物质与硫酸酸作用而形成的糖类物质，是各种天然糖和蔗糖等碳水化合物的主要成分。
还原糖的测定方法主要包括酚酞法和锁紫法两种。
一、酚酞法1.原理还原糖在酸性溶液中能够与酚酞形成红色络合物，按照这个特性可以利用测定还原糖的含量。
酚酞法是将酚酞加入葡萄糖溶液，并加入硫酸，使葡萄糖反应生成邻磺酸基苯甲醛，酚酞与邻磺酸基苯甲醛产生红色络合物，根据颜色变化来测定还原糖的含量。
2.步骤（1）样品处理：将样品取适量加入标准瓶中，加入适量蒸馏水稀释。
（2）试剂溶液制备①酚酞指示剂：0.1%酚酞水溶液，加入适量氢氧化钠溶液调节其pH值到8左右；②还原剂：0.05mol/L的亚硫酸钠溶液。
（3）测定操作①在滴定管中加入5ml淀粉指示液；②将50ml试剂用热水浴加热至60℃，在加热的过程中不断振荡，直到试剂完全溶解；③加入3ml样品，再加入1.5ml的硫酸；④加入恰好的量的还原剂，至混合溶液变成淡绿色，继续振荡至反应彻底；⑤从头部滴入酚酞指示液，直至溶液变为粉色，记录滴定管体积。
（4）计算还原糖的质量浓度二、锁紫法1.原理锁紫法是一种定量测定还原糖的方法，其原理是利用还原性糖在酸性条件下氧化生成醛酸物质，再与锁紫剂作用形成深紫色络合物，根据反应色深与被测样品中还原糖含量成正比关系的特点，来定量测定还原糖的含量。
2.步骤（1）样品前处理：将样品取适量加入到锥形瓶中加入适量蒸馏水稀释，搅拌溶解。
（2）试剂溶液制备①锁紫试剂：将0.2g锁紫用少量水样吸湿后加入10mL浓氢氧化钠（4mol/L），用水稀释到100ml，在加入5ml浓硫酸搅拌，备用；②还原剂：0.05mol/L的亚硫酸钠溶液。
（3）操作流程①在锥形瓶中加入1ml锁紫试剂和30ml蒸馏水；②加入3ml样品后加入2ml还原剂，充分搅拌均匀；③经过10分钟左右，样品溶液颜色变为紫色，放置待沉淀，用滤纸滤掉沉淀；④将过滤后的溶液转移到光度计试样池，用蒸馏水稀释至标线；⑤根据光度计读数计算样品中还原糖的质量浓度。
还原糖的测定方法_国标
还原糖得测定方法(1)食物中还原糖得测定方法：高锰酸钾滴定法与直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法ﻫ1、原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜,加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐,以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成得亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量. ﻫ2、适用范围ﻫＧB5009、７－8５,本法适用于所有食品中还原糖得测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖得非还原性糖类物质得测定。
3、仪器（1）滴定管ﻫ(2）2５ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（３）真空泵ﻫ(4）水浴锅４、试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
４、1 ６ｍｏl／Ｌ盐酸：量取５0ml盐酸加水稀释至100 ｍl。
４、2 甲基红指示剂：称取1０mｇ甲基红,用100ml乙醇溶解. ﻫ4、3５mｏl／L氢氧化钠溶液:称取2０g氢氧化钠加水溶解并稀释至１00ml。
4、4 碱性酒石酸铜甲液：称取３４、６39g 硫酸铜(CuＳＯ４·５H2Ｏ），加适量水溶解,加０、5ml硫酸,再加水稀释至5００ml，用精制石棉过滤。
ﻫ4、5 碱性酒石酸铜乙液：称取１73g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠,加适量水溶解，并稀释至5００ｍl，用精制石棉过滤,贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
ﻫ４、６精制石棉：取石棉先用3mol/Ｌ盐酸浸泡2～3天，用水洗净,再加2、5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液,再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时,用水洗净。
再以３mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细得浆状软县委,用水浸泡并贮存于玻璃瓶中,即可用做填充古氏坩埚用. ﻫ４、7 0、1000 mｏl/L高锰酸钾标准溶液。
4、8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠,加水溶解并稀释至１00mｌ。
ﻫ４、９硫酸铁溶液：称取５0ｇ硫酸铁,加入2０0mｌ水溶解后，慢慢加入1０0ml硫酸,冷却后加水稀释至1L。
826-实验三食品中还原糖的测定——费林氏容量法
实验三食品中还原糖的测定——费林氏容量法一、实验内容用直接滴定法（费林氏容量法）测定食品中的还原糖含量。
二、实验目的通过本实验，加深用直接滴定法（费林氏容量法）测定食品中的还原糖含量的原理的理解；掌握其操作要点，熟练基本操作技术。
三、实验原理样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液（碱性酒石酸铜溶液），费林氏液（碱性酒石酸铜溶液）被还原析出氧化亚铜。
以次甲基蓝为指示剂，在终点稍过量的还原糖立即将氧化型蓝色的次甲基蓝还原为无色的还原型次甲基蓝。
根据样品消耗体积，计算还原糖量。
GB5009.7-85，本方法适用于所有食品中还原糖的检测。
检出限0.1mg。
四、仪器和试剂（一）仪器：100mL、250mL烧杯，1000mL、250mL容量瓶，25mL酸碱滴定管，250mL锥形瓶，滤纸，玻璃珠，电炉，铁架台，漏斗等。
（二）试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
1．费林甲液（碱性酒石酸铜甲液）2．费林乙液（碱性酒石酸铜乙液）3．乙酸锌溶液4．亚铁氰化钾溶液5．盐酸6．葡萄糖标准溶液五、实验步骤（一）试剂配置1．费林甲液（碱性酒石酸铜甲液）称取15 g硫酸铜（CuSO4·5H2O），及0.05 g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。
2．费林乙液（碱性酒石酸铜乙液）称取50 g酒石酸钾钠与75 g氢氧化钠，溶于水中，再加入4 g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
3．乙酸锌溶液称取21.9 g乙酸锌，加3 mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100 mL。
4．亚铁氰化钾溶液称取10.6g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100mL。
5．葡萄糖标准溶液精密称取1.000 g经过80 ℃干燥至恒量的葡萄糖（纯度在99%以上），加水溶解后加入5mL盐酸（如果即配即用就不加），并以水稀释至1000mL。
此溶液相当于1 mg/mL葡萄糖。
（二）样品处理：吸取20mL液体样品，置于250mL容量瓶中，加50mL蒸馏水，摇匀后慢慢加入5mL乙酸锌及5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，静置0.5h。
还原糖的测定国标法
直接滴定法测还原糖1.实验原理实验经除去蛋白质后，在加热条件下，以亚甲基蓝为指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定），根据样品液消耗体积计算还原糖含量。
2.实验药品与试剂硫酸铜、亚甲基蓝指示剂、酒石酸钾钠、氢氧化钠、乙酸锌、冰乙酸、亚铁氰化钾、葡萄糖、氢氧化钠溶液(40g/L)碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜及0.05g亚甲蓝加适量水溶解至1000ml碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠与75g氢氧化钠，加适量水溶解，再加4g亚铁氰化钾，完全溶解后稀释至1000ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
盐酸溶液：量取50ml盐酸加水稀释至100ml。
葡萄糖标液：称取1.0g干燥2h后的葡萄糖,加水溶解并加入5ml盐酸，并以水稀释到1000ml，此溶液每毫克相当于1.0mg葡萄糖。
3.仪器25ml滴定管、250 ml容量瓶、150ml锥形瓶、玻璃珠、真空泵、电子天平、可调电炉（带石棉板）4.实验步骤4.1 样品处理：一般食品是称取粉碎后的样品2.5~5g或吸取5～25g液体样品，置于250ml容量瓶中，加50ml水，摇匀。
加入5ml 乙酸锌溶液及5ml亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀。
静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
4.2标定碱性酒石酸铜溶液：吸取5.0g碱性酒石酸铜甲液及乙液，于150ml锥形瓶中加水10ml,加入玻璃珠两粒，从滴定管滴加约9ml葡萄糖或其他还原糖标液，控制在2min内加热至沸，趁热以1滴/2s的速度继续滴加葡萄糖或其他还原糖标液至蓝色刚好褪去，即为终点，记录消耗体积，平行测定3次并取平均值，计算每10ml酒石酸铜溶液（甲、乙各5ml）相当于多少葡萄糖或其他还原糖的质量（mg）。
4.3试样溶液预测：吸取5.0g碱性酒石酸铜甲液及乙液，于150ml锥形瓶中加水10ml,加入玻璃珠两粒，控制在2min内加热至沸，保持沸腾以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，病保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以1滴/2秒的速度滴定，直至蓝色刚好褪去即为终点，记录样液消耗体积。
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还原糖的测定方法（1）食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2）25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g 硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
4.5 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
5. 操作方法5.1 样品处理：5.1.1 乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于25 0 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。
加入10 ml碱性酒石酸铜甲液及4 ml1mol/L氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。
静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
（注：此步骤目的是沉淀蛋白）5.1.2 酒精性饮料：吸取100 ml样品，置于蒸发皿中，用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后（注：如果蒸发时间过长，应注意保持溶液pH为中性），移入250 ml容量瓶中。
加5 0 ml水，混匀。
以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
5.1.3 含多量淀粉的食品：称取2～10 g样品，置于250 ml容量瓶中，加200 ml水，在45℃水浴中加热1 h，并时时振摇。
（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解，影响检测结果。
）冷却后加水至刻度，混匀，静置。
吸取200 ml上清液于另一250 ml容量瓶中，以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
5.1.4 含有脂肪的食品：称取2～10 g样品，先用乙醚或石油醚淋洗3次，去除醚层。
加入50ml水混匀，以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
5.1.5 汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取100 ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250 ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，备用。
5.2 样品测定：吸取50ml处理后的样品溶液，于400ml烧杯中，加入25ml碱性酒石酸铜甲液及25ml乙液，于烧杯上盖一表面皿，加热，控制在4min内沸腾，再准确煮沸2min，乘热用铺好石棉的古氏坩埚或G4垂融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不成碱性为止。
（注：还原糖与碱性酒石酸铜试剂的反应一定要在沸腾状态下进行，沸腾时间需严格控制。
煮沸的溶液应保持蓝色，如果蓝色消失，说明还原糖含量过高，应将样品溶液稀释后重做。
）将古氏坩埚或垂融坩埚放回原400ml烧杯中，加25 ml硫酸铁溶液及2 5ml水，用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以0.1mol/L高锰酸钾标准液滴定至微红色为终点。
同时吸取50ml水，加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲、乙液，硫酸铁溶液及水，按同一方法做试剂空白实验。
6. 计算：X1=（V-V0）×N×71.54 （1）式中：X1--样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量，mg；V--测定用样品液消耗高锰酸钾标准液的体积，ml；V0--试剂空白消耗高锰酸钾标准液的体积，ml；N--高锰酸钾标准溶液的浓度；71.54--1ml 1mol/L高锰酸钾溶液相当于氧化亚铜的质量，mg。
根据（1）式中计算所得氧化亚铜质量，查附表"氧化亚铜质量相当于葡萄糖、果糖、乳糖、转化糖的质量表"，再计算样品中还原糖含量。
X2=（m1×V2）∕（m2×V1）×（100∕1000）(2)式中：X2--样品中还原糖的含量，g/100g（g/100ml）；m1--查表得还原糖质量，mg；m2--样品质量（或体积），g（ml）；V1--测定用样品处理液的体积，ml；V2--样品处理后的总体积，ml。
7.举例：称取某食物样品3.00g，经过处理后用水定容至250ml。
取50ml进行测定，消耗0.1003 mol/L高锰酸钾标准液5.20ml，同时测试剂空白为0.36ml，则样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量为：X1（mg）=（5.20-0.36）×0.1003×71.54 = 34.73查表得还原糖质量为相当于葡萄糖16.22 mg，样品中还原糖含量（以葡萄糖计）为：X2（g/100g）=（16.22×250）∕（3.00×50）×（100∕1000）= 2.708.注释：本法用碱性酒石酸铜溶液作为氧化剂。
由于硫酸铜与氢氧化钠反应可生成氢氧化铜沉淀，氢氧化铜沉淀可被酒石酸钾钠缓慢还原，析出少量氧化亚铜沉淀，使氧化亚铜计量发生误差，所以甲、乙试剂要分别配制及贮藏，用时等量混合。
还原糖的测定方法（2）二、直接滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液，费林氏液被还原析出氧化亚铜后，过量的还原糖立即将次甲基蓝还原，使蓝色褪色。
根据样品消耗体积，计算还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本方法适用于所有食品中还原糖的检测。
检出限0.1mg。
3.主要仪器滴定管4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）费林甲液：称取15 g硫酸铜（CuSO4·5H2O），及0.05 g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1 L。
（2）费林乙液：称取50 g酒石酸钾钠与75 g氢氧化钠，溶于水中，再加入4 g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至500 ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
（3）乙酸锌溶液：称取21.9 g乙酸锌，加3 ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100 ml。
（4）亚铁氰化钾溶液。
称取10.6g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100ml。
（5）盐酸。
（6）葡萄糖标准溶液：精密称取1.000 g经过80 ℃干燥至恒量的葡萄糖（纯度在99%以上），加水溶解后加入5 ml盐酸，并以水稀释至1 L。
此溶液相当于1 mg/ml葡萄糖。
（注：加盐酸的目的是防腐，标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制）5.操作方法5.1样品处理：5.1.1乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于10 0 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。
边摇边慢慢加入5 ml乙酸锌溶液及5 ml亚铁氢化钾溶液，加水至刻度，混匀。
静置30 min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
（注意：乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。
如果钙离子过多时，易与葡萄糖、果糖生成络合物，使滴定速度缓慢；从而结果偏低，可向样品中加入草酸粉，与钙结合，形成沉淀并过滤。
）5.1.2酒精性饮料：吸取50 ml样品，置于蒸发皿中，用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后，移入100 ml容量瓶中。
加25 ml水，混匀。
以下按4.1.1自"加5 ml乙酸锌溶液"起依法操作。
5.1.3含多量淀粉的食品：称取2～5 g样品，置于100 ml容量瓶中，加50 ml水，在45℃水浴中加热1 h，并时时振摇（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解，影响检测结果。
）。
冷后加水至刻度，混匀，静置。
吸取50 ml上清液于另一100 ml容量瓶中，以下按4.1.1自"5 ml乙酸锌溶液"起依法操作。
5.1.4汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取50 ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入100 ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，备用。
（注意：样品中稀释的还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液的浓度。
）5. 2标定费林氏液溶液：吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液，使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9 ml葡萄糖标准溶液，控制在2 min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液兰色刚好褪去并出现淡黄色为终点，记录消耗的葡萄糖标准溶液总体积，平行操作三份，取其平均值，计算每10 ml（甲、乙液各5 ml）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。
（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
）5.3样品溶液预测：吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每秒1滴的速度滴定，直至溶液兰色褪去，出现亮黄色为终点。
如果样品液颜色较深，滴定终点则为兰色褪去出现明亮颜色（如亮红），记录消耗样液的总体积。
（注意：如果滴定液的颜色变浅后复又变深，说明滴定过量，需重新滴定。